本發(fā)明涉及藥物，具體涉及博落回在制備治療瘧疾藥物中的應用，尤其涉及博落回及其提取物在制備治療由瘧原蟲引起的瘧疾藥物中的應用。

背景技術：

瘧疾(malaria)是嚴重危害人類身體健康和生命安全、影響社會經(jīng)濟發(fā)展的重要寄生蟲病。瘧疾與艾滋病、結核病一起被世界衛(wèi)生組織列為全球亟需控制的公共衛(wèi)生問題，是聯(lián)合國千年發(fā)展目標中重點防控的3種傳染病之一。根據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，僅在2015年內(nèi)，全球有438000瘧疾死亡病例，并且絕大部分發(fā)生在撒哈拉以南的非洲的五歲以下兒童。瘧疾由瘧原蟲引起，其瘧原蟲包括了惡性瘧原蟲、間日瘧原蟲、三日瘧原蟲和卵形瘧原蟲，其中以惡性瘧原蟲致死率最高。帶有成熟子孢子的雌按蚊叮咬人體后，將瘧原蟲注入人體，經(jīng)10～20天會發(fā)生典型的瘧疾臨床癥狀，可分為四期：前驅(qū)期、發(fā)冷(寒戰(zhàn))期、發(fā)熱期、出汗期和間歇期。瘧疾的反復發(fā)作后，病人會出現(xiàn)貧血、肝脾腫大，甚至出現(xiàn)腦型、超高熱型、厥冷型和胃腸型等兇險癥狀，甚至危及生命。隨著氯喹、哌喹和青蒿素的應用，在近幾十年挽救了無數(shù)人的生命，但是這些藥物出現(xiàn)了不同程度的耐藥性，致使瘧疾的發(fā)病率日益增加，亟待具有新型治療作用的抗瘧藥物的發(fā)現(xiàn)。

中醫(yī)藥作為瘧疾預防和治療的重要組成部分，具有良好的療效和提高生活質(zhì)量的優(yōu)勢,成為瘧疾治療的重要手段之一。在中國著名書籍《本草綱目》和《瘧疾論》記載了如常山、青蒿、鴉膽子、草果和砂仁等是在民間用來治療瘧疾的中草藥。從中草藥青蒿中發(fā)現(xiàn)的活性化合物青蒿素用于治療瘧疾取得了很好的效果，廣泛用于臨床，因此從中藥中尋找具有抗瘧活性中草藥和有效成分意義重大。本發(fā)明人通過研究發(fā)現(xiàn)博落回(Macleaya cordata)提取物具有顯著抗瘧作用。

博落回(Macleaya cordata)又名號筒桿,三錢三,勃勒回，山梧桐等，系罌粟科植物，廣泛分布于我國各地，并可人工種植。博落回藥用部位為其帶根全草，辛、苦、溫，有驅(qū)風解毒、散瘀腫及殺蟲驅(qū)蟲之功用。民間用其治療癰腫療毒，惡瘡潰瘍，燙傷頑癬，風濕痹癥，跌打損傷，疥瘡等體表疾患。臨床上已用于陰道炎、肺炎、皮膚病和肝炎等疾病的治療,并具有抗腫瘤作用,在養(yǎng)殖生產(chǎn)中已作為獸藥和生物農(nóng)藥被廣泛使用。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術問題在于研究設計博落回在制備治療瘧疾藥物中的應用。

本發(fā)明提供了博落回提取物在制備治療瘧疾藥物中的應用。

體內(nèi)外抗瘧活性測定結果顯示，博落回提取物有較好的體內(nèi)外抗瘧原蟲活性。因此，可用于制備治療瘧疾的藥物。

本發(fā)明的另一目的是提供以博落回及其提取物為活性成分，用于制備治療瘧疾的中草藥組合物，尤其用于制備治療由瘧原蟲引起的瘧疾的藥物組合物。

本發(fā)明所述藥物組合物含有治療有效量的博落回及其提取物為活性成分，以及含有一種或多種中草藥作為輔助藥物或者含有一種或多種藥學上可接受的載體。其中活性成分在藥物組合物中的重量為5-95％。

所述其他可以接受的中草藥，例如：馬鞭草、柴胡、生姜、黃芩、狼牙草、常山、草果、人參、大棗等可以輔助博落回發(fā)揮藥效的中草藥。

所述藥學上可接受的載體是指藥學領域常規(guī)的藥物載體，例如：稀釋劑、賦形劑如水等；填充劑如淀粉、蔗糖等；粘合劑如明膠、聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣、碳酸氫鈉；吸收促進劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂粘土；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣、聚乙二醇等、另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。

本發(fā)明的藥物組合物可通過口服和外敷給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時，可將其職稱常規(guī)的固體制劑如片劑、顆粒劑、膠囊等或制成液體制劑如水或油懸浮劑、糖漿等；用于外敷給藥時，可將其制成軟膏劑和經(jīng)皮給藥的劑型等。

本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學領域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如使博落回與其他中草藥進行提取，然后將其制成所需的劑型。

附圖說明

圖1博落回提取物和陽性藥物(氯喹)對3D7蟲株生存率影響圖

圖中氯喹組(分別為：0、0.01、0.1、1μg/mL)，博落回組(分別為：0、5、15、50μg/mL)，*P<0.05**P<0.01***P<0.001

圖2博落回提取物和陽性藥物(氯喹)在體內(nèi)對伯氏瘧原蟲感染率影響圖

圖中1空白模型組，2 10mg/kg氯喹組，3 0.5g/kg博落回提取物組，4 1g/kg博落回提取物組，5 2g/kg博落回提取物組，*P<0.05**P<0.01***P<0.001

具體實施方式

實施例1：博落回提取物的制備

博落回的干燥地上部分50g粉碎后，以500mL 85％乙醇室溫冷浸2次，每次24小時，合并兩次浸出液并過濾，60℃以下減壓回收溶劑，得干浸膏，取干浸膏1g，用二甲基亞砜(DMSO)配制為濃度20mg/mL的儲備液。制得的儲備液用于實施例2。

博落回藥材及浸膏經(jīng)HPLC-UV進行指紋圖譜分析，博落回藥材和提取物的與標準藥材指紋圖譜完全一致。

實施例2：博落回提取物體外抗瘧活性測定

抗瘧活性可以通過測量瘧原蟲dsDNA含量來確定(Corey,V.C.,et al.,A broad analysis of resistance development in the malaria parasite.Nat Commun,2016.7:p.11901.)。在含20μL連續(xù)稀釋測試樣本和氯喹陽性藥物(購自中國食品藥品檢定研究所)的96孔板的每個孔中加入感染了3D7蟲株P.falciparum的紅細胞混懸液(100μL，在RPMI 1640培養(yǎng)基(Gibco)中加入5g/L AlbuMAX(Gibco)和50mg/L慶大霉素(Sigma)，使瘧原蟲血癥達到0.5％，紅細胞壓積達到2％)，然后置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時。細胞用裂解液(Tris 2.4g/L,EDTA 1.86g/L,Saponin 0.08g/L,TritonX-1000.8mL/L)進行裂解，來源于Sigma，dsDNA含量用10000X SYBR Green I試劑(Invitrogen)測定，測定程序參照文獻(Plouffe,D.,et al.,In silico activity profiling reveals the mechanism of action of antimalarials discovered in a high-throughput screen.Proc Natl Acad Sci USA,2008.105(26):p.9059-64.)。簡要說來，就是將100μL培育的混合物和按文獻說明配制好100μL SYBR Green I試劑混合，在室溫下避光培育30-60分鐘.然后100μL轉移至黑色酶標板中。將酶標板放入EnSpire熒光酶標儀(PerkinElmer)中，在485nm和535nm的吸光值下讀取酵標板中每孔的熒光信號值。從劑量-效應曲線中計算出IC₅₀。博落回提取物的對3D7的IC₅₀值如下表：

結果顯示，博落回提取物有較好的體外抗瘧原蟲活性。

實施例3：博落回提取物體內(nèi)抗瘧活性測定

伯氏瘧原蟲伯氏株培養(yǎng)，其所用紅細胞為昆明小鼠紅細胞，其他培養(yǎng)條件與瘧原蟲3D7培養(yǎng)方法一致。本發(fā)明用的動物是來自中山大學實驗動物中心，品系為昆明種小鼠，所有的動物實驗過程中對實驗動物保護和使用根據(jù)NIH標準進行。對小鼠進行輸血感染，抽取雄性小鼠心臟血液，用5％葡萄糖鹽水將血液稀釋成每0.2mL內(nèi)含1×10⁶個受感染紅細胞的懸液，腹腔接種小鼠。接種伯氏瘧原蟲3小時后，進行分組給藥，每組8只，組別為：1、空白對照組(灌胃給予生理鹽水)，2、氯喹陽性對照組(灌胃給予10mg/kg)，3、博落回提取物(灌胃給予0.5g/kg、1g/kg和2g/kg)。每天測量體重無明顯差異，在接種感染后第0、2、4、6天尾靜脈取血涂膜檢查減蟲率，結果顯示，博落回提取物有較好的體內(nèi)抗瘧原蟲活性。