本發(fā)明涉及生物材料技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種絲蛋白海綿及其制備方法。

背景技術(shù)：

絲蛋白由于優(yōu)異的生物相容性、力學(xué)性能、可降解性、易于成形以及能夠在水溶液中進(jìn)行處理等優(yōu)點(diǎn)在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域受到廣泛的關(guān)注。具有多孔結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿已經(jīng)廣泛應(yīng)用于不同組織修復(fù)的實(shí)驗(yàn)室研究中，并有多個(gè)產(chǎn)品正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，因此，絲蛋白海綿材料是絲蛋白基生物材料最為重要的組成部分，具有廣泛的應(yīng)用前景。

研究者開(kāi)發(fā)出了多種制備絲蛋白海綿的方法，主要包括鹽析法和冷凍干燥法；鹽析法制備的多孔海綿主要構(gòu)象為beta-sheet結(jié)晶，力學(xué)性能高，不適合應(yīng)用于軟組織修復(fù)；冷凍干燥法所制備的絲蛋白，盡管一般為非晶結(jié)構(gòu)，但其會(huì)在水中溶解，導(dǎo)致其無(wú)法應(yīng)用，只能通過(guò)醇處理、真空水處理來(lái)誘導(dǎo)形成beta-sheet，最終獲得不溶于水的海綿材料。因此，盡管有多種方法如添加高結(jié)晶絲蛋白誘導(dǎo)、利用酸來(lái)抑制結(jié)晶等降低海綿的結(jié)晶度，在保持海綿在水中穩(wěn)定性的基礎(chǔ)上來(lái)降低海綿的硬度，但是絲蛋白多孔海綿水不溶性，力學(xué)性能以及晶體結(jié)構(gòu)之間的內(nèi)在矛盾仍然缺乏解決的方法。另一方面，近年來(lái)，仿細(xì)胞外基質(zhì)納米纖維結(jié)構(gòu)的引入已經(jīng)成為提高材料生物相容性的有效手段，目前研究已有通過(guò)添加納米纖維誘導(dǎo)的方法來(lái)提高絲蛋白海綿中納米纖維結(jié)構(gòu)的比例，但完全由納米纖維組成，具有復(fù)合結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿仍需持續(xù)研究。

最近，申請(qǐng)人研究開(kāi)發(fā)出一種非晶結(jié)構(gòu)的絲蛋白納米纖維，其直徑在10～20nm，長(zhǎng)度在100nm～1μm，具有良好的親水性，能夠形成高濃度的絲蛋白溶液，這使得以此為基礎(chǔ)制備完全由納米纖維組成，具有復(fù)合結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿成為可能。然而，上述非晶結(jié)構(gòu)的絲蛋白納米纖維為亞穩(wěn)態(tài)，易于隨著溫度、時(shí)間等的變化轉(zhuǎn)變成高結(jié)晶的絲蛋白纖維，從而形成凝膠。如何避免制備過(guò)程中beta-sheet的形成，是制備具有納米纖維-多孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿材料亟需解決的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題。

因此，基于上述進(jìn)展，有必要通過(guò)精細(xì)控制制備過(guò)程中絲蛋白的分子運(yùn)動(dòng)性，在抑制絲蛋白形成結(jié)晶態(tài)的同時(shí)，提高分子之間相互作用，最終制備由非晶結(jié)構(gòu)組成，且不溶于水的絲蛋白海綿材料。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種絲蛋白海綿及其制備方法，本申請(qǐng)?zhí)峁┑慕z蛋白海綿不溶于水，且具有非晶結(jié)構(gòu)。

有鑒于此，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N絲蛋白海綿，所述絲蛋白海綿為納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的非晶結(jié)構(gòu)，所述絲蛋白海綿不溶于水。

