本發(fā)明涉及動物用獸藥制品領(lǐng)域，特別是涉及一種治療和預(yù)防畜禽出血性疾病的復(fù)方制劑的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
畜禽的多種疾病，不論是細(xì)菌、病毒和支原體引起的，還是霉菌引起的，都或多或少地伴有出血性傾向，而由于細(xì)菌、病毒、支原體、霉菌等內(nèi)毒素或外毒素等引發(fā)的血管內(nèi)彌漫性凝血(DIC)一直伴隨于疾病的整個發(fā)病過程中，因DIC使得畜禽死亡率增加，降低了許多藥物治療疾病的治愈率，為此，針對畜禽的多種伴有出血性疾病制劑的研發(fā)勢在必行。
在治療和預(yù)防畜禽的多種疾病中，抗生素的使用對于養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展起到了巨大的推動作用。隨著畜禽規(guī)模養(yǎng)殖的發(fā)展和人們生活水平的提高，人們越來越多地關(guān)注于食品安全問題，并且在畜牧業(yè)的生產(chǎn)實踐中也發(fā)現(xiàn)了畜禽疾病中某些細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生和抗生素在肉、蛋、奶中產(chǎn)生殘留的問題，從而擔(dān)心將來會對人類產(chǎn)生或多或少的潛在性危害。于是，為了人類健康的考慮，同時對國際養(yǎng)殖業(yè)提出全面禁抗的更高要求，抗生素替代類新產(chǎn)品作為治療或預(yù)防用制劑已經(jīng)成為時代發(fā)展的必然趨勢。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種治療和預(yù)防畜禽出血性疾病的復(fù)方制劑，該復(fù)方制劑適合于所有畜禽伴有出血性疾病的治療，并且可以部分或完全替代抗生素。
為此，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
一種菊葉三七提取物的制備方法，包括以下步驟：
1)稱取100g粉碎并過60目篩的菊葉三七藥材，加入到8-12倍量、pH值為7-10的堿水中，浸泡30-60分鐘，然后煎熬60-90分鐘，過濾得到一次煎熬藥液和藥渣；
2)將得到的藥渣加入到8-12倍量、pH值為7-10的堿水中，煎熬60-90分鐘，過濾得到二次煎熬藥液和藥渣；
3)重復(fù)步驟2)的過程，得到三次煎熬藥液和藥渣；
4)將三次所得藥液混合，減壓濃縮至相對密度為1.1～1.2，冷卻至室溫；
5)向減壓濃縮后的藥液中加乙醇至含醇量為70-85％(v/v)，靜置，取下層沉淀，干燥，得到所述菊葉三七提取物。
優(yōu)選的是，上述步驟1)、2)、3)中，所述堿水用量為10倍量，堿水的pH值為8，煎熬時間為90分鐘；步驟1)中，浸泡時間為60分鐘。
優(yōu)選的是，上述步驟4)中，加乙醇至含醇量為80％(v/v)。
一種菊葉三七復(fù)方中藥口服液的制備方法，包括以下步驟：
(1)稱取1kg菊葉三七原生藥材，將其殺菌、粉碎，得到原料藥粉；
(2)將得到的原料藥粉加8-12倍量的水浸泡30-60分鐘，然后煎熬60-90分鐘，過濾得到一次煎熬藥液和藥渣；
(3)將步驟(2)得到的藥渣加入到8-12倍量的水中，煎熬60-90分鐘，過濾得到二次煎熬藥液和藥渣；
(4)重復(fù)步驟(3)的過程，得到三次煎熬藥液和藥渣；
(5)將三次所得藥液混合，減壓濃縮，冷卻至室溫，濾過后，加入10g葡萄糖氧化酶和苯甲酸鈉，定容至1L，所述苯甲酸鈉在溶液中的濃度為5wt％。
在本發(fā)明的一個實施例中，菊葉三七復(fù)方中藥口服液的規(guī)格為：每毫升相當(dāng)于菊葉三七原生藥1g，葡萄糖氧化酶100u。
優(yōu)選的是，上述步驟(2)、(3)、(4)中，所述水的用量為10倍，煎熬時間為90分鐘；步驟(2)中，浸泡時間為60分鐘。
