本發(fā)明涉及生物材料技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種絲蛋白海綿及其制備方法。

背景技術(shù)：

絲蛋白優(yōu)異的生物相容性，力學(xué)性能，可降解性，易于成形以及能夠在水溶液中進(jìn)行處理等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)使其成為具有潛在應(yīng)用價(jià)值的通用生物材料。具有多孔結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿已經(jīng)廣泛應(yīng)用于皮膚、骨、神經(jīng)、軟骨等多種組織的修復(fù)，并取得良好的效果。如何利用溫和、穩(wěn)定、簡(jiǎn)單的方法制備絲蛋白多孔海綿，并調(diào)控多孔海綿的力學(xué)以及生物學(xué)性能成為絲蛋白生物材料的重要發(fā)展方向。

目前研究者開發(fā)出多種制備絲蛋白海綿的方法，主要包括鹽析法和冷凍干燥法；鹽析法制備的多孔海綿主要構(gòu)象為beta-sheet結(jié)晶，力學(xué)性能高，不適合應(yīng)用于軟組織修復(fù)，冷凍干燥法所制備的絲蛋白，盡管一般為非晶結(jié)構(gòu)，但其會(huì)在水中溶解，導(dǎo)致其無(wú)法應(yīng)用，只能通過(guò)醇處理、真空水處理來(lái)誘導(dǎo)形成beta-sheet，最終獲得不溶于水的海綿材料。近年來(lái)，利用高結(jié)晶的絲蛋白納米纖維作為誘導(dǎo)劑，促進(jìn)絲蛋白在凍干過(guò)程中發(fā)生結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，從而直接獲得不溶于水的絲蛋白海綿材料，上述方法由于制備過(guò)程中不需要使用有機(jī)溶劑進(jìn)行后處理，引起人們的興趣。然而，上述技術(shù)要求加入高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的含量不能低于7.5％，否則制備的多孔海綿會(huì)在水中部分溶解；而高晶納米纖維含量過(guò)高，則容易導(dǎo)致部分絲蛋白沉淀，使得制備多孔海綿不均勻。如何有效降低高晶納米纖維含量的同時(shí)，有效提高所制備多孔海綿在水中的穩(wěn)定性是提高上述絲蛋白海綿材料應(yīng)用價(jià)值的關(guān)鍵。因此，基于上述進(jìn)展，有必要將高晶納米纖維誘導(dǎo)同絲蛋白自組裝調(diào)控結(jié)合，在更低的高晶納米纖維含量的條件下，實(shí)現(xiàn)不溶性絲蛋白海綿的穩(wěn)定制備。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種絲蛋白海綿及其制備方法，本申請(qǐng)?jiān)谳^低含量高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的基礎(chǔ)上可制備不溶性的絲蛋白海綿。

本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N絲蛋白海綿，所述絲蛋白海綿的beta-sheet含量低于30wt％，所述絲蛋白海綿不溶于水。

優(yōu)選的，所述絲蛋白海綿具有貫通的多孔結(jié)構(gòu)，孔徑為50～500μm。

本申請(qǐng)還提供了所述的絲蛋白海綿的制備方法，包括以下步驟：

a)，將絲蛋白水溶液密封培育后與高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，得到混合溶液；

b)，將所述混合溶液冷凍后凍干，得到絲蛋白海綿。

優(yōu)選的，所述絲蛋白水溶液中的絲蛋白與所述高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液中高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的質(zhì)量比為(15～60)：1。

優(yōu)選的，所述密封培育的溫度為35～70℃，時(shí)間為6～48h。

優(yōu)選的，所述高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維以beta-sheet結(jié)構(gòu)為主，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的直徑為10～20nm，長(zhǎng)度為200nm～3μm。

