本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒及其制備方法與應用。

背景技術(shù)：

川芎嗪在臨床上主要用于缺血性腦血管疾病的治療，并取得較好的療效；但川芎嗪代謝快、半衰期短，為保持有效的藥物治療濃度，臨床上應用時需頻繁給藥，易引起蓄積中毒等缺陷使其應用受到限制；阿魏酸具有抗血小板凝集、血栓形成、保護心肌等藥理活性，在治療心、腦、腎臟等疾病方面效果較好，且毒副反應較低。

川芎嗪和阿魏酸的某些藥理作用一致，研究結(jié)果顯示兩者配伍應用具有明顯的協(xié)同作用，譚載友等從傳統(tǒng)方劑補陽還五湯、血府逐瘀湯和十全大補湯中分別提取分離出一種抗血小板凝集化合物阿魏酸川芎嗪(fatm)，并進行了結(jié)構(gòu)確證和化學合成；隨后大量研究證明fatm抗血栓、抗血小板聚集及在大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護方面效果均優(yōu)于單一成份，且毒副作用有所降低。但目前關(guān)于fatm的研究主要集中在藥理活性及含量測定方面，對其制劑的研究較少。

固體脂質(zhì)納米粒(sln)是20世紀90年代興起的一種新型藥物遞送系統(tǒng)，與以磷脂為主要成分的脂質(zhì)體雙分子層結(jié)構(gòu)不同的是，sln是由多種類脂材料(如三酞甘油、豆磷脂等)形成的固體顆粒，具有物理穩(wěn)定性高、可控制藥物釋放，避免藥物降解或泄漏以及良好的靶向性、無毒等優(yōu)點；將藥物包封在生理相容且耐受性好的sln骨架中，與傳統(tǒng)的藥物制劑相比具有較高的生物利用度。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒(fatm-sln)。

本發(fā)明的目的還在于提供一種阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的制備方法。

本發(fā)明的目的還在于提供一種阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的應用。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒，由包含以下重量份組成：

優(yōu)選的，一種阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒，由包含以下重量份組成：

一種阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，包含以下步驟：

按照上述重量份稱取阿魏酸川芎嗪、蛋黃卵磷脂、乙酸丁酯、單硬脂酸甘油酯于50ml的燒杯中，在65-75℃水浴溶解為油相；再稱取上述重量份的泊洛沙姆188、硬脂酸鈉、純化水于50ml的燒杯中，在65-75℃水浴攪拌溶解為水相；將所述油相注入所述水相中，在溫度為65-75℃和攪拌速率為4500-5500rpm剪切5min，采用超聲探頭超聲處理5min，迅速置于冰水浴中冷卻至室溫，即得阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒(fatm-sln)。

優(yōu)選的，所述的水浴溶解溫度為70℃；所述的攪拌速率為5000rpm；所述的超聲探頭功率占比為30％。

所述的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒，在治療缺血性腦血管疾病的應用。

本發(fā)明中各組分的藥理作用：

川芎嗪：抗血栓、抗缺血再灌注損傷、保護心腦血管系統(tǒng)、保肝、腎等多方面的藥理作用。還具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、解毒等生物活性。

阿魏酸：抗動脈粥樣硬化；抗m小板凝集和血栓；清除亞硝酸鹽、氧自由基、過氧化啞硝基；抗菌消炎；抗腫瘤；抗突變；增加免疫功能、人體精于活力和運動性等。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點：

1、本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒中川芎嗪與阿魏酸具有很好的協(xié)同作用，阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的藥效明顯優(yōu)于川芎嗪或阿魏酸單獨使用時的藥效；

2、本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒物理穩(wěn)定性高、可控制藥物釋放，避免藥物降解或泄漏，具有良好的靶向性且安全無毒等優(yōu)點，可應用于治療治療缺血性腦血管疾病的臨床藥物；

