本發(fā)明具體涉及臘梅屬植物及其提取物在制備預(yù)防/治療由幽門螺旋桿菌引起相關(guān)疾病的藥物的應(yīng)用，所述的蠟梅屬包括柳葉蠟梅、浙江蠟梅或山臘梅，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：：蠟梅屬柳葉蠟梅(chimonanthussalicifoliuss.y.hu)、浙江蠟梅(chimonanthuszhejiangensism.c.liu)或山臘梅(chimonanthusnitensoliv.)等為畬族民間的習(xí)用藥。有近千年歷史服用的食涼茶就是其干燥葉，從北宋年間起即用于治療和預(yù)防感冒?，F(xiàn)代研究又有進(jìn)展，其中，山臘梅提取物制備的顆粒制劑，有良好治療/預(yù)防感冒功效，已在市場銷售；柳葉蠟梅和浙江臘梅已載入2005和2015年的《浙江省中藥炮制規(guī)范》，主要成分為揮發(fā)油，含有1.8-桉葉素、β-蒎烯、α-萜品烯醇、芳樟烯、欖香醇等40多種成分。傳統(tǒng)用途：性味微苦，辛，涼，歸肺、脾、胃經(jīng)，用于治療感受風(fēng)寒而引起肚脹、肚痛腹瀉，因飲食不當(dāng)引起的消化不良、腹部脹痛和小兒疳積等癥狀。幽門螺旋桿菌(helicobacterpylori，簡稱h.pylori、hp或hp)普遍存在于人胃黏膜中的一種微需氧革蘭氏陰性菌。hp感染可引起多種慢性胃病，如消化性潰瘍、胃炎、以至胃癌。目前國際上推薦的一線治療方案主要以質(zhì)子泵抑制劑(ppi)或鉍劑為基礎(chǔ)，合并兩種抗生素組成的三聯(lián)療法，根除率達(dá)90％。但目前的主要問題是易繼發(fā)耐藥以及產(chǎn)生二重感染、患者依存性等問題問題。隨著中草藥挖掘與研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)一些天然產(chǎn)物(含中藥)具有抗hp活性，本研究的臘梅提取物對hp有良好抗菌效果，特別是對多重臨床耐藥菌株有效，就是在借鑒其他有關(guān)研究基礎(chǔ)上選題、探索的結(jié)果，為研發(fā)其預(yù)防和治療的新藥開辟新來源。針對提取物的信息調(diào)研顯示：臘梅的提取物多為簡單水提、醇提和水蒸氣蒸餾所得，未見其抗幽門螺旋桿菌的研究報道；采用超臨界co2萃取僅見賀建云的不加夾帶劑提取柳葉蠟梅物質(zhì)，總收率為3.68％，未見系統(tǒng)、深入的優(yōu)化工藝流程與參數(shù)研究，更未見其提取物抗幽門螺旋桿菌的報告；至于浙江臘梅和山臘梅的超臨界co2萃取和抗幽門螺旋桿菌研究也均無報道?；赾o2超臨界萃取技術(shù)具有低溫、快速、效率高、無污染、提取物純度高等優(yōu)點，是現(xiàn)代天然藥物的分離與純化的新技術(shù)，更適用于揮發(fā)油的研究應(yīng)用，因此本發(fā)明以提取柳葉臘梅有效物質(zhì)為切入點，首次對加與不加、先加與后加夾帶劑的工藝路線和影響參數(shù)進(jìn)行系統(tǒng)、深入、比對的設(shè)計與實驗，掌握不同工藝與參數(shù)對產(chǎn)物的影響和規(guī)律，分離出近20個新提取物，用其進(jìn)行抗幽門螺旋桿菌的篩選，首次發(fā)現(xiàn)多個有活性的提取物，特別是對耐藥株有效，所得結(jié)果迄今未見報道。本發(fā)明在已有研究的基礎(chǔ)上，研究適合柳葉蠟梅提取物的軟膠囊、滴丸等制劑；為柳葉蠟梅提取物用于耐藥菌感染的治療和預(yù)防，提供有益支持。技術(shù)實現(xiàn)要素：發(fā)明概述本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種新的抗幽門螺旋桿菌的藥物，具體而言，本發(fā)明提供了一種臘梅屬植物、臘梅屬植物提取物在制備抗幽門螺旋桿菌的藥物中的應(yīng)用。所述的臘梅科臘梅屬植物包括：柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅。在本發(fā)明的具體實施方案中，所述的提取物為以下一種或多種：(1)水提物；(2)醇水混合提取物；(3)水蒸氣蒸餾揮發(fā)油；(4)超臨界二氧化碳提取物。本發(fā)明第二方面提供了上述柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅提取物的制備方法。本發(fā)明第三方面公開含有臘梅科臘梅屬植物提取物的制劑，所述的藥物與藥學(xué)上接受的輔料制成藥劑學(xué)上接受的口服制劑。