本申請(qǐng)是2012年6月11日提交的同名發(fā)明專利申請(qǐng)201280036695.8的分案申請(qǐng)。

本申請(qǐng)要求2011年6月10日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/495,495號(hào)的優(yōu)先權(quán)，其全文通過(guò)引用并入本文。

本文所引用的所有專利、專利申請(qǐng)和出版物通過(guò)引用全文并入本文。這些出版物的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用全文并入本申請(qǐng)以便更全面地描述自本文所描述并且要求的發(fā)明之日起如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的本領(lǐng)域的狀態(tài)。

本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容包含受到版權(quán)保護(hù)的材料。版權(quán)所有人不反對(duì)任何人在專利文件或?qū)＠_(kāi)出現(xiàn)在美國(guó)專利商標(biāo)局的專利文件或記錄中時(shí)傳真復(fù)制該專利文件或?qū)＠_(kāi)，然而除此之外保留任何和所有版權(quán)權(quán)利。

政府資助

本發(fā)明是在由國(guó)家神經(jīng)疾病和腦中風(fēng)研究所(nationalinstituteofneurologicaldisordersandstroke(ninds))授予的r01-ns049442以及國(guó)家衰老研究所(nia)授予的ag034248政府資助下進(jìn)行的。政府享有本發(fā)明中的某些權(quán)利。

發(fā)明背景

認(rèn)知神經(jīng)退行性病癥表征為突觸功能障礙、認(rèn)知異常和/或在整個(gè)cns中含有不同百分比并且與特定疾病有關(guān)的例如但不限于天然β-淀粉樣蛋白片段、天然和磷酸化的tau、天然和磷酸化的α-突觸核蛋白、脂褐質(zhì)、裂解的tardbp(tdb-43)的包涵體。阿爾茨海默病(ad)是最流行的神經(jīng)退行性病癥之一，其由記憶喪失所表征，并且已經(jīng)為發(fā)現(xiàn)這一破壞性疾病的治療而進(jìn)行了大量研究。

非神經(jīng)退行性的認(rèn)知病癥例如正常的記憶力喪失以及正常個(gè)體的神經(jīng)認(rèn)知增強(qiáng)已經(jīng)開(kāi)始在醫(yī)學(xué)界引起越來(lái)越多的興趣(farah,等人，nat.rev.neuroscience2004,5,421-425)。學(xué)習(xí)和記憶的增強(qiáng)已經(jīng)被報(bào)道與苯異丙胺及其衍生物以及其他中樞作用藥物。某些營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑已經(jīng)被報(bào)道提高精神功能，例如認(rèn)知和記憶(lanni,c,等人，pharmacol.res.2004,57,196-213)。然而，它們中的大部分因它們的作用機(jī)制而具有有限的效用和/或不好的副作用。

組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(hat)參與組蛋白乙?；?導(dǎo)致基因激活)、染色體解凝集、dna修復(fù)和非組蛋白底物修飾。

發(fā)明概述

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及在受試者中增強(qiáng)記憶和學(xué)習(xí)的方法和組合物。

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及在受試者中增加組蛋白乙?；姆椒ā?/p>

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及在受試者中提高記憶保持的方法。

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及在受試者中治療記憶喪失或無(wú)學(xué)習(xí)能力的方法。

在一些實(shí)施方案中，對(duì)治療、抑制和/或預(yù)防受試者中與記憶喪失或無(wú)學(xué)習(xí)能力有關(guān)的病痛有用的方法和組合物。

在一些實(shí)施方案中，所述方法包括向受試者施用治療上有效的量的化合物(i)，

或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者包含化合物i或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體的組合物。

在一些實(shí)施方案中，所述方法和組合物對(duì)在受試者中增強(qiáng)記憶和/或?qū)W習(xí)有用。在一些實(shí)施方案中，所述方法和組合物對(duì)在受試者中治療、抑制和/或預(yù)防與記憶喪失或無(wú)學(xué)習(xí)能力有關(guān)的病痛來(lái)說(shuō)有用。

在一些實(shí)施方案中，所述受試者并未因神經(jīng)退行性疾病而受苦。在一些實(shí)施方案中，神經(jīng)退行性疾病包括腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥(ald)、酒精中毒、亞歷山大病、阿耳珀病、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(路格里克氏病)、共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張、巴藤病(也稱為斯皮爾梅伊爾-沃格特-休格連-巴藤病)、牛海綿樣腦病(bse)、卡納萬(wàn)病、科凱恩綜合癥、皮質(zhì)基底節(jié)退化癥、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、家族性致死性失眠癥、額顳葉變性、亨廷頓氏舞蹈病、hiv相關(guān)性癡呆、肯尼迪氏病、克臘比病、路易體癡呆、神經(jīng)疏螺旋體病、馬查多-約瑟夫病(脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)3型)、多系統(tǒng)萎縮癥、多發(fā)性硬化、發(fā)作性睡病、尼曼皮克氏病、帕金森病、佩梅病、皮克氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化、朊病毒病、進(jìn)行性核上性麻痹、雷特綜合癥、tau蛋白陽(yáng)性額顳癡呆、tau蛋白陰性額顳癡呆、雷弗素姆病、桑德霍夫病(sandhoffdisease)、謝爾德病(schilder'sdisease)、惡性貧血繼發(fā)性脊髓亞急性聯(lián)合變性、斯皮爾梅伊爾-沃格特-休格連-巴藤癥(也稱為巴藤病)、脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)(具有不同特征的多種類型)、脊髓性肌萎縮、斯-里-奧三氏癥、脊髓癆或中毒性腦病。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在正常受試者中增強(qiáng)記憶的方法。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在受試者中改善學(xué)習(xí)的方法。在一些實(shí)施方案中，所述受試者并未患有神經(jīng)退行性病況或疾病。

在一些實(shí)施方案中，化合物(i)增加組蛋白乙?；?。在一些實(shí)施方案中，組蛋白乙?；ńM蛋白h2b、h3、h4或其組合的乙?；?。在一些實(shí)施方案中，組蛋白乙?；ńM蛋白賴氨酸殘基h3k4、h3k9、h3k14、h4k5、h4k8、h4k12、h4k16或其組合的乙?；?。

在一些實(shí)施方案中，受試者是哺乳動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，受試者是小鼠、大鼠、猴、豚鼠、犬或人。在一些實(shí)施方案中，受試者是小鼠、大鼠、猴或人。在一些實(shí)施方案中，受試者是小鼠或人。在一些實(shí)施方案中，受試者是人。

在一些實(shí)施方案中，所述方法減少疼痛、焦慮或恐懼。在一些實(shí)施方案中，所述方法減少焦慮或恐懼。在一些實(shí)施方案中，所述方法減少焦慮。在一些實(shí)施方案中，所述方法增加精神傳遞。

在本申請(qǐng)的下列章節(jié)中，包括發(fā)明詳述、實(shí)施例和權(quán)利要求，進(jìn)一步描述了本發(fā)明的這些和其他實(shí)施方案。還有本發(fā)明的其他目的和益處對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將因簡(jiǎn)單示例而非限制性的本公開(kāi)內(nèi)容而顯而易見(jiàn)。因此，其他實(shí)施方案將是本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公認(rèn)的而不背離本發(fā)明的精神和范圍。

發(fā)明簡(jiǎn)述

圖1是顯示皮質(zhì)和海馬體中h3的乙酰化水平的蛋白質(zhì)印跡的圖片。經(jīng)由插管對(duì)小鼠施用mom(每側(cè)100μg/μl)或?qū)π∈笫┯脃f2(化合物1)(50mg/kg，腹膜內(nèi))。

圖2是顯示皮質(zhì)和海馬體中h3的乙酰化水平的蛋白質(zhì)印跡的圖片。對(duì)小鼠施用5mg/kg、10mg/kg或20mg/kg的yf2(化合物1)(腹膜內(nèi)，溶于鹽水中)。

圖3是顯示oa2(化合物1)對(duì)hdac1活性的作用的圖表。

圖4是顯示oa2(化合物1)對(duì)hdac3/ncor2活性的作用的圖表。

圖5是顯示oa2(化合物1)對(duì)hdac5fl活性的作用的圖表。

圖6是顯示oa2(化合物1)對(duì)hdac7活性的作用的圖表。

圖7是顯示oa2(化合物1)對(duì)hdac8活性的作用的圖表。

圖8是顯示oa2(化合物1)對(duì)hdac10活性的作用的圖表。

圖9是顯示oa2(化合物1)對(duì)hdac11活性的作用的圖表。

圖10是顯示oa2(化合物1)對(duì)sirtuin1活性的作用的圖表。

圖11是顯示oa2(化合物1)對(duì)sirtuin2活性的作用的圖表。

圖12是顯示oa2(化合物1)對(duì)hdac6活性的作用的圖表。

圖13是顯示hdac抑制劑saha對(duì)hdac1活性的作用的圖表。

圖14是顯示hdac抑制劑saha對(duì)hdac3/ncor2活性的作用的圖表。

圖15是顯示hdac抑制劑saha對(duì)hdac6活性的作用的圖表。

圖16顯示不同濃度的化合物1激活人cbp、p300、pcaf和gcn5的劑量-反應(yīng)曲線。對(duì)cbp、p300、pcaf和gcn5所計(jì)算的化合物1的ec50值分別為0.82μμ、0.79μμ、18.11μμ和65.19μμ。

圖17是顯示化合物1的藥代動(dòng)力學(xué)特性的圖表。大腦中化合物1的量比血漿中高。化合物1在腦中迅速吸收(參見(jiàn)表14)。腦和血漿中化合物1的消除半衰期是腹膜內(nèi)～40分鐘和口服60分鐘。化合物1向腦的分配是迅速的。在急性中毒性實(shí)驗(yàn)中化合物1在高達(dá)300mg/kg(腹膜內(nèi))時(shí)不誘導(dǎo)任何副作用?；衔?的長(zhǎng)期施用(45天，腹膜內(nèi)，每天一次，20mg/kg)并不具有副作用。

圖18是表明向野生型小鼠施用化合物1(1、5和20mg/kg)后情境性恐懼條件反射響應(yīng)的柱形圖。

圖19是表明用媒介物或yf2(化合物1)(5mg/kg)處理的小鼠中感覺(jué)閾評(píng)估的柱形圖。

圖20是顯示血液中hat激動(dòng)劑，化合物1，的動(dòng)力學(xué)的圖表。向小鼠施用化合物1(20mg/kg，腹膜內(nèi))并且之后在不同時(shí)間點(diǎn)從尾部采集血樣。

圖21是顯示小鼠海馬體的組蛋白3乙?；降牡鞍踪|(zhì)印跡的圖像。

圖22顯示yf2(化合物1)的急性施用增加海馬體溶解物中h3、h4和h2b的特異性乙?；?。n＝3且每組p<0.05。

圖23顯示yf2(化合物1)對(duì)ab42誘導(dǎo)的bdnf水平減少的有益作用。yf2挽救αβ誘導(dǎo)的海馬體bdnf水平降低(n＝3每組，p<0.05)。αβ通過(guò)插管輸注。

發(fā)明簡(jiǎn)述

記憶已知是由表觀遺傳學(xué)通過(guò)調(diào)控基因表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)。表觀遺傳學(xué)被定義為通過(guò)經(jīng)由過(guò)程例如dna甲基化和組蛋白(h)修飾來(lái)‘標(biāo)記’dna或其相關(guān)蛋白質(zhì)但不改變dna序列本身來(lái)改變基因表達(dá)的機(jī)制(rakyan,v.k.,等人，biochemj,2001.356(第1部分):第1-10頁(yè)；通過(guò)引用全文并入本文)。組蛋白修飾，例如通過(guò)添加或移除乙?；蚣谆倌軋F(tuán)，導(dǎo)致染色質(zhì)結(jié)構(gòu)打開(kāi)或閉合，使得dna內(nèi)所含的信息更容易或更難被轉(zhuǎn)錄因子所接近。因此，表觀遺傳學(xué)機(jī)制中的一個(gè)的失調(diào)會(huì)導(dǎo)致記憶中斷。例如，組蛋白乙?；臏p少使得染色質(zhì)結(jié)構(gòu)閉合，以至于dna內(nèi)所含的信息可能更難為轉(zhuǎn)錄因子和記憶形成所接近(rakyan,v.k.,等人，biochemj,2001.356(第1部分):第1-10頁(yè)；通過(guò)引用全文并入本文)。

目前用于上調(diào)組蛋白乙酰化的主要策略涉及抑制組蛋白脫乙酰酶(hdac)，即能從組蛋白移除乙?；拿浮Ｈ欢?，非特異性hdac抑制的多效性作用可阻礙hdac抑制劑治療潛力。(j.virol.2001.75(4):1909-17；j.virol.2003.77(21):11425-35；knutson,s.k.,biochemistry.2008,vanderbilt:nashville.167；plosone,2009.4(8):第e6612頁(yè)；每一篇通過(guò)引用全文并入本文)。

hat共享含有乙酰輔酶a結(jié)合位點(diǎn)的高度保守型基序。特異性hat激活劑是藥理學(xué)研究的有力工具并且可以有治療應(yīng)用。已經(jīng)對(duì)hat激活劑有所報(bào)道，但是這些化合物溶解度差并且膜滲透性差，因此不被認(rèn)為是治療疾病和其他病痛的可以接受的藥物候選物。例如，n-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-2-乙氧基-苯甲酰胺在水中的溶解性非常差并且其一旦被放入h2o中就會(huì)被沉淀(jphyschemb,2007.111(17):4527-34)。

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及在受試者中增強(qiáng)記憶和學(xué)習(xí)的方法和組合物。

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及在受試者中增加組蛋白乙?；姆椒ā?/p>

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及在受試者中提高記憶保持的方法。

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及在受試者中治療記憶喪失或無(wú)學(xué)習(xí)能力的方法。

在一些實(shí)施方案中，對(duì)治療、抑制和/或預(yù)防受試者中與記憶喪失或無(wú)學(xué)習(xí)能力有關(guān)的病痛有用的方法和組合物。

在一些實(shí)施方案中，所述方法包括向受試者施用治療上有效的量的化合物(i)，

或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者包含化合物i或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體的組合物。

在一些實(shí)施方案中，所述受試者并未因神經(jīng)退行性疾病而受苦。在一些實(shí)施方案中，神經(jīng)退行性疾病包括腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥(ald)、酒精中毒、亞歷山大病、阿耳珀病、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(路格里克氏病)、共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張、巴藤病(也稱為斯皮爾梅伊爾-沃格特-休格連-巴藤病)、牛海綿樣腦病(bse)、卡納萬(wàn)病、科凱恩綜合癥、皮質(zhì)基底節(jié)退化癥、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、家族性致死性失眠癥、額顳葉變性、亨廷頓氏舞蹈病、hiv相關(guān)性癡呆、肯尼迪氏病、克臘比病、路易體癡呆、神經(jīng)疏螺旋體病、馬查多-約瑟夫病(脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)3型)、多系統(tǒng)萎縮癥、多發(fā)性硬化、發(fā)作性睡病、尼曼皮克氏病、帕金森病、佩梅病、皮克氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化、朊病毒病、進(jìn)行性核上性麻痹、雷特綜合癥、tau蛋白陽(yáng)性額顳癡呆、tau蛋白陰性額顳癡呆、雷弗素姆病、桑德霍夫病、謝爾德病、惡性貧血繼發(fā)性脊髓亞急性聯(lián)合變性、斯皮爾梅伊爾-沃格特-休格連-巴藤癥(也稱為巴藤病)、脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)(具有不同特征的多種類型)、脊髓性肌萎縮、斯-里-奧三氏癥、脊髓癆或中毒性腦病。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在正常受試者中增強(qiáng)記憶的方法。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在受試者中改善學(xué)習(xí)的方法。在一些實(shí)施方案中，所述受試者患有年齡相關(guān)的記憶缺陷。在一些實(shí)施方案中，所述受試者并未患有神經(jīng)退行性病況或疾病。在一些實(shí)施方案中，所述受試者并未患有阿爾茨海默病。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明在正常受試者中提供記憶增強(qiáng)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明在認(rèn)知缺陷的受試者中提供記憶增強(qiáng)和/或?qū)W習(xí)改善。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明在年長(zhǎng)受試者中提供記憶增強(qiáng)。在一些實(shí)施方案中，受試者比約40歲更年長(zhǎng)。在一些實(shí)施方案中，受試者比約45歲更年長(zhǎng)。在一些實(shí)施方案中，受試者比約50歲更年長(zhǎng)。在一些實(shí)施方案中，受試者比約55歲更年長(zhǎng)。在一些實(shí)施方案中，受試者比約60歲更年長(zhǎng)。在一些實(shí)施方案中，受試者比約65歲更年長(zhǎng)。

在一些實(shí)施方案中，受試者是哺乳動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，受試者是小鼠、大鼠、猴、豚鼠、犬或人。在一些實(shí)施方案中，受試者是小鼠、大鼠、猴或人。在一些實(shí)施方案中，受試者是小鼠或人。在一些實(shí)施方案中，受試者是人。

在一些實(shí)施方案中，所述方法減少疼痛、焦慮或恐懼。在一些實(shí)施方案中，所述方法減少焦慮或恐懼。在一些實(shí)施方案中，所述方法減少焦慮。在一些實(shí)施方案中，所述方法增加神經(jīng)傳遞。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供使用化合物i的治療方法，所述化合物i具有組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性、hat激活效用、高選擇性、合理的藥代動(dòng)力學(xué)和良好的穿過(guò)血腦屏障(bbb)的滲透性。

在一些實(shí)施方案中，所述方法增加受試者中的基因表達(dá)，產(chǎn)生增強(qiáng)的記憶和認(rèn)知。

縮寫(xiě)和定義

術(shù)語(yǔ)“化合物(i)”或“化合物1”如本文所用的意指表示為式i或1的化合物。其本文也稱為“yf2”或“oa2”。

術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明的組合物”如本文所用的意指包含化合物(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物。本發(fā)明的組合物可進(jìn)一步包含其他劑，例如諸如賦形劑、穩(wěn)定劑(stabilant)、潤(rùn)滑劑、溶劑和類似物。

術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明的方法：如本文所用的意指包括使用化合物(i)和/或本發(fā)明的組合物治療的方法。

“藥物組合物“是指本文描述的化合物(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽以及其他化學(xué)成分例如生理學(xué)上可接受的載體和賦形劑的混合物。藥物組合物的目的是促進(jìn)化合物向生物體的施用。

術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”預(yù)期包括來(lái)源于無(wú)機(jī)或有機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、磷酸、甲酸、乙酸、乳酸、馬來(lái)酸、富馬酸、琥珀酸、酒石酸、乙醇酸、水楊酸、檸檬酸、甲磺酸、苯磺酸、苯甲酸、丙二酸、三氟乙酸、三氯乙酸、萘-2磺酸和其他酸的鹽；來(lái)源于無(wú)機(jī)或有機(jī)堿包括例如鈉、鉀、鈣、銨或四氟硼酸鹽的鹽。示例性的藥學(xué)上可接受的鹽在例如berge,等人，j.pharm.sci.1977,66(1),1和gould,p.,int.j.pharmaceutics1986,33,201-217中，其每一篇通過(guò)引用并入本文。藥學(xué)上可接受的鹽還預(yù)期涵蓋半鹽，其中化合物:酸的比例分別為2:1。示例性的半鹽是來(lái)源于包含兩個(gè)羧酸基團(tuán)的酸例如蘋(píng)果酸、富馬酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、酒石酸、戊二酸、草酸、己二酸和檸檬酸的那些鹽。其他的示例性半鹽是來(lái)源于雙質(zhì)子礦酸例如硫酸的那些鹽。示例性的優(yōu)選的半鹽包括但不限于半馬來(lái)酸鹽、半富馬酸鹽和半琥珀酸鹽。

術(shù)語(yǔ)“酸”涵蓋所有藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸。無(wú)機(jī)酸包括礦酸例如氫鹵酸諸如氫溴酸和氫氯酸，硫酸，磷酸和硝酸。有機(jī)酸包括所有藥學(xué)上可接受的脂肪族、脂環(huán)族和芳香族羧酸、二羧酸、三羧酸和脂肪酸。優(yōu)選的酸是直鏈或支鏈的，飽和的或非飽和的c1-c20脂肪族羧酸(其任選地被鹵素或被羥基基團(tuán)取代)或c6-c12芳香族羧酸。這種酸的實(shí)例是碳酸、甲酸、富馬酸、乙酸、丙酸、異丙酸、戊酸、α-羥基酸例如乙醇酸和乳酸，氯乙酸、苯甲酸、甲磺酸和水楊酸。二羧酸的實(shí)例包括草酸、蘋(píng)果酸、琥珀酸、酒石酸和馬來(lái)酸。三羧酸的實(shí)例是檸檬酸。脂肪酸包括所有藥學(xué)上可接受的飽和的或非飽和的具有4至24個(gè)碳原子的脂肪族或芳香族羧酸。實(shí)例包括丁酸、異丁酸、仲丁酸、月桂酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸以及苯基硬酯酸。其它酸包括葡糖酸、葡庚糖酸(glycoheptonic)和乳糖酸。

如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“約”本文用來(lái)意指接近于、粗略地、左右或在其區(qū)域內(nèi)。當(dāng)術(shù)語(yǔ)“約”與數(shù)值范圍一起使用時(shí)，其通過(guò)延展所述數(shù)值的上邊界和下邊界對(duì)所述范圍進(jìn)行修飾。通常術(shù)語(yǔ)“約”在本申請(qǐng)中用于將數(shù)值修飾為在所述值以上或以下有20％的變動(dòng)(較高或較低)。

如本文所用的“有效的量”、“足夠的量”或“治療上有效的量”是足以實(shí)現(xiàn)有益的或所期望的結(jié)果(包括臨床結(jié)果)的量，因而，有效量可以是足以例如減少或改善記憶喪失或認(rèn)知或其一種或多種癥狀的嚴(yán)重度和/或持續(xù)時(shí)間，預(yù)防與記憶喪失或認(rèn)知有關(guān)的病況的發(fā)展、改善未患有神經(jīng)退行性病癥的患者中的認(rèn)知、學(xué)習(xí)或記憶或者增強(qiáng)或以另外的方式改善另一種治療的預(yù)防或治療效果的。例如，在施用治療精神病的試劑的情況下，例如，與未施用該試劑所獲得的反應(yīng)比較，藥劑的有效量是指足以達(dá)到這樣一種治療的量。有效的量也包括避免或大大減弱不期望的副作用的化合物的量。

如本文所用的并且如本領(lǐng)域所理解的，“治療”是獲得有益或所期望的結(jié)果(包括臨床結(jié)果)的方法。有益的或所期望的臨床結(jié)果可以包括但不限于一種或多種癥狀或病況的緩解或改善，疾病程度的降低、疾病的穩(wěn)定化狀態(tài)(即沒(méi)有惡化)、預(yù)防疾病的擴(kuò)散、延遲或減緩疾病進(jìn)行、疾病狀態(tài)的改善或緩解以及減輕(無(wú)論部分或整體)，無(wú)論可檢測(cè)還是不可檢測(cè)的?！爸委煛币部梢允桥c如果沒(méi)有接受治療的話所預(yù)期的存活相比延長(zhǎng)的存活。

術(shù)語(yǔ)“載體”是指化合物與其一起施用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒介物。這樣的藥學(xué)載體的非限制性實(shí)例包括液體例如水和油，包括石油、動(dòng)物、植物或合成來(lái)源的那些，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油以及類似物。藥學(xué)載體同樣可以是鹽水、阿拉伯膠、明膠、淀粉糊、滑石、角蛋白，膠體二氧化硅、尿素以及類似物。此外，也可使用輔助劑、穩(wěn)定劑、增稠劑、潤(rùn)滑劑和著色劑。合適的藥學(xué)載體的其它實(shí)例描述于e.w.martin的“remington'spharmaceuticalsciences”(通過(guò)引用全文并入本文)中。

術(shù)語(yǔ)“動(dòng)物”、“受試者”和“患者”如本文所用的包括動(dòng)物界的所有成員，包括但不限于哺乳動(dòng)物(例如小鼠、大鼠、貓、猴、犬、馬、豬等)和人類。

dna和組蛋白的乙?；图谆?/u>

組蛋白脫乙酰酶(hdac)和組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(hat)是通過(guò)選擇性地將位于核心組蛋白蛋白質(zhì)的氨基端附近的賴氨酸的ε-氨基脫乙?；蛞阴；瘉?lái)影響轉(zhuǎn)錄的酶。染色質(zhì)乙?；c轉(zhuǎn)錄活性相關(guān)(常染色質(zhì))，而脫乙?；c基因沉默相關(guān)。有趣的是，已經(jīng)顯示，在海馬體的ca1區(qū)域(腦中在長(zhǎng)期記憶中起重要作用的一個(gè)區(qū)域)中h3的增加的乙?；诼?lián)想記憶后發(fā)生。另外，通過(guò)抑制hdac能夠操控染色質(zhì)的變化并且增強(qiáng)長(zhǎng)期記憶的形成。

dna最初纏繞于組蛋白(h)的八聚物復(fù)合物周?chē)纬珊诵◇w單元，產(chǎn)生珠粒在串束之上的表觀(nature,2001.409(6822):860-921；其通過(guò)引用全文并入本文)。反過(guò)來(lái)，這些核小體單元折疊成更高級(jí)的染色質(zhì)纖維(cell,1999.98(3):285-94；其通過(guò)引用全文并入本文)。每個(gè)組蛋白八聚物復(fù)合物含有兩個(gè)組蛋白拷貝h3和h4，以兩個(gè)組蛋白拷貝2a和2b為界。組蛋白h1和其鳥(niǎo)類變體h5是結(jié)合核小體與dna的進(jìn)入位點(diǎn)和退出位點(diǎn)兩者的連接體組蛋白，從而使dna的位置鎖定并且允許形成更高級(jí)結(jié)構(gòu)。每一組蛋白具有球狀結(jié)構(gòu)域，它介導(dǎo)組蛋白-組蛋白相互作用和n端‘尾部’延伸。組蛋白核心，并且尤其是它們的尾部是相當(dāng)大數(shù)目的共價(jià)修飾，例如乙?；?、泛素化、sumo化(sumoylation)、磷酸化、瓜氨酸化、adp-核糖基化和甲基化的靶(angewchemintedengl,2005.44(21):3186-216；其通過(guò)引用全文并入本文)。與活躍的基因轉(zhuǎn)錄相關(guān)的組蛋白修飾，例如h3lys4甲基化和h3lys56乙?；话l(fā)現(xiàn)會(huì)導(dǎo)致基因表達(dá)。另一方面，與基因轉(zhuǎn)錄失活有關(guān)的組蛋白修飾，例如h3lys27甲基化和h2alys119泛素化，被發(fā)現(xiàn)會(huì)導(dǎo)致基因沉默。本申請(qǐng)?zhí)貏e令人感興趣的是組蛋白2b、3和4，因?yàn)樗鼈円呀?jīng)顯示參與記憶過(guò)程(nature,2007.447(7141):178-82；neuron,2004.42(6):947-59；每一篇通過(guò)引用全文并入本文)。與衰老相關(guān)的記憶功能障礙的研究討論于science2010,328,701中，其通過(guò)引用全文并入本文。

hat和hdac。已經(jīng)提出組蛋白修飾和其組合通過(guò)修飾染色質(zhì)可及性并且通過(guò)起到轉(zhuǎn)錄因子停泊位點(diǎn)的作用并改變酶而參與基因調(diào)控(bioessays,2005.27(2):164-75；nature,2000.403(6765):41-5；每一篇通過(guò)引用全文并入本文)。研究最多的組蛋白修飾中的一種是通過(guò)組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(hat)將組蛋白n端上的進(jìn)化保守型賴氨酸殘基乙?；?。相反，發(fā)現(xiàn)由組蛋白脫乙酰酶(hdac)催化的組蛋白脫乙?；筪na封裝成更聚集的形式，限制了轉(zhuǎn)錄因子的接近并且因此起到基因沉默子的作用(trendsbiochemsci,2000.25(3):121-6；通過(guò)引用全文并入本文)。參與基因表達(dá)調(diào)控的hat包括至少三組酶(jbiochem,2005.138(6):647-62；通過(guò)引用全文并入本文)。一般控制non-derepressible5(gcn5)是gcn5n-乙酰轉(zhuǎn)移酶(gnat)的基本成員。gnat家族成員包括gcn5、pcaf、elp3、hat1mhpa2和nut1。myst家族是以家族基本成員命名：morf、ybf2、sas2和tip60。另外，包括cbp/p300、taf1和許多核受體共激活劑的其他蛋白已經(jīng)顯示具有內(nèi)在hat活性。然而，這些蛋白質(zhì)不含有共有結(jié)構(gòu)域，并且因此代表hat酶的‘孤兒類別(orphanclass)’。

hdac與轉(zhuǎn)錄激活劑以及與其他hdac一起形成阻遏子復(fù)合物(biochemj,2003.370(pt3):737-49；通過(guò)引用全文并入本文)。哺乳動(dòng)物hdac可以被分成經(jīng)典和沉默信息調(diào)節(jié)子2(sir2)相關(guān)蛋白(sirtruin)家族(oncogene,2007.26(37):第5310-8頁(yè)；通過(guò)引用全文并入本文)。在人類，經(jīng)典家族的成員具有另一個(gè)亞類，其包括i類、ii類和iv類，它們具有序列相似性并且其脫乙酰酶活性需要zn+。i類hdac(hdac1-3，hdac8)與酵母基因阻遏子rpd3p有關(guān)，并且是至少兩個(gè)不同的共阻遏子復(fù)合物sin3復(fù)合物和nurd復(fù)合物的亞單位。ii類hdac(hdac4-7、9和10)類似于酵母hda1phdac，它們起到基因阻遏子的作用并且以各種作用牽扯到細(xì)胞分化和發(fā)育中。iv類包括hdac11，它具有i類和ii類hdac的一些特征。sirtruin家族包括iii類hdac(sirt1-7)，其類似于酵母sir2。iii類hdac在生物化學(xué)和結(jié)構(gòu)上不同于經(jīng)典家族并且需要nad+作為輔因子。hdac似乎參與基因沉默和著絲點(diǎn)和端粒處的異染色質(zhì)形成(綜述參見(jiàn)(jmolbiol,2004.338(1):17-31；通過(guò)引用全文并入本文中)。

包括dna和組蛋白的乙?；图谆谋碛^遺傳學(xué)修飾的變化可在癌癥和神經(jīng)疾病中促成基因表達(dá)變化。通過(guò)組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(hat)在組蛋白上添加乙酰基增強(qiáng)基因表達(dá)，而通過(guò)組蛋白脫乙酰酶(hdac)來(lái)移除乙?；鶆t會(huì)減少基因表達(dá)。已經(jīng)在多種病痛，例如腫瘤、情緒障礙和神經(jīng)退行性疾病中發(fā)現(xiàn)組蛋白乙酰化的減少。hat的實(shí)例包括(但不限于)gcn5、gcn5l、pcaf、hat1、elp3、hpa2、esa1、sas2、sas3、tip60、hbo1、moz、morf、mof、src1、src3、tif2、grip1、atf-2[參見(jiàn)lee和workman(2007)natrevmolcellbiol.,8(4):284-95，marmorstein(2001)jmolecbiol.311:433-444；以及kimura等人(2005)jbiochem.138(6):647-662，每一篇通過(guò)引用全文并入本文]。在一些實(shí)施方案中，hat激活劑化合物涉及gcn5、gcn5l、hat1、pcaf或其組合。在一些實(shí)施方案中，hat激活劑化合物涉及具有內(nèi)在hat活性的蛋白，例如核受體共激活劑(例如，cbp/p300和taf1)。在一些實(shí)施方案中，h2、h3和/或h4組蛋白的乙?；黾?。

增加組蛋白乙?；扬@示在多種不同疾病如哮喘、傳染性疾病和精神疾病中改善結(jié)果。盡管目前正在對(duì)幾種hdac抑制劑進(jìn)行臨床試驗(yàn)，但通過(guò)hat激活來(lái)增加組蛋白乙?；奶娲圆呗陨形吹玫綇V泛地探究。例如，美國(guó)專利公開(kāi)第us2009076155號(hào)和pct公開(kāi)第wo2004053140號(hào)(每一篇通過(guò)引用全文并入本文)中的化合物具有差的溶解度和膜通透性。而且，這些專利申請(qǐng)中公開(kāi)的化合物沒(méi)有公開(kāi)用于治療任何疾病的任何數(shù)據(jù)。同樣討論了hat的調(diào)節(jié)，例如在美國(guó)專利公開(kāi)第us20040091967號(hào)和美國(guó)專利第7,750,047號(hào)中(每一篇通過(guò)引用全文并入本文)。

目前沒(méi)有hat激活劑處于藥物試驗(yàn)中，然而，有幾種hdac抑制劑目前處于臨床試驗(yàn)中。這些hdac抑制劑(hdaci)中有一些已經(jīng)在臨床前試驗(yàn)中顯示出治療效用。不受理論所束縛，據(jù)信hat激活劑可以是具有類似于hdaci作用的有用的藥物候選。然而，先前可獲得的hat激活劑具有極小的溶解度和膜通透性，使得它們不適合用作藥物。

正在或已經(jīng)針對(duì)神經(jīng)疾病開(kāi)發(fā)一些hdaci，例如正被用于治療神經(jīng)退行性疾病的來(lái)自merck(whitehousestation，nj)的hdaci；和曾被用于治療亨廷頓氏舞蹈病但現(xiàn)已停止的來(lái)自topotarget(rockaway，nj)的hdaci；曾被用于雙相障礙、癲癇和偏頭痛而現(xiàn)已停止的異戊酰胺nps-1776(npspharmaceutical，bedminster,newjersey)；以及用于癌癥但停止于臨床前階段的來(lái)自topotargeta/s(kobenhavn，denmark)組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑。在science2010,328,753和nature2009,459,55中討論了組蛋白乙?；幻恳黄ㄟ^(guò)引用全文并入本文。

本文中，描述了具有改進(jìn)的溶解度和膜通透性的hat激活劑并且顯示了其體外以及在動(dòng)物模型中的效力?；衔?i)和其他hat激活劑化合物同樣描述于pct/us10/59925中，其通過(guò)引用全文并入本文。體外和行為數(shù)據(jù)顯示hat激活劑化合物(i)可將腦中的組蛋白h3乙酰化并且在患有阿耳茨海默病的小鼠模型中改善記憶缺陷。例如，化合物(i)可在幾種癌癥、精神疾病和神經(jīng)退行性疾病中用作輔助療法并且可改進(jìn)對(duì)這些病癥的治療的功效和安全性。而且，化合物(i)表現(xiàn)出良好的溶解度和血腦屏障滲透性(參見(jiàn)abel和zukin(2008)currentopinioninpharmacology8:57-64；和lee和workman(2007)natrevmolcellbiol8:284-295；每一篇通過(guò)引用全文并入本文)。

hat1也稱作kat1(k(賴氨酸)乙酰轉(zhuǎn)移酶1)。由這一基因編碼的蛋白是b型組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(hat)，其參與對(duì)新合成的細(xì)胞質(zhì)組蛋白的迅速乙酰化，所述組蛋白反過(guò)來(lái)被輸入細(xì)胞核以便重新沉積在新生dna鏈上。組蛋白乙酰化，尤其是組蛋白h4，在復(fù)制依賴性染色質(zhì)裝配中起到重要作用。

seqidno:1是對(duì)應(yīng)于hat蛋白，hat1酶，的人野生型氨基酸序列(殘基1-419)：

seqidno:2是對(duì)應(yīng)于hat蛋白，hat1酶，的人野生型核苷酸序列(殘基1-1682)，其中加下劃線的atg表示開(kāi)放讀碼框的起始：

hat蛋白，人pcaf，的多肽序列描述于seqidno:3.中。人pcaf的核苷酸序列顯示于seqidno:4中。與pcaf有關(guān)的序列信息可在公眾數(shù)據(jù)庫(kù)以genbank登錄號(hào)nm_003884(對(duì)于mrna)和np_003875(對(duì)于蛋白)獲得。pcaf也稱為kat2b(k(賴氨酸)乙酰轉(zhuǎn)移酶2b)。cbp和p300是與參與細(xì)胞生長(zhǎng)和/或分化的許多序列特異性因子，包括c-jun和腺病毒癌蛋白e1a，結(jié)合的大的核蛋白。由這一基因編碼的蛋白結(jié)合p300/cbp。其具有與cbp和p300的體外和體內(nèi)結(jié)合活性并且與e1a競(jìng)爭(zhēng)p300/cbp中的結(jié)合位點(diǎn)。其具有對(duì)核心組蛋白和核小體核顆粒的組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性，表明這一蛋白在轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)中直接起作用。

seqidno:3是對(duì)應(yīng)于hat蛋白，pcaf酶，的人野生型氨基酸序列(殘基1-832)：

seqidno:4是對(duì)應(yīng)于hat蛋白，pcaf酶，的人野生型核苷酸序列(殘基1-4824)，其中加下劃線的atg表示開(kāi)放讀碼框的起始：

hat蛋白，人gcn5l，的多肽序列描述于seqidno:5中。人gcn5l的核苷序列描述于seqidno:6中與gcn5l有關(guān)的序

seqidno:6是對(duì)應(yīng)于hat蛋白，gcn5l酶，的人野生型核苷酸序列(殘基1-3127)，其中加下劃線的atg表示開(kāi)放讀碼框的起始：

感興趣的分子，例如hat多肽，的基本序列和該序列與其他同一組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶家族的其他蛋白的相似性的知識(shí)(如gnat家族、myst家族或gcn5家族[參見(jiàn)lee和owrkman(2007)natrevmolcellbiol,8(4):284-95,marmorstein(2001)jmolecbiol.311:433-444；和kimura等人，(2005)jbiochem.138(6):647-662；每一篇通過(guò)引用全文并入本文])可提供關(guān)于感興趣的蛋白的抑制劑或拮抗劑的信息?？赏ㄟ^(guò)確定所述蛋白的結(jié)構(gòu)特征例如使用x射線結(jié)晶學(xué)、中子衍射、核磁共振光譜測(cè)定和用于結(jié)構(gòu)測(cè)定的其他技術(shù)來(lái)進(jìn)一步促進(jìn)對(duì)拮抗劑的鑒定和篩選。這些技術(shù)可為拮抗劑，除了蛋白激動(dòng)劑之外，的設(shè)計(jì)或鑒定提供合理途徑。

hat激活劑化合物可以是在體內(nèi)和/或體外增加hat分子(例如gcn5、gcn5l、pcaf或hat1)的活性和/或表達(dá)的化合物。hat激活劑化合物可以是經(jīng)由表達(dá)、經(jīng)由翻譯后修飾或通過(guò)其他方式對(duì)hat蛋白質(zhì)活性施加其影響的化合物。在一些實(shí)施方案中，hat激活劑化合物將hat蛋白質(zhì)或mrna表達(dá)或者乙酰轉(zhuǎn)移酶活性增加至少約10％、至少約20％、至少約30％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約97％、至少約99％或100％。

在一些實(shí)施方案中，所述方法包括向受試者施用有效量的包含化合物(i)的組合物。在一些實(shí)施方案中，受試者并未表現(xiàn)出異常升高的淀粉樣蛋白β斑塊、升高的tau蛋白水平、α-突觸核蛋白的累積、脂褐質(zhì)的累積或裂解的tardbp(tdb-43)水平的累積或其任意組合。在一些實(shí)施方案中，受試者并未患有阿爾茨海默病、路易體癡呆、包涵體肌炎、亨廷頓氏舞蹈病、帕金森病或大腦淀粉樣血管病。在一些實(shí)施方案中，受試者并未患有癌癥。

在一些實(shí)施方案中，治療方法包括下列步驟：i)確定受試者需要這樣的治療；(ii)提供化合物(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽；和(iii)以藥學(xué)上有效的量向需要這樣的治療的受試者施用所述化合物。

在一些實(shí)施方案中，治療方法包括下列步驟：i)確定受試者需要這樣的治療；(ii)提供包含化合物(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物；和(iii)以藥學(xué)上有效的量向需要這樣的治療的受試者施用所述組合物。

在一些實(shí)施方案中，所述方法包括向受試者施用有效量的化合物(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽或者包含化合物(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體的組合物。藥學(xué)上可接受的載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，包括例如佐劑、稀釋劑、賦形劑、填充劑、潤(rùn)滑劑和媒介物。常常，藥學(xué)上可接受的載體對(duì)活性化合物來(lái)說(shuō)是化學(xué)上惰性的并且在使用條件下時(shí)非毒性的。藥學(xué)上可接受的載體的實(shí)例可包括例如水或鹽水溶液、聚合物例如聚乙二醇、碳水化合物及其衍生物、油類、脂肪酸類或醇類。

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及化合物(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽在用于在受試者中增強(qiáng)學(xué)習(xí)或記憶的藥物的制備中的用途。

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及化合物(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽在用于在受試者中增加組蛋白乙?；乃幬锏闹苽渲械挠猛尽?/p>

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及化合物(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽在用于在受試者中提高記憶保持的藥物的制備中的用途。

在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及化合物(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽在用于在受試者中治療記憶喪失或無(wú)學(xué)習(xí)能力的藥物的制備中的用途。

在一些實(shí)施方案中，化合物(i)被配制為用于以適于體內(nèi)施用的生物學(xué)相容的形式向受試者施用的藥物組合物。根據(jù)一些實(shí)施方案，本發(fā)明提供包含為與藥學(xué)上可接受的稀釋劑和/或載體的混合物的化合物(i)的藥物組合物。藥學(xué)上可接受的載體在可與所述組合物的其他成分相容并且對(duì)其接受者來(lái)說(shuō)無(wú)害的意義上來(lái)說(shuō)是“可接受的”。本文所用的藥學(xué)上可接受的載體可以選自作為用于藥物制品的材料使用并且可作為吸收延遲劑、止痛劑、抗菌劑、抗真菌劑、緩沖劑、粘合劑、包衣劑、崩解劑、稀釋劑、分散劑、乳化劑、賦形劑、填充劑、助流劑、增溶劑、溶劑、穩(wěn)定劑、懸浮劑、等滲劑、媒介物及增粘劑摻入的不同有機(jī)或無(wú)機(jī)材料。同樣可以加入藥物添加劑例如抗氧化劑、芳香劑、著色劑、風(fēng)味改善劑、防腐劑和甜味劑?？山邮艿乃幬镙d體的實(shí)例包括，除了其他的之外，羧甲基纖維素、微晶纖維素、甘油、阿拉伯膠、乳糖、硬脂酸鎂、甲基纖維素、粉末劑、鹽水、藻酸鈉、蔗糖、淀粉、滑石和水。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”意指被聯(lián)邦或州政府的管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的或在動(dòng)物并且更具體地人類中使用的美國(guó)藥典或其他廣泛公認(rèn)的藥典中列出的。

表面活性劑，例如去污劑，同樣適于在所述制品中使用。表面活性劑的特定實(shí)例包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、乙酸乙烯酯和乙烯基吡咯烷酮的共聚物、聚乙二醇、芐醇、甘露糖醇、甘油、山梨糖醇或山梨糖醇的聚氧乙烯酯；卵磷脂或羧甲基纖維素鈉；或丙烯酸衍生物例如異丁烯酸酯和或其他物質(zhì)，陰離子表面活性劑例如堿性硬脂酸鹽，特別是硬脂酸鈉、鉀或銨；硬脂酸鈣或硬脂酸三乙醇胺；烷基硫酸酯，尤其是月桂基硫酸鈉和十六烷基硫酸鈉；十二烷基苯磺酸鈉或十六烷基磺基琥珀酸鈉；或脂肪酸，特別是那些由從椰子油得到的哪些，陽(yáng)離子表面活性劑，例如式n⁺r'r"r"'r""y^-的水溶性季銨鹽，其中r基團(tuán)是相同的或不同的任選羥基化的烴類基團(tuán)而y^-是強(qiáng)酸的陰離子，例如鹵化物、硫酸根和磺酸根陰離子；溴化十六烷基三甲基銨是可以使用的陽(yáng)離子表面活性劑之一，式n⁺r'r"r"的胺鹽，其中r基團(tuán)是相同的或不同的任選羥基化的烴類基團(tuán)；十八烷基胺鹽酸鹽是可以使用的陽(yáng)離子表面活性劑之一，非離子表面活性劑，例如山梨糖醇的任選地聚氧乙烯化的酯，特別是聚山梨酯80，或聚氧乙烯化烷基醚；聚乙二醇硬脂酸酯，蓖麻油的聚氧乙烯化衍生物，聚甘油酯，聚氧乙烯化的脂肪醇，聚氧乙烯化的脂肪酸或環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷的共聚物，兩性表面活性劑，例如甜菜堿的取代的月桂基化合物，

當(dāng)施用于受試者時(shí)，化合物(i)及藥學(xué)上可接受的載體可以是無(wú)菌的。適合的藥物載體還可以包括賦形劑，例如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、聚乙二醇300、水、乙醇、聚山梨酯20和類似物。本發(fā)明的組合物，如果需要，還可以含有極小量的潤(rùn)濕劑或乳化劑，或ph緩沖劑。

本發(fā)明的藥物制品通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域熟知的方法制備。任選地，也加入一種或多種輔助成分(例如，緩沖劑、調(diào)味劑、表面活性劑和類似物)。載體的選擇是由化合物的溶解度和化學(xué)性質(zhì)、選擇的施用途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐來(lái)確定。

另外，本發(fā)明的化合物和/或組合物通過(guò)已知程序施用于人或動(dòng)物受試者，包括口服施用、腹膜內(nèi)、胃腸外(例如、靜脈內(nèi))、皮內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、經(jīng)皮、局部、經(jīng)粘膜、直腸、經(jīng)舌下或含服給藥施用。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)或包含化合物(i)的組合物口服施用。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)或包含化合物(i)的組合物腹膜內(nèi)施用。

對(duì)于口服施用，化合物(i)或其組合物的制劑可以劑型例如膠囊、片劑、粉末、顆?；蜃鳛閼腋∫夯蛉芤捍嬖?。膠囊制品可以是明膠，軟凝膠或固體。片劑和膠囊制品可以進(jìn)一步包含一種或多種輔助劑、粘合劑、稀釋劑、崩解劑、賦形劑、填充劑或潤(rùn)滑劑，其中每一個(gè)都是本領(lǐng)域已知的。這樣的實(shí)例包括碳水化合物如乳糖或蔗糖，無(wú)水磷酸氫鈣，玉米淀粉，甘露醇，木糖醇，纖維素或其衍生物，微晶纖維素，明膠，硬脂酸，二氧化硅，滑石，淀粉羥乙酸鈉，阿拉伯膠，調(diào)味劑，防腐劑，緩沖劑，崩解劑和著色劑?？诜┯玫慕M合物可含有一種或多種任選的劑，例如諸如增甜劑例如果糖、阿斯巴甜或糖精；調(diào)味劑例如薄荷、冬青油或櫻桃；著色劑和防腐劑，以提供藥學(xué)上適口的制劑。

所述組合物可進(jìn)一步包含一種或多種無(wú)菌稀釋劑，例如水、鹽溶液、非揮發(fā)性油、聚亞烷基二醇、聚氧乙烯化二醇、甘油或其他溶劑；抗菌劑例如苯甲醇或甲基對(duì)羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑例如抗壞血酸、檸檬酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑例如edta；緩沖劑例如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽等，張力調(diào)節(jié)劑例如氯化鈉或葡萄糖，ph調(diào)節(jié)劑例如弱酸或弱堿等。

在一些實(shí)施方案中，所述組合物是單位劑量形式，例如片劑，膠囊或單劑量小瓶。適合的單位劑量，即治療上有效的量，可以在指示所選擇的化合物的施用的病況中的每一個(gè)適當(dāng)設(shè)計(jì)的臨床試驗(yàn)期間確定并且將，當(dāng)然地，取決于所需的臨床終點(diǎn)而變化。

適于注射使用的藥物組合物包括無(wú)菌水溶液(在可溶于水時(shí))或分散液和用于臨時(shí)制備無(wú)菌可注射溶液或分散液的無(wú)菌粉末。對(duì)于靜脈內(nèi)施用，適合的載體包括生理鹽水、抑制細(xì)菌的水、cremophorem^tm(basf，parsippany，n.j.)或磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)。在所有情況下，組合物優(yōu)選是無(wú)菌的并且其應(yīng)當(dāng)是以可容易注射的程度存在的流體。它優(yōu)選地在制造和儲(chǔ)存條件下是穩(wěn)定的并且優(yōu)選地免受微生物(例如細(xì)菌和真菌)的污染作用。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，含有例如水，乙醇，藥物學(xué)上可接受的多元醇例如甘油、丙二醇、液體聚乙二醇，和其適合的混合物。適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性可以通過(guò)例如使用涂層例如卵磷脂，通過(guò)在分散液的情況下保持所需的粒度和通過(guò)使用表面活性劑來(lái)維持。防止微生物的作用可以通過(guò)不同抗細(xì)菌劑和抗真菌劑，例如對(duì)羥苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸和硫柳汞來(lái)實(shí)現(xiàn)。在許多情況下，在組合物中包含等張劑，例如糖類、多元醇(例如甘露糖醇、山梨糖醇)、氯化鈉可以是有用的?？勺⑸浣M合物的延長(zhǎng)吸收可以通過(guò)在組合物中包含延遲吸收的藥劑，例如單硬脂酸鋁和明膠來(lái)實(shí)現(xiàn)。

無(wú)菌可注射溶液可以通過(guò)將化合物(i)或其組合物在需要時(shí)按所需量與本文所列成分之一或其組合一起摻入適當(dāng)?shù)娜軇┲?，隨后進(jìn)行過(guò)濾滅菌而制備。通常，分散液是通過(guò)將活性化合物摻入含有基礎(chǔ)分散介質(zhì)和來(lái)自本文所列的那些的所需其他成分的無(wú)菌媒介物中而制備。在用于預(yù)備無(wú)菌可注射溶液的無(wú)菌粉末的情況下，有用的制備方法的實(shí)例是真空干燥和冷凍干燥，其由先前被無(wú)菌過(guò)濾的溶液產(chǎn)生活性成分加上任何額外的所需成分的粉末。

口服組合物一般包括惰性稀釋劑或可食用載體。它們可以封裝于明膠膠囊中或壓制成片劑。為了口服治療性施用的目的，活性化合物可以與賦形劑合并，并且以片劑、錠劑或膠囊形式來(lái)使用?？诜M合物也可以使用流體載劑來(lái)制備以用作嗽口水，其中流體載體中的化合物是口服使用的并且漱口和吐出或吞下。

藥物學(xué)上相容的粘合劑和/或佐劑材料可以作為組合物的一部分而被包括。片劑、藥丸、膠囊、錠劑和類似物可以含有以下成分或具有類似性質(zhì)的化合物中的任何一種：粘合劑例如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑例如淀粉或乳糖；崩解劑例如海藻酸、primogel或玉米淀粉；潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂或sterote；助流劑，例如膠體二氧化硅；甜味劑例如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑例如薄荷、水楊酸甲酯或橙香精。

系統(tǒng)施用也可以通過(guò)經(jīng)粘膜或經(jīng)皮方式來(lái)進(jìn)行。對(duì)于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮施用，在配制物中使用適于有待被透過(guò)的屏障的滲透劑。這樣的滲透劑在本領(lǐng)域內(nèi)一般是已知的，并且對(duì)于經(jīng)粘膜施用來(lái)說(shuō)，包括例如去污劑、膽汁鹽和梭鏈孢酸衍生物。經(jīng)粘膜施用可以通過(guò)使用鼻噴霧劑或栓劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。對(duì)于經(jīng)皮施用來(lái)說(shuō)，如本領(lǐng)域內(nèi)一般所知，將活性化合物配制成軟膏、藥膏、凝膠或乳膏。

腸胃外制劑可以封裝于由玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多劑量小瓶中。

在根據(jù)本發(fā)明的方法，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和/或組合物以治療上有效的量施用于受試者以在受試者中增強(qiáng)或增加記憶或認(rèn)知。該量可容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員，根據(jù)已知的程序，包括對(duì)體內(nèi)建立的滴定曲線的分析以及本文公開(kāi)的方法和測(cè)定，容易地確定。

所施用的劑量可以是足以在受試者中導(dǎo)致記憶或認(rèn)知增強(qiáng)，提高學(xué)習(xí)或減少記憶喪失的該組合物的治療上有效的量。

在一些實(shí)施方案中，所述方法包括施用治療上有效的劑量的化合物(i)。在一些實(shí)施方案中，治療上有效的劑量是至少約0.05mg/kg體重、至少約0.1mg/kg體重、至少約0.25mg/kg體重、至少約0.3mg/kg體重、至少約0.5mg/kg體重、至少約0.75mg/kg體重、至少約1mg/kg體重、至少約2mg/kg體重、至少約3mg/kg體重、至少約4mg/kg體重、至少約5mg/kg體重、至少約6mg/kg體重、至少約7mg/kg體重、至少約8mg/kg體重、至少約9mg/kg體重、至少約10mg/kg體重、至少約15mg/kg體重、至少約20mg/kg體重、至少約25mg/kg體重、至少約30mg/kg體重、至少約40mg/kg體重、至少約50mg/kg體重、至少約75mg/kg體重、至少約100mg/kg體重、至少約200mg/kg體重、至少約250mg/kg體重、至少約300mg/kg體重、至少約350mg/kg體重、至少約400mg/kg體重、至少約450mg/kg體重、至少約500mg/kg體重、至少約550mg/kg體重、至少約600mg/kg體重、至少約650mg/kg體重、至少約700mg/kg體重、至少約750mg/kg體重、至少約800mg/kg體重、至少約900mg/kg體重或至少約1000mg/kg體重。應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到本文所列的劑量中的任一種可構(gòu)成較高或較低劑量范圍并且可與任何其他劑量組合以構(gòu)成包含上限和下限的劑量范圍。

在一些實(shí)施方案中，所述方法包括單次劑量或施用(例如，作為單次注射或沉積)?；蛘撸龇椒ò蓪?duì)有需要的受試者每日一次、每日兩次、每日三次或每日四次施用持續(xù)約2天至約28天、或約7天至約10天或約7天至約15天或更久的一段時(shí)間。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括長(zhǎng)期施用。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括經(jīng)幾年或幾十年的時(shí)間施用。

所施用的劑量可以取決于已知因素例如活性成分的藥效動(dòng)力學(xué)特征和其施用模式與途徑；活性成分的施用時(shí)間；接受者的年齡、性別、健康狀態(tài)和體重；癥狀的性質(zhì)和程度；并行治療的種類、治療頻率和所需作用以及排泄率而變化。這些都是容易確定并且由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用以調(diào)整或逐漸改變(titrate)劑量和/或給藥計(jì)劃。

組合物所使用的精確劑量將同樣取決于施用途徑并且應(yīng)當(dāng)根據(jù)實(shí)行者的判斷和每個(gè)患者的情況而決定。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服施用的適合的劑量范圍一般是約5mg/天至約1000mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約5mg/天至約800mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約5mg/天至約500mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約5mg/天至約250mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約5mg/天至約100mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約5mg/天至約50mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約5mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約10mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約20mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約50mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約100mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約250mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約500mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約750mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的口服劑量是約1000mg/天。

在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)施用的適合的劑量范圍一般是約5mg/天至約1000mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約5mg/天至約800mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約5mg/天至約500mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約5mg/天至約250mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約5mg/天至約100mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約5mg/天至約50mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約5mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約10mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約20mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約50mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約100mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約250mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約500mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約750mg/天。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)的腹膜內(nèi)劑量是約1000mg/天。

本文所述的任何治療性應(yīng)用可以應(yīng)用于需要這樣的療法的任何受試者，包括例如哺乳動(dòng)物，例如小鼠、大鼠、犬、貓、奶牛、馬、兔、猴、豬、綿羊、山羊或人。

應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到本文所公開(kāi)的任一實(shí)施方案的一個(gè)或多個(gè)特征可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)組合和/或重新排列以產(chǎn)生同樣在本發(fā)明范圍內(nèi)的另外的實(shí)施方案。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到或能夠確定使用不止一種常規(guī)實(shí)驗(yàn)，本文描述的許本領(lǐng)域特定實(shí)施方案的許多等價(jià)物。這樣的等價(jià)物預(yù)期在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

通過(guò)下列非限制性實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明

實(shí)施例

下文提供實(shí)施例以有助于對(duì)本發(fā)明的更全面的理解。下列實(shí)施例說(shuō)明進(jìn)行并實(shí)行本發(fā)明的示例性方式。然而，本發(fā)明的范圍不限于這些實(shí)施例中公開(kāi)的特定的實(shí)施方案，其僅為了說(shuō)明性目的，因?yàn)榭墒褂每商鎿Q的方法獲得相似的結(jié)果。

實(shí)施例1–化合物1的合成

方案1:化合物1的合成

根據(jù)方案1制備hat激活劑化合物，化合物1(i)。將商業(yè)上可獲得的6-甲氧基-2羥基苯甲酸乙酯(2.10g,10.0mmol)溶于etoh和naoh1n(10ml，1:1)的溶液加熱回流2小時(shí)。將溶液通過(guò)加入hcl1n酸化并且所獲得的沉淀用ch2cl2(50ml)稀釋并且用hcl1n(3×50ml)清洗。有機(jī)層在na2so4下干燥，在減壓下過(guò)濾并且蒸發(fā)。獲得白色固體為所期望的的產(chǎn)物3(1.65g，91％)。

將edc(2.19ml，12.35mmol)于0℃逐滴加至3(1.5g，8.23mmol)和3-氯-4-(三氟甲基)苯胺(1.61g,8.23mmol)溶于ch2cl2(15ml)的溶液。將反應(yīng)物于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且通過(guò)沉淀從meoh分離為白色針樣固體的最終產(chǎn)物4(2.42g，82％)。

向4(170mg，0.47mmol)、2-(二甲基氨基)乙醇(54mg,0.6mmol)和pph3(157mg，0.6mmol)溶于thf(5ml)的溶液逐滴加入diad(121mg，0.6mmol)。將反應(yīng)物于室溫?cái)嚢?4h。在減壓下除去溶劑并且將殘留物溶于acoet(30ml)。用水清洗有機(jī)層(3×30ml)，在na2so4下干燥，過(guò)濾并濃縮以產(chǎn)生黃色油，其通過(guò)快速色譜法純化(acoe:meoh9:1)，產(chǎn)生作為無(wú)色油的化合物1(135mg，70％)。¹hnmr(cdcl3,300mhz)δ8.65(s,1h),7.98(d,1h,j＝7.8hz),7.79(d,1h,j＝1.5hz),7.46(d,1h,j＝8.7hz),7.29(t,1h,j＝8.4hz),6.60(dd,2h,j1＝1.8,j2＝8.4hz),4.20(t,2h,j＝5.1hz),4.10(q,2h,j＝6.9hz),2.65(t,2h,j＝5.4hz),2.25(s,6h),1.40(t,3h,j＝7.2hz)；msesi(m/z)431(m+l)⁺。將化合物1在乙醚中用hcl2m處理并且通過(guò)過(guò)濾收集1的白色鹽。

實(shí)施例2–hat激活劑化合物表征

化合物1的制備未使用柱并且2個(gè)相可見(jiàn)：澄清相和油質(zhì)相。化合物1(50mg/kg，腹膜內(nèi))隨后被施用于小鼠?；衔?的脫乙氧基類似物，mom，同樣經(jīng)由插管施用(每側(cè)100μg/μl)。其施用后兩小時(shí)和四小時(shí)后，將小鼠處死并且摘取海馬體。有趣的是，當(dāng)mom沒(méi)有穿過(guò)bbb時(shí)，yf2(化合物1)能夠穿過(guò)bbb，穿透細(xì)胞并且增加ach3(道1對(duì)比道9，10)(圖1)。假定化合物不是100％純凈的并且需要進(jìn)一步純化/核實(shí)，合成更多的化合物1并且純化。通過(guò)核磁共振(nmr)光譜測(cè)定核實(shí)純度。將5、10、20mg/kg化合物1施用于小鼠(腹膜內(nèi)，溶于鹽水)。在3個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行海馬體摘取(處理后0.5、1和2小時(shí))。之后進(jìn)行ach3的蛋白質(zhì)印跡。除了1hr-10mg/kg施用yf2之外，yf2顯著增加ach3水平(圖2)，表明yf2(化合物1)穿過(guò)bbb和細(xì)胞膜。

實(shí)施例3:化合物1通過(guò)hat激活而不是hdac抑制增加組蛋白乙?；?/p>

hdac抑制導(dǎo)致組蛋白乙?；黾印０l(fā)明人檢測(cè)了組蛋白乙?；欠裢ㄟ^(guò)hadc抑制發(fā)生。結(jié)果概述描述于表1中?；衔?化合物1和saha)的平均ic50值概述于表1中。

表1.化合物對(duì)hdac活性的抑制性作用

進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)并且研究顯示化合物1沒(méi)有hdac抑制特性。化合物1并不抑制hadc。

材料和方法

材料：

hdac測(cè)定緩沖液(bps目錄號(hào)50031)

hdac測(cè)定顯影劑(bps目錄號(hào)50030)

hdac底物1(bps號(hào)50032)

hdac底物3(bps號(hào)50037)

hdac2a類底物1(bps號(hào)50040)

saha(caymanchemical，annarbor，mi，目錄號(hào)10009929)

表2.研究中使用的化合物

*化合物1在以2mm溶于10％dmso時(shí)是混濁的(最高測(cè)試點(diǎn))。

**saha和hdaci是hdac的陽(yáng)性對(duì)照。

實(shí)驗(yàn)條件

表3.酶和底物

測(cè)定條件。用溶于測(cè)定緩沖液的10％dmso制備測(cè)試化合物的一系列稀釋物并且將5μl的稀釋物加至50μl反應(yīng)物中以使得所有反應(yīng)物中dmso的終濃度是1％。除了hdac11在室溫進(jìn)行3小時(shí)之外，所有的酶促反應(yīng)于37℃一式兩份進(jìn)行30分鐘。50μl反應(yīng)混合物含有hdac測(cè)定緩沖液、5μgbsa、hdac底物、hdac酶和測(cè)試化合物。在酶促反應(yīng)之后，向每孔加入50μl的hdac顯影劑并且將板在室溫孵育另外20分鐘。使用tecaninfinitem1000微板讀數(shù)儀以360nm的激發(fā)和460nm的發(fā)射測(cè)量熒光強(qiáng)度。

數(shù)據(jù)分析。hdac活性測(cè)定在每種濃度一式兩份進(jìn)行。熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)用計(jì)算機(jī)軟件graphpadprism分析。在化合物不存在的情況下，每個(gè)數(shù)據(jù)集中的熒光強(qiáng)度(ft)定義為100％活性。hdac不存在的情況下，每個(gè)數(shù)據(jù)集中的熒光強(qiáng)度(fb)定義為0％活性?；衔?在測(cè)定條件下具有熒光；因此，不同濃度的化合物1的熒光強(qiáng)度被定義為背景(fb)。根據(jù)下列公式計(jì)算每種化合物存在時(shí)的百分比活性：％活性＝(f-fb)/(ft-fb)，其中f＝化合物存在時(shí)的熒光強(qiáng)度。

之后用使用公式y(tǒng)＝b+(t-b)/1+10^{((logec50-x)×hill斜率)}產(chǎn)生的sigmoidal劑量反應(yīng)曲線的非線性回歸分析將％活性的值對(duì)一系列化合物濃度作圖，其中y＝百分比活性，b＝最小百分比活性，t＝最大百分比活性，x＝化合物的對(duì)數(shù)而hill斜率＝斜率因子或hill系數(shù)。ic50值由產(chǎn)生半最大百分比活性的濃度確定。

化合物1對(duì)hdac抑制的作用的結(jié)果

表4.hdac1測(cè)定-化合物1對(duì)hdac1活性的作用的數(shù)據(jù)

圖3對(duì)應(yīng)于表4中所示的結(jié)果。

表5.hdac3/ncor2測(cè)定-化合物1對(duì)hdac3/ncor2活性的作用的數(shù)據(jù)

圖4對(duì)應(yīng)于表5中所示的結(jié)果。

表6.hdac5fl測(cè)定-化合物1對(duì)hdac5fl活性的作用的數(shù)據(jù)

圖5對(duì)應(yīng)于表6中所示的結(jié)果。

表7.hdac7測(cè)定-化合物1對(duì)hdac7活性的作用的數(shù)據(jù)

圖6對(duì)應(yīng)于表7中所示的結(jié)果。

表8.hdac8測(cè)定-化合物1對(duì)hdac8活性的作用的數(shù)據(jù)

圖7對(duì)應(yīng)于表8中所示的結(jié)果

表9.hdac10測(cè)定-化合物1對(duì)hdac10活性的作用的數(shù)據(jù)

圖8對(duì)應(yīng)于表9中所示的結(jié)果。

表10.hdac11測(cè)定-化合物1對(duì)hdac11活性的作用的數(shù)據(jù)

圖9對(duì)應(yīng)于表10中所示的結(jié)果。

表11.sirtuin1測(cè)定-化合物1對(duì)sirtuin1活性的作用的數(shù)據(jù)

圖10對(duì)應(yīng)于表11中所示的結(jié)果。

表12.sirtuin2測(cè)定-化合物1對(duì)sirtuin2活性的作用的數(shù)據(jù)

圖11對(duì)應(yīng)于表12中所示的結(jié)果。

表13.hdac6測(cè)定-化合物1對(duì)hdac6活性的作用的數(shù)據(jù)

圖12對(duì)應(yīng)于表13中所示的結(jié)果。

saha對(duì)hdac抑制的作用的結(jié)果

saha是hdac抑制劑(hdaci)。其起到hdac陽(yáng)性對(duì)照的作用。圖13-15顯示saha對(duì)hdachdac1、hdac3/ncor2和hdac6的抑制性作用。saha同樣抑制hdac5fl、hdac7、hdac8、hdac10、sirtuin1和sirtuin2(參見(jiàn)表1)。

在體外測(cè)定中，化合物1具有對(duì)cbp、pcaf和gcn5的活性?；衔?對(duì)cbp、pcaf和gcn5的ec50分別為2.75μμ、29.04μμ和49.31μμ。此外，化合物1沒(méi)有干擾p300和hdac活性(hdac1、3、5、6、7、8、10、11和sirt1-2)。如圖16中所示的，化合物1同樣增加p300活性

實(shí)施例4–化合物1的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)

測(cè)定化合物1藥物動(dòng)力學(xué)(pk)和腦血屏障(bbb)滲透能力。在以20mg/kg腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)施用于balb/c小鼠之后，通過(guò)lc-ms/ms測(cè)定血漿濃度和腦濃度。表14中的數(shù)據(jù)表明化合物1在腦中被迅速吸收(t最大值在15分鐘)。

表14.化合物1的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

*比例＝腦/血漿

cbp、pcaf和gcn5的yf2ec50分別是：2.75μμ、29.04μμ和49.31μμ

腦中化合物1的量比血漿中更高，具有腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)施用的分別為8.2和10.8的auc0-t比例?；衔?在腦中和血漿中的消除半衰期為～40分鐘。腦中和血漿中的t最大值值是相似的，表明化合物1向腦中的分布同樣迅速。此外，在急性毒性實(shí)驗(yàn)中，化合物1直到300mg/kg(腹膜內(nèi))并未誘導(dǎo)任何副作用。

口服給藥的化合物1的藥代動(dòng)力學(xué)特性示于圖17和表15中，并且表明腦中化合物1的量比血漿中高。

表15.化合物1的口服藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

實(shí)施例5-情境性恐懼條件反射實(shí)驗(yàn)

進(jìn)行情境性恐懼條件反射以測(cè)定化合物1是否能夠增強(qiáng)記憶。這一類型的認(rèn)知測(cè)試比需要多天的訓(xùn)練和測(cè)試的其他行為任務(wù)快得多(jclininvest，2004.114(11):1624-34；通過(guò)引用全文并入本文)。條件反射室在隔音盒中。透明的plexiglas窗使得實(shí)驗(yàn)者可以用放置在三腳架上并且與freezeframe軟件(medass.inc.)連接的照相機(jī)拍攝小鼠行為。為了避免背景白噪音(72db)，單個(gè)計(jì)算機(jī)風(fēng)扇被安裝在隔音室的一側(cè)。條件反射室具有36條安裝的沖擊網(wǎng)格地板。地板是可移除的并且在每個(gè)實(shí)驗(yàn)受試者之后，用75％酒精清洗并且之后用水清洗。每次僅一個(gè)動(dòng)物出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)房間中。

訓(xùn)練由2.5分鐘的適應(yīng)環(huán)境時(shí)期、之后的將純音(2800hz,85db,30s)與共同終止(coterminating)足底電擊(0.4ma，1s)的配對(duì)的弱訓(xùn)練程序，將純音(2800hz,85db,30s)與共同終止(coterminating)足底電擊(0.8ma，2s)的配對(duì)的強(qiáng)訓(xùn)練程序組成。在最后的配對(duì)結(jié)束后將小鼠保留在所述室中另外30秒，之后將它們返回它們的飼養(yǎng)籠。在條件反射環(huán)境中替換動(dòng)物5分鐘時(shí)間的訓(xùn)練后24小時(shí)測(cè)定情境性恐懼條件反射，期間記錄僵直(除了呼吸之外的不動(dòng))的發(fā)生率。

較強(qiáng)的訓(xùn)練程序?qū)е聦W(xué)習(xí)飽和，由此僵直/記憶達(dá)到其最大值(wt動(dòng)物中的～25-30％)，甚至在足底電擊增加時(shí)。在另外的方面，較弱的訓(xùn)練程序?qū)е律俚枚嗟慕┲?～15％)，這允許在記憶有增加的情況下更多的僵直。當(dāng)使用較弱的程序時(shí)，化合物1作為記憶增強(qiáng)劑起作用。

僵直行為，定義為除了必需的呼吸之外所有活動(dòng)都不存在，使用freezeview軟件來(lái)計(jì)算。

為了評(píng)估情境性恐懼條件反射，在訓(xùn)練之后24小時(shí)在訓(xùn)練小鼠的室中測(cè)量僵直5分鐘(連續(xù)地)。為了評(píng)估所反映的恐懼學(xué)習(xí)，在情境性測(cè)試之后，將小鼠放置在新的環(huán)境中(具有平滑平板地板的三角籠)2分鐘(cs測(cè)試前)，之后它們被暴露于cs3分鐘(cs測(cè)試)并且測(cè)量僵直。電擊的感知覺(jué)通過(guò)閾值測(cè)定確定。一系列單足底電擊被遞送至放置在同樣的電氣化網(wǎng)格中以便進(jìn)行恐懼條件反射。起初，1秒遞送0.1mv的電擊，并且就畏縮、跳躍和發(fā)音評(píng)估行為。以30秒間隔，將電擊強(qiáng)度以0.1mv增加至0.7mv，然后以30秒間隔以0.1mv的增量回到0mv。通過(guò)將每個(gè)動(dòng)物顯示出響應(yīng)于足底電擊的行為時(shí)的沖擊強(qiáng)度平均將發(fā)聲、畏縮和之后跳躍的閾值定量。

媒介物wt和化合物1處理的小鼠在遞送足底電擊之前顯示相似的僵直響應(yīng)(基線)(圖18)。然而，5和20mg/kg化合物1處理的小鼠在訓(xùn)練程序之后24小時(shí)僵直幾乎是wt媒介物小鼠的兩倍(純音與0.35ma足底電擊的單配對(duì))。最終在不同實(shí)驗(yàn)設(shè)置的不同組小鼠中沒(méi)有觀察到差異，其中我們測(cè)定了媒介物或化合物1(yf2)單獨(dú)存在時(shí)的感覺(jué)閾值(圖19)。

基于在恐懼條件反射測(cè)試期間獲得的結(jié)果，決定測(cè)定血液中化合物1的動(dòng)力學(xué)以核實(shí)處理的最佳時(shí)間點(diǎn)。出于這一目的，化合物1(20mg/kg，腹膜內(nèi))被施用并且之后在不同的時(shí)間點(diǎn)從尾部采集血液。化合物1的動(dòng)力學(xué)顯示在注射后約30分鐘的峰值(圖20)。

化合物1，本發(fā)明的組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(hat)激活劑，是未患有神經(jīng)退行性疾病的受試者中增強(qiáng)記憶和認(rèn)知的良好的藥物候選。當(dāng)化合物1(yf2)施用于小鼠(腹膜內(nèi))時(shí)，蛋白質(zhì)印跡顯示其不僅穿過(guò)bbb，還增加了海馬體中組蛋白3乙?；乃?圖21)。

之后測(cè)試化合物1以確定小鼠海馬體中組蛋白乙?；脑黾?。以20mg/kg腹膜內(nèi)施用化合物，30分鐘之后將小鼠處死并且將海馬體移出并且迅速冷凍以便用于wb分析。如圖22中所示，化合物1(yf2)增加已顯示參與記憶形成組蛋白賴氨酸的乙?；?h3k4、h3k9、h3k14、h4k5、h4k8、h4k12、h4k16和h2b)(neuron,2004,42(6):947-59；science328(5979):753-6；每一篇通過(guò)引用全文并入本文)

實(shí)施例6–化合物1挽回αβ誘導(dǎo)的bdnf水平降低。

化合物1增加bdnf，活性依賴性可塑性和記憶所必須的一種關(guān)鍵蛋白，的水平。cbp顯示促進(jìn)對(duì)活性依賴性可塑性和記憶來(lái)說(shuō)所必需的關(guān)鍵蛋白的轉(zhuǎn)錄(korzus,e.,m.g.rosenfeld和m.mayford,cbphistoneacetyltransferaseactivityisacriticalcomponentofmemoryconsolidation.neuron,2004.42(6):p.961-72；通過(guò)引用全文并入本文)，例如來(lái)源于腦的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(bdnf)，其已知有助于突觸可塑性和記憶形成(cowansage,k.k.,j.e.ledoux和m.h.monfils，brain-derivedneurotrophicfactor:adynamicgatekeeperofneuralplasticity.currentmolecularpharmacology,2010.3(1):第12-29頁(yè)；caccamo,a等人，cbpgenetransferincreasesbdnflevelsandameliorateslearningandmemorydeficitsinamousemodelofalzheimer'sdisease.procnatlacadsciusa,2010.107(52):第22687-92頁(yè)；每一篇通過(guò)引用全文并入本文)。有趣的是，已經(jīng)提出bdnf在ad發(fā)病機(jī)制中起作用，在ad患者的腦中和ad動(dòng)物模型中檢測(cè)到減少的bdnf水平(hock,c等人，region-specificneurotrophinimbalancesinalzheimerdisease:decreasedlevelsofbrain-derivedneurotrophicfactorandincreasedlevelsofnervegrowthfactorinhippocampusandcorticalareas.archivesofneurology,2000.57(6):第846-51頁(yè)；connor,b.等人，brain-derivedneurotrophicfactorisreducedinalzheimer'sdisease.brainresearch.molecularbrainresearch,1997.49(1-2):第71-81頁(yè)；garzon,d.j.和m.fahnestock,oligomericamyloiddecreasesbasallevelsofbrain-derivedneurotrophicfactor(bdnf)mrnaviaspecificdownregulationofbdnftranscriptsivandvindifferentiatedhumanneuroblastomacells.thejournalofneuroscience:theofficialjournalofthesocietyforneuroscience,2007.27(10):第2628-35頁(yè)，每一篇通過(guò)引用全文并入本文)。因此，對(duì)化合物1效用的初步研究被延伸至bdnf。與媒介物輸注的動(dòng)物相比較，測(cè)量輸注αβ的小鼠的海馬體中的bdnf水平。與ad患者的腦中和ad動(dòng)物模型中的bdnf的水平降低相一致，輸注αβ之后發(fā)現(xiàn)bdnf水平的降低(圖23)。這一作用被化合物1挽回(20mg/kg，腹膜內(nèi)，收集海馬體之前90分鐘，圖23)。有趣的是化合物1增加輸注媒介物的小鼠中的bdnf水平(圖23)，與刺激記憶形成相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄機(jī)制之后bdnf的基礎(chǔ)水平增加的觀察一致(arancio,o.和m.v.chao,neurotrophins,synapticplasticityanddementia.currentopinioninneurobiology,2007.17(3):第325-30頁(yè)；其通過(guò)引用全文并入本文)。

***

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到或者能夠確定使用不止一種常規(guī)實(shí)驗(yàn)、本文描述的特定物質(zhì)和程序的多個(gè)等價(jià)物。這些等價(jià)物被認(rèn)為在本發(fā)明的范圍內(nèi)并且被下文權(quán)利要求所覆蓋。

盡管本發(fā)明已經(jīng)在上文示例性實(shí)施方案中描述并且說(shuō)明，但是應(yīng)當(dāng)理解的是本公開(kāi)內(nèi)容僅以示例性方式進(jìn)行并且可進(jìn)行實(shí)行本發(fā)明的細(xì)節(jié)上的多種變化而不背離僅由下文權(quán)利要求所限制的本發(fā)明的精神和范圍。所公開(kāi)的實(shí)施方案的特征可以不同方式組合和排列以獲得本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)的另外的實(shí)施方案。

本說(shuō)明書(shū)還包括下列內(nèi)容：

1.一種在受試者中增強(qiáng)學(xué)習(xí)或記憶的方法，其包括向所述受試者施用治療上有效的量的化合物(i)

(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽。

2.如實(shí)施方式1所述的方法，其中所述受試者未患有神經(jīng)退行性病況或疾病。

3.如實(shí)施方式2所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性病況或疾病選自由腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥(ald)、酒精中毒、亞歷山大病、阿耳珀病、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(路格里克氏病或als)、共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張、巴藤病(斯皮爾梅伊爾-沃格特-休格連-巴藤病)、牛海綿樣腦病(bse)、卡納萬(wàn)病、科凱恩綜合癥、皮質(zhì)基底節(jié)退化癥、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、家族性致死性失眠癥、額顳葉變性、亨廷頓氏舞蹈病、hiv相關(guān)性癡呆、肯尼迪氏病、克臘比病、路易體癡呆、神經(jīng)疏螺旋體病、馬查多-約瑟夫病(脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)3型)、多系統(tǒng)萎縮癥、多發(fā)性硬化、發(fā)作性睡病、尼曼皮克氏病、帕金森病、佩梅病、皮克氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化、朊病毒病、進(jìn)行性核上性麻痹、雷特綜合癥、tau蛋白陽(yáng)性額顳癡呆、tau蛋白陰性額顳癡呆、雷弗素姆病、桑德霍夫病、謝爾德病、惡性貧血繼發(fā)性脊髓亞急性聯(lián)合變性、脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)(具有不同特征的多種類型)、脊髓性肌萎縮、斯-里-奧三氏癥、脊髓癆和中毒性腦病所組成的組。

4.如實(shí)施方式2或3所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性病況或疾病是阿爾茨海默病。

5.如實(shí)施方式1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述受試者是哺乳動(dòng)物。

6.如實(shí)施方式1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述治療上有效的量是至少約1mg/kg體重、至少約2mg/kg體重、至少約3mg/kg體重、至少約4mg/kg體重、至少約5mg/kg體重、至少約6mg/kg體重、至少約7mg/kg體重、至少約8mg/kg體重、至少約9mg/kg體重、至少約10mg/kg體重、至少約15mg/kg體重、至少約20mg/kg體重、至少約25mg/kg體重、至少約30mg/kg體重、至少約40mg/kg體重、至少約50mg/kg體重、至少約75mg/kg體重或至少約100mg/kg體重。

7.一種在受試者中增加組蛋白乙?；椒ǎ浒ㄏ蛩鍪茉囌呤┯没衔?i)

(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽。

8.如實(shí)施方式7所述的方法，其中組蛋白乙酰化包括組蛋白h2b、h3、h4或其任意組合的乙?；?。

9.如實(shí)施方式7或8所述的方法，其中組蛋白乙?；ńM蛋白賴氨酸殘基h3k4、h3k9、h3k14、h4k5、h4k8、h4k12、h4k16或其任意組合的乙?；?。

10.如實(shí)施方式7-9中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述受試者的學(xué)習(xí)或記憶被增強(qiáng)。

11.如實(shí)施方式7-10中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述受試者并未患有神經(jīng)退行性病況或疾病。

12.如實(shí)施方式11所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性病況或疾病選自由腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥(ald)、酒精中毒、亞歷山大病、阿耳珀病、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(路格里克氏病或als)、共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張、巴藤病(斯皮爾梅伊爾-沃格特-休格連-巴藤病)、牛海綿樣腦病(bse)、卡納萬(wàn)病、科凱恩綜合癥、皮質(zhì)基底節(jié)退化癥、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、家族性致死性失眠癥、額顳葉變性、亨廷頓氏舞蹈病、hiv相關(guān)性癡呆、肯尼迪氏病、克臘比病、路易體癡呆、神經(jīng)疏螺旋體病、馬查多-約瑟夫病(脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)3型)、多系統(tǒng)萎縮癥、多發(fā)性硬化、發(fā)作性睡病、尼曼皮克氏病、帕金森病、佩梅病、皮克氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化、朊病毒病、進(jìn)行性核上性麻痹、雷特綜合癥、tau蛋白陽(yáng)性額顳癡呆、tau蛋白陰性額顳癡呆、雷弗素姆病、桑德霍夫病、謝爾德病、惡性貧血繼發(fā)性脊髓亞急性聯(lián)合變性、脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)(具有不同特征的多種類型)、脊髓性肌萎縮、斯-里-奧三氏癥、脊髓癆和中毒性腦病所組成的組。

13.如實(shí)施方式11或12所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性病況或疾病是阿爾茨海默病。

14.一種在受試者中提高記憶保持的方法，其包括向所述受試者施用治療上有效的量的化合物(i)

(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽。

15.如實(shí)施方式14所述的方法，其中所述受試者未患有神經(jīng)退行性病況或疾病。

16.如實(shí)施方式15所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性病況或疾病選自由腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥(ald)、酒精中毒、亞歷山大病、阿耳珀病、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(路格里克氏病或als)、共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張、巴藤病(斯皮爾梅伊爾-沃格特-休格連-巴藤病)、牛海綿樣腦病(bse)、卡納萬(wàn)病、科凱恩綜合癥、皮質(zhì)基底節(jié)退化癥、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、家族性致死性失眠癥、額顳葉變性、亨廷頓氏舞蹈病、hiv相關(guān)性癡呆、肯尼迪氏病、克臘比病、路易體癡呆、神經(jīng)疏螺旋體病、馬查多-約瑟夫病(脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)3型)、多系統(tǒng)萎縮癥、多發(fā)性硬化、發(fā)作性睡病、尼曼皮克氏病、帕金森病、佩梅病、皮克氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化、朊病毒病、進(jìn)行性核上性麻痹、雷特綜合癥、tau蛋白陽(yáng)性額顳癡呆、tau蛋白陰性額顳癡呆、雷弗素姆病、桑德霍夫病、謝爾德病、惡性貧血繼發(fā)性脊髓亞急性聯(lián)合變性、脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)(具有不同特征的多種類型)、脊髓性肌萎縮、斯-里-奧三氏癥、脊髓癆和中毒性腦病所組成的組。

17.如實(shí)施方式15或16所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性病況或疾病是阿爾茨海默病。

18.如實(shí)施方式14-17中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述受試者是哺乳動(dòng)物。

19.如實(shí)施方式14-18中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述治療上有效的量是至少約1mg/kg體重、至少約2mg/kg體重、至少約3mg/kg體重、至少約4mg/kg體重、至少約5mg/kg體重、至少約6mg/kg體重、至少約7mg/kg體重、至少約8mg/kg體重、至少約9mg/kg體重、至少約10mg/kg體重、至少約15mg/kg體重、至少約20mg/kg體重、至少約25mg/kg體重、至少約30mg/kg體重、至少約40mg/kg體重、至少約50mg/kg體重、至少約75mg/kg體重或至少約100mg/kg體重。

20.一種在受試者中治療記憶喪失或無(wú)學(xué)習(xí)能力的方法，其包括向所述受試者施用治療上有效的量的化合物(i)

(i)或其藥學(xué)上可接受的鹽。

21.如實(shí)施方式20所述的方法，其中所述受試者未患有神經(jīng)退行性病況或疾病。

22.如實(shí)施方式21所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性病況或疾病選自由腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥(ald)、酒精中毒、亞歷山大病、阿耳珀病、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(路格里克氏病或als)、共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張、巴藤病(斯皮爾梅伊爾-沃格特-休格連-巴藤病)、牛海綿樣腦病(bse)、卡納萬(wàn)病、科凱恩綜合癥、皮質(zhì)基底節(jié)退化癥、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、家族性致死性失眠癥、額顳葉變性、亨廷頓氏舞蹈病、hiv相關(guān)性癡呆、肯尼迪氏病、克臘比病、路易體癡呆、神經(jīng)疏螺旋體病、馬查多-約瑟夫病(脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)3型)、多系統(tǒng)萎縮癥、多發(fā)性硬化、發(fā)作性睡病、尼曼皮克氏病、帕金森病、佩梅病、皮克氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化、朊病毒病、進(jìn)行性核上性麻痹、雷特綜合癥、tau蛋白陽(yáng)性額顳癡呆、tau蛋白陰性額顳癡呆、雷弗素姆病、桑德霍夫病、謝爾德病、惡性貧血繼發(fā)性脊髓亞急性聯(lián)合變性、脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)(具有不同特征的多種類型)、脊髓性肌萎縮、斯-里-奧三氏癥、脊髓癆和中毒性腦病所組成的組。

23.如實(shí)施方式21或22所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性病況或疾病是阿爾茨海默病。

24.如實(shí)施方式20-23中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述受試者是哺乳動(dòng)物。

25.如實(shí)施方式20-24中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述治療上有效的量是至少約1mg/kg體重、至少約2mg/kg體重、至少約3mg/kg體重、至少約4mg/kg體重、至少約5mg/kg體重、至少約6mg/kg體重、至少約7mg/kg體重、至少約8mg/kg體重、至少約9mg/kg體重、至少約10mg/kg體重、至少約15mg/kg體重、至少約20mg/kg體重、至少約25mg/kg體重、至少約30mg/kg體重、至少約40mg/kg體重、至少約50mg/kg體重、至少約75mg/kg體重或至少約100mg/kg體重。

?序列表

<110>紐約市哥倫比亞大學(xué)理事會(huì)

<120>組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶激活劑的用途

<130>19240.931wo1

<140>pct/us2012/041907

<141>2012-06-11

<150>61/495,495

<151>2011-06-10

<160>6

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>419

<212>prt

<213>智人

<400>1

metalaglypheglyalametglulyspheleuvalglutyrlysser

151015

alavalglulyslysleualaglutyrlyscysasnthrasnthrala

202530

ilegluleulysleuvalargpheprogluaspleugluasnaspile

354045

argthrphepheproglutyrthrhisglnleupheglyaspaspglu

505560

thralapheglytyrlysglyleulysileleuleutyrtyrileala

65707580

glyserleuserthrmetpheargvalglutyralaserlysvalasp

859095

gluasnpheaspcysvalglualaaspaspvalgluglylysilearg

100105110

glnileileproproglyphecysthrasnthrasnasppheleuser

115120125

leuleuglulysgluvalaspphelyspropheglythrleuleuhis

130135140

thrtyrservalleuserprothrglyglygluasnphethrphegln

145150155160

iletyrlysalaaspmetthrcysargglypheargglutyrhisglu

165170175

argleuglnthrpheleumettrppheilegluthralaserpheile

180185190

aspvalaspaspgluargtrphistyrpheleuvalpheglulystyr

195200205

asnlysaspglyalathrleuphealathrvalglytyrmetthrval

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