本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及微生物學(xué)，具體為一種光動(dòng)力治療牙周炎的光敏凝膠制劑產(chǎn)品及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

牙周炎是世界衛(wèi)生組織(WHO)公布的口腔三大疾病之一，是一組以菌斑微生物為始動(dòng)因子，與宿主發(fā)生反應(yīng)導(dǎo)致牙周支持組織(如牙齦、牙周膜、牙槽骨和牙骨質(zhì))炎癥和破壞的慢性感染性疾病。我國第三次口腔流行病學(xué)調(diào)查顯示人群中35歲以上牙周炎患病率達(dá)80％-90％，是人群中最廣泛流行的慢性感染性疾病，嚴(yán)重影響口腔健康，造成牙齦出血、腫脹、牙槽骨吸收形成牙周袋等病變，同時(shí)也是成人牙松動(dòng)和缺失的主要原因。此外，近十余年的大量研究結(jié)果表明，牙周感染可能是某些重要的系統(tǒng)性疾病或異常狀況的一個(gè)重要的潛在危險(xiǎn)因素，包括心血管疾病(動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死及腦中風(fēng)等)、早產(chǎn)及低體重出生兒、糖尿病、呼吸道感染等。

牙周炎具有高發(fā)病率高，難以根治，復(fù)發(fā)性強(qiáng)等特點(diǎn)，目前常規(guī)治療包括機(jī)械治療和應(yīng)用抗生素治療。復(fù)雜的牙齒結(jié)構(gòu)限制了機(jī)械清創(chuàng)術(shù)的效果，例如齦下刮治及根面平整術(shù)，雖然能清除根面大部分的牙石和菌斑，但不能有效去除牙周袋上皮襯里內(nèi)以及復(fù)雜袋底的微生物，故需要加以各種基礎(chǔ)輔助或進(jìn)一步手術(shù)治療，如全身或局部用抗生素，而且機(jī)械清創(chuàng)術(shù)較為復(fù)雜，不容易為基層醫(yī)院醫(yī)生所掌握。以NaOCl、氯己定二葡糖酸鹽等作為沖洗劑的化學(xué)殺菌牙髓清創(chuàng)術(shù)雖然有很強(qiáng)的殺菌效果，但由于藥物在牙髓里停留時(shí)間過短，還是不能完全清除全部的細(xì)菌。而目前使用抗生素治療也存在許許多多問題，如果大劑量，長時(shí)間的全身用藥會(huì)導(dǎo)致菌群失調(diào)；局部用藥時(shí)，由于唾液的沖刷是藥物難以長時(shí)間在患處停留，使其治療效果不理想。另一方面，抗生素存在潛在的耐藥性問題，近年來抗生素的濫用導(dǎo)致了耐藥菌的廣泛流行，并出現(xiàn)了一些多重耐藥菌即所謂“超級(jí)細(xì)菌”。超級(jí)細(xì)菌的流行引起了世界各國的恐慌，醫(yī)學(xué)對(duì)抗生素的使用越來越謹(jǐn)慎，故研究治療牙周炎的新方法迫在眉睫。因此現(xiàn)有技術(shù)帶開發(fā)能夠克服以上缺點(diǎn)的新治療方法。

光動(dòng)力療法是利用物質(zhì)的光學(xué)特性，通過結(jié)合光敏劑與一定波長光波的產(chǎn)生活性氧(ROS)，從而殺死細(xì)菌的無/微創(chuàng)的治療方法。該法廣泛應(yīng)用于多種癌癥的綜合治療、皮膚病治療、口腔疾病的控制和治療等多個(gè)領(lǐng)域，該方法具有見效快、對(duì)大量細(xì)菌都有效果、無免疫反應(yīng)、無副作用、可重復(fù)使用的優(yōu)點(diǎn)。甲苯胺藍(lán)凝膠為光敏劑凝膠，具有以下幾大優(yōu)勢(shì)：凝膠制劑具有一定的粘性和附著性，可以使藥物停留在患病部位提高治療效果。另一方面甲苯胺藍(lán)是一種核酸傾向的嗜酸性染料，停留在細(xì)胞核成分較多的組織中。在組織中具有較好的穿透深度，可有效的分布于感染的靶組織，但不能穿透正常組織，這樣避免了正常組織受到光動(dòng)力對(duì)其的殺傷，所以甲苯胺藍(lán)對(duì)病變區(qū)域、細(xì)菌具有較好的選擇性。最重要的一點(diǎn)是，甲苯胺藍(lán)光敏劑無明顯的毒副作用，這樣減少了對(duì)人類健康系統(tǒng)的危害，有利于光動(dòng)力療法的推廣與應(yīng)用。光敏劑的光動(dòng)力治療的相關(guān)研究可以參考以下文章：[José A.-Delgado,Pedro M.Castro,Alexandra Machado,et al.Hydrogels containing porphyrin-loaded nanoparticles for topical photodynamic applications.International Journal of Pharmaceutics 2016；510:221-231],[Juliana P.M.L.Rolim,Mary A.S.de-Melo,et al.The antimicrobial activity of photodynamic therapy against Streptococcus mutans using different photosensitizers.Journal of Photochemistry and Photobiology B:Biology 2012；106:40-46]。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種配合光動(dòng)力治療牙周炎的光敏凝膠制劑產(chǎn)品及其制備方法，這種凝膠產(chǎn)品以甲苯胺藍(lán)為主要的光敏物質(zhì)。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種光敏凝膠制劑，主要由以下組分按重量百分比配制而成：0.001％～1％的甲苯胺藍(lán)，0.05％～3％的親水性凝膠劑，0.01％～0.4％的氫氧化鈉或0.07％～2％三乙醇胺，余量為水。

進(jìn)一步，本發(fā)明所述親水性凝膠劑為卡波姆。

更進(jìn)一步，本發(fā)明所述水為純化水。

本發(fā)明所述的光敏凝膠制劑優(yōu)選為由以下組分按重量比配制而成：0.01％～0.5％的甲苯胺藍(lán)，0.1％～2％的親水性凝膠劑，0.04％～0.4％的氫氧化鈉或0.1％～1％三乙醇胺，余量為水。

本發(fā)明所述所述制劑主要由以下組分按重量百分比配制而成：0.001％～1％的甲苯胺藍(lán)，0.05％～3％的親水性凝膠劑，0.01％～0.4％的氫氧化鈉或0.07％～2％三乙醇胺，余量為水，

(1)將0.05％～3％的親水性凝膠劑溶于水中，攪勻，使之充分溶脹；

(2)將0.001％～1％的甲苯胺藍(lán)加在溶脹的親水性凝膠劑中匯總；

(3)再加入0.01％～0.4％的氫氧化鈉或者0.07％～2％的三乙醇胺，補(bǔ)足水至100％，充分?jǐn)嚢璩浞秩苊浐蟮玫剿龉饷裟z制劑。

進(jìn)一步，本發(fā)明所述親水性凝膠劑為卡波姆，制備方法優(yōu)選按以下步驟進(jìn)行：

(1)將0.1％～2％的卡波姆溶于水中，攪勻，使之充分溶脹；

(2)將0.01％～0.5％的甲苯胺藍(lán)加在溶脹的卡波姆中匯總；

(3)再加入0.04％～0.4％的氫氧化鈉或者0.1％～1％的三乙醇胺，補(bǔ)足水至100％，充分?jǐn)嚢璩浞秩苊浐蟮玫剿龉饷裟z制劑。

再進(jìn)一步，本發(fā)明所述的光敏凝膠制劑應(yīng)用在牙周炎的治療。

本發(fā)明的有益效果為：該凝膠制劑具有無毒副作用、無免疫反應(yīng)、無副作用、對(duì)大量細(xì)菌都有效果、可重復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，一次照射治療的抑菌率達(dá)到99.99％，且不存在抗生素產(chǎn)生耐藥性的問題，可解決傳統(tǒng)技術(shù)無法根治牙周炎的問題。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1的1克凝膠制劑放置于離心管內(nèi)離心之后的外觀性狀圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。

實(shí)施例1

一種用于光動(dòng)力治療牙周炎的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑配方，成分包括重量百分比分別為0.5％卡波姆、0.01％甲苯胺藍(lán)、0.04％氫氧化鈉，水余量。以制備一千克凝膠為例，將5克卡波姆加于700mL純化水中，攪勻，使之充分溶脹，取0.1克甲苯胺藍(lán)加于卡波姆溶液中，攪拌形成凝膠。取0.4克氫氧化鈉加入前面所述的凝膠中，充分?jǐn)嚢璩浞秩苊?，即得到本發(fā)明的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑。

實(shí)施例2

一種光動(dòng)力治療牙周炎的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑配方，成分包括重量百分比分別為3％卡波姆、0.1％甲苯胺藍(lán)、0.07％三乙醇胺，水余量。以制備一千克凝膠為例，將30克卡波姆加于700mL純化水中，攪勻，使之充分溶脹。取1克甲苯胺藍(lán)加于待用的卡波姆溶液中，攪拌形成凝膠。取0.7克三乙醇胺加入前面所述的凝膠中，補(bǔ)充純化水至凝膠中使其總量為1000克。充分?jǐn)嚢枞苊?，即得到本發(fā)明的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑。

實(shí)施例3

一種光動(dòng)力治療牙周炎的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑配方，成分包括重量百分比分別為0.8％卡波姆、0.001％甲苯胺藍(lán)、0.4％氫氧化鈉，水余量。以制備一千克凝膠為例，將8克卡波姆加于700mL純化水中，攪勻，使之充分溶脹。取0.01克甲苯胺藍(lán)加于待用的卡波姆溶液中，攪拌形成凝膠。取4克氫氧化鈉加入前面所述的凝膠中，補(bǔ)充純化水至凝膠中使其總量為1000克。充分?jǐn)嚢枞苊?，即得到本發(fā)明的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑。

實(shí)施例4

一種光動(dòng)力治療牙周炎的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑配方，成分包括重量百分比分別為2％卡波姆、0.1％甲苯胺藍(lán)、0.4％氫氧化鈉，水余量。以制備一千克凝膠為例，將20克卡波姆加于700mL純化水中，攪勻，使之充分溶脹。取1克甲苯胺藍(lán)加于待用的卡波姆溶液中，攪拌形成凝膠。取4克氫氧化鈉加入前面所述的凝膠中，補(bǔ)充純化水至凝膠中使其總量為1000克。充分?jǐn)嚢枞苊?，即得到本發(fā)明的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑。

實(shí)施例5

一種光動(dòng)力治療牙周炎的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑配方，成分包括重量百分比分別為0.5％卡波姆、0.5％甲苯胺藍(lán)、1％三乙醇胺，水余量。以制備一千克凝膠為例，將5克卡波姆加于700mL純化水中，攪勻，使之充分溶脹。取5克甲苯胺藍(lán)加于待用的卡波姆溶液中，攪拌形成凝膠。取10克三乙醇胺加入前面所述的凝膠中，補(bǔ)充純化水至凝膠中使其總量為1000克。充分?jǐn)嚢枞苊?，即得到本發(fā)明的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑。

實(shí)施例6

一種光動(dòng)力治療牙周炎的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑配方，成分包括重量百分比分別為0.05％卡波姆、0.1％甲苯胺藍(lán)、2％三乙醇胺，水余量。以制備一千克凝膠為例，將0.5克卡波姆加于700mL純化水中，攪勻，使之充分溶脹。取1克甲苯胺藍(lán)加于待用的卡波姆溶液中，攪拌形成凝膠。取20克三乙醇胺加入前面所述的凝膠中，補(bǔ)充純化水至凝膠中使其總量為1000克。充分?jǐn)嚢枞苊洠吹玫奖景l(fā)明的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑。

實(shí)施例7

一種光動(dòng)力治療牙周炎的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑配方，成分包括重量百分比分別為1.5％卡波姆、1％甲苯胺藍(lán)、0.01％氫氧化鈉，水余量。以制備一千克凝膠為例，將15克卡波姆加于700mL純化水中，攪勻，使之充分溶脹。取10克甲苯胺藍(lán)加于待用的卡波姆溶液中，攪拌形成凝膠。取0.1克氫氧化鈉加入前面所述的凝膠中，補(bǔ)充純化水至凝膠中使其總量為1000克。充分?jǐn)嚢枞苊?，即得到本發(fā)明的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑。

實(shí)施例8

一種光動(dòng)力治療牙周炎的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑配方，成分包括重量百分比分別為0.1％卡波姆、0.6％甲苯胺藍(lán)、0.1％三乙醇胺，水余量。以制備一千克凝膠為例，將1克卡波姆加于700mL純化水中，攪勻，使之充分溶脹。取6克甲苯胺藍(lán)加于待用的卡波姆溶液中，攪拌形成凝膠。取1克三乙醇胺加入前面所述的凝膠中，補(bǔ)充純化水至凝膠中使其總量為1000克。充分?jǐn)嚢枞苊?，即得到本發(fā)明的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑。

實(shí)施例9

從牙周炎患者患病部位直接取牙周炎細(xì)菌培養(yǎng)過夜,菌液稀釋至OD值為0.31，取100μl稀釋菌液值96孔板，空白組加入100μl的生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組加入100μl實(shí)施例3所述方法制備的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑。將空白組和實(shí)驗(yàn)組反應(yīng)的菌液進(jìn)行連續(xù)稀釋，取100μl相應(yīng)的稀釋液涂布在LB平板上，37℃培養(yǎng)18h，通過CFU值計(jì)算其抑菌率，其抑菌率為0，說明實(shí)施例三方法制備的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑沒有LED光照配合和空白實(shí)驗(yàn)一樣是沒有抑菌功效的。

實(shí)施例10

從牙周炎患者患病部位直接取牙周炎細(xì)菌培養(yǎng)過夜的,菌液稀釋至OD值為0.31，取100μl稀釋菌液值96孔板，空白組加入100μl的生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組同樣加入100μl的生理鹽水結(jié)合630nm的LED光照30s。將空白組和實(shí)驗(yàn)組反應(yīng)的菌液進(jìn)行連續(xù)稀釋，取100μl相應(yīng)的稀釋液涂布在LB平板上，37℃培養(yǎng)18h，通過CFU值計(jì)算其抑菌率，其抑菌率為0，說明對(duì)細(xì)菌進(jìn)行單純光照和空白實(shí)驗(yàn)一樣是沒有抑菌功效的。

實(shí)施例11

從牙周炎患者患病部位直接取牙周炎細(xì)菌培養(yǎng)過夜,菌液稀釋至OD值為0.31，取100μl稀釋菌液值96孔板，空白組加入100μl的生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組加入100μl實(shí)施例3所述的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑，實(shí)驗(yàn)組采用630nm的LED光照30s，空白組不做任何處理。將空白組和實(shí)驗(yàn)組反應(yīng)的菌液進(jìn)行連續(xù)稀釋，取100μl相應(yīng)的稀釋液涂布在LB平板上，37℃培養(yǎng)18h，通過CFU值計(jì)算其抑菌率，其抑菌率為97.4％.

實(shí)施例12

從牙周炎患者患病部位直接取牙周炎細(xì)菌培養(yǎng)過夜,牙周炎混合菌菌液稀釋至OD值為0.31，取100μl稀釋菌液值96孔板，空白組加入100μl的生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組加入100μl實(shí)施例6所述的甲苯胺藍(lán)凝膠制劑，實(shí)驗(yàn)組采用630nm的LED光照30s，空白組不做任何處理。將空白組和實(shí)驗(yàn)組反應(yīng)的菌液進(jìn)行連續(xù)稀釋，取100μl相應(yīng)的稀釋液涂布在LB平板上，37℃培養(yǎng)18h，通過CFU值計(jì)算其抑菌率，其抑菌率為90.9％.

制劑性能綜合評(píng)價(jià)

1)本發(fā)明的凝膠制劑的性狀：均勻細(xì)膩、稠度適當(dāng)。

2)PH值：取該凝膠制劑1克，根據(jù)中國藥典2015年版四部通則規(guī)定的方法測(cè)定PH值為6-8。

3)穩(wěn)定性：將所得凝膠制劑1克放置于離心管內(nèi)，以4000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速使之旋轉(zhuǎn)10分鐘，凝膠制劑為分層，不渾濁。

4)本發(fā)明的單獨(dú)使用凝膠制劑對(duì)細(xì)菌沒有毒性，沒有抑菌效率，本發(fā)明單獨(dú)使用LED光照對(duì)細(xì)菌也沒有毒性，沒有抑菌效率。

5)抑菌活性：采用平板菌落計(jì)數(shù)法，通過甲苯胺藍(lán)凝膠的光動(dòng)力治療，所訴工藝參數(shù)范圍內(nèi)所制備的凝膠制劑結(jié)合LED光照手段，對(duì)牙周炎致病菌抑菌率達(dá)到90.998％-99.999％。