發(fā)明詳述本發(fā)明第一方面提供了一種臘梅屬植物、臘梅屬植物提取物在制備抗幽門螺旋桿菌的藥物中的應(yīng)用，特別是抗其耐藥菌株的的應(yīng)用。本發(fā)明中所述的藥材或原藥材是指臘梅屬植物，具體包括柳葉臘梅、浙江臘梅、山臘梅。本發(fā)明中所述的生藥也是指臘梅屬植物，具體包括柳葉臘梅、浙江臘梅、山臘梅。本發(fā)明的臘梅屬植物包括臘梅屬植物的鮮品或干品；臘梅屬植物的藥用部位選自臘梅屬植物的全株、地上部分、地下部分、莖、莖皮、花、葉、種子或任意組合；優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的地上部分、莖、莖皮、葉或任意組合；更優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的莖或葉；最優(yōu)選的藥用部位選自臘梅屬植物的葉。本發(fā)明的第二方面提供了臘梅屬植物提取物的制備方法。在本發(fā)明的具體實施方案中，所述的臘梅屬植物提取物為以下用水提、醇提、水蒸氣蒸餾及超臨界二氧化碳提取一種或多種：(1)水提物；(2)醇提物；(3)水蒸氣蒸餾揮發(fā)油；(4)超臨界二氧化碳提取物。為了加快提取速度，提高提取收率，可以對臘梅屬原藥材進(jìn)行粉碎，粉碎后的平均粒徑優(yōu)選10-80目，更優(yōu)先是20-65目，最優(yōu)選是30-50目。本發(fā)明提供的提取物的第一種制備方法：所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材臘梅屬植物加入溶劑提取，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。所述的溶劑：本領(lǐng)域常用的溶劑均可以用于本發(fā)明。優(yōu)選溶劑水和c1-c5的醇類。c1-c5的醇類選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或其混合物。選自水、無水乙醇、乙醇水溶液；更優(yōu)選溶劑選自乙醇水溶液。乙醇或乙醇水溶液和其他溶劑相比，具有低毒，防腐，污染小，價格低等優(yōu)點，更適合于本發(fā)明應(yīng)用于醫(yī)藥產(chǎn)品工業(yè)化大生產(chǎn)。乙醇水溶液的濃度(乙醇水溶液中含有的乙醇的體積百分比)：優(yōu)選30％-100％的乙醇水溶液，更優(yōu)選50％-95％的乙醇水溶液，進(jìn)一步優(yōu)選優(yōu)選60％-80％的乙醇水溶液，最優(yōu)選75％的乙醇水溶液。溶劑的量是指提取每公斤原藥材所用的溶劑量，即提取每公斤藥材計使用溶劑的重量(單位kg)或體積(單位l)。溶劑用量是原藥材用量的2-30倍；更優(yōu)選5-16倍；進(jìn)一步優(yōu)選6-15倍；最優(yōu)選8-10倍。提取的溫度：優(yōu)選是室溫到溶劑回流的溫度；更優(yōu)選是40℃-溶劑回流的溫度；進(jìn)一步優(yōu)選是50℃-溶劑回流的溫度；最優(yōu)選是溶劑回流的溫度。提取的次數(shù)：可以是1～5次；優(yōu)選是2～3次。提取的時間：每次0.5～5小時；優(yōu)選每次0.5～3小時；更優(yōu)選每次1～3小時。濃縮的溫度：可以是55～90：；優(yōu)選62～80優(yōu)；更優(yōu)選65～75以。濃縮后稠膏的相對密度為1.1～1.5，優(yōu)選1.2～1.4。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述的提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)水提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-16倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-16倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)乙醇提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)3-30倍的65％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)5-15倍的60％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是柳葉臘梅或浙江臘梅或山臘梅經(jīng)8-10倍的60％