本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，尤其是涉及一種可降解藥物緩釋材料的制備方法。

背景技術(shù)：

結(jié)直腸癌，簡稱“crc”，是當(dāng)今世界上發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一。外科手術(shù)是用于治療這種疾病的最常用方法，如切除腫瘤、腸道造口術(shù)或者開腹手術(shù)。但是，外科手術(shù)導(dǎo)致的復(fù)發(fā)率和死亡率高達(dá)4%～60%，8.8%～27%，并且嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。另外，一些身體狀況難以達(dá)到手術(shù)條件的晚期患者或者老年患者，無法及時(shí)進(jìn)行手術(shù)?；诖耍芯咳藛T開發(fā)了腸道支架用于緩解病人的腸道梗阻、恢復(fù)病人的排便功能，達(dá)到姑息治療的作用。

常見的腸道支架多采用鈦絲、鎳絲等制成的金屬支架，如美國專利（7731742b2）、歐洲專利（2009025418a1）、中國專利（cn106175980a）等，包括經(jīng)美國食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的自膨式金屬支架（簡稱“sems”）。但是，傳統(tǒng)的金屬支架僅能發(fā)揮支撐腸道、緩解病人梗阻的作用，無法達(dá)到治療的效果。一方面，在金屬支架植入患者體內(nèi)的期間，易出現(xiàn)支架滑移、腸道穿孔、出血等相關(guān)并發(fā)癥，加大了患者的痛苦；另一方面，患者在此期間內(nèi)需要額外進(jìn)行口服或者肌肉注射化療藥物，到達(dá)腫瘤部位的有效藥物濃度低，且易引起相關(guān)免疫排斥反應(yīng)，如脫發(fā)、嘔吐、免疫力降低等，嚴(yán)重危及患者生命安全。

因此，開發(fā)出一種具備優(yōu)良的生物相容性、生物可降解性、靶向性治療腫瘤部位的腸道藥物緩釋材料非常重要。腸道藥物緩釋材料中載有抗腫瘤藥物，可以達(dá)到靶向性治療結(jié)直癌的效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種具備優(yōu)良的生物相容性、生物可降解性、靶向性治療腫瘤部位的腸道藥物緩釋材料。

本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種可降解藥物緩釋材料，包括如下組成成分：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5-15%的純絲素蛋白溶液、抗腫瘤藥物和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的聚乙二醇。

