本發(fā)明涉及一種gpc3受體靶向的診斷與治療藥物，特別是涉及一種gpc3受體靶向的多肽放射性診斷與治療藥物。

背景技術(shù)：

肝癌是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，常規(guī)影像診斷技術(shù)主要為b超、ct和mri，雖然這些影像診斷技術(shù)通過顯示肝細(xì)胞癌的形態(tài)改變及血流供應(yīng)情況對(duì)肝細(xì)胞癌的診斷有較好的應(yīng)用價(jià)值，但在鑒別診斷、全身分期和早期療效評(píng)價(jià)上仍存在一定的不足。目前，國(guó)際上對(duì)晚期肝細(xì)胞癌無標(biāo)準(zhǔn)化療方案，傳統(tǒng)的聯(lián)合化療對(duì)延長(zhǎng)晚期肝細(xì)胞癌患者的生存期無肯定的作用，其療效多低于20％且毒副作用大。

正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層/計(jì)算機(jī)斷層掃描(positronemissiontomography/computerizedtomography，pet/ct)是近20年來發(fā)展起來并在臨床上推廣的一種新型的核醫(yī)學(xué)顯像技術(shù)，主要是利用短半衰期正電子放射性核素的示蹤作用進(jìn)行顯像。將放射性核素標(biāo)記的葡萄糖、氨基酸、核素、配體、靶向多肽等注射入靜脈內(nèi)，體內(nèi)代謝穩(wěn)定后進(jìn)行掃描顯像，顯示活體內(nèi)物質(zhì)代謝、細(xì)胞增殖、受體分布等信息，用于疾病的診斷和人體生命活動(dòng)的研究。臨床上最常用的pet/ct顯像劑是葡萄糖的類似物：2-氟-18氟-2-脫氧-d-葡萄糖(2-fluorine-18-fluoro-2–deoxy-d-glucose，¹⁸f-fdg)。¹⁸f-fdg是葡萄糖類似物，具有和葡萄糖相同的細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)及己糖激酶磷酸化過程。絕大多數(shù)惡性腫瘤代謝率較高，能量消耗大，所以大多數(shù)腫瘤消耗葡萄糖較多，因此¹⁸f-fdg可以顯示腫瘤內(nèi)葡萄糖代謝狀態(tài)，以及腫瘤的部位、大小、數(shù)量及全身分布情況，用于腫瘤的良惡性鑒別診斷、分期、療效評(píng)價(jià)、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)以及預(yù)后監(jiān)測(cè)。¹⁸f-fdgpet/ct顯像對(duì)于原發(fā)性肝細(xì)胞癌的總敏感度只有50％～70％。¹⁸f-fdgpet/ct顯像對(duì)于高分化肝細(xì)胞癌敏感性低，但是對(duì)于中分化及低分化肝細(xì)胞癌、腫瘤直徑＞5cm或者甲胎蛋白顯著升高者¹⁸f-fdgpet/ct顯像是一種較好的非侵入性檢查手段(參見koroglu,r.,etal.,a(18)f-fdgpet/ctscreeningstudyofahepatocellularcarcinomapatientwithdiffuse(18)f-fdguptakeintotheportalveinanditsintrahepaticbranches.worldjnuclmed,2016.15(1):p.68-70.或pandey,a.k.,etal.,digitalcontrastenhancementof(18)fluorine-fluorodeoxyglucosepositronemissiontomographyimagesinhepatocellularcarcinoma.indianjnuclmed,2016.31(1):p.20-6.)