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加入5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的水、無水乙醇、乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(包括0.5～3小時，包括1～3小時)，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加入5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的水、無水乙醇、乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(包括0.5～3小時，包括1～3小時)，過濾并合并提取液，經(jīng)濃縮至相對密度為1.1～1.5(包括1.2～1.4)的稠膏，減壓干燥，即得。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的30～99％的乙醇水溶液回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(包括0.5～3小時，包括1～3小時)，過濾并合并提取液，60～90℃(包括65～75))濃縮至相對密度為1.1～1.5(包括1.2～1.4)的稠膏，減壓干燥，即得。本發(fā)明提供的提取物的第二種制備方法：所述提取物是原藥材臘梅屬植物經(jīng)水蒸氣蒸餾并獲得的水蒸氣蒸餾揮發(fā)油。本發(fā)明提供的提取物的第三種制備方法：所述提取物是原藥材經(jīng)超臨界二氧化碳提取并獲得。本發(fā)明的超臨界提取物，其特征在于，所述提取物是原藥材臘梅屬植物經(jīng)二氧化碳超臨界提取，在分離釜中獲得提取物，提取的條件可以是一種或多種，例如：(1)不加夾帶劑的提取物；(2)加夾帶劑的提取物；(3)不加夾帶劑提取后再加夾帶劑的提取物。超臨界二氧化碳提取的條件如下：萃取釜:萃取溫度為30-70℃；優(yōu)選為35-60℃；更優(yōu)選為40-50℃；最優(yōu)選43-47℃。萃取溫度可以選自40℃，42℃，45℃，47℃，50℃。萃取壓力為10-40mpa；優(yōu)選為13-35mpa；優(yōu)選為16-24mpa；更優(yōu)選為18-22mpa。萃取壓力可以選自15mpa，20mpa，20.6mpa，29.6mpa，30mpa。萃取釜可以是1個或多個分離釜，例如1個，2個，3個，4個，5個或更多。如果是多個萃取釜的，可以是并聯(lián)或串聯(lián)。為了盡量節(jié)約原藥材的加料和卸料時間，提高生產(chǎn)效率，優(yōu)選是多個萃取釜并聯(lián)。在一部分萃取釜加料或卸料的時候，另外的萃取釜同事進(jìn)行萃取。萃取劑流速：萃取劑二氧化碳的流速會對本發(fā)明的生產(chǎn)效率產(chǎn)生重大的影響。如果二氧化碳的流速過快，二氧化碳和萃取溶質(zhì)不能充分接觸，會降低每體積二氧化碳的萃取效率；如果二氧化碳的流速過慢，會降低單位時間的生產(chǎn)效率。因此，萃取劑二氧化碳的流速需要一個合適的流速。萃取劑二氧化碳的流速為每公斤藥材每小時20-150升(以每公斤藥材每小時計，單位為l/h·kg生藥)，即20-150l/h·kg；優(yōu)選的萃取劑二氧化碳的流速為23-125l/h·kg；更優(yōu)選為33-80l/h·kg；進(jìn)一步優(yōu)選為50-70l/h·kg；最優(yōu)選為55-65l/h·kg。萃取劑二氧化碳的流速可以選自23.1l/h·kg；23.8l/h·kg；28.5l/h·kg；32.3l/h·kg；32.8l/h·kg；36.2l/h·kg；38.3l/h·kg；35.3l/h·kg；44.8l/h·kg；50.7l/h·kg；55.4l/h·kg；75.6l/h·kg；82.2l/h·kg。萃取時間分鐘(min)：30-400min，優(yōu)選120-160min，更優(yōu)選120-160min，最優(yōu)選120-160min。萃取時間可以是60-70min，70-80min，80-100min，110-120min，120-130min，140-150min，155-165min。例如萃取時間可以是62min，70min，83min，100min，120min，132min，145min，160min。夾帶劑:本發(fā)明的超臨界提取方案中，可以選擇性的使用夾帶劑或不使用夾帶劑；優(yōu)先是使用夾帶劑。