優(yōu)選的，所述絲蛋白海綿的納米纖維的直徑為10～20nm，長(zhǎng)度為100nm～1μm，所述絲蛋白海綿的孔徑為50～800μm。

本申請(qǐng)還提供了上述方案所述的絲蛋白海綿的制備方法，包括以下步驟：

a)，將非晶絲蛋白納米纖維水溶液的濃度進(jìn)行調(diào)整；

b)，將步驟a)得到的非晶絲蛋白納米纖維溶液進(jìn)行冷凍；

c)，將步驟b)得到的非晶絲蛋白納米纖維進(jìn)行凍干，得到絲蛋白海綿。

優(yōu)選的，步驟a)中，所述非晶絲蛋白納米纖維水溶液的濃度進(jìn)行調(diào)整的方式為加水稀釋或濃縮。

優(yōu)選的，所述濃縮的方式為揮發(fā)濃縮或peo置換濃縮。

優(yōu)選的，所述濃縮的溫度為1～15℃，所述濃縮的時(shí)間為0～48h。

優(yōu)選的，步驟a)中，所述非晶絲蛋白納米纖維水溶液中非晶絲蛋白納米纖維的直徑為10～20nm，長(zhǎng)度為100nm～1μm。

優(yōu)選的，步驟a)中，所述非晶絲蛋白納米纖維水溶液調(diào)整后的濃度為0.1～12wt％。

優(yōu)選的，步驟b)中，所述冷凍的溫度為-2～-15℃，所述冷凍的時(shí)間為8～48h。

優(yōu)選的，步驟c)中，所述凍干的溫度為-20～-90℃，所述凍干的時(shí)間為12～48h。

本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N絲蛋白海綿，其為納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的非晶結(jié)構(gòu)，且不溶于水。由此，本申請(qǐng)?zhí)峁┝怂鼋z蛋白海綿的制備方法，其首先將非晶絲蛋白納米纖維水溶液進(jìn)行濃度的調(diào)整，然后將調(diào)整濃度后的非晶絲蛋白納米纖維溶液依次進(jìn)行冷凍與凍干，最終得到了絲蛋白海綿。在上述過(guò)程中，非晶絲蛋白納米纖維水溶液濃度的調(diào)整使絲蛋白納米纖維由無(wú)規(guī)非晶態(tài)逐漸向中間態(tài)轉(zhuǎn)化，在冷凍的過(guò)程中，絲蛋白的構(gòu)象進(jìn)一步向中間態(tài)轉(zhuǎn)化，并逐步靠近結(jié)晶態(tài)，同時(shí)在絲蛋白中形成結(jié)晶顆粒，最后在凍干階段，形成主要由非晶構(gòu)象的絲蛋白納米纖維組成，且結(jié)晶顆粒凍干在絲蛋白納米纖維中形成多孔結(jié)構(gòu)，最終得到了納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的非晶結(jié)構(gòu)，且不溶于水的絲蛋白海綿。

進(jìn)一步的，本申請(qǐng)調(diào)整濃度的溫度與時(shí)間決定了絲蛋白納米纖維在溶液中從無(wú)規(guī)結(jié)構(gòu)向中間態(tài)轉(zhuǎn)變的程度，后續(xù)的冷凍和凍干進(jìn)一步調(diào)控?zé)o規(guī)態(tài)的轉(zhuǎn)化，最終獲得合適的中間態(tài)組成，使得多孔絲蛋白海綿在水中具有穩(wěn)定性。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明采用的非晶絲蛋白納米纖維的宏觀(guān)圖；

圖2為本發(fā)明采用的非晶絲蛋白納米纖維的微觀(guān)圖；

圖3為本發(fā)明采用的非晶絲蛋白納米纖維的紅外光譜圖；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例2制備多孔絲蛋白海綿材料的電鏡圖(高倍)；

圖5為本發(fā)明實(shí)施例2制備多孔絲蛋白海綿材料的電鏡圖(低倍)；

圖6為本發(fā)明實(shí)施例2制備多孔絲蛋白海綿材料的xrd照片。

具體實(shí)施方式

為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行描述，但是應(yīng)當(dāng)理解，這些描述只是為進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的特征和優(yōu)點(diǎn)，而不是對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求的限制。

本發(fā)明實(shí)施例公開(kāi)了一種絲蛋白海綿，所述絲蛋白海綿為納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的非晶結(jié)構(gòu)，所述絲蛋白海綿不溶于水。