在一些實(shí)施方式中，所述抗腫瘤藥物選自5-氟尿嘧啶、羥基喜樹堿、紫杉醇、奧沙利鉑、順鉑、卡鉑、表阿霉素、姜黃素和亞葉酸鈣中的一種或多種。

一種可降解藥物緩釋材料的制備方法，包括以下步驟：

將蠶絲脫膠；

將脫膠后的蠶絲溶解在溶劑中形成絲素蛋白溶液，將所述絲素蛋白溶液依次進(jìn)行透析處理和離心處理后得到純絲素蛋白溶液；

將所述純絲素蛋白溶液和抗腫瘤藥物溶于聚乙二醇中混合后制得混合液，并將所述混合液制成膠狀制得載藥絲素蛋白水凝膠。

在一些實(shí)施方式中，蠶絲在脫膠過程中要進(jìn)行干燥處理。

在一些實(shí)施方式中，通過透析袋對所述絲素蛋白溶液進(jìn)行透析處理。

在一些實(shí)施方式中，所述溶劑選自libr/c2h5oh/h2o或溴化鋰溶液或cacl2/c2h5oh/h2o中的一種。

在一些實(shí)施方式中，所述libr/c2h5oh/h2o的質(zhì)量比為45:46:12。

在一些實(shí)施方式中，所述cacl2/c2h5oh/h2o的摩爾比為1:2:8。

在一些實(shí)施方式中，所述溴化鋰溶液的濃度為9.5mol/l。

其有益效果為：本發(fā)明采用蠶絲作為緩釋材料，具有生物相容性和生物可降解性，降低人體免疫排斥率。本發(fā)明搭載藥物的絲素蛋白藥物水凝膠可直接接觸腫瘤部位，從而靶向性治療腫瘤部位，減少患者進(jìn)行全身放化療，避免危害患者其它部位，提高患者生存質(zhì)量，同時(shí)可以靶向性治療病變梗阻，降低腸癌病人置入支架后的再梗阻風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明制作方法成熟、穩(wěn)定，便于大范圍推廣。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1的一種可降解藥物緩釋材料及其制備方法的不同成分的絲素蛋白水凝膠的紅外光譜（ft-ir）測試分析圖。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例1的一種可降解藥物緩釋材料及其制備方法的絲素蛋白水凝膠的x-射線衍射分析（xrd）測試分析圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，本發(fā)明中所用到的試劑為均為分析純。

實(shí)施例一

取繅絲后的蠶絲30g放入0.5‰（w/w）的碳酸鈉（na2co3）溶液中，浴比1:20，煮沸20-40分鐘。然后用去離子水洗滌，反復(fù)進(jìn)行3次完成脫膠,置于通風(fēng)廚中干燥12-24小時(shí)。將脫膠蠶絲溶于質(zhì)量比為45:46:12的libr/c2h5oh/h2o溶劑中恒溫水浴攪拌溶解4小時(shí)，恒溫水浴的溫度控制在70℃-75℃，形成絲素蛋白溶液。將絲素蛋白溶液取出冷卻后將其注入透析袋中，采用去離子水?dāng)嚢柰肝?-3天，得到純絲素蛋白溶液。將純絲素蛋白溶液與抗腫瘤藥物進(jìn)行混合，具體為：將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的純絲素蛋白溶液、濃度為15mg/ml的5-氟尿嘧啶混合溶液，按1:3比例，與質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的聚乙二醇400（peg-400）均勻混合制得絲素蛋白藥物混合液；再向混合液中添加催化劑二月桂酸二丁基錫（t-12）和中和劑三乙醇胺（tea），成鹽后降溫至40℃以下，再將混合液置于500ml帶有聚四氟乙烯（ptfe）攪拌桿、溫度計(jì)和連接真空泵的橡膠導(dǎo)管的四口反應(yīng)釜中。加入適量的絲素蛋白水溶液緩慢攪拌5min，直至混合物體系固化，停止攪拌，放置24-40min，恒溫保持6-12h后，即得到載藥絲素蛋白水凝膠。

通過上述方法分別制取純絲素水凝膠（5%）、絲素/peg水凝膠（10:1,w/w）以及如實(shí)施例1中所述的絲素/peg/5-氟尿嘧啶水凝膠（10:1:0.1,w/w/w）

如圖1所示，a、b、c分別為制取純絲素水凝膠（5%）、絲素/peg水凝膠（10:1,w/w）以及絲素/peg/5-氟尿嘧啶水凝膠（10:1:0.1,w/w/w）的紅外譜圖。在841cm^-1處是5-氟尿嘧啶的c-h面外變形振動(dòng)特征吸收峰，1439cm^-1處是5-氟尿嘧啶的c-h面內(nèi)彎曲振動(dòng)特征吸收峰，1626cm^-1處是5-氟尿嘧啶的c=c伸縮振動(dòng)重吸收峰。而且5-氟尿嘧啶在3069cm^-1處的n-h的伸縮振動(dòng)峰消失，說明其與絲素的c=o之間形成氫鍵。因此，5-氟尿嘧啶與絲素有效結(jié)合，且形成穩(wěn)定的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