本領(lǐng)域常用的溶劑均可以作為本發(fā)明的夾帶劑。例如本發(fā)明的夾帶劑可以選自：0％-100％v/v的乙醇水溶液、甲醇，乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。本文中100％v/v的乙醇水溶液表示無水乙醇；本文中0％v/v的乙醇水溶液表示沒有醇的水。例如本發(fā)明的夾帶劑可以選自：水、無水乙醇、30％-100％v/v的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮。優(yōu)選的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％v/v的乙醇水溶液。更優(yōu)選的夾帶劑選自75％-95％v/v的乙醇水溶液。最優(yōu)選的夾帶劑選自95％v/v的乙醇水溶液。夾帶劑的量(以每公斤藥材計為l/kg，kg/kg；或以每克藥材計為ml/g，g/g)：夾帶劑的量為0.10-2.5l/kg；；優(yōu)選0.20-1.5l/kg；，更優(yōu)選0.30-0.80l/kg；最優(yōu)選0.40-0.60l/kg；分離釜：分離釜的溫度為25-70℃，優(yōu)選為30-60℃；更優(yōu)選為35-55℃，最優(yōu)選為40-50℃，。分離釜的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃，41℃，42℃，43℃，44℃，45℃，46℃，47℃，48℃，49℃，50℃，51℃，52℃，53℃，54℃，55℃，56℃，57℃。分離釜的壓力為2-17mpa；優(yōu)選為3-15mpa；更優(yōu)選為4-12mpa；最優(yōu)選為4.5-10mpa。分離釜的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa，5.6mpa，5.7mpa，5.8mpa，6mpa，7mpa，8mpa，8.5mpa，9mpa，9.5mpa，10mpa。分離釜可以是1個或多個分離釜，例如1個，2個，3個，4個，5個或更多。如果是多個分離釜的，可以是并聯(lián)或串聯(lián)，為了盡量提高提取物的回收率，優(yōu)選是多個分離釜串聯(lián)。分離釜i壓力和溫度：分離釜i的溫度為30-70℃，優(yōu)選為50-60℃；更優(yōu)選為53-57℃；最優(yōu)選為55℃。分離釜i的溫度可以選自53℃，54℃，55℃，56℃，57℃。分離釜i的壓力為4-17mpa；優(yōu)選為5-15mpa；更優(yōu)選為6-12mpa；最優(yōu)選為8-10mpa。分離釜i的壓力可以選自8mpa，8.5mpa，9mpa，9.5mpa，10mpa。分離釜ii壓力和溫度：分離釜ii的溫度為25-50℃，優(yōu)選為30-45℃；更優(yōu)選為32-42℃；最優(yōu)選為35-40℃。分離釜ii的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃。分離釜ii的壓力為2-8mpa；優(yōu)選為3-7mpa；更優(yōu)選為4-6mpa；最優(yōu)選為4.5-5.5mpa。分離釜ii的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa。分離釜iii壓力和溫度：分離釜iii的溫度為25-50℃，優(yōu)選為30-45℃；更優(yōu)選為32-42℃；最優(yōu)選為35-40℃。分離釜iii的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃。分離釜iii的壓力為2-8mpa；優(yōu)選為3-7mpa；更優(yōu)選為4-6mpa；最優(yōu)選為4.5-5.5mpa。分離釜iii的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa。分離釜中的得到的提取物，就是本發(fā)明的臘梅屬植物提取物。