本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N絲蛋白海綿，其主要由非晶構(gòu)象的絲蛋白納米纖維組成，具有納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)。本申請(qǐng)所述絲蛋白海綿不溶于水，在水中穩(wěn)定性較好，生物相容性更好；所述絲蛋白海綿的納米纖維的直徑為10～20nm，長(zhǎng)度為100nm～1μm，其孔徑在50～800μm可調(diào)。

為了得到上述結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿，本申請(qǐng)?zhí)峁┝怂鼋z蛋白海綿的制備方法，包括以下步驟：

a)，將非晶絲蛋白納米纖維水溶液的濃度進(jìn)行調(diào)整；

b)，將步驟a)得到的非晶絲蛋白納米纖維溶液進(jìn)行冷凍；

c)，將步驟b)得到的非晶絲蛋白納米纖維進(jìn)行凍干，得到絲蛋白海綿。

本申請(qǐng)利用亞穩(wěn)態(tài)的非晶絲蛋白納米纖維通過(guò)濃度調(diào)整-冷凍-凍干，制備得到了非晶態(tài)的納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿。

在制備絲蛋白海綿的過(guò)程中，本申請(qǐng)首先將非晶絲蛋白納米纖維水溶液的濃度進(jìn)行調(diào)整，在調(diào)整非晶絲蛋白納米纖維水溶液的過(guò)程中，非晶絲蛋白納米纖維由無(wú)規(guī)的非晶態(tài)逐漸向中間態(tài)轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化程度決定了后續(xù)凍干之后是否在水中具有穩(wěn)定性以及結(jié)晶程度。上述非晶絲蛋白納米纖維溶液的濃度不超過(guò)1wt％，否則會(huì)在透析過(guò)程中發(fā)生凝膠。本申請(qǐng)所述非晶絲蛋白納米纖維水溶液進(jìn)行濃度調(diào)整的方式可以通過(guò)加水稀釋或不同的濃縮方式進(jìn)行；所述濃縮的方式可以為敞口揮發(fā)濃縮，也可以為peo置換法濃縮。具體的，對(duì)非晶絲蛋白納米纖維水溶液的濃度進(jìn)行濃縮調(diào)整時(shí)，將溶液放置到敞口容器中，保持濃縮溫度為1～15℃，濃縮的時(shí)間為0～48h；對(duì)非晶絲蛋白納米纖維水溶液進(jìn)行濃縮調(diào)整時(shí)，利用peo置換濃縮方法，保持濃縮溫度為1～15℃，濃縮的時(shí)間為0～48h；過(guò)高的濃縮溫度和過(guò)長(zhǎng)的濃縮時(shí)間均會(huì)導(dǎo)致凝膠形成，而使制備失敗。

本申請(qǐng)采用的原料非晶絲蛋白納米纖維首先能夠提供仿細(xì)胞外基質(zhì)的納米纖維結(jié)構(gòu)，從而使多孔絲蛋白海綿具有更好的生物相容性，同時(shí)非晶的絲蛋白納米纖維能夠以溶液狀態(tài)存在，而非凝膠，才使得多孔海綿的制備成為可能。本申請(qǐng)所述非晶絲蛋白納米纖維溶液中的非晶絲蛋白納米纖維的直徑為10～20nm，長(zhǎng)度為100nm～1μm。所述非晶絲蛋白纖維的制備方法按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式制備即可，示例的，所述非晶絲蛋白納米纖維水溶液的制備具體為：

(1)將蠶絲纖維溶解于溴化鋰-甲酸混合溶劑中，通過(guò)調(diào)控溴化鋰-甲酸混合溶劑中甲酸和溴化鋰的濃度和比例來(lái)影響對(duì)蠶絲纖維的溶解程度，保留蠶絲中絲蛋白的納米原纖結(jié)構(gòu)；

(2)將上述混合溶劑溶解的蠶絲纖維溶液放置到透析袋中，并通過(guò)絲蛋白濃度和溫度的調(diào)控，控制透析過(guò)程中絲蛋白的組裝速率，以防止絲蛋白發(fā)生凝膠；

