本發(fā)明涉及中藥及保健食品制備技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種冬蟲夏草的乙醇冷凍滅菌方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

冬蟲夏草是麥角菌科真菌，冬蟲夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的干燥復(fù)合體。性味甘平，入肺腎經(jīng)，功能益肺、腎，止咳喘，補(bǔ)虛損，益精氣。用于久咳虛喘，勞嗽咯血，陽痿遺精，腰膝酸痛?！侗静輦湟罚骸岸x夏草，甘平，保肺益腎，止血化痰，止勞咳”。趙學(xué)敏的《本草綱目拾遺》記載：“冬蟲夏草性溫和，補(bǔ)精髓，此物保肺氣。以酒浸數(shù)枚啖之，治腰膝問痛楚，有益腎之功，宜中老年人。

冬蟲夏草生長于高原地區(qū)土壤之中，外覆薄膜，藏民在夏初子座出土、孢子未發(fā)散時將其挖出，通常用木刷直接將其外膜纖維狀的附著物及土壤雜質(zhì)刷掉，自然陰涼至六七成干。整個加工過程簡單、粗放，蟲草表面無法避免地會帶有土壤中的微生物。同時，野生蟲草營養(yǎng)成分豐富，在其生長、儲藏過程中也易受各種微生物的污染，導(dǎo)致其原粉產(chǎn)品含菌量超過國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)重影響產(chǎn)品質(zhì)量。冬蟲夏草含有蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、氨基酸、脂肪酸、甾醇、蛋白質(zhì)及多種活性酶等成分，其中很多物質(zhì)在高溫高濕環(huán)境下會發(fā)生變性、水解造成功效成分大量損失。因此傳統(tǒng)的高溫、濕熱滅菌法不適用于冬蟲夏草。

現(xiàn)有技術(shù)研究和相關(guān)專利中，對不耐高溫高濕物料滅菌所采用的方法主要包括鈷-60輻照法、電子束輻照法、臭氧滅菌法、微波滅菌法、環(huán)氧乙烷滅菌法、超低溫冷凍法等，這些方法當(dāng)中有的存在細(xì)菌殘留問題，有的則會破壞物料的功效成分，有些方法還存在滅菌條件苛刻、滅菌效果不佳的問題。如中國專利公布號為cn104000853a公開了冬蟲夏草微粉制作方法及其制劑，將粉碎后的冬蟲夏草微粉進(jìn)行不低于-268.7℃的超低溫冷凍滅菌和不高于65℃的反復(fù)2次以上的凍融處理。該方法的不足之處在于：首先溫度控制到-268.7℃對設(shè)備要求很苛刻，雖然極限低溫和反復(fù)凍融可以造成部分微生物細(xì)胞的機(jī)械損傷和脫水死亡，但部分微生物數(shù)量在低溫條件下會采取“自我休眠”的方式，進(jìn)行自我保護(hù)，等到條件合適重新復(fù)活繁殖，很難達(dá)到預(yù)期的滅菌效果。中國專利公布號為cn104415064a公開了冬蟲夏草的保鮮存儲工藝，將新鮮的冬蟲夏草清洗后進(jìn)行真空冷凍干燥，再通入大于120ppm的臭氧滅菌60min，臭氧滅菌法對物料的穿透力有限，直接對冬蟲夏草原料進(jìn)行滅菌還會造成其中易氧化成分的大量損失。中國專利公布號為cn103300276b公開了一種花粉的滅菌方法，首先將花粉于-18℃—-20℃冷凍8~12天，再將冷凍后的花粉用大功率微波進(jìn)行微波加熱和滅菌，傳送帶速度為0.3~0.5m/s，微波功率為20~24kw；溫度控制在60~90℃范圍；在此基礎(chǔ)上再用6~12kw的微波功率，在85~90℃下滅菌10~20min。在使用微波進(jìn)行滅菌時，滅菌效果好，花粉顏色和成分很容易發(fā)生變化，影響質(zhì)量；而在花粉顏色和成分保持較好時，滅菌效果卻不理想。因此，微波滅菌方法無法真正運(yùn)用到花粉和冬蟲夏草這類產(chǎn)品的滅菌生產(chǎn)工藝中，探索出一種適合冬蟲夏草粉的滅菌方法是本技術(shù)領(lǐng)域亟待解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是要解決現(xiàn)行的滅菌方法存在的上述問題，提供一種適用于冬蟲夏草粉的滅菌方法及其應(yīng)用，該方法可以有效解決冬蟲夏草粉中微生物超標(biāo)嚴(yán)重的問題，且操作簡單，安全無毒、適用于實際大生產(chǎn)要求，能夠最大限度保護(hù)冬蟲夏草粉的理化和生物學(xué)特性，提高溶解度，促進(jìn)吸收，具有良好的醫(yī)藥和食品、保健食品開發(fā)前景。