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，是對原藥材不加夾帶劑的進(jìn)行超臨界提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為100-250kg/小時，萃取時間為90-300分鐘，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa，分離釜中的得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，是對原藥材加夾帶劑進(jìn)行超臨界提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa,加入夾帶劑，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為23-125l/h·kg生藥，萃取時間為90-300分鐘，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa；分離釜中的得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。所述的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，是對原藥材先不加夾帶劑進(jìn)行超臨界提取后再加夾帶劑的進(jìn)行提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為40℃-50℃，壓力為15mpa-40mpa，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為35℃-45℃，壓力為4.8mpa-6mpa；二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為23-125l/h·kg生藥，萃取時間為90-300分鐘；放出分離釜中的提取物；再加入夾帶劑，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的保持流量為23-125l/h·kg生藥，再萃取90-300分鐘；分離釜中再次得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。所述的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。本領(lǐng)域常用的干燥均可以用于本發(fā)明，例如：減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥、熱風(fēng)干燥、遠(yuǎn)紅外線干燥或微波干燥。或聯(lián)合使用上述一種或多種干燥方式。本發(fā)明提供的提取物的第四種制備方法：所述提取物是原藥材經(jīng)二氧化碳超臨界提取后，其剩余的藥材再加入溶劑提取，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。具體的提取方法可以第一種方式相同。在本發(fā)明中，術(shù)語“提取”可以是常溫下的浸漬，或者超臨界狀態(tài)下的提取，或者在升高的溫度下的提取(例如煎煮和/或回流)，或者這些操作方式的結(jié)合。還可以進(jìn)一步包括對提取物進(jìn)行進(jìn)一步處理，例如進(jìn)一步純化，例如除溶劑、沉淀除雜質(zhì)、溶劑萃取、樹脂吸附分離等。如本文所述的，術(shù)語“提取物”將包括可用于實現(xiàn)本發(fā)明任何目的的任何純度的提取物，提取物的提取純度可以在較大的范圍內(nèi)變化。本發(fā)明第三方面公開含有臘梅屬植物提取物的制劑，所述的藥物與藥學(xué)上接受的輔料制成藥劑學(xué)上接受的制劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述的制劑為柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅的提取物制劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述的制劑的組合物還包含一種或多種無毒生理學(xué)可接受的載體。所述的可接受的載體包括本領(lǐng)域公知的任何輔料及起控釋作用的輔料。常用的輔料包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、致孔劑、增塑劑、填充劑、增溶劑和乳化劑。稀釋劑可以是但不限于淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是但不限于水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是但不限于干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是但不限于滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇；增溶劑和乳化劑可以是但不限于乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油類(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯及它們的混合物。