優(yōu)選的，所述冷凍的溫度為-4～-12℃，所述冷凍的時(shí)間為8～48h。

優(yōu)選的，所述凍干的溫度為-20～-90℃，所述凍干的時(shí)間為12～48h。

優(yōu)選的，所述高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液按照下述方法制備得到：

將絲蛋白溶液濃縮至濃度為8～12wt％的第一絲蛋白溶液；

將所述第一絲蛋白溶液濃縮至濃度為18～22wt％的第二絲蛋白溶液；

將所述第二絲蛋白溶液稀釋至濃度為0.5～2wt％，密封培育，得到高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液。

優(yōu)選的，所述得到第一絲蛋白溶液中的濃縮在40～60℃進(jìn)行；所述得到第二絲蛋白溶液中的濃縮在25～35℃進(jìn)行，所述密封培育的溫度為50～70℃。

本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N絲蛋白海綿，其beta-sheet含量低于30wt％，且不溶于水。為得到上述絲蛋白海綿，本申請(qǐng)?zhí)峁┝怂鼋z蛋白海綿的制備方法，其首先將絲蛋白水溶液密封培育后再與高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，再將得到的混合溶液冷凍后凍干，得到絲蛋白海綿。在上述過(guò)程中，絲蛋白在密封培育后絲蛋白的構(gòu)象逐漸向中間態(tài)轉(zhuǎn)變，由此部分轉(zhuǎn)變的絲蛋白更容易在高晶納米纖維誘導(dǎo)下繼續(xù)變化，從而可降低高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的含量；在同高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合后，在高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的誘導(dǎo)下，絲蛋白繼續(xù)向中間態(tài)和晶體結(jié)構(gòu)變化；在冷凍的過(guò)程中，絲蛋白的構(gòu)象進(jìn)一步向中間態(tài)轉(zhuǎn)化，并逐步靠近結(jié)晶態(tài)，同時(shí)在絲蛋白中形成結(jié)晶顆粒，最后在凍干階段，形成主要由非晶構(gòu)象的絲蛋白納米纖維組成，且結(jié)晶顆粒凍干在絲蛋白納米纖維中形成多孔結(jié)構(gòu)，最終得到了多孔-非晶結(jié)構(gòu)的且不溶于水的絲蛋白海綿。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明采用的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的宏觀圖；

圖2為本發(fā)明采用的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的微觀圖；

圖3為本發(fā)明采用的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的紅外光譜圖；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例2制備的絲蛋白多孔海綿的掃描電鏡圖(高倍)；

圖5為本發(fā)明實(shí)施例2制備的絲蛋白多孔海綿的掃描電鏡圖(低倍)；

圖6為本發(fā)明實(shí)施例2制備的絲蛋白多孔海綿的ftir圖。

具體實(shí)施方式

為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行描述，但是應(yīng)當(dāng)理解，這些描述只是為進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的特征和優(yōu)點(diǎn)，而不是對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求的限制。

本發(fā)明實(shí)施例公開了一種絲蛋白海綿，所述絲蛋白海綿的beta-sheet含量低于30wt％，所述絲蛋白海綿不溶于水。

本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N絲蛋白海綿，其beta-sheet含量低于30wt％，具有貫通的多孔結(jié)構(gòu)。本申請(qǐng)所述絲蛋白海綿不溶于水，在水中穩(wěn)定性較好，生物相容性更好。本申請(qǐng)的絲蛋白海綿具有可控的孔結(jié)構(gòu)，孔徑在50～500μm可調(diào)。

由此，本申請(qǐng)?zhí)峁┝松鲜鼋z蛋白海綿的制備方法，包括以下步驟：

a)，將絲蛋白水溶液密封培育后與高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，得到混合溶液；

b)，將所述混合溶液冷凍后凍干，得到絲蛋白海綿。

本申請(qǐng)以少量高結(jié)晶的絲蛋白納米纖維為誘導(dǎo)劑，經(jīng)與處理的絲蛋白溶液混合，再依次經(jīng)過(guò)冷凍與凍干，得到了絲蛋白海綿。