本發(fā)明的一種冬蟲夏草的乙醇冷凍滅菌方法，包括以下步驟：

（1）乙醇浸潤：將冬蟲夏草粉碎至60-1000目，加入70-85%乙醇溶液將冬蟲夏草粉末浸潤處理0.5-5h，所述乙醇溶液的體積為冬蟲夏草重量的1-5倍，再加入純凈水稀釋至溶液中乙醇的濃度為5-35%；

（2）預(yù)凍：將稀釋后的溶液鋪盤后置入冷凍干燥機(jī)中，溫度為-65—-50℃，預(yù)凍2-6h；

（3）真空冷凍干燥：在-45—-20℃進(jìn)行升華干燥，真空度為100-400μbar，干燥時間10-30h；再在15-20℃下解析干燥，真空度為10-100μbar，干燥時間至少2h，即可得到冬蟲夏草滅菌凍干粉，所述冬蟲夏草滅菌凍干粉中的含水量為1-5%，菌落總數(shù)殺滅率＞99%。

本發(fā)明中所述步驟（2）中的鋪盤厚度≤20mm。

本發(fā)明還提供了一種冬蟲夏草的乙醇冷凍滅菌方法在中草藥中的應(yīng)用。

本發(fā)明中所述中草藥為人參、三七、馬鹿茸、珍珠、當(dāng)歸、瑪咖。

本發(fā)明與現(xiàn)行的滅菌方法相比，具有以下幾個優(yōu)點：

（1）整個滅菌過程只用到乙醇和純凈水，沒有接觸任何有毒有害化學(xué)試劑，不存在化學(xué)殘留問題；

（2）本發(fā)明使用乙醇聯(lián)合真空冷凍滅菌，滅菌效果良好，不會出現(xiàn)輻照滅菌、臭氧滅菌及微波滅菌等造成的顏色改變和化學(xué)成分損失問題，冷凍干燥滅菌過程在低溫、真空狀態(tài)下完成，避免高溫、氧化等副作用，解決了加熱干燥方式引起的酶性褐變現(xiàn)象，能夠最大程度上防止發(fā)生理化和生物學(xué)方面的變性；

（3）本發(fā)明通過乙醇聯(lián)合冷凍的滅菌方式，可以將冬蟲夏草粉中的微生物數(shù)量控制到符合食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)要求，且不會造成冬蟲夏草粉功效成分腺苷含量的損失；

（4）本發(fā)明方式通過冷凍干燥方式將冬蟲夏草粉的水分含量控制到1-5%，可以達(dá)到抑制微生物生長、繁殖的目地，提高產(chǎn)品儲存期的穩(wěn)定性，所得到的冬蟲夏草凍干粉骨架疏松，復(fù)水溶解性提高，促進(jìn)吸收；

（5）本發(fā)明將乙醇浸潤滅菌和冷凍滅菌相結(jié)合，所需設(shè)備常見，操作簡單，可滿足工業(yè)化生產(chǎn)要求；

（6）本發(fā)明具有良好的延展性，可以將該方法應(yīng)用于人參、三七、馬鹿茸、珍珠、當(dāng)歸、瑪咖等中草藥中。

具體實施方式

實施例1

本實施例的一種冬蟲夏草的乙醇冷凍滅菌方法，包括以下步驟：

（1）乙醇浸潤：將冬蟲夏草粉碎至60目，加入70%乙醇溶液將冬蟲夏草粉末浸潤處理5h，所述乙醇溶液的體積為冬蟲夏草重量的5倍，再加入純凈水稀釋至溶液中乙醇的濃度為35%；

（2）預(yù)凍：將稀釋后的溶液鋪盤后置入-65℃的冷凍干燥機(jī)中預(yù)凍6h，所述鋪盤厚度≤20mm；

（3）真空冷凍干燥：預(yù)凍后在-45℃下進(jìn)行升華干燥30h，真空度為100μbar；再在15℃下解析干燥至少2h，真空度為10μbar，即可得到冬蟲夏草滅菌凍干粉。

將本實施例得到的冬蟲夏草滅菌凍干粉與滅菌前的冬蟲夏草粉進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)、腺苷含量、水分等項目檢測，結(jié)果見下表1。

從上表1可以看出，本實施例得到的冬蟲夏草滅菌凍干粉有效降低了冬蟲夏草粉末中微生物的含量，菌落總數(shù)殺滅率為99.13%、大腸菌群殺滅率＞99.75%、霉菌殺滅率＞99.62%，且不會造成冬蟲夏草中功效成分腺苷含量的損失。

實施例2

本實施例的一種冬蟲夏草的乙醇冷凍滅菌方法，包括以下步驟：

（1）乙醇浸潤：將冬蟲夏草粉碎至300目，加入75%乙醇溶液將冬蟲夏草粉末浸潤處理3h，所述乙醇溶液的體積為冬蟲夏草重量的2.5倍，再加入純凈水稀釋至溶液中乙醇的濃度為15%；