起緩控釋作用的輔料可以選自親水性凝膠材料、蠟脂類材料和不溶性材料的一種或多種。所述的親水性凝膠材料可以選自羥丙基甲基纖維素、卡波普、羧甲基纖維素鈉和海藻酸鹽，所述的蠟脂類材料可以選自十六醇、十八醇、蜂蠟、山崳酸甘油酯、硬脂酸和巴西棕櫚蠟，所述的不溶性材料可以選自乙基纖維素、丙烯酸樹脂、聚氧乙烯和聚乙烯。此外，如需要，可向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述制劑包含柳葉蠟梅或浙江臘梅或山臘梅的提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成的制劑?？赏ㄟ^將組合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成適于人或動物使用的任何劑型。該制劑可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述制劑優(yōu)選口服制劑、噴霧劑、吸入劑；更優(yōu)選噴霧劑、吸入劑。有益技術(shù)效果柳葉臘梅揮發(fā)油(lyy)對幽門螺旋桿菌，2株標(biāo)準(zhǔn)株(atcc700392、ss1)和1株多重耐藥株的最低抑菌濃度(mic)分別為4mg/ml、4mg/ml、2mg/ml優(yōu)于頭花蓼。柳葉蠟梅的醇提物(lyc)和柳葉蠟梅的水提物(lys)對3株幽門螺旋桿菌的mic分別為1mg/ml、4mg/ml、16mg/ml和8mg/ml、8mg/ml、8mg/ml。超臨界加夾帶劑的萃取產(chǎn)物lylj-2-y對h.pyloriatcc700392的mic為2mg/ml，對ss1的mic為8mg/ml，對臨床多重耐藥菌株的mic為4mg/ml；四種柳葉蠟梅提取物對h.pylori的抗菌活性較強，對h.pylori耐藥菌株也具有較強抗菌活性。附圖說明圖1石油醚對h.pylori生長的影響。圖1-1：空白對照；圖1-2：2％石油醚。圖2臨床耐藥株的驗證實驗a：空白對照b：256μg/ml甲硝唑c：256μg/ml克拉霉素d：256μg/ml阿莫西林。圖34mg/ml的lyy平板無菌生長。圖44mg/ml的lyc對ss1抑菌實驗。具體實施方式提取物制備實施例實施例1-11水提：取粉碎后藥材，裝入圓底燒瓶中，分兩次加水回流提取。第一次加10-16倍水，提取1小時后過濾，第二次加水8-12倍水，提取1小時，合并兩次濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮或水浴鍋上濃縮，水浴75℃、轉(zhuǎn)速80rpm,濃縮至比重為1.18－1.22時，傾倒入不銹鋼盤中置減壓干燥烘箱65℃，真空烘干后粉碎。醇提：取粉碎后藥材，裝入圓底燒瓶中，分兩次加70％乙醇回流提取。第一次加10倍70％的乙醇，提取1小時后過濾，第二次加8倍70％乙醇，提取1小時，合并兩次濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，水浴65℃、轉(zhuǎn)速80rpm,濃縮至比重為1.18－1.22時，傾倒入不銹鋼盤中置減壓干燥烘箱65℃，真空烘干后粉碎。揮發(fā)油：水提時，裝好揮發(fā)油提取器，待油產(chǎn)生后收集。詳細(xì)參數(shù)及結(jié)果如下：實施例12開啟電熱控制系統(tǒng)和制冷系統(tǒng)。稱取6.4kgly，置于24l萃取釜中。稱取3.2kg95％乙醇，放置于副泵的儲箱中，開啟副泵(r＝9.1r/min),60min內(nèi)加夾帶劑結(jié)束。萃取釜、分離釜i、分離釜ii、分離釜iii的壓力分別為20.7mpa、8.5mpa、5mpa、5mpa，溫度分別為45℃、55℃、40℃、40℃，主泵的轉(zhuǎn)速r＝30.5r/min，二氧化碳流速為220-240l/h。萃取135min，后處理后，分離釜i收集到1.3g產(chǎn)品，分離釜ii收集到產(chǎn)物200.4g，編號lylj-2(2-6)，總收率3.15％。實施例13稱取6.05kgly，置于24l萃取釜中。當(dāng)壓力穩(wěn)定時，萃取開始。