上述菊葉三七復(fù)方中藥口服液還可以直接用菊葉三七提取物制備，包括以下步驟：
取菊葉三七提取物40g和葡萄糖氧化酶10g，溶解后，加入1％吐溫-80，加入0.5％苯甲酸鈉，定容至1L，煮沸滅菌，過濾，灌封。
在本發(fā)明的一個實施例中，菊葉三七復(fù)方中藥口服液的規(guī)格為：每毫升相當(dāng)于菊葉三七提取物0.04g，葡萄糖氧化酶100u。
一種菊葉三七復(fù)方中藥預(yù)混劑的制備方法，稱取權(quán)利要求1的方法制備的菊葉三七提取物40g和葡萄糖氧化酶20g，加入適量的藥用輔料，使用混合機(jī)充分混合15分鐘，得到所述菊葉三七復(fù)方中藥預(yù)混劑，其中所述藥用輔料為淀粉、蔗糖、無水葡萄糖、輔美白、糊精、乳糖和微粉硅膠中的一種，藥用輔料的用量可以根據(jù)臨床實際應(yīng)用情況進(jìn)行調(diào)整。
在本發(fā)明的一個實施例中，菊葉三七復(fù)方中藥預(yù)混劑的規(guī)格為：每克相當(dāng)于菊葉三七原生藥0.8g，葡萄糖氧化酶200u。
一種菊葉三七復(fù)方中藥可溶性粉的制備方法，稱取權(quán)利要求1的方法制備的菊葉三七提取物40g和葡萄糖氧化酶20g，加入適量的藥用輔料，例如940g，使用混合機(jī)充分混合15分鐘，得到所述菊葉三七復(fù)方中藥可溶性粉，其中所述藥用輔料為蔗糖、無水葡萄糖、輔美白、糊精、乳糖中的一種，藥用輔料的用量可以根據(jù)臨床實際應(yīng)用情況進(jìn)行調(diào)整。
在本發(fā)明的一個實施例中，菊葉三七復(fù)方中藥可溶性粉的規(guī)格為：每克相當(dāng)于菊葉三七原生藥0.8g，葡萄糖氧化酶200u。
一種菊葉三七復(fù)方中藥口服液在治療和預(yù)防畜禽出血性疾病方面的應(yīng)用，使用時，每公斤飼料或飲水中，加入所述菊葉三七復(fù)方中藥口服液1-20ml。
一種菊葉三七復(fù)方中藥預(yù)混劑在治療和預(yù)防畜禽出血性疾病方面的應(yīng)用，使用時，每公斤飼料或飲水中，加入所述菊葉三七復(fù)方中藥預(yù)混劑1-20g。
一種菊葉三七復(fù)方中藥可溶性粉在治療和預(yù)防畜禽出血性疾病方面的應(yīng)用，使用時，每公斤飼料或飲水中，加入所述菊葉三七復(fù)方中藥可溶性粉1-20g。
本發(fā)明中各組分的作用如下：
菊葉三七：為菊科多年生宿根草本植物菊葉三七Gynura segetum(Lour.)Merr.的根、葉及全草。味甘、微苦，性平。具有散瘀止血、解毒消腫功能。適用于衄血、吐血、跌打傷痛、瘡癰腫毒、乳癰等?！兜崮媳静荨分^本品“治跌打損傷。生用破血，灸用補(bǔ)血?！薄侗静菥V目·卷十二·三七》，只言其“治金瘡折傷出血及上下血病”。《土家族醫(yī)藥學(xué)概論》記載其能治療：跌打損傷，勞傷疼痛、吐血、血痢、無名腫毒、產(chǎn)后腹痛、痛經(jīng)、乳癰等?！恫菟庒樉闹潍F病》記載其能：“祛瘀散血，止血止痛，消腫解毒。治跌打損傷，淤血腫痛，外傷出血，內(nèi)傷疼痛，產(chǎn)后淤血，赤白痢疾，癰疽疔瘡，毒蛇咬傷”，為民間獸醫(yī)常用的治療畜禽伴有出血性疾病的一味重要中藥。研究證明菊葉三七屬植物中含有生物堿類、黃酮類、香豆素類、三萜類、甾體類及其皂苷、倍半萜類、酚酸類等化學(xué)成分，具有良好的止血、活血、抗炎、解毒、消腫等藥理活性。
葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase，GOD)：是從特異青霉(Penicillium notatum)等霉菌和蜂蜜中發(fā)現(xiàn)的酶。它能催化D-葡萄糖+O2→D-葡糖酸(的δ-內(nèi)酯)+H2O2的反應(yīng)。特異青霉(P.notatum)的酶以其顯有抗菌性而引入注意。因此，也有葡糖氧化酶的稱呼?，F(xiàn)已清楚，抗菌性是由于反應(yīng)生成的H2O2具滅菌作用，同時生成的葡萄糖酸或葡萄糖酸內(nèi)酯具有類似肝泰樂的結(jié)構(gòu)，因此也具有解肝臟中毒的作用。