3、本發(fā)明選用pc、f68、硬脂酸鈉為復配乳化劑，pc為天然乳化劑，屬于動物磷脂，具有更好的生物活性和人體利用率；f68為非離子表面活性劑，是常用的供注射用的合成乳化劑；硬脂酸鈉為陰離子表面活性劑，具有優(yōu)良的乳化能力，與非離子表面活性劑聯(lián)合使用，臨界膠束濃度更低，乳化效果增強，該復配乳化劑有效降低粒徑，提高穩(wěn)定性；

4、本發(fā)明將川芎嗪與阿魏酸包封在生理相容且耐受性好的sln骨架中，與傳統(tǒng)的藥物制劑相比具有較高的生物利用度，為臨床提供物理穩(wěn)定性高、療效好、副作用小的新型阿魏酸川芎嗪制劑奠定基礎(chǔ)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的紫外掃描色譜圖，其中a為fatm，b為fatm-sln，c為陰性樣品；

圖2為本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的透射電鏡圖；

圖3為本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的粒徑分布圖；

圖4為本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的zeta電位圖；

圖5為本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的體外釋放度曲線。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。

本發(fā)明實施例應用spss16.0軟件進行統(tǒng)計學分析，多組樣本均數(shù)間比較采用方差分析，以p<0.05為差異。

實施例1本發(fā)明阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的制備

1.儀器

剪切分散儀(德國ika集團)；

超聲細胞粉碎機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；

tg16臺式高速離心機(長沙英泰儀器有限公司)；

nano-zs90激光散射粒徑儀(英國malvan公司)；

759s紫外可見分光光度計(上海菁華科技儀器有限公司)；

alpha-bruker紅外光譜儀(德國bruker光譜公司)。

2.藥品與試劑

阿魏酸原料藥、川芎嗪原料藥(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號：20160303，純度：98.1％)；

阿魏酸川芎嗪(長沙醫(yī)學院藥學實驗室合成，批號：20160416，純度：98.0％)；

甲醇、磷酸、蛋黃卵磷脂(pc)、硬脂酸鈉(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20160223、20121114、20151222、20131209，甲醇為色譜純，磷酸為優(yōu)級純，其余均為分析純)；

乙酸丁酯(江蘇強盛功能化學股份有限公司，批號：20120910，分析純)；

單硬脂酸甘油酯(上海恒信化學試劑有限公司，批號：20130107，純度：95.0％)；

泊洛沙姆188(f68)(深圳市優(yōu)普惠股份有限公司，批號：wpwi625c，純度：98.5％)；

葡聚糖凝膠g50(上海如吉生物有限公司，批號：20151112)。

3.方法

稱取阿魏酸川芎嗪10mg、蛋黃卵磷脂400mg、乙酸丁酯1.5ml、單硬脂酸甘油酯300mg于50ml的燒杯中，在70℃水浴溶解為油相；再稱取泊洛沙姆188400mg、硬脂酸鈉10mg、純化水20ml于50ml的燒杯中，在70℃水浴攪拌溶解為水相；將所述油相注入所述水相中，在溫度為70℃和攪拌速率為5000rpm剪切5min，采用超聲探頭超聲處理5min，迅速置于冰水浴中冷卻至室溫，即得阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒(fatm-sln)。

實施例2本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的波長測定

精密稱取0.0102gfatm，置于50ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解并定容，得fatm儲備液a，精密移取該儲備液1ml于10ml容量瓶中，加甲醇稀釋并定容，以甲醇為空白對照；精密吸取實施例1中制備的fatm-sln1ml，用甲醇破乳并定容至25ml，得供試品溶液b；精密稱取處方中所有輔料，制備不含fatm的sln，作為陰性樣品c，精密吸取陰性樣品1ml，用甲醇破乳并定容至25ml，即得空白溶液；用紫外可見分光光度儀在200～500nm波長處分別對a、b、c進行光譜掃描。

