一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑及其制備方法；所述幽門螺旋桿菌感染診斷試劑包括一種放射性尿素[14C]膠囊和與所述膠囊配套使用的集氣劑；所述放射性尿素[14C]膠囊由尿素[14C]乙醇溶液和膠囊填料封裝而成；所述放射性尿素[14C]膠囊的放射性活度為0.85~1.15μCi；所述的填料為甘露醇和尿素的混合物；所述集氣劑為氫氧化海胺和酚酞的無水甲醇溶液，其中氫氧化海胺的濃度為0.475~0.525mol/L，酚酞的濃度為0.70-0.80g/L；使用該診斷試劑進(jìn)行幽門螺旋桿菌感染診斷，具有輕松方便、準(zhǔn)確的、安全的特點。
【專利說明】一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑及其制備方法，具體涉及一種診斷用尿素[14C]膠囊及其集氣劑以及所述膠囊和集氣劑的制備方法，屬于放射性藥品領(lǐng)域。。
【背景技術(shù)】
[0002]目前放射性物質(zhì)廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)、科研、醫(yī)療、生物、實驗室等各個領(lǐng)域，尤其作為藥品，已被廣泛地應(yīng)用于國內(nèi)外的臨床應(yīng)用中。診斷用尿素[14C]膠囊及其集氣劑用于胃幽門螺旋桿菌感染的診斷檢測方法，具有方便、快速、經(jīng)濟(jì)、非創(chuàng)傷性等特點。幽門螺旋桿菌是胃潰瘍和慢性萎縮性胃炎的主要致病菌，根除幽門螺旋桿菌可使胃潰瘍和慢性萎縮性胃炎的發(fā)病率大大降低。流行病學(xué)研究證明大約6%的幽門螺旋桿菌感染會最終發(fā)展為胃癌，世界衛(wèi)生組織已將其列為I類致癌源。因此，盡早發(fā)現(xiàn)幽門螺旋桿菌感染并給與及時治療是非常重要的。
[0003]診斷用尿素[14C]膠囊及其集氣劑是一種新的同位素診斷技術(shù)。其原理是口服碳[14C]放射性同位素標(biāo)記的尿素膠囊后，如果存在幽門螺旋桿菌的感染，則會分泌尿素酶而使[14C]尿素在該酶的作用下分解成碳[14C] 二氧化碳及氨氣，用集氣劑收集呼出的二氧化碳并用儀器進(jìn)行檢測碳[14C]放出的β射線便可判斷是否存在幽門螺旋桿菌感染。
[0004]當(dāng)前診斷幽門螺旋桿菌感染的方法有6種，細(xì)菌培養(yǎng)、組織學(xué)、分子生物學(xué)、尿素酶試驗、血清學(xué)和診斷用尿素[1 4C]膠囊及其集氣劑。其中四種診斷方法均要通過做胃鏡、活檢才能進(jìn)行。做胃鏡本身對病人來說十分痛苦，活檢又容易傳染感言等疾病，而幽門螺旋桿菌的治療無特效藥，要根除它必須進(jìn)行療效的跟蹤和復(fù)查。除了初診病人需進(jìn)行胃鏡檢查以排除胃癌之外，僅為復(fù)查幽門螺旋桿菌治療情況而再做胃鏡活檢檢查，患者十分痛苦，費(fèi)用也高，一般不被接受。因此常錯過一次性根治胃病的機(jī)會，病情復(fù)發(fā)后又給治療帶來新的困難。血清學(xué)方法雖也是基本無創(chuàng)傷的，但只能診斷是否感染過幽門螺旋桿菌，而不能判斷是否已根除。因此需要一種輕松方便、準(zhǔn)確的、安全的檢查幽門螺旋桿菌感染的方法，才能保證一次性根除感染成功，從而根治胃病，減少復(fù)發(fā)，極大地提高了人民健康水平。診斷用尿素[14C]膠囊及其集氣劑則很好滿足了這種需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有幽門螺旋桿菌感染診斷技術(shù)的缺點，提供一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑及其制備方法；使用該診斷試劑進(jìn)行幽門螺旋桿菌感染診斷，具有輕松方便、準(zhǔn)確的、安全的特點。