在制備絲蛋白海綿的過(guò)程中，本申請(qǐng)首先將絲蛋白水溶液密封培育；經(jīng)過(guò)密封培育后，無(wú)規(guī)絲蛋白的構(gòu)象逐漸向中間態(tài)轉(zhuǎn)變。所述絲蛋白為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的絲蛋白，對(duì)此本申請(qǐng)沒(méi)有特別的限制。所述密封培育的溫度為35～70℃，時(shí)間為6～48h；在具體實(shí)施例中，所述密封培育的溫度為40～60℃，時(shí)間為8～24h。所述密封培育的溫度和時(shí)間影響絲蛋白轉(zhuǎn)化的程度，因此也會(huì)影響最終獲得的絲蛋白海綿在水中的穩(wěn)定性、多孔結(jié)構(gòu)以及力學(xué)性能等。

在絲蛋白溶液經(jīng)過(guò)密封培育后將其與高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，得到混合溶液。高結(jié)晶絲蛋白納米纖維具有誘導(dǎo)普通絲蛋白構(gòu)象變化和納米纖維形成的作用，因此高結(jié)晶絲蛋白納米纖維能夠誘導(dǎo)普通絲蛋白溶液中的絲蛋白向中間態(tài)和bata-sheet晶體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，除此之外，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的直徑和長(zhǎng)度會(huì)對(duì)絲蛋白在冷凍過(guò)程中的排布有影響，最終影響絲蛋白海綿的孔結(jié)構(gòu)以及力學(xué)性能。由于密封培育后的絲蛋白溶液中的絲蛋白已經(jīng)發(fā)生了部分轉(zhuǎn)變，因此絲蛋白更容易在高結(jié)晶絲蛋白納米纖維誘導(dǎo)下繼續(xù)變化，從而在低含量的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維下可獲得不溶于水的多孔海綿。所述高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液中的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維與所述絲蛋白溶液中的絲蛋白的質(zhì)量比為1：(15～60)，在具體實(shí)施例中，所述高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液中的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維與所述絲蛋白溶液中的絲蛋白的質(zhì)量比為1：(20～50)。高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的含量增加會(huì)提高對(duì)普通絲蛋白向晶體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化的程度，因此導(dǎo)致絲蛋白海綿結(jié)晶度升高，硬度增加；同時(shí)高結(jié)晶絲蛋白納米纖維含量的增加會(huì)降低溶液的均勻性，從而使得制備多孔海綿的均勻性降低，因此，為制備不溶于水的低結(jié)晶含量的多孔海綿材料，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的量越低越好，但含量過(guò)低，對(duì)誘導(dǎo)普通絲蛋白向中間態(tài)和beta-sheet結(jié)晶的轉(zhuǎn)化能力也會(huì)降低，而導(dǎo)致所制備多孔海綿溶于水，因此，需要在盡可能低的情況下，保持一定量的高晶絲蛋白納米纖維。所述高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維以beta-sheet結(jié)構(gòu)為主，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的直徑為10～20nm，長(zhǎng)度為200nm～3μm。示例的，所述高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液的制備過(guò)程具體為：