（2）預(yù)凍：將稀釋后的溶液鋪盤后置入-60℃的冷凍干燥機(jī)中預(yù)凍4h，所述鋪盤厚度≤20mm；

（3）真空冷凍干燥：預(yù)凍后在-35℃下進(jìn)行升華干燥22h，真空度為200μbar；再在18℃下解析干燥至少2h，真空度為50μbar，即可得到冬蟲夏草滅菌凍干粉。

將本實施例得到的冬蟲夏草滅菌凍干粉與滅菌前的冬蟲夏草粉進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)、腺苷含量、水分等項目檢測，結(jié)果見下表2。

從上表2可以看出，本實施例得到的冬蟲夏草滅菌凍干粉有效降低了冬蟲夏草粉末中微生物的含量，菌落總數(shù)殺滅率＞99.93%、大腸菌群殺滅率＞99.23%、霉菌殺滅率＞99.72%，且不會造成冬蟲夏草中功效成分腺苷含量的損失。

實施例3

本實施例的一種冬蟲夏草的乙醇冷凍滅菌方法，包括以下步驟：

（1）乙醇浸潤：將冬蟲夏草粉碎至1000目，加入85%乙醇溶液將冬蟲夏草粉末浸潤處理0.5h，所述乙醇溶液的體積為冬蟲夏草重量的1倍，再加入純凈水稀釋至溶液中乙醇的濃度為5%；

（2）預(yù)凍：將稀釋后的溶液鋪盤后置入-50℃的冷凍干燥機(jī)中預(yù)凍2h，所述鋪盤厚度≤20mm；

（3）真空冷凍干燥：預(yù)凍后在-20℃下進(jìn)行升華干燥10h，真空度為400μbar；再在20℃下解析干燥至少2h，真空度為100μbar，即可得到冬蟲夏草滅菌凍干粉。

將本實施例得到的冬蟲夏草滅菌凍干粉與滅菌前的冬蟲夏草粉進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)、腺苷含量、水分等項目檢測，結(jié)果見下表3。

從上表3可以看出，本實施例得到的冬蟲夏草滅菌凍干粉有效降低了冬蟲夏草粉末中微生物的含量，菌落總數(shù)殺滅率＞99.91%、大腸菌群殺滅率＞99.68%、霉菌殺滅率＞99.78%，且不會造成冬蟲夏草中功效成分腺苷含量的損失。

實施例4

本實施例的一種冬蟲夏草的乙醇冷凍滅菌方法在瑪咖中的應(yīng)用，包括以下步驟：

（1）乙醇浸潤：將瑪咖粉碎至800目，加入75%乙醇溶液將瑪咖粉末浸潤處理1h，所述乙醇溶液的體積為瑪咖重量的3倍，再加入純凈水稀釋至溶液中乙醇的濃度為10%；

（2）預(yù)凍：將稀釋后的溶液鋪盤后置入-55℃的冷凍干燥機(jī)中預(yù)凍5h，所述鋪盤厚度≤20mm；

（3）真空冷凍干燥：預(yù)凍后在-25℃下進(jìn)行升華干燥16h，真空度為300μbar；再在20℃下解析干燥至少2h，真空度為20μbar，即可得到瑪咖滅菌凍干粉。

將本實施例得到的瑪咖滅菌凍干粉與滅菌前的瑪咖粉進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)、芐基芥子油苷含量、水分等項目檢測，結(jié)果見下表4。

從上表4可以看出，本實施例得到的瑪咖滅菌凍干粉有效降低了瑪咖粉末中微生物的含量，菌落總數(shù)殺滅率為99.30%、大腸菌群殺滅率＞99.41%、霉菌殺滅率＞99.09%，且不會造成瑪咖中功效成分芐基芥子油苷含量的損失。

實施例5

本實施例的一種冬蟲夏草的乙醇冷凍滅菌方法在當(dāng)歸中的應(yīng)用，包括以下步驟：

（1）乙醇浸潤：將當(dāng)歸粉碎至800目，加入75%乙醇溶液將當(dāng)歸粉末浸潤處理2h，所述乙醇溶液的體積為當(dāng)歸重量的2倍，再加入純凈水稀釋至溶液中乙醇的濃度為10%；

（2）預(yù)凍：將稀釋后的溶液鋪盤后置入-55℃的冷凍干燥機(jī)中預(yù)凍5h，所述鋪盤厚度≤20mm；

（3）真空冷凍干燥：預(yù)凍后在-35℃下進(jìn)行升華干燥20h，真空度為200μbar；再在20℃下解析干燥至少2h，真空度為50μbar，即可得到當(dāng)歸滅菌凍干粉。

將本實施例得到的當(dāng)歸滅菌凍干粉與滅菌前的當(dāng)歸粉進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)、阿魏酸含量、水分等項目檢測，結(jié)果見下表5。

從上表5可以看出，本實施例得到的當(dāng)歸滅菌凍干粉有效降低了當(dāng)歸粉末中微生物的含量，菌落總數(shù)殺滅率為99.02%、大腸菌群殺滅率＞99.17%，且未見當(dāng)歸中功效成分阿魏酸含量的明顯損失。