萃取釜、分離釜i、分離釜ii、分離釜iii的壓力分別為20mpa、8mpa、5.2mpa、5.2mpa，溫度分別為45℃、55℃、40℃、40℃，主泵的轉(zhuǎn)速r＝30.6r/min，二氧化碳流速為350-370l/h，萃取72min，后處理，收集到151g紅褐色油狀物,收率2.50％,編號lylw(2-5)。實施例14在實施例12的基礎(chǔ)上，開啟副泵(r＝15.5r/min)，15min加入1.55kg95％乙醇,萃取110min，后處理后，收集到產(chǎn)物138.7g，收率2.29％，編號lylwj(2-3)。藥理實驗抗幽門螺旋桿菌的篩選1.材料與方法：1.1材料1.1.1實驗菌株atcc700392：為標(biāo)準(zhǔn)菌株，所用菌株為h.pyloriatcc700392，購自atcc(美國菌種保藏中心)；ss1：為標(biāo)準(zhǔn)菌株，所用菌株為h.pylori悉尼株ss1，由張建中教授惠贈，傳代次數(shù)在10代以內(nèi)。h.pylori多重耐藥菌株：發(fā)明人對前期收集的貴州醫(yī)科大學(xué)消化科診斷為消化性潰瘍或慢性胃炎病人的胃粘膜標(biāo)本并分離的出具有3種以上抗生素耐藥性的h.pylori菌株，進(jìn)行耐藥情況核實后，作為本次實驗的臨床多重耐藥株。1.1.2實驗藥物：(1)待測藥物：表1樣品狀態(tài)(2)對照藥物：阿莫西林、甲硝唑、克拉霉素。1.1.3主要儀器表2主要儀器1.1.4主要試劑：表3主要試劑table3mainreagent1.1.5主要試劑的配制1.1.5.1哥倫比亞血瓊脂平板稱取哥倫比亞血瓊脂干粉3.9g，加入89ml去離子水，121℃高壓滅菌20min，待溫度降至50～55℃時，加入無菌脫纖維羊血10ml及混合抗生素1ml后混勻，快速傾倒于4個無菌平板中，每板約25ml。冷卻凝固后從中隨機取出一個平板置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h做無菌試驗，其余保存至4℃冰箱備用。1.1.5.2腦心浸液肉湯稱取腦心浸液粉3.7g，加入100ml去離子水，121℃高壓滅菌20min冷卻后4℃保存。1.1.5.3腦心浸液保存液稱取腦心浸液瓊脂干粉3.7g，加入甘油20ml及去離子水80ml，121℃高壓滅菌20min后分裝于ep管中，每管1ml，冷卻后-20℃保存?zhèn)溆谩?.1.5.4混合抗生素稱取萬古霉素30mg、多粘菌素b20mg、兩性霉素20mg、tmp25mg，加入100ml無菌去離子水后混勻，分裝于15ml離心管中，每管10ml，4℃保存?zhèn)溆谩?.1.5.5800mg/mllyy藥物母液稱取lyy原液40g，加入dmso50ml，混勻溶解，4℃保存?zhèn)溆谩?.1.5.6800mg/mllylj-2-y藥物母液稱取lylj-2-y原液40g，加入dmso50ml，混勻溶解，4℃保存?zhèn)溆谩?.1.5.7160mg/mllyc藥物母液稱取lyc32g，加入雙蒸水200ml，混勻溶解，4℃保存?zhèn)溆谩?.1.5.8160mg/mllys藥物母液稱取lys32g，加入雙蒸水200ml，混勻溶解，4℃保存?zhèn)溆谩?.1.5.9400μg/ml甲硝唑母液配制稱取甲硝唑粉末20mg，加入無菌去離子水50ml，混勻溶解，4℃保存?zhèn)溆谩?.1.5.10400μg/ml克拉霉素母液配制稱取克拉霉素粉末20mg，加無菌去離子水50ml，混勻溶解，4℃保存?zhèn)溆谩?.1.5.11400μg/ml阿莫西林母液配制稱取阿莫西林粉末20mg，加無菌去離子水50ml，混勻溶解，4℃保存?zhèn)溆谩?.1.5.12含畬藥平板的配制：根據(jù)體外藥敏實驗要求，稱取1.95g哥倫比亞血瓊脂粉溶解于43.5ml去離子水中，高壓滅菌后，待培養(yǎng)基冷卻至50～55℃時加入5ml脫纖維無菌羊血(10％)、0.5ml混合抗生素(1％)，將800mg/ml母液進(jìn)行倍比稀釋，加入對應(yīng)稀釋度的藥液1ml，混勻后倒入2個無菌平板中。藥平板配制具體方法如下表4：表4畬藥平板配制方法1.1.5.13含對照藥物平板的配制方法同畬藥血平板的配制，將400μg/ml母液進(jìn)行倍比稀釋，加入對應(yīng)稀釋度的藥液1ml，混勻后倒入2個無菌平板中。藥平板濃度如下表5：表5對照藥物平板配制方法1.1.5.14含溶媒血平板的配制(溶劑對照)：方法同畬藥血平板的配制，并加入相應(yīng)體積的dmso替代藥物稀釋液。