(1)將普通絲蛋白溶液在40～60℃緩慢濃縮，獲得濃度為10％左右的溶液；

(2)將溶液轉(zhuǎn)移到常溫繼續(xù)濃縮至20％左右，在此過(guò)程中絲蛋白轉(zhuǎn)變成亞穩(wěn)態(tài)的納米顆粒；

(3)將濃縮液加水稀釋至0.5％～2％，放置到60℃密封培育，獲得高晶絲蛋白納米纖維。

本申請(qǐng)然后將混合溶液進(jìn)行冷凍，以使混合溶液中的絲蛋白繼續(xù)向中間態(tài)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，同時(shí)在絲蛋白中形成結(jié)晶顆粒，為后續(xù)形成多孔結(jié)構(gòu)做準(zhǔn)備。在上述過(guò)程中，所述冷凍的溫度為-4～-12℃，所述冷凍的時(shí)間為8～48h；在具體實(shí)施例中，所述冷凍的溫度為-5～-10℃，所述冷凍的時(shí)間為10～24h。所述冷凍溫度和時(shí)間會(huì)影響絲蛋白轉(zhuǎn)化的速率和程度，冷凍溫度過(guò)低，時(shí)間過(guò)短，絲蛋白構(gòu)象轉(zhuǎn)化不足，所制備多孔絲蛋白海綿會(huì)溶于水；冷凍溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則會(huì)導(dǎo)致凝膠形成，因此冷凍必須保持在一定溫度和時(shí)間范圍。同時(shí)，冷凍溫度和時(shí)間的作用同前面高晶絲蛋白納米纖維含量以及密封培育的時(shí)間和溫度息息相關(guān)，具有協(xié)同作用，需要根據(jù)前面的變化做相應(yīng)調(diào)整，而不能單獨(dú)調(diào)控。

按照本發(fā)明，最后將冷凍后的絲蛋白進(jìn)行凍干，得到絲蛋白海綿。此過(guò)程可去除結(jié)晶顆粒，在絲蛋白中形成多孔結(jié)構(gòu)，且使絲蛋白的構(gòu)象轉(zhuǎn)化為非晶態(tài)。所述凍干的溫度為-20～-90℃，時(shí)間為12～48h；在具體實(shí)施例中，所述凍干的溫度為-40～-70℃，所述凍干的時(shí)間為24～36h。所述凍干過(guò)程中的溫度和時(shí)間除了影響水的去除，也會(huì)對(duì)絲蛋白的構(gòu)象轉(zhuǎn)化有一定影響，從而影響絲蛋白海綿的結(jié)構(gòu)和性能。

本申請(qǐng)中每個(gè)步驟均是對(duì)絲蛋白的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象轉(zhuǎn)化的程度進(jìn)行調(diào)控，最終通過(guò)協(xié)同作用獲得不溶于水的低晶絲蛋白多孔海綿；首先密封培育使得普通絲蛋白從無(wú)規(guī)向中間態(tài)結(jié)構(gòu)部分轉(zhuǎn)化，使其更容易被高晶納米纖維誘導(dǎo)；隨后加入高結(jié)晶絲蛋白納米纖維繼續(xù)誘導(dǎo)普通絲蛋白向納米纖維以及中間態(tài)轉(zhuǎn)化，并通過(guò)高晶納米纖維的量控制進(jìn)一步轉(zhuǎn)化的程度；隨后將冷凍溫度和時(shí)間調(diào)控到合理范圍，進(jìn)一步調(diào)控絲蛋白向中間態(tài)轉(zhuǎn)化的程度，最后通過(guò)凍干過(guò)程，使得絲蛋白在低結(jié)晶含量下獲得不溶于水的性能。

本發(fā)明提出一種由高結(jié)晶絲蛋白納米纖維誘導(dǎo)的不溶性低晶絲蛋白多孔海綿及其制備方法，制備得到的絲蛋白海綿在水中具有穩(wěn)定性，結(jié)構(gòu)均勻，晶體結(jié)構(gòu)含量低，孔徑可在50～500μm調(diào)控。在制備絲蛋白海綿的過(guò)程中，本發(fā)現(xiàn)顯著降低了高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的使用量，從而避免了過(guò)多納米纖維導(dǎo)致的部分絲蛋白聚集沉淀的問(wèn)題，提高了材料的均勻性，同時(shí)也顯著降低了最終材料中的beta-sheet含量，使得材料具有更好的親水性和生物相容性。