為了提高¹⁸f-fdgpet/ct顯像對(duì)原發(fā)性肝細(xì)胞癌診斷的敏感性，ho等[ho,c.l.,s.c.yu,andd.w.yeung,11c-acetatepetimaginginhepatocellularcarcinomaandotherlivermasses.jnuclmed,2003.44(2):p.213-21.]首次將¹¹c-乙酸鹽應(yīng)用于臨床，聯(lián)合應(yīng)用¹¹c-乙酸鹽和¹⁸f-fdg對(duì)39例肝細(xì)胞癌患者進(jìn)行了pet顯像，結(jié)果顯示二者聯(lián)合診斷敏感度達(dá)到了100％，而單用¹¹c-乙酸鹽和¹⁸f-fdg的敏感度分別為87.3％和47.3％。高分化肝細(xì)胞癌在¹¹c-乙酸鹽pet顯像時(shí)代謝明顯增高，與¹⁸f-fdgpet/ct顯像形成互補(bǔ)。有學(xué)者對(duì)¹¹c-膽堿(¹¹c-choline)、¹⁸f-膽堿顯像也進(jìn)行了研究，雖然研究顯示¹¹c-乙酸鹽、¹¹c-膽堿、¹⁸f-膽堿顯像在提高pet/ct肝細(xì)胞癌的診斷靈敏度方面有較好的補(bǔ)充價(jià)值，但由于結(jié)節(jié)樣增生等良性病變也易出現(xiàn)¹¹c-乙酸鹽、¹¹c-膽堿陽性而使¹⁸f-fdg、¹¹c-乙酸鹽和¹⁸f-fdg、¹¹c-膽堿雙顯像方法仍難達(dá)到很高的診斷準(zhǔn)確性。靶向與肝細(xì)胞癌增長(zhǎng)有關(guān)的新生血管、尤其是特異性靶向肝細(xì)胞癌細(xì)胞本身的靶向顯像可能在肝細(xì)胞癌的診斷、分期及療效評(píng)價(jià)上更有優(yōu)勢(shì)，但遺憾的是目前尚無一種pet分子探針能實(shí)現(xiàn)肝細(xì)胞癌高靈敏度、高特異性診斷。合成并制備高親和力的分子探針，利用高特異性的靶向結(jié)合作用，能夠敏感快速的探測(cè)到靶向病灶，并可以從分子層面分析病灶。因此分子影像學(xué)將有望成為實(shí)現(xiàn)肝細(xì)胞癌早期診斷提供重要依據(jù)。

研究發(fā)現(xiàn)(參見bhave,v.s.,etal.,regulationoflivergrowthbyglypican3,cd81,hedgehog,andhhex.amjpathol,2013.183(1):p.153-9.和capurro,m.i.,etal.,glypican-3inhibitshedgehogsignalingduringdevelopmentbycompetingwithpatchedforhedgehogbinding.devcell,2008.14(5):p.700-11.)，作為硫酸類肝素蛋白聚糖家族一員的磷酸酯酰肌醇蛋白聚糖-3(glypcian-3，gpc3)，特異性高表達(dá)于80％以上的人肝細(xì)胞癌細(xì)胞膜上，而在成人的正常組織中不表達(dá)。大量的研究證實(shí)gpc3可以成為肝細(xì)胞癌的治療靶點(diǎn)，目前關(guān)于gpc3受體的抗體及小分子多肽已成功合成，并已進(jìn)入臨床前期實(shí)驗(yàn)研究階段。目前早期肝細(xì)胞有較多的治療手段，如手術(shù)、射頻消融、化療及生物免疫治療，而晚期肝癌尚無有效的治療方法。靶向特定靶點(diǎn)的靶向治療是未來治療晚期肝細(xì)胞癌的重要發(fā)展方向。靶向gpc3受體的靶向治療有望改變目前晚期肝細(xì)胞癌治療十分被動(dòng)的局面。

作為核醫(yī)學(xué)領(lǐng)域比較先進(jìn)的臨床檢查影像技術(shù)——pet是目前惟一可在活體上顯示生物分子代謝、受體及神經(jīng)介質(zhì)活動(dòng)的新型影像技術(shù)，現(xiàn)已廣泛用于多種疾病的診斷與鑒別診斷、病情判斷、療效評(píng)價(jià)、臟器功能研究和新藥開發(fā)等方面。利用pet/ct顯像技術(shù)無創(chuàng)性地在活體上顯示gpc3受體表達(dá)情況，對(duì)該項(xiàng)靶向治療具有重要的指導(dǎo)意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種gpc3受體靶向的多肽放射性診斷或治療藥物。

本發(fā)明所述的gpc3受體靶向的多肽放射性診斷或治療藥物包括：氨基酸序列如seqidno:1所示的多肽；所述多肽偶聯(lián)放射性核素或者正電子核素標(biāo)記。

