本發(fā)明涉及中藥軟膏劑，具體為一種治療皮膚病的虎耳草軟膏劑及制備方法。

背景技術(shù)：

濕疹發(fā)病率高，病因復(fù)雜，表現(xiàn)多樣，是皮膚科最常見的而又頑固難治的疾病。臨床上主要是對癥治療，予以抗過敏，抗炎，止癢等治療，目前對于濕疹的外用藥物多為激素類軟膏，雖然其抗過敏、止癢、抑制炎癥等效果較好，但長期使用易引起許多不良反應(yīng)，如皮膚萎縮、毛孔增大和色素沉著，局部抵抗力降低，令病情加重，甚至導(dǎo)致藥物依賴性皮炎，一直以來飽受爭議。

中草藥有著悠久的臨床應(yīng)用歷史，實(shí)踐證明，中醫(yī)藥在治療濕疹上有一定優(yōu)勢，采用傳統(tǒng)中醫(yī)治療濕疹療效確切，且治愈后不易復(fù)發(fā)。因此，運(yùn)用現(xiàn)代技術(shù)研制開發(fā)具有安全、有效的中藥新藥，對濕疹等皮膚疾病的治療，具有重要的臨床意義。

虎耳草( Saxifraga stolonifera (L.) Meerb.)為虎耳草科( Saxifragaceae )虎耳草屬多年生常綠草本植物，目前收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版，是貴州特色苗藥材，資源豐富。虎耳草全草入藥，具有清熱解毒、祛濕消腫、抑菌消炎的功效。歷代醫(yī)家在臨床上常用于治療濕疹、瘡腫及中耳炎等，起到很好的療效。國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道虎耳草的主要成分為多元酚、黃酮、有機(jī)酸等成分，現(xiàn)代藥理研究表明黃酮具有抗氧化、抗癌、抗炎抑菌等多種生物活性及藥理作用，對人類的衰老、腫瘤和炎癥疾病的防治具有重要意義。鞣質(zhì)是植物界中普遍存在的一類次生代謝產(chǎn)物，虎耳草中另一有效成分多酚類，具有抗菌、抗病毒和抗腫瘤的作用，近年來越來越多的研究表明鞣質(zhì)具有清除生物體內(nèi)過剩的自由基，維護(hù)細(xì)胞膜的流動(dòng)和蛋白質(zhì)的構(gòu)象，從而在抑制脂質(zhì)過氧化及心血管病、抗腫瘤、抗突變、抗衰老等方面有獨(dú)到功效。故鞣質(zhì)是天然的抗氧化劑，有收斂、止血、抗炎及抗菌的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種治療皮膚病的虎耳草軟膏劑及制備方法。

為達(dá)到上述目的，采用的技術(shù)方案為：

一種治療皮膚病的虎耳草軟膏劑，其包含的組分重量比為：虎耳草0.5，凡士林0.1，硬脂酸1.2，單硬脂酸甘油酯0.5，液體石蠟0.6，三乙醇胺0.04，羊毛脂0.5，甘油0.75，氮酮0.2，羥苯乙酯0.03以及適量的水。

上述虎耳草軟膏劑的制備方法為：

1）制備水相劑，先將虎耳草浸膏粉末用適量水溶解，再加入甘油、三乙醇胺、羥苯乙酯和氮酮，混合攪拌加熱至 75℃；

2）制備油相劑，將凡士林、硬脂酸、液體石蠟、羊毛脂和單硬脂酸甘油酯混合攪拌加熱至 75℃；

3）制備軟膏劑，保持75℃和攪拌狀態(tài)，將上述2）步驟制備的油相劑緩慢加入至1）步驟制備的水相劑中，待反應(yīng)充分，繼續(xù)攪拌混合液并使其緩慢冷凝，再補(bǔ)充適量水，調(diào)勻膏劑，即得虎耳草軟膏劑。

進(jìn)一步，所述虎耳草浸膏粉末是虎耳草粉末的乙醇提取浸膏經(jīng)干燥、粉碎、過100目篩粉末。

進(jìn)一步，所述加熱方式為水浴加熱。

中醫(yī)藥對皮炎濕疹的治療獨(dú)具優(yōu)勢，能通過多種途徑作用，有效祛風(fēng)利濕、清熱潤燥，抗過敏，且講究諸藥協(xié)同，重視整體平衡，因而療效好，副作用少。本制劑由單味藥材虎耳草加適宜的基質(zhì)制備而成，副作用少，療效顯著，且對于單方中藥制劑，有效成分更易于控制和檢測。同時(shí)，通過皮膚給藥，不僅可以避免口服給藥的胃腸道刺激，降低全身的血藥濃度，減少毒副作用，而且使用方便，提高了患者的順應(yīng)性，有望為皮炎濕疹的臨床治療提供一種新的制劑。

