本發(fā)明提供了一種青蒿氯仿提取物，以及該提取物的制備方法和在制備治療支氣管哮喘方面的藥物的用途，屬于中醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

支氣管哮喘(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“哮喘”)是一種由過(guò)敏原引起的多發(fā)性慢性呼吸道疾病，其發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚。目前，全球的哮喘患者達(dá)到3億以上，我國(guó)的哮喘患者有將近3000萬(wàn)。2013年中國(guó)成人哮喘患病情況為：自我報(bào)告的哮喘患病率為2％，基于癥狀的哮喘患病率為3.9％；而中國(guó)城區(qū)0～14歲兒童哮喘總患病率為3.02％，較10年前顯著升高。目前哮喘疾病的有效控制率低下，其主要原因是隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展生活水平的提高，環(huán)境變化加快，汽車(chē)尾氣、工業(yè)廢氣、家庭裝修、食品添加劑等過(guò)敏原越來(lái)越多，這都必然導(dǎo)致哮喘的發(fā)病率越來(lái)越高，目前，哮喘已經(jīng)成為僅次于癌癥的世界第二大致死和致殘疾病。因此急需尋找能有效的治療哮喘的藥物。

哮喘的主要癥狀表現(xiàn)為氣道阻塞，而氣道平滑肌的異常收縮是導(dǎo)致這一癥狀的主要原因。目前支氣管擴(kuò)張劑如β2-受體激動(dòng)劑已被廣泛應(yīng)用于臨床，但治療效果有限，30～45％哮喘病人的肺功能無(wú)法得到改善，即使癥狀有所緩解，停止治療后病情亦容易反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重者更需要住院治療。這給患者本人和家庭造成了極大的痛苦，同時(shí)也加重了社會(huì)經(jīng)濟(jì)的負(fù)擔(dān)和損失。

青蒿，為菊科植物黃花蒿Artemisia annua L.的地上部分。主要分布于重慶酉陽(yáng)、吉林、遼寧、河北、陜西等地。朝鮮、日本、越南(北部)、緬甸、印度(北部)及尼泊爾等也有分布。重慶酉陽(yáng)享有“世界青蒿之鄉(xiāng)”的美譽(yù)，是世界上最主要的青蒿生產(chǎn)基地，也是全球青蒿素高含量的富集區(qū)，平均青蒿素含量高達(dá)8‰。青蒿的主要成份包含青蒿素系列化合物如青蒿素，青蒿甲、乙，青蒿內(nèi)酯等和黃酮類(lèi)化合物如山柰黃素(山柰酚)、槲皮黃素等，以及揮發(fā)油和香豆精類(lèi)化合物?！吨袊?guó)藥典》顯示青蒿具有清熱、解暑、除蒸、截瘧等功效。現(xiàn)代藥理研究表明青蒿提取物具有抗瘧、抑菌、消炎、抗腫瘤作用。

目前雖然有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道青蒿素及其衍生物青蒿琥酯具有制備治療哮喘藥物的功效，但是發(fā)揮功效的組分為青蒿素，在青蒿中尚無(wú)除青蒿素外的其他組分具有治療哮喘功效的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種青蒿氯仿提取物，該提取物經(jīng)過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)能夠舒張氣道平滑肌，能夠用于緩解哮喘患者的氣道阻塞，因此上述青蒿氯仿提取物能夠應(yīng)用于制備治療支氣管哮喘的藥物。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明上述目的所采用的技術(shù)方案為：

一種青蒿氯仿提取物，該提取物采用以下方法制備：(1)選取干燥的青蒿作為原料，磨成粉末；

(2)將粉末混入去離子水中，加熱至50～60℃并維持2～4h，過(guò)濾收集提取物，重復(fù)提取1～4次；

(3)將提取物用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸干，收集殘余物；

(4)殘余物溶于去離子水，用石油醚萃取2～4次，除去油脂及其他石油醚可溶性物質(zhì)，收集濾出液；

(5)濾出液用氯仿萃取，收集萃取液并蒸干制得浸膏，即青蒿氯仿提取物。

步驟(2)中采用pH值為9～10的去離子水提取2次，提取時(shí)加熱時(shí)間為3h。

步驟(4)中殘余物溶解于pH值為9～10的去離子水中，用等體積石油醚萃取3次。

步驟(5)中濾出液用氯仿萃取2次。

本發(fā)明中所提供的青蒿氯仿提取物，在提取過(guò)程中采用氯仿萃取之前，先用去離子水進(jìn)行初提，而青蒿素幾乎不溶于水，所以水初提物中幾乎不含青蒿素；另外，通過(guò)之后的石油醚萃取，進(jìn)一步去除了可能殘留的青蒿素。因此本發(fā)明所制備的氯仿提取物中是不含有青蒿素的。

通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠離體氣管環(huán)張力的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所提供的青蒿氯仿提取物具有舒張氣管平滑肌的作用，有望應(yīng)用于緩解哮喘患者氣道阻塞。因此能夠用于制備治療支氣管哮喘藥物中。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例中青蒿氯仿提取物對(duì)高鉀引起氣道平滑肌收縮的作用圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例中青蒿氯仿提取物對(duì)乙酰膽堿引起氣道平滑肌收縮的作用圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)具體的說(shuō)明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于以下實(shí)施例。