本發(fā)明的核心技術(shù)在于在利用高結(jié)晶納米纖維誘導(dǎo)的同時(shí)，通過(guò)溫度培育前處理促進(jìn)絲蛋白向中間態(tài)轉(zhuǎn)化，隨后通過(guò)冷凍過(guò)程中溫度和時(shí)間的精細(xì)調(diào)控來(lái)改變絲蛋白相互作用，將上述三種因素有機(jī)結(jié)合，利用不同因素的協(xié)同作用，從水溶液中直接獲得不溶于水的低晶絲蛋白多孔海綿。盡管上述的關(guān)鍵條件看似采用的常規(guī)技術(shù)，但其核心在于對(duì)絲蛋白納米纖維本身狀態(tài)和絲蛋白組裝過(guò)程的深入理解，以及不同參數(shù)的協(xié)同作用，不同的參數(shù)之間具有極高的關(guān)聯(lián)性，不考慮絲蛋白的本身狀態(tài)和不同因素對(duì)絲蛋白組裝影響，而機(jī)械套用上述參數(shù)并不會(huì)制備出具有不溶性的非晶海綿。

與現(xiàn)有制備多孔絲蛋白海綿的方法相比，本申請(qǐng)以更少量的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維作為誘導(dǎo)劑，解決了納米纖維含量過(guò)高導(dǎo)致的不均勻問(wèn)題，制備的絲蛋白多孔海綿具有更好的質(zhì)量；同時(shí)高結(jié)晶絲蛋白納米纖維含量的降低，也顯著降低了所制備絲蛋白海綿的晶體含量，使得材料具有更好的親水性和生物相容性；通過(guò)溫度培育前處理和冷凍溫度精細(xì)調(diào)控結(jié)合，調(diào)控絲蛋白的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，實(shí)現(xiàn)了更低含量高結(jié)晶絲蛋白納米纖維誘導(dǎo)下，不溶于水的絲蛋白多孔海綿材料的制備，解決了高結(jié)晶絲蛋白納米纖維誘導(dǎo)制備多孔海綿方法中，納米纖維含量，水不溶性以及均勻性之間的固有矛盾；整個(gè)過(guò)程主要通過(guò)溫度的控制來(lái)誘導(dǎo)絲蛋白分子的相互作用，直接從水溶液中制備出不溶于水的絲蛋白海綿，而不需要添加任何其他物質(zhì)或者進(jìn)行任何后處理，條件溫和，工藝簡(jiǎn)單，具有更好的可生產(chǎn)性。

為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的絲蛋白海綿的制備方法進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍不受以下實(shí)施例的限制。

實(shí)施例1

(1)將普通絲蛋白溶液在40～60℃范圍內(nèi)緩慢濃縮，獲得濃度為10％左右的溶液；

(2)將溶液轉(zhuǎn)移到常溫繼續(xù)濃縮至20％左右，在此過(guò)程中絲蛋白轉(zhuǎn)變成亞穩(wěn)態(tài)的納米顆粒；

(3)將濃縮液加水稀釋至0.5％～2％，放置到60℃密封培育，直到獲得高結(jié)晶絲蛋白納米纖維。

圖1與圖2分別為本實(shí)施例制備的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維的宏觀圖和微觀圖，圖3為本實(shí)施例制備的納米纖維的紅外光譜；由圖可知，本實(shí)施制備的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維為溶液狀態(tài)，纖維直徑在10～20nm之間，長(zhǎng)度在200nm～3μm之間，紅外光譜表明其構(gòu)象主要為beta-sheet晶體。

以下實(shí)施例采用的高結(jié)晶絲蛋白納米纖維均由實(shí)施例1制備得到。

實(shí)施例2

(1)將一定濃度的普通絲蛋白溶液在40℃密封培育48h后，同高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維同普通絲蛋白的質(zhì)量比為1:40，獲得兩種絲蛋白的混合水溶液，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-7℃冷凍24h，形成冰狀物；

(3)將冷凍后的冰狀物放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-63℃，凍干48h，獲得不溶于水的絲蛋白海綿。

圖4和圖5分別為本實(shí)施例制備的多孔絲蛋白海綿材料的高倍電鏡圖與低倍電鏡圖，由圖可知，本實(shí)施例制備的多孔絲蛋白海綿的孔徑在100～200μm之間，孔壁由納米纖維組成。圖6為本實(shí)施例制備的多孔絲蛋白海綿的ftir圖，由圖可知，本實(shí)施例制備的多孔絲蛋白海綿的支架為低晶結(jié)構(gòu)。

將本實(shí)施例制備的絲蛋白海綿放置到水中培育24小時(shí)后，干燥，稱量培育前后的質(zhì)量變化，發(fā)現(xiàn)絲蛋白海綿的質(zhì)量損失低于5％，證明絲蛋白海綿具有良好的水穩(wěn)定性。

實(shí)施例3

(1)將一定濃度的普通絲蛋白溶液在60℃密封培育12h后，同高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維同普通絲蛋白的質(zhì)量比為1:30，獲得兩種絲蛋白的混合水溶液，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-4℃冷凍48h，形成冰狀物；

(3)將冷凍后的冰狀物放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-20℃，凍干24h，獲得不溶于水的絲蛋白海綿。

實(shí)施例4

(1)將一定濃度的普通絲蛋白溶液在70℃密封培育6h后，同高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維同普通絲蛋白的質(zhì)量比為1:15，獲得兩種絲蛋白的混合水溶液，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-12℃冷凍8h，形成冰狀物；

(3)將冷凍后的冰狀物放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-90℃，凍干24h，獲得不溶于水的絲蛋白海綿。

實(shí)施例5

(1)將一定濃度的普通絲蛋白溶液在50℃密封培育16h后，同高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維同普通絲蛋白的質(zhì)量比為1:15，獲得兩種絲蛋白的混合水溶液，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-4℃冷凍48h，形成冰狀物；

(3)將冷凍后的冰狀物放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-40℃，凍干36h，獲得不溶于水的絲蛋白海綿。

實(shí)施例6

(1)將一定濃度的普通絲蛋白溶液在70℃密封培育48h后，同高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維同普通絲蛋白的質(zhì)量比為1:60，獲得兩種絲蛋白的混合水溶液，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-4℃冷凍48h，形成冰狀物；

(3)將冷凍后的冰狀物放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-60℃，凍干48h，獲得不溶于水的海綿材料。

對(duì)比例1

(1)將一定濃度的普通絲蛋白溶液不進(jìn)行溫度培育，直接同高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維同普通絲蛋白的質(zhì)量比為1:60，獲得兩種絲蛋白的混合水溶液，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-4℃冷凍48h，形成冰狀物；

(3)將冷凍后的冰狀物放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-60℃，凍干48h，獲得海綿材料，材料由非晶結(jié)構(gòu)組成，完全在水中溶解。

對(duì)比例2

(1)將一定濃度的普通絲蛋白溶液在70℃密封培育6h后，同高結(jié)晶絲蛋白納米纖維溶液混合，高結(jié)晶絲蛋白納米纖維同普通絲蛋白的質(zhì)量比為1:15，獲得兩種絲蛋白的混合水溶液，并注入模具；

(2)將注入模具的絲蛋白納米纖維溶液在-20℃冷凍8h，形成冰狀物；

(3)將冷凍后的冰狀物放置于凍干機(jī)中，冷阱溫度為-90℃，凍干24h，獲得絲蛋白海綿，材料由非晶結(jié)構(gòu)組成，完全在水中溶解。

對(duì)比例1和對(duì)比例2均為將相關(guān)實(shí)施例中的其中單個(gè)因素調(diào)整到本申請(qǐng)范圍外，其它參數(shù)保持不變，但所獲得海綿均未獲得在水中的穩(wěn)定性，證明了不同因素之間的高度相關(guān)性。

以上實(shí)施例的說(shuō)明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。

對(duì)所公開的實(shí)施例的上述說(shuō)明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。對(duì)這些實(shí)施例的多種修改對(duì)本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實(shí)施例中實(shí)現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會(huì)被限制于本文所示的這些實(shí)施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點(diǎn)相一致的最寬的范圍。