葡萄糖氧化酶在動物養(yǎng)殖中的作用：清除體內(nèi)，特別是腸道內(nèi)致病因子，優(yōu)化腸道環(huán)境，提高食欲，增加采食量，替代抗生素和益生素；保護(hù)免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)肝臟功能，降低動物體內(nèi)藥物殘留，提高畜產(chǎn)品品質(zhì)；并且可以快速解除毒素中毒，特別是霉菌毒素中毒；可以輔助藥物，增加療效，加快痊愈等。
在本發(fā)明的治療和預(yù)防畜禽出血性疾病的復(fù)方制劑中，菊葉三七與葡萄糖氧化酶的復(fù)配比例相當(dāng)于生藥菊葉三七1～20g/kg飼料或飲水：葡萄糖氧化酶20～1000u/kg飼料或飲水。
本發(fā)明的方法制備的菊葉三七提取物，1g菊葉三七提取物相當(dāng)于原生藥材5～30g。本發(fā)明中使用的葡萄糖氧化酶，酶活力為200～10000u/g。
本發(fā)明的方法制備的菊葉三七復(fù)方制劑適合于所有畜禽伴有出血性疾病的預(yù)防和治療，例如：豬丹毒、豬肺疫、仔豬副傷寒、豬葡萄球菌感染、豬圓環(huán)病毒感染、豬藍(lán)耳病、牛羊血痢及各種腸炎、雞新城疫、傳支、傳喉、法氏囊炎、金色葡萄球菌感染、禽球蟲病等，并且可以部分或完全替代抗生素。該類制劑具有性能穩(wěn)定、安全性好、成本低、簡便易用等特點，并且其制備方法簡單，適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)的需要。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的菊葉三七提取物及其復(fù)方制劑的制備方法作進(jìn)一步說明。
實例一：菊葉三七提取物的制備
稱取100g粉碎并過60目篩的菊葉三七藥材，加入10倍量的堿水中，堿水的pH值為8，浸泡60分鐘，然后煎熬90分鐘，過濾得到一次煎熬藥液和藥渣。
將得到的藥渣再次加入到10倍量、pH值為8的堿水中，煎熬90分鐘，過濾得到二次煎熬藥液。重復(fù)前述步驟，得到三次煎熬藥液。
將三次所得藥液混合，減壓濃縮至相對密度為1.1～1.2，放冷，加乙醇至含醇量為80％(v/v)，靜置，取下層沉淀，干燥，得菊葉三七提取物。
實例二：菊葉三七復(fù)方中藥口服液的制備(1L)
稱取1kg菊葉三七原生藥材，將其殺菌、粉碎，得到原料藥粉；將得到的原料藥粉，加10倍量的水浸泡60分鐘，再煎熬90分鐘，過濾得到一次煎熬藥液和藥渣。
將得到的藥渣加入到10倍量的水中，煎熬90分鐘，過濾得到二次煎熬藥液和藥渣；重復(fù)前述步驟，得到三次煎熬藥液和藥渣。
將三次所得藥液混合，減壓濃縮，放冷，濾過后，加入10g葡萄糖氧化酶和苯甲酸鈉，最后定容至1L，所述苯甲酸鈉在溶液中的濃度為5wt％。最終的菊葉三七復(fù)方中藥口服液規(guī)格為：每毫升相當(dāng)于菊葉三七原生藥1g，葡萄糖氧化酶100u。
使用時，每公斤飼料或飲水中，加入所述菊葉三七復(fù)方中藥口服液1-20ml。
實例三：菊葉三七復(fù)方中藥預(yù)混劑的制備(1kg)
稱取實施例1制備的菊葉三七提取物40g，葡萄糖氧化酶20g，加入940g的藥用淀粉，使用混合機(jī)充分混合15分鐘，即得菊葉三七復(fù)方中藥預(yù)混劑。最終的復(fù)方中藥預(yù)混劑規(guī)格為：每克相當(dāng)于菊葉三七原生藥0.8g，葡萄糖氧化酶200u。
使用時，每公斤飼料或飲水中，加入所述菊葉三七復(fù)方中藥預(yù)混劑1-20g。