實(shí)施例1

本實(shí)施例中青蒿氯仿提取物的制備方法如下：

選取干燥的青蒿作為原料，磨成粉末；采用去離子水(pH:9)浸泡，并于52℃加熱3h，重復(fù)3次，收集提取物；將提取物用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸干，收集殘余物；殘余物溶于200毫升去離子水(pH:9)，用等體積石油醚萃取3次，除去油脂及其他石油醚可溶性物質(zhì)，收集濾出液；濾出液用等體積氯仿萃取，收集氯仿萃取液并蒸干制得浸膏，即青蒿氯仿提取物，所得青蒿氯仿提取物約為原材料干重的0.5％。

下面將氯仿提取物溶解于DMSO用于生物活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，檢測(cè)步驟如下：

1、小鼠氣管的體外分離：

雄性成年的BALB/c小鼠頸椎脫臼法處死，將口腔和四肢釘在解剖板上，噴灑75％的酒精后剪開(kāi)胸腔，暴露出心肺組織，移除心臟之后取下從喉結(jié)至肺部的一整段組織，將取下的組織馬上浸泡于PSS溶液(NaCl 135mM，KCl 5mM，MgCl2 1mM，CaCl2 2mM，HEPES10mM，glucose 10mM，pH 7.4)中，然后在轉(zhuǎn)移至膠板上進(jìn)行進(jìn)一步修剪。在SZM體視顯微鏡下小心去除氣管外周的結(jié)締組織及內(nèi)腔中的殘留血液。

2、小鼠氣道平滑肌的張力檢測(cè)方法：

將小鼠氣管剪成長(zhǎng)約5mm的氣管環(huán)后與掛鉤連接，小心銜接張力換能器后置于內(nèi)有6mL PSS并持續(xù)通高純氧的37℃的恒溫水浴槽中.前負(fù)荷調(diào)至300mg，開(kāi)始平衡，平衡期間，每15min換液1次，共換液4次。平衡完畢后使用80mM高鉀溶液或100μM乙酰膽堿(ACh)溶液進(jìn)行預(yù)刺激，充分刺激組織活性后換液洗脫，至恢復(fù)至基線，30min后即可開(kāi)始試驗(yàn)。

3、青蒿氯仿提取物效果測(cè)試：

離體小鼠氣管環(huán)在80mM高鉀溶液中發(fā)生穩(wěn)定持續(xù)的預(yù)收縮，當(dāng)加入青蒿氯仿提取物(CEAA)后收縮的氣管環(huán)張力逐漸下降，隨著青蒿氯仿提取物濃度的增加氣管環(huán)張力逐漸恢復(fù)為收縮前水平。表明青蒿氯仿提取物可完全舒張高鉀引起氣道平滑肌收縮，且該藥物作用呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，檢測(cè)結(jié)果如圖1所示。

實(shí)施例2

本實(shí)施例中青蒿氯仿提取物的制備方法如下：

選取干燥的青蒿作為原料，磨成粉末；采用去離子水(pH:10)浸泡，并于60℃加熱3h，重復(fù)2次，收集提取物；將提取物用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸干，收集殘余物；殘余物溶于200毫升去離子水(pH:10)，用等體積石油醚萃取3次，除去油脂及其他石油醚可溶性物質(zhì)，收集濾出液；濾出液用等體積氯仿萃取，收集氯仿萃取液并蒸干制得浸膏，即青蒿氯仿提取物，所得青蒿氯仿提取物約為原材料干重的0.5％。

下面將氯仿提取物溶解于DMSO用于生物活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，檢測(cè)步驟如下：

1、小鼠氣管的體外分離：

雄性成年的BALB/c小鼠頸椎脫臼法處死，將口腔和四肢釘在解剖板上，噴灑75％的酒精后剪開(kāi)胸腔，暴露出心肺組織，移除心臟之后取下從喉結(jié)至肺部的一整段組織，將取下的組織馬上浸泡于PSS溶液(NaCl 135mM，KCl 5mM，MgCl2 1mM，CaCl2 2mM，HEPES10mM，glucose 10mM，pH 7.4)中，然后在轉(zhuǎn)移至膠板上進(jìn)行進(jìn)一步修剪。在SZM體視顯微鏡下小心去除氣管外周的結(jié)締組織及內(nèi)腔中的殘留血液。

2、小鼠氣道平滑肌的張力檢測(cè)方法：

將小鼠氣管剪成長(zhǎng)約5mm的氣管環(huán)后與掛鉤連接，小心銜接張力換能器后置于內(nèi)有6mL PSS并持續(xù)通高純氧的37℃的恒溫水浴槽中.前負(fù)荷調(diào)至300mg，開(kāi)始平衡，平衡期間，每15min換液1次，共換液4次。平衡完畢后使用80mM高鉀溶液或100μM乙酰膽堿(ACh)溶液進(jìn)行預(yù)刺激，充分刺激組織活性后換液洗脫，至恢復(fù)至基線，30min后即可開(kāi)始試驗(yàn)。

3、青蒿氯仿提取物效果測(cè)試：

離體小鼠氣管環(huán)在100μM ACh溶液中發(fā)生穩(wěn)定持續(xù)的預(yù)收縮，當(dāng)加入青蒿氯仿提取物后收縮的氣管環(huán)張力逐漸下降，隨著青蒿氯仿提取物濃度的增加氣管環(huán)張力逐漸恢復(fù)為收縮前水平。表明青蒿氯仿部提取物可完全舒張ACh引起氣道平滑肌收縮，且該藥物作用呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，檢測(cè)結(jié)果如圖2所示。