精密稱取0.0142gfatm置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻得質(zhì)量濃度為0.284mg/ml的對照品儲備液，分別精密移取儲備液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml置于10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得系列濃度的溶液；在320nm波長處測定上述溶液的吸光度值(a)，以溶液質(zhì)量濃(x)為橫坐標，以吸光值(y)為縱坐標，繪制標淮曲線并進行回歸，得fatm甲醇溶液標準線方程：y＝0.07501x-0.02971，r＝0.9994，線性范圍為2.48～28.40μg/ml，結(jié)果見圖1所示，可以看出本發(fā)明的fatm最大吸收波長為320nm，輔料在320nm波長處沒有吸收，對藥物測定無干擾。

實施例3本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的精密度測定

分別配罝5.68、11.36、22.72μg/ml低、中、高三個濃度的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的甲醇溶液測定精密度，rsd為0.24％、0.94％、0.55％，表明本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的精密度良好。

實施例4本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米?；厥章实臏y定

按照處方量制備9份空白輔料樣品，分別加入處方原料量80％、100％、120％三種水平的fatm，混勻，每個含量水平配置3份樣品液，每個樣品吸取1ml并用甲醇定容至25ml，用微孔濾膜濾過，在波長320nm下測定其吸光度計算出濃度，rsd為0.72％，表明本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米?；厥章屎?。

實施例5本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒包封率和載藥量測定

將葡聚糖顆粒用蒸餾水充分溶脹，裝柱，吸取1mlfatm-sln上柱，用蒸餾水洗脫，收集帶有乳光部分的洗脫液(fatm-sln)，并吸取0.5ml該部分洗脫液，加甲醇破乳至25ml，另吸取0.5mlfatm-sln直接用甲醇破乳并定容至25ml，按照實施例2的步驟在320nm處測定吸收度，分別測定兩樣品中的含量，按照下述公式計算包封率、載藥量。

包封率％＝c柱/c總×100％，其中，c柱為fatm-sln通過葡聚糖凝膠后的藥物量，c總為fatm-sln的總量；

載藥量％＝c包/c加×100％，其中，c包為被包封的藥物量，c加為處方中加入的藥物總量；結(jié)果如表1所示，可知本發(fā)明的固體脂質(zhì)體納米粒包封率較高、粒徑較小，載藥量數(shù)據(jù)說明該產(chǎn)品屋里穩(wěn)定性好。

表1不同樣品包封率和載藥量測定結(jié)果

實施例6本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的穩(wěn)定性測定

fatm-sln置于25℃和4℃環(huán)境中放置10天，考察溫度對fatm-sln粒徑的影響；觀察發(fā)現(xiàn)，放置在25℃的三批樣品出現(xiàn)不同程度的白色絮狀物，rsd>3％；放置在4℃的樣品外觀無明顯變化，rsd＜2％。

實施例7本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒的外觀形態(tài)、粒徑分布及zeta電位測定

利用透射電鏡觀察fatm-sln的表面形態(tài)，將fatm-sln加蒸餾水稀釋10倍，取適量滴加在覆蓋碳膜的銅網(wǎng)上，用1％磷鎢酸染色，室溫放置至形成薄膜后用透射電子顯微鏡觀察其形態(tài)為類球形實體粒子，外觀形態(tài)較圓整，其粒徑在100-200nm范圍內(nèi)，如圖2所示；吸取一定量的fatm-sln，加超純水稀釋10倍，用激光粒徑測定儀測定粒徑及電位，其平均粒徑為105.3nm，多分散系數(shù)(pdi)為0.254，zeta電位為-34.8mv，如圖3和圖4所示。

實施例8本發(fā)明的阿魏酸川芎嗪固體脂質(zhì)納米粒體外釋藥性測定

精密吸取1mlfatm-sln溶液，放入透析袋中，在透析袋中加入5mlpbs(ph＝7.4)，并置于含44mlpbs的100ml廣口瓶中，37℃恒溫水浴，分別放置0.5、0.75、1、2、4、8、12h，按時分別取透析溶液3ml，過濾后通過uv法測定，同時向廣口瓶中補加3ml新鮮介質(zhì)，計算累積釋放量，結(jié)果如圖5所示，可以看出fatm-sln在0.51h釋放最快，1h釋放量達到60.47％，8h以后趨于平穩(wěn)，藥物基本釋放完全。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施例對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。