[0006]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0007]—種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑，包括一種放射性尿素[14C]膠囊和與所述放射性尿素[14c]膠囊配套使用的集氣劑；
[0008]所述放射性尿素[14C]膠囊由尿素[14C]乙醇溶液和膠囊填料封裝而成；所述放射性尿素[14C]膠囊的放射性活度為0.85~1.15 μ Ci ;所述的膠囊填料為甘露醇和尿素的混合物。本發(fā)明中所述尿素區(qū)別于尿素[14C]，單獨(dú)提到的尿素是指不含14C的尿素，是沒有放射性的尿素。
[0009]所述集氣劑為氫氧化海胺和酚酞的無水甲醇溶液，其中，氫氧化海胺的濃度為0.475 ~0.525mol/L，酚酞的濃度為 0.70 ~0.80g/L。
[0010]所述甘露醇和尿素質(zhì)量之比為42~44:26~28 ;優(yōu)選為43:27。
[0011]所述尿素[14C]乙醇溶液的放射性活度為0.17~0.23Ci/L。
[0012]所述放射性尿素[14C]膠囊由4.9~5.1 μ L的尿素[14C]乙醇溶液和0.12~0.14g的膠囊填料封裝而成。
[0013]所述放射性尿素[14C]膠囊的制備方法，包括以下步驟:
[0014](A)尿素[14C]的溶解:取尿素[14C],加無水乙醇溶解,制成尿素[14C]乙醇溶液；
[0015](B)填料的配制:制備甘露醇和尿素的混合物，作為膠囊填料；
[0016](C)放射性尿素[14C]膠囊的制備:向空心膠囊中依次加入前述制備的尿素[14C]乙醇溶液和膠囊填料，制成單粒放射性活度為0.85~1.15 μ Ci的放射性尿素[14C]膠囊；
[0017](D)膠囊瓶的封裝:將前述制備好的放射性尿素[14C]膠囊，放入包裝瓶中，旋緊瓶蓋，封好瓶口。
[0018]其中，優(yōu)選的，步驟(B)中，所述膠囊填料中，甘露醇和尿素的混合質(zhì)量之比為42 ~44:26 ~28，優(yōu)選為 43:27。
`[0019]優(yōu)選的，步驟(C)中采用精密可調(diào)移液器向膠囊體中加入所述的尿素[14C]乙醇溶液。
[0020]優(yōu)選的，步驟(D)中采用鋁箔感應(yīng)封口機(jī)封好瓶口。
[0021]優(yōu)選的，向膠囊中依次加入4.9~5.1 μ L尿素[14C]乙醇溶液和0.12~0.14g膠
囊填料。
[0022]優(yōu)選的，所述空心膠囊由醫(yī)用明膠制成；所述包裝瓶為口服固體藥用高密度聚乙烯瓶。與所述放射性尿素[14C]膠囊配套使用的集氣劑的制備方法，包括以下步驟:
[0023](a)配制氫氧化海胺和酚酞的無水甲醇溶液，其中氫氧化海胺的濃度為0.475~
0.525mol/L，酚酞的濃度為0.70~0.80g/L，作為前述放射性尿素[14C]膠囊的集氣劑；
[0024](b)在每個安瓿瓶中加入1.9~2.1mL前述集氣劑，然后封口 ；
[0025]優(yōu)選的，步驟(b)中采用自動安瓿拉絲灌封機(jī)向安瓿瓶中加入集氣劑。
[0026]本發(fā)明進(jìn)一步公開將所述放射性尿素[14C]膠囊和集氣劑用于幽門螺旋桿菌感染診斷的使用方法，包括以下步驟:
[0027]( I)受檢人在檢查前禁食4-6小時，受試前漱口 ；
[0028](2)用110~130mL溫飲用水送服放射性尿素[14C]膠囊I粒，靜坐10-20分鐘；
[0029](3)用一個安瓿瓶的集氣劑收集受檢者呼出的氣體:首先將細(xì)管的一端插入安瓿瓶內(nèi)的集氣劑溶液中，然后從細(xì)管的另一端向溶液中吹氣，直至集氣劑溶液由紅色變?yōu)闊o色；
[0030](4)用β射線檢測儀對上述變色的集氣劑樣品進(jìn)行檢測，判斷是否被幽門螺旋桿菌感染。
[0031]根據(jù)檢測的結(jié)果:如果β射線檢測儀測量計數(shù)率大于200dpm，則判定為被幽門螺旋桿菌感染；反之，則判定為未被幽門螺旋桿菌感染。[0032]本發(fā)明的技術(shù)效果及優(yōu)點在于:
[0033]本發(fā)明所用的尿素[14C]，其放射化學(xué)品為14C,衰變產(chǎn)生弱β射線，能量低，非常易于防護(hù)，由其制備的膠囊活度值也非常低，只有約I μ Ci/粒，生物半衰期短，診斷結(jié)束很快排泄至體外。
[0034]本發(fā)明尿素[14C]放射化學(xué)品用無水乙醇進(jìn)行溶解，原因是尿素[14C]放射化學(xué)品特別易溶于無水乙醇中，這樣形成的混合溶液的均勻度也特別好，從而保證最后分裝到每粒膠囊的活度含量均勻性也特別高。
[0035]本發(fā)明膠囊使用的填料是甘露醇和尿素。由于尿素[14C]的載體量很低，加一定量的尿素起飽和尿素酶催化作用，保證酶促反應(yīng)速率高，以減少尿素[14c]的用量。甘露醇為充填膠囊用。同時二者均有利尿的作用，為此可以加速尿素[14C]的排泄，以降低對人體傷害的風(fēng)險。將以上成分裝填于膠囊中，由受試者吞服使用，還可避免口腔中分泌酶對測試的干擾，亦避免了尿素 [14C]沾污在非測試部位。
[0036]本發(fā)明與膠囊配套使用的集氣劑是將適量酚酞、氫氧化海胺溶于無水甲醇中，混合均勻，形成紅色液體，氫氧化海胺濃度在0.95~1.05mmol/2ml之間。當(dāng)集氣劑遇到足夠的二氧化碳?xì)怏w時溶夜的顏色則由紅色變?yōu)闊o色。此時對集氣劑進(jìn)行放射性[14C]檢測即可判別是否被幽門螺旋桿菌感染，從而達(dá)到診斷的目的。
[0037]本發(fā)明與膠囊配套使用的集氣劑是用自動安瓿拉絲灌封機(jī)進(jìn)行分裝，在每個安瓿瓶中加入2ml集氣劑，并將每個瓶子封口，該設(shè)備自動化程度高，每瓶溶液加樣體積精度高，速度快，加液、分裝一體化。
[0038]除了尿素[14C]放射化學(xué)品需從國外進(jìn)口而外，其他的原輔料、化學(xué)試劑和分裝用設(shè)備均可在國內(nèi)購買。
【具體實施方式】
[0039]以下通過特定的具體實例說明本發(fā)明的技術(shù)方案。應(yīng)理解，本發(fā)明提到的一個或多個方法步驟并不排斥在所述組合步驟前后還存在其他方法步驟或在這些明確提到的步驟之間還可以插入其他方法步驟；還應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。而且，除非另有說明，各方法步驟的編號僅為鑒別各方法步驟的便利工具，而非為限制各方法步驟的排列次序或限定本發(fā)明可實施的范圍，其相對關(guān)系的改變或調(diào)整，在無實質(zhì)變更技術(shù)內(nèi)容的情況下，當(dāng)亦視為本發(fā)明可實施的范疇。
[0040]實施例
[0041]1、尿素[14C]乙醇溶液制備:
[0042](I)尿素[14C]的溶解:
[0043]①取尿素[14C] 一瓶，按ImCi加ImL無水乙醇的比例，溶解原料；以IOOmCi規(guī)格的原料為例:取一瓶，用移液管(或滅菌注射器)取無水乙醇lOOmL，溶解成放射性濃度為lmCi/mL的溶液；
[0044]②取上述溶液，按1:5的稀釋比例，加無水乙醇稀釋。以配制IOmCi尿素[14C]乙醇溶液為例:取IOmL上述溶液于玻璃容器中，用移液管(或滅菌注射器)取無水乙醇稀釋成50mL，搖勻，制備成用于生產(chǎn)膠囊的尿素[14C]乙醇溶液，送驗；
[0045]③取上述稀釋溶液2 μ L加入一干凈的檢測瓶中，再加入3mL閃爍液，搖勻。用β射線檢測儀檢驗，所述尿素[14C]乙醇溶液的放射性活度在0.85~1.15 μ Ci/5 μ L為合格。做三份平行樣品。
[0046]檢測數(shù)據(jù)如下:
[0047]β射線檢測儀自帶的14C標(biāo)準(zhǔn)源放射性活度C:0.059 ( μ Ci )
[0048]β射線檢測儀自帶的14C標(biāo)準(zhǔn)源測量計數(shù)率B:131409 (dpm)
[0049]三份平行樣品的計數(shù)率(dpm)分別為:1.8483972.8531863.850330