實例四：菊葉三七復(fù)方中藥可溶性粉的制備(1kg)
稱取實施例1制備的菊葉三七提取物40g，葡萄糖氧化酶20g，加入940g無水葡萄糖，使用混合機(jī)充分混合15分鐘，即得菊葉三七復(fù)方制劑中藥可溶性粉。最終的復(fù)方中藥可溶性粉規(guī)格為：每克相當(dāng)于菊葉三七原生藥0.8g，葡萄糖氧化酶200u。
使用時，每公斤飼料或飲水中，加入所述菊葉三七復(fù)方中藥可溶性粉1-20g。
應(yīng)用例
例1：實施例2制備的菊葉三七復(fù)方中藥口服液對豬圓環(huán)病毒感染豬的臨床試驗
某豬場仔豬斷奶后，糞便呈灰白色或淡黃色水樣，出現(xiàn)嘔吐，不久嚴(yán)重脫水，眼球凹陷，皮膚干燥，無彈；生長緩慢，發(fā)育不良，表現(xiàn)為漸進(jìn)性消瘦，肋骨凸顯，被毛粗糙無光澤，眼圈發(fā)黑；有的病豬為頸部、肩部、腹底甚至全身皮膚結(jié)痂、龜裂，雙耳背側(cè)、腹底、股內(nèi)側(cè)皮內(nèi)彌漫分布黑紫色小點。經(jīng)實驗室診斷，確診為豬圓環(huán)病毒感染。所有病豬服用菊葉三七復(fù)方中藥口服液(相當(dāng)于生藥菊葉三七1～20g/kg飲水：葡萄糖氧化酶20～1000u/kg飲水)，連續(xù)飲用5-7天，在治療的同時，對豬舍和周圍環(huán)境進(jìn)行徹底消毒進(jìn)行噴灑，每天一次，連用7d。2周后病豬逐漸恢復(fù)健康。
例2：實施例3制備的菊葉三七復(fù)方中藥預(yù)混劑對金黃色葡萄球菌感染豬的臨床試驗
選擇潔凈級廣西巴馬小型豬，隔離飼養(yǎng)觀察一周后，供試驗用。
將確認(rèn)未受金黃色葡萄球感染的試驗豬隨機(jī)分成三組，第一組為空白對照組(10頭)，第二組為攻毒對照組(10頭)，第三組為攻毒治療組(10頭)。第一組為空白對照組，不注射任何藥品，隔離飼養(yǎng)。第二組和第三組每頭豬注射金黃色葡萄球菌菌液2ml，約含10億個活菌。于攻毒呈現(xiàn)發(fā)病癥狀后，第三組飼喂混有菊葉三七復(fù)方中藥預(yù)混劑的飼料(相當(dāng)于生藥菊葉三七1～20g/kg飼料：葡萄糖氧化酶20～1000u/kg飼料)，連續(xù)飼喂5-7天，第二組飼喂不含有任何藥物的飼料。觀察豬的發(fā)病和死亡情況至第30天，結(jié)果見表1。
表1各組豬的發(fā)病和死亡情況
例3：實施例4制備的菊葉三七復(fù)方中藥可溶性粉對患有雞球蟲病家禽的防治試驗
某雞場的病雞精神不振，閉目呆立，羽毛蓬松，雙翅下垂，食欲不振，喜多喝水，先便秘后下痢，肛門周圍羽毛粘在一起。以后雙翅輕癱，走路失調(diào)，嗉囊充滿液體，拒食，糞便由水樣帶血到血糞，粘膜和冠呈蒼白，消瘦。大多數(shù)病雛在發(fā)病6至10天內(nèi)死亡。剖檢顯示盲腸腸管顯著腫大，充滿暗紅色血液凝塊，并伴有嚴(yán)重的糜爛；有的含有一種混雜血液的黃白色干酪樣壞死物質(zhì)，其它臟器無明顯變化。雞尸體消瘦，雞冠和年末蒼白或者發(fā)青，泄殖腔周圍羽毛被液體排泄物污染，往往帶有血液。經(jīng)實驗室診斷，確診為雞球蟲病。所有病雞用菊葉三七復(fù)方中藥可溶性粉兌水服用(相當(dāng)于生藥菊葉三七1～20g/kg飲水：葡萄糖氧化酶20～1000u/kg飲水)，連續(xù)飲用5-7天，在治療的同時，對雞舍和周圍環(huán)境進(jìn)行徹底消毒進(jìn)行噴灑，每天一次，連用7天。2周后病雞逐漸恢復(fù)健康。
上述治療和預(yù)防畜禽出血性疾病的菊葉三七復(fù)方制劑的制備方法及其應(yīng)用的實施例僅是說明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個實施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍。