本發(fā)明屬于中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種銀杏葉提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
銀杏(Ginkgo biloba L.)，為銀杏科、銀杏屬落葉喬木。銀杏出現(xiàn)在幾億年前，是第四紀冰川運動后遺留下來的裸子植物中最古老的孑遺植物，現(xiàn)存活在世的銀杏稀少而分散，上百歲的老樹已不多見，和它同綱的所有其他植物皆已滅絕，所以銀杏又有活化石的美稱。本草綱目中記載銀杏具有“斂肺平喘，止遺尿、白帶”的功效。
銀杏葉的主要有效成分為黃酮類化合物和萜內(nèi)酯。銀杏葉中黃酮類化合物含量較高，主要含有黃酮苷類，黃酮醇苷，雙黃酮苷元，黃酮苷元等多種黃酮類成分，其中黃酮苷和黃酮醇苷包括槲皮素、山奈素、異鼠李素與葡萄糖或鼠李糖的結(jié)合物。銀杏葉中萜內(nèi)酯為含有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的萜類，包括銀杏內(nèi)酯A、B、C、J、M和白果內(nèi)酯。銀杏葉提取物能夠作用于心腦和外周末梢血管系統(tǒng)，改善末梢血液循環(huán)和促進血液運行，具有活血化瘀、通絡(luò)舒脈功效，臨床用于治療血瘀型腦動脈硬化引起的眩暈、冠心病、心絞痛等。
另外，銀杏葉中還含有烷基酚酸類化合物，由銀杏酸、白果酚和白果二酚組成，其中銀杏酸具有細胞毒性、胚胎毒性、致敏及突變作用，當銀杏酸濃度達到一定程度后會使大鼠肝細胞存活率大大降低。因此，歐美藥典標準為銀杏葉提取物中銀杏酸含量小于5ppm，中國藥典標準為銀杏葉提取物中銀杏酸含量小于10ppm。
目前，關(guān)于銀杏葉提取物的研究多為低銀杏酚酸銀杏葉提取物的提取方法。中國專利CN103446195B公開了銀杏葉提取物的制備方法，其步驟包括：使用HCl溶液進行水提，在酸性環(huán)境下迅速破壞銀杏葉的細胞膜和細胞壁，將銀杏葉中的有效成分充分地溶解于提取液中，然后經(jīng)大孔吸附樹脂純化，再經(jīng)萃取，干燥即得銀杏葉提取物。該方法用酸法提取，導(dǎo)致銀杏葉中有效成分分解，降低藥效。中國專利CN102727538B公開了一種從銀杏葉中提取銀杏黃酮、銀杏內(nèi)酯和銀杏酚酸的工藝，其步驟包括：對銀杏葉進行前期處理；進行超聲波裝置提??；減壓濃縮；進入大孔樹脂處理；收集洗脫液；檢測提取物；將經(jīng)上述步驟提取的提取物干燥儲存。該法采用超聲波提取，對設(shè)備要求較高，且長期處于超聲波環(huán)境，對人身體也有所損傷。中國專利CN1315481C公開了一種銀杏葉提取物及其提取方法，其步驟包括：將干燥銀杏葉粉碎至10-20目，用濃度為70-85％乙醇回流提取多次，過濾，濃縮至稠膏；將上述稠膏加入濃度15-25％乙醇中，回流提取，過濾，沉淀，次過程處理2次，在濾液中加入濃度為0.5-1.5％殼聚糖溶液作為絮凝劑，絮凝，離心分離；減壓回收乙醇至無乙醇味，以相當于每克干葉加入0.5-1.5ml水的比例，將水加入回收乙醇后的上清液中，再經(jīng)聚酰胺樹脂，大孔樹脂純化，減壓濃縮，真空干燥。該方法步驟繁多，收率較低。中國專利CN104189026A公開了一種從銀杏葉提取物中脫除和富集銀杏酸的方法，將銀杏酸分子印跡聚合物做柱層析填料裝住，然后用銀杏葉提取液上柱，再用體積比10：1的環(huán)己烷/乙醇混合溶液淋洗，最后層析柱用醇洗脫，流出液位銀杏酸，其中所述醇為乙醇、異丙醇或正丁醇。雖然該發(fā)明所得銀杏葉提取物中銀杏酸含量低于5ppm，但用分子印跡聚合物做為填料造成成本較高，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。
所以，改進銀杏葉現(xiàn)有的提取技術(shù)和分離方法，尋找一種提高收率，適合工業(yè)生產(chǎn)，降低銀杏酸含量的提取工藝具有重大的現(xiàn)實意義。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種銀杏葉提取物的制備方法，所述制備方法具有工藝簡單，成本低，有利于工業(yè)化生產(chǎn)的特點。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種銀杏葉提取物的制備方法，包括以下步驟：
(1)采用動態(tài)逆流提取方法對銀杏葉或銀杏葉粉末進行提取，提取結(jié)束后，濃縮所得提取液至無溶劑殘留，得浸膏；
(2)以石油醚、正己烷、環(huán)己烷中的任意一種或多種為溶劑，對所述浸膏進行二次提取，提取結(jié)束后，過濾，取濾渣，即為銀杏葉粗提物；
(3)對所述銀杏葉粗提物進行柱層析分離，所述柱層析以大孔吸附樹脂、聚酰胺樹脂或兩種樹脂混合物為固定相，先以水為流動相進行洗脫，然后以10％-90％的乙醇水溶液為流動相，按照乙醇濃度由低到高的梯度進行洗脫，收集以20％-80％乙醇水溶液為流動相洗脫得到的洗脫液，經(jīng)濃縮、干燥、粉碎，即得所述銀杏葉提取物。
所述制備方法中，步驟(1)首先提取得到提取液，經(jīng)過步驟(2)處理后，除去提取液中含有的銀杏酸和脂溶性雜質(zhì)，以初步提高產(chǎn)品的純度；再經(jīng)步驟(3)柱層析分離以進一步除去銀杏酸、游離山奈素、游離槲皮素、游離異鼠李素等雜質(zhì)，此種方法提取得到的銀杏葉提取物中總銀杏酸含量低于0.3ppm，符合中國藥典和歐美藥典的標準。
優(yōu)選地，步驟(1)中，所述銀杏葉粉末的粒徑為10-50目，進一步優(yōu)選為20-30目。
優(yōu)選地，步驟(1)中，所述動態(tài)逆流提取方法以乙醇、甲醇或丙酮中的一種或多種為溶劑。
進一步優(yōu)選地，步驟(1)中，所述乙醇、甲醇或丙酮的濃度為40-90％，如可采用60％的乙醇水溶液為提取溶劑，或采用90％的甲醇為提取溶劑。
優(yōu)選地，步驟(1)中，所述動態(tài)逆流提取方法使用的溶劑量為1～10L/kg銀杏葉；進一步優(yōu)選為3-7L/kg銀杏葉。
優(yōu)選地，步驟(1)中，所述動態(tài)逆流提取方法的溫度為40℃-80℃，進一步優(yōu)選為40℃-60℃。
本發(fā)明步驟(1)可采用單級動態(tài)逆流提取，也可采用多級連續(xù)動態(tài)逆流提取，優(yōu)選采用多級連續(xù)動態(tài)逆流提取的方式。當采用多級連續(xù)動態(tài)逆流提取時，在提取結(jié)束后，取一級提取所得提取液進行后續(xù)操作，二級及以上提取所得提取液作為下一批物料的提取溶劑使用。
采用動態(tài)逆流提取工藝，出液系數(shù)小，物料與溶劑沿相反的方向運動，固液兩相不斷地更新，所需的提取溶劑少，濃度梯度大、有效成分提取率大，可節(jié)省溶劑，藥材處理能力大。同時，采用動態(tài)逆流提取工藝，提取速度快，能夠連續(xù)化生產(chǎn)，因而處理能力大、效率高、耗時短。
本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉，用于實現(xiàn)本發(fā)明動態(tài)逆流提取的設(shè)備可采用本領(lǐng)域公知的動態(tài)逆流提取器，例如，所述動態(tài)逆流提取器由投料斗、內(nèi)帶螺旋輸送裝置的提取筒(以下簡稱提取筒)、出渣螺旋輸送器、過濾器、擠榨機、儲液罐、泵等組成，另有蒸汽發(fā)生器以夾套蒸汽加熱的方式為各級提取裝置加熱，并輔以冷凝水控制溫度。
當采用多級連續(xù)動態(tài)逆流提取時，采用的設(shè)備由多個逆流提取器串聯(lián)而成。銀杏葉和提取液可在各級逆流提取器中流動。其中，所述多級連續(xù)動態(tài)逆流提取優(yōu)選為三級連續(xù)動態(tài)逆流提取。其中，二級、三級提取所得提取液分別作為下一批物料的一級、二級提取溶劑，下一批物料的三級提取使用新鮮溶劑。
以下以三級連續(xù)動態(tài)逆流提取為例說明具體提取過程：向一級提取筒注入溶劑，當溶劑的液位高度達到筒體直徑的3/4時，開啟蒸汽閥門加熱溶劑，溫度加熱至提取溫度時，開始向提取筒內(nèi)投入銀杏葉或銀杏葉粉末，將提取筒軸旋轉(zhuǎn)速控制為一定轉(zhuǎn)速，固定在軸的螺旋帶將銀杏葉粉末從機組前端向后緩慢推進，同時提取溶劑從機組末端的進液口進入過濾器，由筒后端穿過移動的物料向前端流動，固液兩相物質(zhì)在這種逆向運動中充分接觸，當銀杏葉粉末被輸送至筒體長度的1/2時開啟過濾器、擠榨機，當銀杏葉粉末被出渣螺旋輸送器輸送至末端時開始出料，經(jīng)過濾，擠榨后進入下一級提取筒的進料口進行第二級提取，提取液通過過濾器的收集漏斗進入儲液罐內(nèi)，第二級、第三級的提取流程與第一級相同，每批銀杏葉粉末經(jīng)過三級動態(tài)逆流提取后，藥渣經(jīng)蒸渣回收溶劑后棄去，第二、三級的提取液經(jīng)泵泵入上一級提取筒進液口作為下一批藥材的第一、二級提取溶劑，下批藥材的第三級提取加入新鮮溶劑提取，以此循環(huán)，收集每批銀杏葉粉末第一級提取液進行后續(xù)處理。
優(yōu)選地，動態(tài)逆流提取時，控制提取筒軸的旋轉(zhuǎn)速度為1-5r/min，進一步優(yōu)選為3r/min。在此轉(zhuǎn)速下，可確保物料與溶劑充分接觸，滲漉、浸漬的充分進行，最終保證銀杏葉與提取溶劑充分接觸，提高提取效率。
優(yōu)選地，每級動態(tài)逆流提取的時間為30～120min。
優(yōu)選地，步驟(2)中，所述二次提取在回流溫度下進行。
優(yōu)選地，步驟(2)中，所述溶劑的用量為3-8L/kg浸膏。
優(yōu)選地，步驟(3)中，柱層析過程中，樹脂的用量為每千克銀杏葉粗提物10-50Kg。
步驟(3)中，當采用大孔吸附樹脂作為固定相時，研究發(fā)現(xiàn)，采用孔徑5-20nm，比表面積500-700m2/g的大孔吸附樹脂具有最佳的吸附和洗脫效果，可以更充分地去除提取物中含有的銀杏酸、游離山奈素、游離槲皮素、游離異鼠李素等雜質(zhì)。其中，所述大孔吸附樹脂可采用市售的SP207、HP2MG型樹脂材料。
當采用聚酰胺樹脂為固定相時，優(yōu)選采用60-80目的聚酰胺樹脂，分離效果較佳。
當采用大孔吸附樹脂和聚酰胺樹脂的混合物作為固定相時，優(yōu)選大孔吸附樹脂和聚酰胺樹脂的重量比為(1-3)：1。
優(yōu)選地，步驟(3)中，以水為洗脫劑時，控制洗脫水的用量為1-4倍柱體積，按照1.0-1.5BV/h流速沖洗，除雜效果最佳。
優(yōu)選地，步驟(3)中，以乙醇水溶液為洗脫劑時，控制洗脫劑的用量為1-4倍柱體積，按照2.0-5.0BV/h的流速沖洗，分離效果最佳。
進一步優(yōu)選地，以乙醇水溶液為洗脫劑時，洗脫梯度依次為20％～30％、50％～60％、70％～80％的乙醇水溶液。
在一種優(yōu)選的實施方式中，以乙醇水溶液為洗脫劑時，具體操作為：依次使用2-4倍柱體積20％～30％、50％～60％、70％～80％的乙醇水溶液，以2-4BV/h的速度進行梯度洗脫，收集20％～60％乙醇水溶液洗脫時產(chǎn)生的洗脫液。
在另一種優(yōu)選的實施方式中，依次用2-4倍柱體積30％～40％、40％～50％、60％～70％的乙醇水溶液以2-4BV/h的速度進行梯度洗脫，收集20％～60％乙醇水溶液洗脫時產(chǎn)生的洗脫液。
在一種具體的實施方式中，可依次使用30％、50％、70％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集30％～50％乙醇水溶液洗脫時產(chǎn)生的洗脫液，即得。
優(yōu)選地，步驟(3)中，柱層析的壓力為0.1-0.3MPa。
其中，步驟(3)進行柱層析分離之前，可采用5％-10％乙醇對所述銀杏葉粗提物進行溶解，得到濃度為4-6g/L的銀杏葉粗提物溶液，以此進行柱層析上樣。
優(yōu)選地，上樣可采用動態(tài)吸附方式。在一種具體的實施方式中，動態(tài)吸附條件為吸附流速為1-3BV/h，吸附時間為2-9h。
在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件可以相互組合，即得本發(fā)明各較佳實施例。
本發(fā)明涉及到的試劑或原料均可市購獲得。
本發(fā)明具有以下有益效果：采用本發(fā)明的制備方法，所得銀杏葉提取物的收率高，活性成分含量高，且副產(chǎn)物如總銀杏酸、游離銀杏黃酮苷元含量低。同時，該制備方法操作簡便，步驟短，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)。
實施例1
一種銀杏葉提取物的制備方法，包括如下步驟：
(1)取干燥銀杏葉100Kg，粉碎至20目。向提取筒注入50％乙醇500L，當溶劑的液位高度達到筒體直徑的3/4時，開啟蒸汽閥門加熱溶劑，溫度加熱至50℃時，開始向提取筒內(nèi)投入銀杏葉粉末，將提取筒軸旋轉(zhuǎn)速控制為3r/min，固定在軸的螺旋帶將銀杏葉粉末從機組前端向后緩慢推進，同時提取溶劑從機組末端的進液口進入過濾器，由筒后端穿過移動的物料向前端流動，固液兩相物質(zhì)在這種逆向運動中充分接觸，當銀杏葉粉末被輸送至筒體長度的1/2時開啟過濾器、擠榨機，當銀杏葉粉末被出渣螺旋輸送器輸送至末端時開始出料，經(jīng)過濾，擠榨后進入下一級提取筒的進料口進行第二級提取，提取液通過過濾器的收集漏斗進入儲液罐內(nèi)，第一級提取時間為45min。第二級、第三級的提取流程與第一級相同，每批銀杏葉粉末經(jīng)過三級動態(tài)逆流提取后，藥渣經(jīng)蒸渣回收溶劑后棄去，第二、三級的提取液經(jīng)泵泵入上一級提取筒進液口作為下一批藥材的第一、二級提取溶劑，下批藥材的第三級提取加入新鮮溶劑提取，以此循環(huán)，收集每批銀杏葉粉末第一級提取液，減壓蒸餾，回收乙醇，得到6.34Kg浸膏。
(2)將浸膏加入提取罐中，加入38L石油醚，攪拌回流提取2h，冷卻至室溫，過濾，取固體，得到4.11Kg銀杏葉粗提物。
(3)采用質(zhì)量比為1:1的SP207大孔吸附樹脂(孔徑11nm，比表面積600m2/g)與聚酰胺樹脂(60-80目)裝柱，樹脂用量為164.4Kg；將所得4.11Kg銀杏葉粗提物用822L濃度為5％的乙醇溶液溶解后，以1.5BV/h的流速上樣，樹脂吸附4h，然后進行洗脫，具體洗脫方式為：采用0.15MPa的柱壓，以2倍柱體積水以1.5BV/h的流速沖洗，再依次用2倍柱體積30％乙醇，3倍柱體積60％乙醇及2倍柱體積80％乙醇以2BV/h的速度洗脫，收集30％、60％乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到3.09Kg銀杏葉提取物。
實施例2
一種銀杏葉提取物的制備方法，包括如下步驟：
(1)取干燥銀杏葉100Kg，粉碎至10目。向提取筒注入60％丙酮600L，當溶劑的液位高度達到筒體直徑的3/4時，開啟蒸汽閥門加熱溶劑，溫度加熱至40℃時，開始向提取筒內(nèi)投入銀杏葉粉末，將提取筒軸旋轉(zhuǎn)速控制為3r/min，固定在軸的螺旋帶將銀杏葉粉末從機組前端向后緩慢推進，同時提取溶劑從機組末端的進液口進入過濾器，由筒后端穿過移動的物料向前端流動，固液兩相物質(zhì)在這種逆向運動中充分接觸，當銀杏葉粉末被輸送至筒體長度的1/2時開啟過濾器、擠榨機，當銀杏葉粉末被出渣螺旋輸送器輸送至末端時開始出料，經(jīng)過濾，擠榨后進入下一級提取筒的進料口進行第二級提取，提取液通過過濾器的收集漏斗進入儲液罐內(nèi)，第一級提取時間為60min。第二級、第三級的提取流程與第一級相同，每批銀杏葉粉末經(jīng)過三級動態(tài)逆流提取后，藥渣經(jīng)蒸渣回收溶劑后棄去，第二、三級的提取液經(jīng)泵泵入上一級提取筒進液口作為下一批藥材的第一、二級提取溶劑，下批藥材的第三級提取加入新鮮溶劑提取，以此循環(huán)，收集每批銀杏葉粉末第一級提取液，減壓蒸餾，回收丙酮，得到6.91Kg浸膏。
(2)將浸膏加入提取罐中，加入38L石油醚，攪拌回流提取2h，冷卻至室溫，過濾，得到4.87Kg銀杏葉粗提物。
(3)采用HP2MG型大孔吸附樹脂(孔徑20nm，比表面積500m2/g)裝柱，樹脂用量為219.2Kg；將所得4.87Kg銀杏葉粗提物用812L濃度為30％的乙醇溶液溶解后，以1BV/h的流速進行上樣，樹脂吸附2.5h，然后開始洗脫，洗脫方法具體為：采用0.1MPa柱壓，以2倍柱體積水以1.0BV/h的流速沖洗，再依次用3倍柱體積10％乙醇，2倍柱體積50％乙醇及2倍柱體積70％乙醇以3BV/h的速度洗脫，收集20％、50％乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到3.27Kg銀杏葉提取物。
對比例1
取銀杏葉100Kg，粉碎至20目于多功能提取罐中。加入50％乙醇900L，室溫條件下浸提8h，過濾，再浸提兩次，每次用乙醇800L，室溫條件下浸提8h，合并三次浸提濾液，濃縮得到浸膏。然后按實施例1中步驟(2)～(3)的純化處理方法處理，計算所得銀杏葉提取物收率，測定各成分含量。
對比例2
取銀杏葉100Kg，粉碎至20目于滲漉罐中。加入50％乙醇900L，室溫條件下浸潤2h，從滲漉罐下方以1500L/h的速度放出滲漉液，并用泵打入滲漉罐中，循環(huán)4h，收集滲漉液。再進行兩次滲漉提取，每次加入乙醇800L，從滲漉罐下方以1500L/h的速度放出滲漉液，并用泵打入滲漉罐中，循環(huán)4h，收集第一、二次滲漉提取液，濃縮得到浸膏。然后按實施例1中步驟(2)～(3)的純化處理方法處理，計算所得銀杏葉提取物收率，測定各成分含量。第三次滲漉提取液作為下一批藥材的提取溶劑，以此循環(huán)。
對比例3
取銀杏葉100Kg，粉碎至20目于多功能提取罐中。加入50％乙醇900L，回流提取3h，過濾，向濾渣中再加入乙醇800L，回流提取3h，過濾，收集兩次回流提取的濾液，濃縮得到浸膏。然后按實施例1中步驟(2)～(3)的純化處理方法處理，計算所得銀杏葉提取物收率，測定各成分含量。
對比例4
一種銀杏葉提取物的制備方法，具體操作同實施例1，區(qū)別僅在于：步驟(3)中，樹脂選擇大孔吸附樹脂XAD-7(孔徑8nm，比表面積450m2/g)。
對比例5
一種銀杏葉提取物的制備方法，具體操作同實施例1，區(qū)別僅在于：步驟(3)中，柱壓為0.5MPa。
實施例1～2，對比例1～5的實驗數(shù)據(jù)如表1所示。
表1：實施例1～2，對比例1～5的實驗數(shù)據(jù)
由表1結(jié)果可知，實施例1-2與對比例1-2相比，雖然所得銀杏葉提取物的收率和品質(zhì)相差不大，但對比例1-2所用溶劑量較大，成本較高；實施例1-2與對比例3相比，雖然二者收率相差不大，但對比例3采用的是回流提取方式，提取溫度較高，造成了銀杏黃酮醇苷的含量下降較多，所得產(chǎn)物品質(zhì)較低；實施例1-2與對比例4相比，大孔吸附樹脂的結(jié)構(gòu)、組成、性能對銀杏葉提取物的純化效果有較大影響；實施例1-2與對比例5相比，增大柱壓后，不利于銀杏葉粗提物的純化。
其中，表1中各參數(shù)的測定方法如下：
1.收率(％)＝(銀杏葉提取物的質(zhì)量/銀杏葉的質(zhì)量)×100％
2.游離山奈素、游離槲皮素、游離異鼠李素含量的檢驗方法
對照品溶液的制備
分別取槲皮素對照品、山奈素對照品、異鼠李素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml分別含30μg、30μg、20μg的混合溶液，作為對照品溶液。
供試樣品溶液的制備
稱取銀杏葉提取物40mg，置于具塞錐形瓶中，精密加入80％甲醇溶液20ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)20分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用80％甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定方法
分別精密吸取對照品溶液10μl，供試樣品溶液2-10μl，注入液相色譜儀，按照以下條件測定：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50:50)為流動相；檢測波長為360nm。分別計算槲皮素、山奈素、異鼠李素的含量。
3.銀杏黃酮醇苷含量的檢驗方法
對照品溶液的制備
分別取槲皮素對照品、山奈素對照品、異鼠李素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml分別含30μg、30μg、20μg的混合溶液，作為對照品溶液。
供試樣品溶液的制備
取銀杏葉提取物35mg，精密稱定，加甲醇-25％鹽酸溶液(4:1)的混合溶液25ml，置于水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定方法
分別精密吸取對照品溶液與供試樣品溶液各10μl，注入也想色譜儀，按以下條件測定：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50:50)為流動相；檢測波長為360nm。分別計算槲皮素、山奈素、異鼠李素的含量。
計算公式
銀杏黃酮醇苷含量(％)＝[(槲皮素含量-游離槲皮素含量)+(山奈素含量-游離山奈素含量)+(異鼠李素含量-游離異鼠李素含量)]×2.51
4.銀杏內(nèi)酯含量的檢驗方法
按照《中國藥典》2015年版銀杏葉提取物銀杏內(nèi)酯含量的檢驗方法檢驗。
5.總銀杏酸含量的檢驗方法
按照《中國藥典》2015年版銀杏葉提取物總銀杏酸含量的檢驗方法檢驗。
雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明、具體實施方式及試驗，對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。