[0050]三份平行樣品的平均計數(shù)率A (dpm):850638
[0051]放射性活度=5/2A*C/B計算為:_ ( μ Ci/5 μ L)
[0052]2、填料的配制:制備甘露醇和尿素的混合物，作為膠囊填料；甘露醇和尿素的混合質(zhì)量之比為43:27 ;以萬粒膠囊產(chǎn)量為例，需用天平分別稱取甘露醇860克和尿素540克混勻，備用。
[0053]3、尿素[14C]膠囊的制備:
[0054](1)將配制好的尿素[14C]乙醇溶液、填料及所有器皿放通風(fēng)柜內(nèi)，開紫外燈照射消毒半小時；
[0055](2)尿素[14C]膠囊灌裝:將空心膠囊拆開，膠囊體插入多孔板中，用精密可調(diào)移液器在每個膠囊體中加入尿素[14C]乙醇溶液5yL，然后加入混勻的填料0.13g，蓋好膠囊帽。
[0056](3)裝瓶:從多孔板上取下已制備好的膠囊，放入瓶中，每瓶中放10?；?0粒，蓋好蓋子;
[0057](4)膠囊的檢驗:
[0058]①均勻度方法:任取20粒尿素[14C]膠囊，分別置小瓶中，各加5mL水微熱溶解，從各瓶中分別取5 μ L于各液體閃爍瓶中，分別加4mL閃爍液，搖勻，用液體閃爍計數(shù)儀測量每瓶溶液的放射性計數(shù)率，計算平均計數(shù)率。每個膠囊的計數(shù)率與平均計數(shù)率比較，至少有19個膠囊的計數(shù)率應(yīng)為平均值的80.0~120.0%。
[0059]檢驗結(jié)果:放射性計數(shù)(dpm)
[0060]2187,2027,2089,2191,2112,2068,2125,2015,2152,2151,
[0061]2200,2015,2107,2143,2231,1952,2226,2154,2297,1966。
[0062]放射性計數(shù)平均值(A):2120 (dpm)
[0063]在平均值80.0~120.0%范圍內(nèi)的膠囊粒數(shù):20粒
[0064]②放射性活度方法:測量尿素[14C]標(biāo)準(zhǔn)溶液的DPM數(shù)(B)，按以下公式計算膠囊的放射性活度(X)，X=1000AXC/B。其中C為β射線檢測儀自帶的14C標(biāo)準(zhǔn)源的活度，A為均勻度平均值。放射性活度在0.85~1.15 μ Ci/5 μ L為合格。
[0065]檢驗結(jié)果:A=2120(dpm) B=130933 (dpm) C=0.059 ( μ Ci)
[0066]膠囊的放射性活度X=0.955 UCi)
[0067]③Rf值和放射化學(xué)純度方法:用毛細(xì)管取做均勻度的水溶液點于新華I號紙的原點，以正丁醇:冰醋酸:水(體積比2:1:1)為展開劑，展開后取出，涼干，依次剪成11小段，分別放入11個閃爍瓶中，各加4mL閃爍液，依次測量各段的放射性計數(shù)(dpm)按公式計算放射化學(xué)純度％=(主峰的計數(shù)率/放射性計數(shù)率總和)。放射化學(xué)純度不低于90%為合格。
[0068]檢驗結(jié)果:0.0) 170.1) 80.2) 80.3) 630.4) 2030.5) 8960.6) 44450.7) 24760.8)3900.9) 91.0) 154
[0069]主峰的計數(shù)率放射性計數(shù)率總和:8669
[0070]放射化學(xué)純度%=97%
[0071]④崩解時限
[0072]設(shè)置溫度:實測溫度:37.2 V
[0073]方法:待燒杯內(nèi)的實測溫度穩(wěn)定在37±1°C后，將待檢的6粒膠囊放入吊籃的玻璃試管內(nèi)再放上擋板，將吊籃放于升降臂上，按時間控制的“啟/?！辨I，開始崩解試驗。膠囊的崩解時限在10分鐘之內(nèi)為合格。
[0074]
【權(quán)利要求】