(3)透析72小時(shí)左右，去除溴化鋰和甲酸，獲得非晶絲蛋白納米纖維的水溶液。

本申請(qǐng)然后將調(diào)整濃度后的非晶絲蛋白納米纖維進(jìn)行冷凍，以使絲蛋白的構(gòu)象進(jìn)一步向中間態(tài)轉(zhuǎn)化，并逐漸靠近結(jié)晶態(tài)而不形成結(jié)晶態(tài)，從而有利于絲蛋白凍干后能夠在水中具有穩(wěn)定性，同時(shí)此過(guò)程中非晶絲蛋白納米纖維中形成結(jié)晶顆粒，以利于后期在絲蛋白納米纖維中形成多孔結(jié)構(gòu)。上述轉(zhuǎn)化程度則決定是否具有穩(wěn)定性和其晶體結(jié)構(gòu)的含量，從而使得絲蛋白海綿具有相應(yīng)的力學(xué)性能；絲蛋白轉(zhuǎn)化的程度同分子運(yùn)動(dòng)性和時(shí)間有關(guān)，而冷凍溫度則決定了分子運(yùn)動(dòng)性和冷凍時(shí)間。因此，本申請(qǐng)冷凍的溫度為-2～-15℃，冷凍的時(shí)間為8～48h；在具體實(shí)施例中，所述冷凍的溫度為-4～-12℃，所述冷凍的時(shí)間為8～24h。所述冷凍的溫度過(guò)低則獲得的多孔絲蛋白海綿會(huì)在水中溶解，溫度過(guò)高則可能導(dǎo)致絲蛋白納米纖維難以冷凍或發(fā)生凝膠。

本申請(qǐng)最后將上述得到的非晶絲蛋白納米纖維進(jìn)行凍干，得到絲蛋白海綿。所述凍干的溫度為-20～-90℃，所述凍干的時(shí)間為8～48h；在具體實(shí)施例中，所述凍干的溫度為-40～-80℃，所述凍干的時(shí)間為24～48h。所述凍干的溫度與時(shí)間會(huì)影響絲蛋白納米纖維的分子運(yùn)動(dòng)性，從而對(duì)最終獲得到絲蛋白海綿的運(yùn)動(dòng)性和力學(xué)性能產(chǎn)生影響。

在制備絲蛋白海綿的過(guò)程中，經(jīng)過(guò)濃度調(diào)整-冷凍-凍干三個(gè)過(guò)程，制備了非晶構(gòu)象的具有納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿，其不溶于水，在水中具有較好的穩(wěn)定性。上述三個(gè)過(guò)程是一個(gè)協(xié)同的作用過(guò)程，濃縮的溫度和時(shí)間決定了非晶絲蛋白納米纖維在溶液中從無(wú)規(guī)結(jié)構(gòu)向中間態(tài)轉(zhuǎn)化的程度，后續(xù)的冷凍和凍干進(jìn)一步調(diào)控其轉(zhuǎn)化，最終獲得合適的中間態(tài)組成，使得絲蛋白多孔海綿在水中具有穩(wěn)定性。三者根據(jù)溶液的狀態(tài)共同調(diào)整才能實(shí)現(xiàn)上述目的，必須同時(shí)考慮，單獨(dú)考慮其中一個(gè)因素，并不會(huì)獲得不溶于水的絲蛋白多孔海綿。

本發(fā)明關(guān)鍵在于通過(guò)溫度和時(shí)間的精細(xì)調(diào)控來(lái)改變絲蛋白纖維的相互作用，實(shí)現(xiàn)非晶結(jié)構(gòu)絲蛋白在水中具有穩(wěn)定性的性能突破。非晶絲蛋白納米纖維為亞穩(wěn)態(tài)，易于轉(zhuǎn)變成beta-sheet結(jié)晶態(tài)，因此本專(zhuān)利中為獲得合適的濃度以調(diào)控制備海綿的孔徑，需要在1～15℃的相對(duì)低溫環(huán)境進(jìn)行非晶絲蛋白納米纖維溶液濃度的調(diào)整，并將時(shí)間控制在48h以?xún)?nèi)，過(guò)高的溫度和過(guò)長(zhǎng)的時(shí)間均會(huì)導(dǎo)致凝膠形成，而使得制備失??；與此同時(shí)，冷凍溫度也是本發(fā)明調(diào)控絲蛋白相互作用的關(guān)鍵，過(guò)低的冷凍溫度會(huì)抑制絲蛋白相互作用，使得制備的絲蛋白海綿溶于水，因此必須對(duì)冷凍溫度進(jìn)行精細(xì)調(diào)控才可直接從水溶液中制備不溶于水的海綿。

盡管上述的關(guān)鍵條件看似采用的常規(guī)技術(shù)，但其核心在于對(duì)絲蛋白納米纖維本身狀態(tài)和絲蛋白組裝過(guò)程的深入理解，以及不同參數(shù)的協(xié)同作用，不同的參數(shù)之間具有極高的關(guān)聯(lián)性，不考慮絲蛋白的本身狀態(tài)和不同因素對(duì)絲蛋白組裝影響，而機(jī)械套用上述參數(shù)并不會(huì)制備出具有不溶性的非晶絲蛋白海綿。

與現(xiàn)有制備海綿絲蛋白的方法相比，本發(fā)明以亞穩(wěn)態(tài)的非晶絲蛋白納米纖維為基礎(chǔ)材料，通過(guò)傳統(tǒng)冷凍干燥法獲得完全由納米纖維組成，且具有納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿，具有更好的生物相容性，上述絲蛋白海綿的孔徑通過(guò)濃度可以有效調(diào)控，滿(mǎn)足不同的應(yīng)用需求；通過(guò)在調(diào)整濃度與冷凍過(guò)程中的溫度和時(shí)間的精細(xì)調(diào)控，來(lái)抑制絲蛋白納米纖維向beta-sheet轉(zhuǎn)變，同時(shí)提高分子之間相互作用，最終獲得非晶結(jié)構(gòu)的，不溶于水的絲蛋白海綿，解決了原有絲蛋白材料水穩(wěn)定性同結(jié)晶性之間的固有矛盾；整個(gè)過(guò)程主要通過(guò)溫度的控制來(lái)誘導(dǎo)絲蛋白分子的相互作用，直接從水溶液中制備出不溶于水的絲蛋白海綿，而不需要添加任何其他物質(zhì)或者進(jìn)行任何后處理，條件溫和，工藝簡(jiǎn)單，具有更好的可生產(chǎn)性。

為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的多孔絲蛋白海綿的制備方法進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍不受以下實(shí)施例的限制。

實(shí)施例1非晶絲蛋白納米纖維水溶液的制備

(1)將蠶絲纖維溶解于溴化鋰-甲酸混合溶劑中，溴化鋰-甲酸混合溶劑中甲酸和溴化鋰的質(zhì)量比為1:13，溴化鋰的濃度為9mol/l；

(2)將上述混合溶劑溶解的蠶絲纖維溶液放置到透析袋中透析72h，得到非晶絲蛋白納米纖維的水溶液；所述蠶絲纖維溶液中蠶絲纖維的濃度0.4～1wt％，透析的溫度4～25℃之間。

以下實(shí)施例中的非晶絲蛋白納米纖維溶液均由實(shí)施例1制備得到。

實(shí)施例2

(1)將濃度為0.8％的非晶絲蛋白納米纖維溶液50ml，在2℃下，使用peo置換濃縮的方法，濃縮36h，調(diào)整濃度到4％，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-4℃冷凍24h，形成冰狀物；

(3)冷凍后的材料放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-63℃，凍干48h，獲得不溶于水的絲蛋白海綿。

圖1與圖2分別為步驟(1)采用的非晶絲蛋白納米纖維的宏觀(guān)圖和微觀(guān)圖，圖3為步驟(1)采用的非晶絲蛋白納米纖維的紅外光譜圖，由圖可以看出，步驟(1)采用的非晶絲蛋白納米纖維為溶液狀態(tài)，纖維直徑為10～20nm，長(zhǎng)度為100nm～1μm，紅外光譜表明其構(gòu)象為非晶結(jié)構(gòu)。

圖4與圖5分別為本實(shí)施例制備的多孔絲蛋白海綿的高倍電鏡圖與低倍電鏡圖，由圖可以看出，本實(shí)施例制備的絲蛋白海綿孔徑在100～200μm，孔壁由納米纖維組成；圖6為本實(shí)施例制備的絲蛋白海綿的xrd照片，由圖可知，本實(shí)施例制備的絲蛋白海綿的支架為非晶結(jié)構(gòu)。

將本實(shí)施例制備的絲蛋白海綿放置于水中，培育24h，干燥；稱(chēng)量放置前后的質(zhì)量，在水中浸泡24h后，絲蛋白海綿的質(zhì)量損失低于5％，由此表明，本實(shí)施例制備的絲蛋白海綿在水中具有較好的穩(wěn)定性。濕態(tài)下絲蛋白海綿的力學(xué)強(qiáng)度約為4kpa。

實(shí)施例3

(1)將濃度為0.8％的非晶絲蛋白納米纖維溶液20ml，加純化水稀釋到0.3％，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-2℃冷凍24h，形成冰狀物；

(3)冷凍后的材料放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-20℃，凍干48h，獲得不溶于水的絲蛋白海綿。濕態(tài)下絲蛋白海綿的力學(xué)強(qiáng)度約為1kpa。

實(shí)施例4

(1)將濃度為0.9％的非晶絲蛋白納米纖維溶液30ml，使用敞口揮發(fā)的方法，在4℃下，濃縮20h，濃縮至2％，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-12℃冷凍8h，形成冰狀物；

(3)冷凍后的材料放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-90℃，凍干24h，獲得不溶于水的絲蛋白海綿。濕態(tài)下絲蛋白海綿的力學(xué)強(qiáng)度約為3kpa。

實(shí)施例5

(1)將濃度為1.2％的非晶絲蛋白納米纖維溶液30ml，使用敞口揮發(fā)的方法，在10℃下，濃縮12h，濃縮至6％，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-5℃冷凍12h，形成冰狀物；

(3)冷凍后的材料放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-40℃，凍干36h，獲得不溶于水的海綿材料。濕態(tài)下絲蛋白海綿的力學(xué)強(qiáng)度約為2kpa。

實(shí)施例6

(1)將濃度為1％的非晶絲蛋白納米纖維溶液80ml，使用peo置換濃縮的方法，在1℃下，濃縮46h，濃縮至10％，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-9℃冷凍24h，形成冰狀物；

(3)冷凍后的材料放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-60℃，凍干48h，獲得不溶于水的海綿材料。濕態(tài)下絲蛋白海綿的力學(xué)強(qiáng)度約為5kpa。

對(duì)比例1

(1)將濃度為0.9％的非晶絲蛋白納米纖維溶液30ml，使用敞口揮發(fā)的方法，在50℃下，濃縮12h，濃縮至2％，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-12℃冷凍8h，形成冰狀物；

(3)冷凍后的材料放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-90℃，凍干24h，獲得不溶于水的絲蛋白海綿。但由于前期熱處理絲蛋白組裝速率過(guò)快,冷凍過(guò)程中絲蛋白已經(jīng)發(fā)生凝膠，導(dǎo)致凍干后海綿易碎，不具有力學(xué)性能。

對(duì)比例2

(1)將濃度為1％的非晶絲蛋白納米纖維溶液80ml，使用peo置換濃縮的方法，在1℃下，濃縮46h，濃縮至10％，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-20℃冷凍24h，形成冰狀物；

(3)冷凍后的材料放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-60℃，凍干48h，獲得海綿材料。但制備的海綿材料在水中不具有穩(wěn)定性，會(huì)在水中溶解。

對(duì)比例1和2分別是將實(shí)施例4和6中的其中一個(gè)參數(shù)改變，而保持其它參數(shù)不變，但所制備的絲蛋白海綿均不具有本發(fā)明所希望的性能，表明不同因素之間具有相關(guān)性。

以上實(shí)施例的說(shuō)明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。

對(duì)所公開(kāi)的實(shí)施例的上述說(shuō)明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。對(duì)這些實(shí)施例的多種修改對(duì)本領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將是顯而易見(jiàn)的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實(shí)施例中實(shí)現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會(huì)被限制于本文所示的這些實(shí)施例，而是要符合與本文所公開(kāi)的原理和新穎特點(diǎn)相一致的最寬的范圍。