根據(jù)本發(fā)明所述的藥物的進(jìn)一步特征，所述多肽是修飾后的多肽，采用以下之一進(jìn)行修飾：化合物、氨基酸和寡肽或它們的組合。

優(yōu)選地，所述化合物的分子量小于5000，選自：疊氮戊酸、丙炔酸、聚乙二醇(peg)、peg4、1,4,7-三氮雜環(huán)壬烷-1,4,7-三乙酸(nota)、7-[(4-羥基丙基)亞甲基]-1,4,7-三氮雜化壬烷-1,4-二乙酸、1,4,7,10-四氮雜環(huán)四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四乙酸(dota)、巰基乙酰三甘氨酸(mag3)、mag2、n3s、n2s2類配體、二乙基三胺五乙酸(dtpa)、1,4-丁二酸、5-氨基戊酸、聚乙烯亞胺(pei)、6-肼基吡啶-3-甲酸(hynic)、溴甲酸苯甲基、n-(2-氨基乙酸)馬來酰亞胺以及它們的組合修飾。其中，對(duì)于疊氮戊酸、丙炔酸、1,4-丁二酸、5-氨基戊酸、溴甲酸苯甲基，其碳鏈長(zhǎng)度不限于此，可以延長(zhǎng)或縮短。

優(yōu)選地，所述寡肽為分子量不大于15個(gè)氨基酸的小分子肽，或者寡肽自身偶聯(lián)形成的二聚體或多聚體。

根據(jù)本發(fā)明所述的藥物的進(jìn)一步特征，所述多肽由第一雙功能偶聯(lián)劑修飾后，再與第一放射性金屬核素(*m)形成絡(luò)合物；其中，所述第一雙功能偶聯(lián)劑是選自：dota，nota或dtpa；所述第一放射性金屬核素(*m)是選自：⁶⁴cu，⁶⁷ga，⁶⁸ga，⁹⁰y，¹¹¹in或¹⁷⁷lu。

nota：1,4,7-三氮雜環(huán)壬烷-1,4,7-三乙酸(1,4,7-triazacylononane-1,4,7-triaceticacid)。

dota：1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二環(huán)-n’,n”,n”’-四乙酸(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-n’,n”,n”’-tetraacetic,)。

dtpa：二乙撐三胺五乙酸(diethylenetriaminepentoaceticacid)。

根據(jù)本發(fā)明所述的藥物的進(jìn)一步特征，所述多肽由第二雙功能偶聯(lián)劑修飾后，再與第二放射性金屬核素(*n)形成絡(luò)合物；其中，所述第二雙功能偶聯(lián)劑是選自：mag3、hynic、nxs4-x類配體或者三羰基化合物；所述第二放射性金屬核素(*n)是選自：^99mtc、¹⁸⁶re或¹⁸⁸re。

mag3：巰基乙酰三甘氨酸(mercaptocetyltriglycine)。

hynic：聯(lián)肼尼可酰胺(hydrazinonicotinamide)。

nxs4-x：硫氮化合物(sulfurnitride)。

根據(jù)本發(fā)明所述的藥物的進(jìn)一步特征，所述多肽通過第三放射性金屬核素(*h)間接標(biāo)記，形成*h-y-修飾物-多肽，所述第三放射性金屬核素是選自：¹²³i、¹²⁴i、¹³¹i、⁷⁶br或者²¹¹at；所述*h-y-modifier-是選自：

其中，第三放射性金屬核素*h在苯環(huán)上的位置包括：羰基的對(duì)位或者苯環(huán)上任何位置。

根據(jù)本發(fā)明所述的藥物的進(jìn)一步特征，所述多肽通過第三放射性金屬核素(*h)直接標(biāo)記，形成*h-多肽-修飾物，所述第三放射性金屬核素是選自：¹²³i、¹²⁴i、¹³¹i、⁷⁶br或者²¹¹at。

根據(jù)本發(fā)明所述的藥物的進(jìn)一步特征，所述多肽經(jīng)¹⁸f標(biāo)記，形成¹⁸f-x-修飾物-多肽，其中¹⁸f-x-修飾物是選自：

，其中，n為1、2、3或4；z為-cn，-no2或-cf3基團(tuán)。

本發(fā)明還提供了一種gpc3受體靶向的多肽用于制備診斷或治療gpc3受體表達(dá)陽性的腫瘤的藥物中的用途，所述多肽的氨基酸序列如seqidno:1所示，所述多肽偶聯(lián)放射性核素或者正電子核素標(biāo)記。

本發(fā)明采用放射性核素標(biāo)記多肽作為肝細(xì)胞癌特異性靶向分子探針，在活體水平顯示肝細(xì)胞癌腫瘤組織內(nèi)gpc3受體表達(dá)情況，提高肝細(xì)胞癌腫瘤治療的有效率。對(duì)于肺癌、黑色素瘤等其他gpc3受體表達(dá)陽性的腫瘤，本發(fā)明所述的gpc3受體靶向的多肽也可用于制備診斷或治療肺癌、黑色素瘤的藥物。

附圖說明

圖1是¹⁸f標(biāo)記的多肽(rlnvggtyflttrq)在肝細(xì)胞癌hepg2腫瘤模型的顯像圖片。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明涉及一種gpc3受體新型靶向的多肽放射性診斷與治療藥物，所述多肽含rlnvggtyflttrq(seqidno.1)序列，其具有分子靶向gpc3受體的功能，可用于gpc3受體陽性的肝細(xì)胞癌的診斷和治療。所述多肽放射性診斷于治療藥物的制備方法如下：

1.多肽(rlnvggtyflttrq)的合成

采用固相9-芴甲氧羰基(fmoc)肽化學(xué)合成方法合成多肽。以氯三苯基氯樹脂為載體，采用fmoc氨基保護(hù)策略，固相合成多肽，氨基酸序列為：rlnvggtyflttrq。第一個(gè)氨基酸與樹脂的連接采用對(duì)稱酸酐法，反應(yīng)結(jié)束后用適量的吡啶和乙酸酐封閉樹脂上剩余的活性位點(diǎn)。后續(xù)氨基酸以hobt/hbtu/diea為縮合劑依次連接。反應(yīng)結(jié)束后，以三氟乙酸為主切割劑將目的肽段從樹脂上裂解下來，合成產(chǎn)物經(jīng)高效液相色譜分離、純化、分析，質(zhì)譜分析鑒定。

2.多肽鏈的nota修飾

將nota，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和n-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽(sulfo-nhs)按10:5:4的比例加入到ph5.5的5ml酸性水溶液中，室溫反應(yīng)30min后形成nota-osu，然后冷卻至4℃，加入步驟1合成的多肽，用naoh調(diào)節(jié)ph至8.5，反應(yīng)過夜，然后進(jìn)行hplc純化得到產(chǎn)物，其他的有機(jī)酸，如dota，dtpa，疊氮戊酸，丙炔修飾的多肽以此為例。

3.chelator-peptide的制備(chelator為mag3，hynic，dota，nota，dtpa)

將多肽與chelator溶于1mldmf中，加入20ul的dipea，室溫?cái)嚢柽^夜，經(jīng)behc18柱半制備柱分離純化，經(jīng)液質(zhì)聯(lián)用確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物chelator-peptide。

4.多肽的⁶⁴cu標(biāo)記

取5mci的⁶⁴cucl2加入到0.1mol/l醋酸鈉水溶液中，調(diào)整ph值后加入dota偶聯(lián)的peptide，50℃孵育1h，經(jīng)xbridgebeh130prepc18柱分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)整ph值為6-8，過無菌濾膜，即得到⁶⁴cu標(biāo)記的多肽，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

5.多肽的⁶⁸ga標(biāo)記

從發(fā)生器淋洗的⁶⁸ga溶液用醋酸鈉調(diào)節(jié)ph值至5.5，然后加入nota偶聯(lián)的多肽，100℃孵育10min，進(jìn)行hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)整ph值為6-8，過無菌濾膜，即得到⁶⁸ga標(biāo)記的多肽，可作為診斷藥物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下。多肽的⁶⁷ga操作于此相同。

6.多肽的¹¹¹in標(biāo)記

¹¹¹incl3溶液用醋酸銨調(diào)節(jié)ph值至5.3，然后加入dota偶聯(lián)的多肽，37℃孵育1h，hplc分離純化后去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)整ph值為6-8，過無菌濾膜，即得到¹¹¹in標(biāo)記的多肽，可作為診斷藥物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下。

7.多肽的⁹⁰y標(biāo)記

取⁹⁰y溶液，加入醋酸銨調(diào)節(jié)ph值至5.0，然后加入dota偶聯(lián)的多肽，80℃孵育1h，hplc分離純化后去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)整ph值為6-8，過無菌濾膜，即得到⁹⁰y標(biāo)記的多肽，可作為診斷藥物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下。

8.多肽的^99mtc標(biāo)記

取mag3修飾的多肽，溶于nh4oac緩沖液(ph＝5.2)，加入酒石酸鈉溶液(50g/l)，再加入新鮮^99mtco4^-洗脫液和新鮮配置的sncl2溶液。反應(yīng)30min后hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)整ph值為6-8，過無菌濾膜，即得到^99mtc標(biāo)記的多肽，所得產(chǎn)物可作為spect診斷藥物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下。

mag2，nxs4-x類配體的^99mtc標(biāo)記多肽的方法于此類似。

取hynic修飾的多肽，溶于生理鹽水中，加入三(羥甲基)甲基甘胺酸(tricine)緩沖液(10g/l)，再加入新鮮^99mtco4^-洗脫液和新鮮配置的sncl2溶液。反應(yīng)30min后hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)整ph值為6-8，過無菌濾膜，所得產(chǎn)物可作為spect診斷藥物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下。

稱取5mgbh3·nh3放在干燥潔凈的10ml西林瓶中，壓蓋密封。向裝有bh3·nh3的西林瓶中通20minco氣體。加入7ul濃度＞85％的h3po4加入1ml^99mtco4^-淋洗液中，混合均勻后注射到已通co氣體的西林瓶中。反應(yīng)在75℃水浴中進(jìn)行15min。反應(yīng)完成后，立即將反應(yīng)瓶放入冰水中冷卻。然后向其中加入100ul組氨酸修飾的多肽溶液(多肽的最終濃度為5-10mol/l)，75℃條件下反應(yīng)30min。經(jīng)hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)節(jié)ph值為6-8，過無菌濾膜。所得產(chǎn)物可作為spect診斷藥物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

9.多肽的¹⁸⁸re標(biāo)記

取mag3修飾的多肽，溶于1ml生理鹽水中，加入0.1ml酒石酸亞錫(2.5g/l)，再加入新淋洗的0.3ml¹⁸⁸re^—洗脫液，100℃反應(yīng)30min，自然冷卻至室溫，hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)節(jié)ph值為6-8，過無菌濾膜，即得到¹⁸⁸re標(biāo)記的多肽，其可作為spect診斷藥物。

10.多肽的¹⁸f標(biāo)記

采用¹⁸f-sfb標(biāo)記多肽，取100ug多肽，用dmso溶解，加入dipea20ul，5mci¹⁸f-sfb，37℃孵育30min，hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)節(jié)ph值為6-8，過無菌濾膜，即得¹⁸f標(biāo)記的多肽，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下，其作為pet診斷藥物。

采用¹⁸f-fbem標(biāo)記多肽

100ug多肽用dmso溶解，加入¹⁸f-fbem溶于pbs和三(2-羰基乙基)磷酸鹽，室溫孵育20min，hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)節(jié)ph值為6-8，過無菌濾膜，即得¹⁸f-fbem標(biāo)記多肽，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下，其可作為pet診斷藥物。

當(dāng)然半胱氨酸修飾的多肽18f標(biāo)記方法并不僅限于此，另外還包括n-[4-[(4-¹⁸f-fluorobenzylidene)aminooxyl]-butyl]maleimide(¹⁸f-fbabm),1-[3-(2-(¹⁸f-fluoropyridin-3-yloxy)propyl]pyrrole-2,5-dione(¹⁸f-fpyme)等。

¹⁸f-nfp

取多肽100μg用dmso溶解，加入50μl乙腈溶液，dipia20μl，80℃孵育30min，采用hplc分離純化，濃縮去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶劑溶解，調(diào)整ph為6-8，過無菌濾膜，作為pet診斷藥物。

通過nota偶聯(lián)的多肽螯合¹⁸f-氟化鋁標(biāo)記多肽

將nota偶聯(lián)的多肽50ug用40ul純水溶解于2ml離心管中，加入6ul、2mm的alcl3(1.6ug)，5ul冰醋酸，324ul乙腈，混勻、離心；加入30ul¹⁸f靶水(30.1mci)，混勻、100℃加熱10min；采用hplc分離純化，濃縮除去溶劑，用生理鹽水溶解，調(diào)整ph值為6-8，過無菌濾膜，得到標(biāo)記產(chǎn)物¹⁸f-nota-多肽(rlnvggtyflttrq)作為pet診斷藥物。

用1.5ml含1mgk2co3,5mgk222的乙腈溶液將qma陰離子交換柱富集的18f-氟離子淋洗下來，然后與1ml無水乙腈共沸蒸干三次，加入(2-氰基-4羧基-苯基)n，n，n三甲氨基三氟甲基磺酸鹽修飾的多肽2mg，50℃反應(yīng)15min，采用hplc分離，濃縮去除溶劑，用生理鹽水溶解，調(diào)節(jié)ph值為6-8，過無菌濾膜，所得化合物結(jié)構(gòu)式如下，其可作為pet診斷藥物。

其中z可為-cn，-no2，cf3等強(qiáng)吸電子基團(tuán)。

采用點(diǎn)擊化學(xué)法

氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將丙炔酸修飾的多肽溶于300ulph6.0磷酸鹽緩沖液，加入硫酸銅和抗壞血酸鈉，再加入500ul[¹⁸f]2-氟疊氮乙烷溶于乙腈，在50℃密閉診斷反應(yīng)15min。hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用生理演說溶解，調(diào)整ph值為6-8，過無菌濾膜，所得化合物結(jié)構(gòu)式如下，其可作為診斷和治療藥物。該方法不僅局限于此，還包括¹⁸f偶聯(lián)的其他烷基、芳基疊氮都與卻極修飾的多肽發(fā)生點(diǎn)擊反應(yīng)，完成¹⁸f的標(biāo)記。

氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將疊氮戊酸修飾的多肽溶于300ulph6.0磷酸緩沖液，加入硫酸銅和抗壞血酸鈉，再加入5mci溶于乙腈的[¹⁸f]3-氟代丙炔，在50℃密閉振蕩反應(yīng)15min。hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用生理鹽水溶解，調(diào)節(jié)ph值，過無菌濾膜，所得產(chǎn)物結(jié)構(gòu)式如下，其作為診斷和治療藥物。該方法不僅局限于此，還包括¹⁸f偶聯(lián)的其他烷基、芳香修飾的炔基與疊氮基團(tuán)修飾的多肽發(fā)生點(diǎn)擊反應(yīng)，完成¹⁸f的標(biāo)記。

用1.5ml含1mgk2co3,5mgk222的乙腈溶液將qma陰離子交換柱富集的¹⁸f-氟離子淋洗下來，然后與1ml無水乙腈共沸蒸干三次，加入對(duì)(二叔丁基)硅基苯甲酸修飾的多肽2mg，80℃反應(yīng)10min，采用hplc分離，濃縮取出溶劑，用生理鹽水溶解，調(diào)節(jié)ph值至6-8，過無菌濾膜，所得化合物結(jié)構(gòu)式如下，其作為pet診斷藥物。

11.多肽的¹³¹i標(biāo)記

多肽的直接標(biāo)記取10ug酪氨酸修飾的多肽溶于磷酸鹽緩沖液中，加入5mci¹³¹i-碘離子，然后加入催化劑n-溴代琥珀酰亞胺(或者是氯胺-t，iodogen涂在反應(yīng)管上)，室溫反應(yīng)10min，hplc分離純化，懸蒸除去溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)整ph值為6-8，過無菌濾膜，作為診斷和治療藥物。

其中¹³¹i可在苯環(huán)上的任何位置。¹²³i，¹²⁵i，¹²⁴i標(biāo)記多肽可通過此法。

采用sib標(biāo)記多肽：取100ug多肽，用dmso溶解，加入dipea20ul，5mci¹³¹i-sib，37℃孵育30min。hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)節(jié)ph值為6-8，過無菌濾膜，所得化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下，其作為診斷和治療藥物。

取100ug多肽，用dmso溶解，加入5mci¹³¹i-ibem和三(2-羰基乙酸)磷酸鹽，室溫孵育20min。hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)節(jié)ph值為6-8，過無菌濾膜，所得化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下，其作為診斷和治療藥物。¹²³i，¹²⁵i，¹²⁴i標(biāo)記多肽可通過此法。

12.多肽的²¹¹at標(biāo)記

取2mcin-琥珀酰亞胺對(duì)[²¹¹at]砹苯甲酸酯，加入到dmso溶解的多肽中，加入dipea20ul，室溫孵育30min，hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)節(jié)ph值為6-8，過無菌濾膜，所得化合物可作為診斷和治療藥物。²¹¹at可在苯環(huán)上的任意位置。

100ug多肽用dmso溶解，加入5mci的溶于pbs的n-[2-(²¹¹at-對(duì)砹苯甲酰基)乙基]馬來酰亞胺和三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽，室溫孵育20min，hplc分離純化，懸蒸去除溶劑，用0.9％nacl注射液溶解，調(diào)節(jié)ph值為6-8，過無菌濾膜，所得化合物可作為診斷或治療藥物。²¹¹at可在苯環(huán)上的任意位置。

放射性核素標(biāo)記的含有氨基酸序列為rlnvggtyflttrq的多肽放射性藥物具有分子靶向gpc3受體的功能，可用于靶向gpc3受體的診斷和治療。為進(jìn)一步闡述上述應(yīng)用，本發(fā)明采用氨基?；磻?yīng)標(biāo)記多肽(rlnvggtyflttrq)，在肝細(xì)胞癌hepg2裸鼠腫瘤模型進(jìn)行顯像，具體實(shí)驗(yàn)為：選取裸鼠，體重約20g，每只小鼠左前肢腋下注射肝細(xì)胞癌hepg2細(xì)胞(2×10⁶細(xì)胞/裸鼠)，當(dāng)腫瘤長(zhǎng)到直徑約1cm時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每只裸鼠尾靜脈注射100ul，200uci放化純度大于95％的¹⁸f-nota–多肽(rlnvggtyflttrq)，在體內(nèi)代謝1小時(shí)后，在siemensinveonmicropet/ct顯像。其顯像結(jié)果如圖1所示，左圖顯示腫瘤特異性攝取¹⁸f-nota–多肽(rlnvggtyflttrq)(見箭頭所指區(qū)域)，其他濃聚區(qū)域?yàn)楦闻K、膽囊、腸道、膀胱。右圖為阻斷實(shí)驗(yàn)，受體被阻斷后顯像為陰性。

分析圖1可知nota修飾多肽(rlnvggtyflttrq)與¹⁸f-alf發(fā)生螯合反應(yīng)后，經(jīng)過hplc分離純化后得到¹⁸f-nota-多肽(rlnvggtyflttrq)，其放化純度達(dá)到95％以上，經(jīng)尾靜脈注射入肝細(xì)胞癌hepg2裸鼠模型60min后在siemensinveonmicropet/ct顯像，左圖(i)受體阻斷前micropet/ct顯示為陽性；右圖(ii)受體阻斷后顯像結(jié)果為陰性。

以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，其構(gòu)架形式能夠靈活多變，可以派生系列產(chǎn)品。只是作出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明由所提交的權(quán)利要求書確定的專利保護(hù)范圍。

sequencelisting

<110>南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院

<120>一種gpc3受體靶向的多肽放射性診斷或治療藥物

<130>

<160>1

<170>patentinversion3.4

<210>1

<211>14

<212>prt

<213>人工合成

<400>1

argleuasnvalglyglythrtyrpheleuthrthrarggln

1510