1.一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑，包括一種放射性尿素[14C]膠囊和與所述放射性尿素[14C]膠囊配套使用的集氣劑； 所述放射性尿素[14C]膠囊由尿素[14C]乙醇溶液和膠囊填料封裝而成；所述放射性尿素[14C]膠囊的放射性活度為0.85~1.15 μ Ci ;所述的膠囊填料為甘露醇和尿素的混合物； 所述集氣劑為氫氧化海胺和酚酞的無水甲醇溶液，其中氫氧化海胺的濃度為0.475~0.525mol/L，酚酞的濃度為 0.70 ~0.80g/L。
2.如權(quán)利要求1所述的一種一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑，其特征在于，所述甘露醇和尿素質(zhì)量之比為42~44:26~28 ;所述尿素[14C]乙醇溶液的放射性活度為0.17~0.23Ci/L。
3.如權(quán)利要求1所述的一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑，其特征在于，所述放射性尿素[14C]膠囊由4.9~5.1 μ L的尿素[14C]乙醇溶液和0.12~0.14g的填料封裝而成。
4.如權(quán)利要求1所述的一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑的制備方法，包括以下步驟: (1)放射性尿素[14C]膠囊的制備: (A)尿素[14C]的溶解:取尿素[14C],加無水乙醇溶解,制成尿素[14C]乙醇溶液； (B)填料的配制:制備甘露醇和尿素的混合物,作為膠囊填料； (C)放射性尿素[14C]膠囊的制備:向空心膠囊中依次加入前述制備的尿素[14C]乙醇溶液和膠囊填料，制成單粒放射性活度為0.85~1.15 μ Ci的放射性尿素[14C]膠囊； (D)膠囊瓶的封裝:將前述制 備好的放射性尿素[14C]膠囊，放入包裝瓶中，旋緊瓶蓋，封好瓶口。 (2)集氣劑的制備: Ca)配制氫氧化海胺和酚酞的無水甲醇溶液，其中氫氧化海胺的濃度為0.475~0.525mol/L，酚酞的濃度為0.70~0.80g/L，作為前述放射性尿素[14C]膠囊的集氣劑； (b)在每個安瓿瓶中加入1.9~2.1mL前述集氣劑，然后封口。
5.如權(quán)利要求4所述的一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑的制備方法，其特征在于，所述膠囊填料中，甘露醇和尿素質(zhì)量之比為42~44:26~28 ;所述尿素[14C]乙醇溶液的放射性活度為0.17~0.23Ci/L。
6.如權(quán)利要求5所述的一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑的制備方法，其特征在于，向空心膠囊中依次加入4.9~5.1 μ L尿素[14C]乙醇溶液和0.12~0.14g膠囊填料。
7.如權(quán)利要求6所述的一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑的制備方法，其特征在于，步驟(C)中采用精密可調(diào)移液器向膠囊體中加入所述的尿素[14C]乙醇溶液；步驟(D)中采用鋁箔感應(yīng)封口機(jī)封好瓶口 ；步驟(b)中，采用自動安瓿拉絲灌封機(jī)向安瓿瓶中加入集氣劑。
8.如權(quán)利要求4所述的一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑的制備方法，其特征在于，所述空心膠囊由醫(yī)用明膠制成。
9.如權(quán)利要求4所述的一種幽門螺旋桿菌感染診斷試劑的制備方法，其特征在于，所述包裝瓶為口服固體藥用高密度聚乙烯瓶。
【文檔編號】G01N23/00GK103751815SQ201410035644
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年1月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月24日
【發(fā)明者】徐鵬程, 戴雅琴, 張國華, 吳松年 申請人:上海欣科醫(yī)藥有限公司