本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及一種免疫脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用，特別涉及一種伊立替康脂免疫嵌合西妥昔單抗的免疫脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

鹽酸伊立替康(1rinotecan，cpt-11)是半合成水溶性喜樹堿衍生物，是dna拓?fù)洚悩?gòu)酶i(topoi)的抑制劑。伊立替康與其活性代謝產(chǎn)物sn-38通過與dna-topo-1復(fù)合體的穩(wěn)定結(jié)合引起dna單鏈的斷裂，使dna產(chǎn)生不可逆的損傷而死亡。伊立替康是治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的有效藥物，對(duì)氟尿嘧啶耐藥病例仍有效，而且具有很廣的抗腫瘤譜。i期、ⅱ期臨床研究結(jié)果表明，該藥對(duì)化療抗拒性腫瘤，如非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌和宮頸癌有肯定療效；另外它對(duì)胃癌、惡性淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌、皮膚癌、胰腺癌也有一定療效。

cn104906586a中公開了一種鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物、制備方法及其在制備治療腫瘤或耐藥性腫瘤藥物中的用途。所述復(fù)合磷脂組合物包含鹽酸伊立替康、復(fù)合磷脂、膽固醇、長循環(huán)膜材、表面活性劑、緩沖介質(zhì)。該組合物針對(duì)抗耐藥性腫瘤，治療小細(xì)胞肺癌和胰腺癌，但其臨床適應(yīng)性有待提高。

西妥昔單抗屬于嵌合型igg1單克隆抗體，分子靶點(diǎn)為表皮生長因子受體(egfr)。可與表達(dá)于正常細(xì)胞和多種癌細(xì)胞表面的egf受體特異性結(jié)合，并競爭性阻斷egf和其他配體，如α轉(zhuǎn)化生長因子(tgf-α)的結(jié)合。本品是針對(duì)egf受體的igg1單克隆抗體，兩者特異性結(jié)合后，通過對(duì)與egf受體結(jié)合的酪氨酸激酶(tk)的抑制作用，阻斷細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而抑制癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡，減少基質(zhì)金屬蛋白酶和血管內(nèi)皮生長因子的產(chǎn)生。

臨床上通常使用西妥昔單抗與伊立替康(irinotecan)聯(lián)用于表皮生長因子(egf)受體過度表達(dá)的，以伊立替康為基礎(chǔ)的化療方案耐藥的轉(zhuǎn)移性直腸癌的治療。

因此開發(fā)一種同時(shí)包含西妥昔單抗與伊立替康的尤為重要，更大的方便臨床上的使用，增強(qiáng)藥物靶向的協(xié)同性非常有效。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種免疫脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用，所述免疫脂質(zhì)體可以發(fā)揮鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物和西妥昔單抗聯(lián)合治療轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌，具有協(xié)同作用。

為達(dá)到此發(fā)明的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

第一方面，本發(fā)明提供一種免疫脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟：

(1)用酶處理西妥昔單抗，得到fab片段；

(2)將fab片段與還原劑反應(yīng)，得到具有單價(jià)活性的fab片段；

(3)將鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物與修飾材料混合，得到具有活化基團(tuán)的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物；

(4)將步驟(3)得到的具有活化基團(tuán)的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物與步驟(2)得到的具有單價(jià)活性的fab片段混合后反應(yīng)，得到所述免疫脂質(zhì)體。

本發(fā)明中，鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物已在cn104906586a中公開，本發(fā)明采用該專利中的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)cn104906586a中公開的制備方法制備所述鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物。

本發(fā)明中，所述fab單價(jià)活性指的是fab片段是一個(gè)含有鉸鏈區(qū)、一條完整的輕鏈及重鏈的vh和ch1區(qū)，可特異性結(jié)合一分子的抗原，因此稱為單價(jià)抗體，而單價(jià)活性指的是獲得的fab單價(jià)抗體具有活性。

本發(fā)明中，將鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物與西妥昔單抗單純的聯(lián)用可以起到聯(lián)合治療的效果，但是也會(huì)產(chǎn)生許多不良反應(yīng)諸如增加手足綜合癥、過敏反應(yīng)等，而本申請(qǐng)將其作成免疫脂質(zhì)體后靶向效果更明顯，被動(dòng)靶向和主動(dòng)靶向效應(yīng)的疊加，可直接作用于靶器官，而不會(huì)在其他非靶器官過多停留。