前期研究工作發(fā)現(xiàn)，虎耳草乙醇提取物具有較好的抑菌作用，且通過初步藥效學(xué)試驗(yàn)證實(shí)其有一定的抗炎作用。這無疑為進(jìn)一步研究開發(fā)濕疹藥物提供了可能。局部給藥不僅可以避免口服給藥對胃腸道的刺激，減少血液中的藥物濃度，減少副作用，而且可以提高患者的依從性。因此本發(fā)明以前期研究工作為基礎(chǔ)，擬選用虎耳草為原料，采用適當(dāng)溶劑和方法進(jìn)行原藥提取，提取物濃縮，用石油醚萃取除去親酯性雜質(zhì)后，用乙酸乙酯萃取，同時(shí)利用紫外、HPLC 等方法測定主要成分總黃酮和鞣質(zhì)含量，優(yōu)選提取工藝，利用活性成分跟蹤法，將抗菌活性有效部位加入適宜基質(zhì)和輔料，制備成軟膏劑，再進(jìn)行虎耳草軟膏劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)評價(jià)、藥效學(xué)評價(jià)等的相關(guān)研究，在治療皮膚病臨床應(yīng)用上具有較好效果，無毒副作用和不良反應(yīng)。

附圖說明

圖1為小鼠慢性皮炎濕疹模型實(shí)驗(yàn)的耳厚度圖。

圖2為小鼠慢性皮炎濕疹模型實(shí)驗(yàn)的耳腫脹圖。

圖3為二硝基氯苯（DNCB）誘導(dǎo)的濕疹模型小鼠體重圖。

圖4為為ELISA檢測血清細(xì)胞因子IL-6圖。

圖5為為ELISA檢測血清細(xì)胞因子IL-4圖。

圖6為ELISA檢測血清細(xì)胞因子IL-2圖。

圖7為ELISA檢測血清細(xì)胞因子TNF圖。

圖8為免疫器官重量實(shí)驗(yàn)圖。

圖9為免疫器官實(shí)驗(yàn)圖片。

圖10為光學(xué)顯微鏡下的耳部組織病理學(xué)檢查圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步介紹本發(fā)明，但本發(fā)明不僅限于下述實(shí)施例，可以預(yù)見本領(lǐng)域技術(shù)人員在結(jié)合現(xiàn)有技術(shù)的情況下，實(shí)施情況可能產(chǎn)生種種變化。

一種治療皮膚病的虎耳草軟膏劑，其包含的組分重量比為：虎耳草0.5，凡士林0.1，硬脂酸1.2，單硬脂酸甘油酯0.5，液體石蠟0.6，三乙醇胺0.04，羊毛脂0.5，甘油0.75，氮酮0.2，羥苯乙酯0.03以及適量的水。

制備方法為：

1）制備水相劑，虎耳草粉末采用乙醇提取，得浸膏經(jīng)干燥、粉碎、過100目篩制備得虎耳草浸膏粉末。并將虎耳草浸膏粉末用適量水溶解，再加入甘油、三乙醇胺、羥苯乙酯和氮酮，混合攪拌和水浴加熱至 75℃。

2）制備油相劑，將白凡士林、硬脂酸、液體石蠟、羊毛脂和單硬脂酸甘油酯混合攪拌，水浴加熱至 75℃。

3）制備軟膏劑，保持75℃和攪拌狀態(tài)，將上述2）步驟制備的油相劑緩慢加入至1）步驟制備的水相劑中，待反應(yīng)充分，繼續(xù)攪拌混合液并使其緩慢冷凝，再補(bǔ)充適量水，調(diào)勻膏劑，即得虎耳草軟膏劑。

下面為本發(fā)明制備的虎耳草軟膏劑的實(shí)驗(yàn)對比。

（1）對于二甲苯致小鼠耳廓腫脹的抗炎試驗(yàn)：

虎耳草軟膏劑對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（）

與模型對照組比較，除虎耳草軟膏低劑量組外，各給藥組均可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，皮炎平組（激素類）作用效果最好，虎耳草軟膏中、高劑量組腫脹度抑制率強(qiáng)于陽性對照藥丹皮酚組。

（2）大鼠角叉菜膠性足腫脹試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

由表可知，與模型組比較，在致炎1h后，各給藥組均可顯著抑制大鼠足腫脹度（P<0.01)，致炎2h、4h后，地塞米松和虎耳草軟膏高劑量組有明顯抑制作用，其余各組無顯著作用。

（3）虎耳草軟膏對豚鼠瘙癢模型的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

模型組與正常對照組比較，模型組出現(xiàn)豚鼠抓撓現(xiàn)象，而正常對照組無此現(xiàn)象，說明造模成功，而陰性對照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果豚鼠無抓撓現(xiàn)象，說明虎耳草軟膏對豚鼠沒有毒副作用，用藥安全。表結(jié)果表明，虎耳草軟膏低劑量組無顯著差異，虎耳草軟膏中、高劑量均可明顯提高致癢劑磷酸組織胺對豚鼠的致癢閾(P<0.05)，且呈劑量依賴性；丹皮酚和皮炎平也可提高豚鼠的致癢閾。

（4）小鼠慢性皮炎-濕疹模型的耳厚度和腫脹度實(shí)驗(yàn)：

如圖1和圖2，Norm+S4為陰性對照組；Norm為正常對照組小鼠；DNCB為模型組；DEX為醋酸地塞米松組小鼠；PA為陽性對照組丹皮酚；S1，S2，S4分別代表不同濃度的虎耳草軟膏。a為耳厚度圖，致敏前和每次激發(fā)后24h小時(shí)用游標(biāo)卡尺測量；b為耳腫脹，腫脹度=右耳重量—左耳重量，數(shù)據(jù)采用均值 標(biāo)準(zhǔn)誤，P小于0.05說明有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

從圖中可以看出，各給藥組均有作用，且虎耳草軟膏中、高劑量組效果均強(qiáng)于陽性對照藥丹皮酚軟膏組。

（5）二硝基氯苯（DNCB）誘導(dǎo)的濕疹模型小鼠體重實(shí)驗(yàn)：

如圖3，致敏前和每次激發(fā)后24h稱量小鼠體重，從圖中可以明顯看出，與正常組小鼠比較，皮炎平治療的小鼠體重增長緩慢，說明其對小鼠產(chǎn)生了不良影響，而本制劑未出現(xiàn)這一情況，說明其使用安全無副作用。

（6）DNCB誘導(dǎo)的小鼠血清細(xì)胞因子水平實(shí)驗(yàn)：

如圖4、圖5、圖6和圖7，通過ELISA檢測血清細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α，IL-6和IL-4，發(fā)現(xiàn)模型組TNF-α和IL-2水平明顯下降，IFN-γ水平太低無法檢測，而IL-4和IL-6水平增加，呈典型的Th2免疫反應(yīng)；皮炎平組和虎耳草軟膏高劑量組改善了這一狀況。

（7）免疫器官重量實(shí)驗(yàn)：

如圖8和圖9，A-陰性對照組；B-正常對照組；C-模型組；D-陽性對照組（地塞米松）；E-陽性對照組（丹皮酚）；F-虎耳草軟膏低劑量組；G-虎耳草軟膏中劑量組；H-虎耳草軟膏高劑量組。胸腺及脾臟是機(jī)體重要的免疫器官，其中脾臟為各類免疫細(xì)胞的居住場所，而胸腺是T 淋巴細(xì)胞分化成熟的場所，B淋巴細(xì)胞在脾臟中所占比例相對較大，DNCB誘導(dǎo)濕疹模型小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)明顯增加(P＜0.05)，說明免疫器官胸腺、脾臟參與了濕疹的病理過程，而虎耳草軟膏能改善濕疹引起的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)變化。

（8）光學(xué)顯微鏡下的耳部組織病理學(xué)檢查（HE染色，×400）：

如圖10，A-正常對照組；B-模型組；C-陽性對照組（地塞米松）；D-陽性對照組（丹皮酚）；E-虎耳草軟膏低劑量組；F-虎耳草軟膏中劑量組；G-虎耳草軟膏高劑量組；H-陰性對照組。從圖中可看出模型組耳部組織角化過度，真皮層大量炎癥細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管擴(kuò)張，細(xì)胞核固縮、變性、壞死；除虎耳草軟膏低劑量組，各給藥組顯示上皮組織恢復(fù)到正常的形態(tài)組織。

反復(fù)應(yīng)用半抗原DNCB，虎耳草軟膏、皮炎平乳膏和丹皮酚乳膏均能抑制濕疹小鼠皮膚病變的發(fā)展。抑制耳部腫脹程度上，皮炎平乳膏與虎耳草軟膏比丹皮酚乳膏療效更好。組織病理學(xué)分析表明，皮炎平乳膏表現(xiàn)出相對較好的效果在抑制細(xì)胞浸潤方面與虎耳草軟膏高劑量組比較。同時(shí)，不同濃度的虎耳草軟膏對濕疹小鼠的治療效果不同，藥物濃度呈劑量依賴性。在藥效學(xué)研究的基礎(chǔ)上，我們探討了虎耳草軟膏對濕疹小鼠的抗炎機(jī)制，通過ELISA檢測血清細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α，IL-6和IL-4，發(fā)現(xiàn)TNF-α和IL-2水平明顯下降，而IL-4和IL-6水平增加，呈典型的Th2免疫反應(yīng)?？傊?，本研究表明，虎耳草軟膏局部給藥能抑制濕疹小鼠皮膚病變的發(fā)展，對DNCB引起的耳部濕疹樣皮損有改善治療，能改善皮膚嚴(yán)重程度評分及血清細(xì)胞因子水平。