如圖2所示，實(shí)施例一中所述的不同成分的水凝膠的x-射線衍射光譜圖。a-d分別為純絲素水凝膠（5%）、絲素/peg水凝膠（10:1,w/w）、絲素/peg/5-fu水凝膠（10:1:0.1,w/w/w）及純5-氟尿嘧啶藥物。由圖可得，5-氟尿嘧啶的特征結(jié)晶峰在28.56°處，圖中c在該位置同樣出現(xiàn)結(jié)晶峰，說明5-氟尿嘧啶成功負(fù)載在水凝膠中；相比于a和b，c除了增加5-氟尿嘧啶結(jié)晶峰外，某些肩峰的寬度和強(qiáng)度出現(xiàn)改變，而且某些峰的位置出現(xiàn)偏移，進(jìn)一步說明5-氟尿嘧啶與絲素及peg載體確實(shí)存在相互作用，且有效結(jié)合成穩(wěn)定的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

實(shí)施例二

先稱取未脫膠蠶絲10g，放置于0.5wt%的na2co3水溶液中煮沸0.5-1小時(shí)以除去絲膠，再用去離子水反復(fù)沖洗，濾紙干燥，將蠶絲在40oc-50oc真空干燥箱中放置48-72小時(shí)。取出脫膠后蠶絲溶解于濃度為9.5mol/l、溫度為40oc溴化鋰溶液中，充分溶解得到絲素蛋白溶液。將所得絲素蛋白溶液注入分子量為10000-20000的透析袋中，在去離子水中透析48-72小時(shí)，每經(jīng)過24小時(shí)換水一次；完成透析后，取出絲素蛋白溶液置于離心管中，在5000-9000rpm轉(zhuǎn)速下離心5-8分鐘去除固體雜質(zhì)，得到純絲素蛋白溶液。將純絲素蛋白溶液與抗腫瘤藥物進(jìn)行混合，具體步驟為：將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的純絲素蛋白溶液、濃度為15mg/ml的5-氟尿嘧啶和濃度為70mg/ml的姜黃素組成的混合溶液，按1:20比例，與溶于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的peg-400混合均勻制得絲素蛋白藥物混合液，向混合液中加入的濃度為6mg/ml的表面活性劑月桂酰肌氨酸鈉（sns），置于37℃度生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30-60分鐘，即可得到載藥絲素蛋白水凝膠。

實(shí)施例三

蠶絲脫膠：量取10-15l純水于脫膠鍋中加熱，稱取25.44g無水na2co3，待水即將沸騰時(shí)加入，使其充分溶解制得na2co3水溶液；稱取未脫膠30g蠶絲，待na2co3水溶液水沸騰后加入，每隔10min攪拌一次，煮30-60min；取出蠶絲后用純水反復(fù)搓洗3次，置于通風(fēng)廚中干燥12-24小時(shí)。蠶絲溶解：稱取2-4g脫膠后的蠶絲，放于50ml燒杯中，量取20ml三元混合液（cacl2:c2h5oh:h2o=1:2:8)，加入50ml燒杯中，使蠶絲充分浸入，用塑膠手套封口，置于80oc烘箱中1小時(shí)后取出，得到絲素蛋白溶液。絲素蛋白溶液透析：剪取兩段透析袋，放于超純水中浸潤，將溶液分別裝入兩個(gè)透析袋，然后擠跑袋內(nèi)空氣，扎緊袋口，將透析袋置于桶中，加滿水透析36h，中途換水5-6次；將透析完成后的溶液以9000rpm轉(zhuǎn)速，離心20min兩次，得到純絲素蛋白溶液。將純絲素蛋白溶液與抗腫瘤藥物進(jìn)行混合，具體操作步驟為：將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的純絲素蛋白溶液、濃度為15mg/ml的5氟尿嘧啶、濃度為5mg/ml的奧沙利鉑和濃度為10mg/ml的亞葉酸鈣組成的混合溶液，按照1：3比例，均勻溶于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的peg-400中，600轉(zhuǎn)/min速下攪拌10min，超聲分散1h，得到均勻分散的載藥絲素蛋白水凝膠。

以上所述的僅是本發(fā)明的一些實(shí)施方式。對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。