根據(jù)本發(fā)明，步驟(1)所述的酶為木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶，優(yōu)選為木瓜蛋白酶。

根據(jù)本發(fā)明，所述酶與西妥昔單抗的質(zhì)量比為(1-80):1000，例如可以是1:1000、2:1000、3:1000、5:1000、6:1000、8:1000、10:1000、12:1000、15:1000、18:1000、20:1000、22:1000、25:1000、28:1000、30:1000、32:1000、35:1000、38:1000、40:1000、42:1000、45:1000或50:1000，優(yōu)選為(1-50):1000，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

根據(jù)本發(fā)明，所述酶處理西妥昔單抗的ph可根據(jù)酶的參考說明書進(jìn)行調(diào)整，不同公司的酶反應(yīng)ph會(huì)有差別，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)選擇酶的參考說明書進(jìn)行調(diào)整，本申請(qǐng)選用pierece公司的酶，其反應(yīng)的ph為5-7，例如可以是5、5.5、6、6.5或7，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)所述的還原劑為含有活性巰基的類似化合物，本申請(qǐng)選用2-巰基乙胺·鹽酸。

根據(jù)本發(fā)明，步驟(3)所述的修飾材料為活化磷脂，活化磷脂是鏈接fab片段的關(guān)鍵所在，因?yàn)榛罨字嫌芯哂谢钚缘膍al鍵，可以與fab上的sh鍵發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。

根據(jù)本發(fā)明，所述活化磷脂為dspe-peg-mail(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺)、dmpe-peg-mail(雙肉豆蔻磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯)、dppe-peg-mail(二棕櫚酸磷脂酰乙酸胺-聚乙二醇-活性酯)、pope-peg-mail(1-棕櫚?；?2-油酰基基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯)或dope-peg-mail(二油?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-活性酯)中的任意一種或至少兩種的組合，所述組合例如可以是dspe-peg-mail和dmpe-peg-mail，dspe-peg-mail和dppe-peg-mail，dmpe-peg-mail和dppe-peg-mail，pope-peg-mail和dope-peg-mail，dspe-peg-mail、dmpe-peg-mail和dppe-peg-mail，dmpe-peg-mail、dppe-peg-mail和pope-peg-mail，dppe-peg-mail、pope-peg-mail和dope-peg-mail。

根據(jù)本發(fā)明，所述活化磷脂中的聚乙二醇的分子量太大容易配巨噬細(xì)胞吞噬，分子量太小起不到修飾的作用，本申請(qǐng)聚乙二醇的分子量為1000-5000，例如可以是1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500或5000，優(yōu)選為2000-5000，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

根據(jù)本發(fā)明，步驟(4)所述反應(yīng)的溫度為20-30℃，例如可以是20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

優(yōu)選地，步驟(4)所述反應(yīng)的時(shí)間為0-5小時(shí)且不包括0點(diǎn)，例如可以是0.1小時(shí)、0.2小時(shí)、0.5小時(shí)、0.6小時(shí)、0.8小時(shí)、1小時(shí)、1.2小時(shí)、1.5小時(shí)、1.8小時(shí)、2小時(shí)、2.2小時(shí)、2.5小時(shí)、2.8小時(shí)、3小時(shí)、3.2小時(shí)、3.5小時(shí)、3.8小時(shí)、4小時(shí)、4.2小時(shí)、4.5小時(shí)、4.8小時(shí)或5小時(shí)，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述種免疫脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟：

(1)用木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶處理西妥昔單抗，其中，所述酶與西妥昔單抗的質(zhì)量比為(1-80):1000，反應(yīng)的ph為5-7，得到fab片段；

(2)將fab片段與2-巰基乙胺·鹽酸反應(yīng)，得到具有單價(jià)活性的fab片段；

(3)將鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物與活化磷脂類修飾材料混合，得到具有活化基團(tuán)的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物；

(4)將步驟(3)得到的具有活化基團(tuán)的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物與步驟(2)得到的具有單價(jià)活性的fab片段混合后在20-30℃反應(yīng)0.1-5小時(shí)，得到所述免疫脂質(zhì)體。

本發(fā)明中，所述fab單價(jià)活性指的是fab片段是一個(gè)含有鉸鏈區(qū)、一條完整的輕鏈及重鏈的vh和ch1區(qū)，可特異性結(jié)合一分子的抗原，因此稱為單價(jià)抗體，而單價(jià)活性指的是獲得的fab單價(jià)抗體具有活性。

第二方面，本發(fā)明提供一種如第一方面所述的制備方法制備得到的伊立替康脂免疫嵌合西妥昔單抗的免疫脂質(zhì)體。

第三方面，本發(fā)明提供一種免疫脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟：

(1’)用酶處理西妥昔單抗，得到fab片段；

(2’)將fab片段與還原劑反應(yīng)，得到具有單價(jià)活性的fab片段；

(3’)將步驟(2’)得到的具有單價(jià)活性的fab片段與修飾材料反應(yīng)，得到修飾后的fab片段；

(4’)將步驟(3’)得到的修飾后的fab片段與鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物混合后反應(yīng)，得到所述免疫脂質(zhì)體。

本發(fā)明中，鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物已在cn104906586a中公開，本發(fā)明采用該專利中的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)cn104906586a中公開的制備方法制備所述鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物。

根據(jù)本發(fā)明，步驟(1’)所述的酶為木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶，優(yōu)選為木瓜蛋白酶。

根據(jù)本發(fā)明，所述酶與西妥昔單抗的質(zhì)量比為(1-80):1000，例如可以是1:1000、2:1000、3:1000、5:1000、6:1000、8:1000、10:1000、12:1000、15:1000、18:1000、20:1000、22:1000、25:1000、28:1000、30:1000、32:1000、35:1000、38:1000、40:1000、42:1000、45:1000或50:1000，優(yōu)選為(1-50):1000，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

根據(jù)本發(fā)明，所述酶處理西妥昔單抗的ph可根據(jù)酶的參考說明書進(jìn)行調(diào)整，不同公司的酶反應(yīng)ph會(huì)有差別，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)選擇酶的參考說明書進(jìn)行調(diào)整，本申請(qǐng)選用pierece公司的酶，其反應(yīng)的ph為5-7，例如可以是5、5.5、6、6.5或7，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

根據(jù)本發(fā)明，步驟(2’)所述的還原劑為含有活性巰基的類似化合物，本申請(qǐng)選用2-巰基乙胺·鹽酸。

根據(jù)本發(fā)明，步驟(3’)所述的修飾材料為活化磷脂，活化磷脂是鏈接fab片段的關(guān)鍵所在，因?yàn)榛罨字嫌芯哂谢钚缘膍al鍵，可以與fab上的sh鍵發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。

根據(jù)本發(fā)明，所述活化磷脂為dspe-peg-mail(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺)、dmpe-peg-mail(雙肉豆蔻磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯)、dppe-peg-mail(二棕櫚酸磷脂酰乙酸胺-聚乙二醇-活性酯)、pope-peg-mail(1-棕櫚?；?2-油酰基基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯)或dope-peg-mail(二油?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-活性酯)中的任意一種或至少兩種的組合，所述組合例如可以是dspe-peg-mail和dmpe-peg-mail，dspe-peg-mail和dppe-peg-mail，dmpe-peg-mail和dppe-peg-mail，pope-peg-mail和dope-peg-mail，dspe-peg-mail、dmpe-peg-mail和dppe-peg-mail，dmpe-peg-mail、dppe-peg-mail和pope-peg-mail，dppe-peg-mail、pope-peg-mail和dope-peg-mail。

根據(jù)本發(fā)明，所述活化磷脂中的聚乙二醇的分子量為1000-5000，例如可以是1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500或5000，優(yōu)選為2000-5000，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

優(yōu)選地，步驟(3’)所述反應(yīng)的ph為4-8，例如可以是4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5或8，優(yōu)選為5-6，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

根據(jù)本發(fā)明，步驟(4’)所述反應(yīng)的溫度為20-30℃，例如可以是20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

優(yōu)選地，步驟(4’)所述反應(yīng)的時(shí)間為0-5小時(shí)且不包括0點(diǎn)，例如可以是0.1小時(shí)、0.2小時(shí)、0.5小時(shí)、0.6小時(shí)、0.8小時(shí)、1小時(shí)、1.2小時(shí)、1.5小時(shí)、1.8小時(shí)、2小時(shí)、2.2小時(shí)、2.5小時(shí)、2.8小時(shí)、3小時(shí)、3.2小時(shí)、3.5小時(shí)、3.8小時(shí)、4小時(shí)、4.2小時(shí)、4.5小時(shí)、4.8小時(shí)或5小時(shí)，以及上述數(shù)值之間的具體點(diǎn)值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點(diǎn)值。

作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述免疫脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟：

(1’)用木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶處理西妥昔單抗，其中，所述酶與西妥昔單抗的質(zhì)量比為(1-80):1000，反應(yīng)的ph為5-7，得到fab片段；

(2’)將fab片段與2-巰基乙胺·鹽酸反應(yīng)反應(yīng)，得到具有單價(jià)活性的fab片段；

(3’)將步驟(2’)得到的具有單價(jià)活性的fab片段與活化磷脂類修飾材料反應(yīng)，反應(yīng)ph4-8，得到修飾后的fab片段；

(4’)將步驟(3’)得到的修飾后的fab片段與鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物混合后在20-30℃反應(yīng)0.1-5小時(shí)，得到所述免疫脂質(zhì)體。

本發(fā)明中，第一方面所述的制備方法相比于第二方面所述的制備方法，第一方面所述的制備方法是先將活性磷脂在磷脂相變溫度60度左右插入到脂質(zhì)體的球狀結(jié)構(gòu)中，然后室溫下與fab片段進(jìn)行連接，其免疫脂質(zhì)體的收率更高。

第四方面，本發(fā)明提供一種如第一方面所述的制備方法制備得到的伊立替康脂免疫嵌合西妥昔單抗的免疫脂質(zhì)體。

第五方面，本發(fā)明提供一種如第二方面或第四方面所述的免疫脂質(zhì)體用于制備治療癌癥的藥物。

根據(jù)本發(fā)明，所述癌癥為結(jié)直腸癌，優(yōu)選為轉(zhuǎn)移性直腸癌。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

(1)本發(fā)明免疫脂質(zhì)體中的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物和西妥昔單抗聯(lián)合作用，具有協(xié)同效果，可針對(duì)轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌具有治療效果，具有臨床適應(yīng)性，大大增強(qiáng)了所述免疫脂質(zhì)體在臨床上的應(yīng)用，便于后期大范圍推廣使用；

(2)本發(fā)明免疫脂質(zhì)體的制備工藝簡單，制備方法成熟，質(zhì)量可控，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說明

圖1為免疫脂質(zhì)體與普通制劑對(duì)對(duì)人結(jié)腸癌sw-620裸小鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)治療。

具體實(shí)施方式

為更進(jìn)一步闡述本發(fā)明所采取的技術(shù)手段及其效果，以下結(jié)合本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明并非局限在實(shí)施例范圍內(nèi)。

實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件，或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可通過正規(guī)渠道商購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

試劑：

hspc：lipoid；

dspc：lipoid；

peg2000-dspe：lipoid；

dspe-peg2000-mail：lipoid；

膽固醇：dikman；

sephadexg-50：美國ge公司；

鹽酸伊立替康：海南錦瑞；

木瓜蛋白酶：pierece公司。

實(shí)施例1：鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物的制備

將hspc1.2g、dspc0.012g、膽固醇0.3g、peg2000-dspe0.4g、dspe-peg2000-mail0.4g以1.5ml無水乙醇超聲溶解，將其注入到預(yù)熱至65℃的30ml250mm硫酸銨水溶液，采用轉(zhuǎn)速20000rpm攪拌得初品，再于20000psi下高壓均質(zhì)3次，使用10％的蔗糖經(jīng)切向流超濾系統(tǒng)(膜分子量30kda，流速為200ml/min，壓力為1bar)置換10倍體積除去外水相硫酸銨，即得到空白脂質(zhì)體懸液；

將所得空白脂質(zhì)體懸液與鹽酸伊立替康水溶液(濃度為10mg/ml)按藥物與hspc重量比1:10混合，65℃孵育15min，再加入0.012gf68、0.065g組氨酸，調(diào)節(jié)ph＝6.0，即得含有活化基團(tuán)的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物。

實(shí)施例2：免疫脂質(zhì)體的制備

(1)用木瓜蛋白酶處理西妥昔單抗，其中，所述酶與西妥昔單抗的質(zhì)量比為30:1000，反應(yīng)的ph為6，得到fab片段；

(2)將fab片段與2-巰基乙胺·鹽酸反應(yīng)，得到具有單價(jià)活性的fab片段；

(3)將鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物與dspe-peg2000-mail材料混合，得到具有活化基團(tuán)的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物；

(4)將步驟(3)得到的具有活化基團(tuán)的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物與步驟(2)得到的具有單價(jià)活性的fab片段混合后反應(yīng)，得到所述免疫脂質(zhì)體。

實(shí)施例3：免疫脂質(zhì)體的制備

(1)用木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶處理西妥昔單抗，其中，所述酶與西妥昔單抗的質(zhì)量比為50:1000，反應(yīng)的ph為7，得到fab片段；

(2)將fab片段與2-巰基乙胺·鹽酸反應(yīng)，得到具有單價(jià)活性的fab片段；

(3)將鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物與dmpe-peg5000-mail材料混合，得到具有活化基團(tuán)的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物；

(4)將步驟(3)得到的具有活化基團(tuán)的鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物與步驟(2)得到的具有單價(jià)活性的fab片段混合后反應(yīng)，得到所述免疫脂質(zhì)體。

實(shí)施例4：免疫脂質(zhì)體的制備

(1’)用木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶處理西妥昔單抗，其中，所述酶與西妥昔單抗的質(zhì)量比為30:1000，反應(yīng)的ph為6，得到fab片段；

(2’)將fab片段與2-巰基乙胺·鹽酸反應(yīng)反應(yīng)，得到具有單價(jià)活性的fab片段；

(3’)將步驟(2’)得到的具有單價(jià)活性的fab片段與dspe-peg2000-mail材料反應(yīng)，反應(yīng)ph5-6，得到修飾后的fab片段；

(4’)將步驟(3’)得到的修飾后的fab片段與鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物混合，得到所述免疫脂質(zhì)體。

實(shí)施例5：免疫脂質(zhì)體的制備

(1’)用木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶處理西妥昔單抗，其中，所述酶與西妥昔單抗的質(zhì)量比為1:1000，反應(yīng)的ph為5，得到fab片段；

(2’)將fab片段與2-巰基乙胺·鹽酸反應(yīng)反應(yīng)，得到具有單價(jià)活性的fab片段；

(3’)將步驟(2’)得到的具有單價(jià)活性的fab片段與dppe-peg1000-mail材料反應(yīng)，反應(yīng)ph8，得到修飾后的fab片段；

(4’)將步驟(3’)得到的修飾后的fab片段與鹽酸伊立替康復(fù)合磷脂組合物混合，得到所述免疫脂質(zhì)體。

實(shí)施例6：免疫脂質(zhì)體的應(yīng)用

選用人結(jié)腸癌sw-620裸小鼠皮下移植瘤模型，評(píng)價(jià)伊立替康免疫脂質(zhì)體偶合物對(duì)其生長抑制作用：具體步驟如下：所述免疫脂質(zhì)體、安慰劑和普通制劑cpt-11每周靜脈注射給藥三次，每次20mg/kg，連續(xù)給藥3周，實(shí)驗(yàn)過程中，各組小鼠生長狀況良好，無小鼠死亡，其結(jié)果如表1和圖1所示。

表1免疫脂質(zhì)體與普通制劑對(duì)對(duì)人結(jié)腸癌sw-620裸小鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)治療作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：隨著所述免疫脂質(zhì)體、安慰劑和普通制劑cpt-11的注入，安慰劑組的小鼠腫瘤體積明顯增大，普通制劑cpt-11對(duì)腫瘤體積有抑制作用，且還有腫瘤體積變小，而本申請(qǐng)免疫脂質(zhì)體使得腫瘤體積減小的同時(shí)，使用的藥劑量也最小，可見，本申請(qǐng)免疫脂質(zhì)體對(duì)人結(jié)腸癌sw-620裸小鼠皮下移植瘤的生長具有顯著的抑制作用，且其對(duì)腫瘤的抑制作用優(yōu)于同劑量市售制劑cpt-11。

申請(qǐng)人聲明，本發(fā)明通過上述實(shí)施例來說明本發(fā)明的詳細(xì)方法，但本發(fā)明并不局限于上述詳細(xì)方法，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細(xì)方法才能實(shí)施。所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對(duì)本發(fā)明的任何改進(jìn)，對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開范圍之內(nèi)。