1.2實驗方法1.2.1h.pylori的復(fù)蘇從-80℃冰箱中取出h.pylori，室溫溶解后傾倒于哥倫比亞血瓊脂平板內(nèi)，涂布均勻；37℃三氣恒溫培養(yǎng)箱(5％o2,10％co2,85％n2,相對濕度95％以上)培養(yǎng)48h；觀察細(xì)菌生長情況并進(jìn)行革蘭氏染色、氧化酶、觸酶、尿素酶試驗進(jìn)行鑒定。將革蘭氏染色為陰性，生化鑒定試驗均為陽性的細(xì)菌進(jìn)行傳代培養(yǎng)48h后重復(fù)觀察細(xì)菌生長情況，穩(wěn)定傳代后用于后續(xù)實驗。1.2.2菌液的制備：將血平板上的菌苔刮至含15ml預(yù)冷腦心浸液肉湯的玻璃試管中,離心洗滌一次后，重懸于4℃腦心浸液肉湯中。將此菌液作10倍、100倍、1000倍稀釋后，在紫外分光光度計上測菌液的od600值，當(dāng)od600值位于0.1～1.0之間時該數(shù)值與菌液濃度有較好的線性關(guān)系，菌液含量的計算公式如下：菌量/ml＝2.2×108×od600值×稀釋倍數(shù)，將菌液稀釋到3×108cfu/ml，在15min內(nèi)完成菌液配制和接種，接種過程中菌液需保持在4℃。1.2.3.臨床多重耐藥株驗證試驗：將培養(yǎng)48h的h.pylori臨床多重耐藥菌株用腦心浸液肉湯制備菌懸液，調(diào)配其濃度在3×108cfu/ml，分別用無菌棉簽沾取菌懸液均勻涂布于濃度為甲硝唑256μg/ml，克拉霉素256μg/ml，阿莫西林256μg/ml的藥物培養(yǎng)板及空白培養(yǎng)板上，每個藥物濃度涂抹兩個平板，置于微需氧環(huán)境中37℃培養(yǎng)48h。以空白平板上生長良好的h.pylori多重耐藥菌株作參照，觀察其生長情況，并對所生長細(xì)菌做革蘭氏染色和生化鑒定試驗。1.2.4lyy、lylj-2-y、lyc、lys抗h.pylori活性檢測：(1)菌液涂布：用無菌棉簽蘸取濃度為3×108cfu/ml的菌液，在瓊脂表面均勻涂布，同時設(shè)置陰性對照(即不加菌)、空白對照(即不加藥)、溶劑對照(即僅加溶劑)和藥物對照(甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林)。每種樣品每個濃度均涂布2塊平板。(2)培養(yǎng)：將平板置于37℃三氣培養(yǎng)箱(85％n2，10％co2，5％o2)中培養(yǎng)48h后觀察結(jié)果。(3)藥物抑菌效果判定：在陰性對照無菌生長，空白對照和溶劑對照生長良好，藥物對照(甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林)結(jié)果相符的情況下的條件下，以肉眼下無菌生長的樣品最高稀釋度為該樣品對相應(yīng)菌株的最低抑菌濃度(mic)。實驗重復(fù)三次。2.實驗結(jié)果2.1溶劑對h.pylori生長的影響配制含2％石油醚、1.1％及2％dmso的哥倫比亞血平板，分別均勻涂布h.pylori，培養(yǎng)48h。結(jié)果顯示：與空白對照相比，含2％石油醚的平板表面凹凸不平，無法直接觀察h.pylori的生長狀況，影響實驗結(jié)果的判斷，若將其作為溶劑進(jìn)行后續(xù)實驗可能無法得到準(zhǔn)確的mic；而含1.1％及2％的dmso平板上的h.pylori生長情況與空白對照無明顯差異，如圖12.2臨床多重耐藥株的驗證實驗：將從臨床收集并分離的h.pylori多重耐藥菌株進(jìn)行復(fù)蘇，并對耐藥情況核實。結(jié)果顯示，h.pylori多重耐藥菌株在甲硝唑藥物濃度為256μg/ml，克拉霉素為256μg/ml，阿莫西林為256μg/ml的藥平板上均生長狀態(tài)良好，與空白組無區(qū)別。如圖2。2.3lyy、lyc、lys、lylj-2-y及對照西藥抗h.pylori活性的藥敏結(jié)果：本次實驗在陰性對照無菌生長、空白對照和溶劑對照生長良好的情況下，lyy對h.pyloriatcc700392和ss1的mic均為4mg/ml，對臨床多重耐藥菌株的mic為2mg/ml；lylj-2-y對h.pyloriatcc700392的mic為2mg/ml，對ss1的mic為8mg/ml，對臨床多重耐藥菌株的mic為4mg/ml；lyc對h.pyloriatcc700392、ss1、臨床多重耐藥菌株的mic分別為1mg/ml、4mg/ml、16mg/ml；lys對3株菌的mic都為8mg/ml，各藥物的mic詳見表6。表6各藥物的mic綜上所述，畬藥lyc、lys、lyy及l(fā)ylj-2-y具有一定的h.pylori抗菌活性。當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12