本發(fā)明屬于蛋白質藥物領域，具體地涉及乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用。

背景技術：

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)主要有靜止性震顫、肌僵直、運動減少和姿勢反射障礙等癥狀。PD的神經(jīng)病理學基礎是黑質致密帶(substantia nigra pars compacta，SNpc)多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)元的變性脫失以及由此而導致的紋狀體DA含量降低。PD的病因目前尚未完全明了，但黑質(substantia nigra,SN)鐵聚積被認為參與了PD的發(fā)病。PD患者的中腦SNpc有大量的激活的小膠質細胞，這些激活的小膠質細胞和殘存的DA能神經(jīng)元又有大量的鐵沉積，然而小膠質細胞激活和鐵聚積之間的關系尚未闡明。

乳鐵蛋白(lactoferrin，Lf)是一種鐵結合性糖蛋白，屬于轉鐵蛋白家族成員之一，由許多外分泌腺分泌，存在于人類和其他哺乳動物的淚液、唾液、乳汁和嗜中性粒細胞中。乳鐵蛋白受體(lactoferrin receptor，LfR)廣泛存在于人體內(nèi)的不同組織和細胞類型中，其作用是通過受體介導的內(nèi)吞參與Lf內(nèi)化。Lf可以結合轉運三價鐵離子，是鐵在機體內(nèi)代謝及轉運的關鍵載體。Lf還具有廣泛的生物學功能：抗氧化應激，抗癌，調控免疫炎癥反應等，可能與其鐵結合特性無關。在體內(nèi)Lf主要以兩種形式存在：不含鐵形式(apo-lactoferrin，apo-Lf)和鐵飽和形式(holo-lactoferrin，holo-Lf)。在腦內(nèi)只有激活的小膠質細胞合成釋放Lf，1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine，MPTP)模型小鼠中Lf mRNA的表達水平升高。LfR主要在神經(jīng)元上表達，腦組織染色發(fā)現(xiàn)PD患者中腦的神經(jīng)元和微血管中LfR反應性表達增加，提示Lf/LfR與PD鐵聚積和神經(jīng)元進行性退化之間有一定關聯(lián)性。乳鐵蛋白(lactoferrin，Lf)是一種鐵結合性糖蛋白，屬于轉鐵蛋白家族成員之一，由許多外分泌腺分泌，存在于人類和其他哺乳動物的淚液、唾液、乳汁和嗜中性粒細胞中。乳鐵蛋白受體(lactoferrin receptor，LfR)廣泛存在于人體內(nèi)的不同組織和細胞類型中，其作用是通過受體介導的內(nèi)吞參與Lf內(nèi)化。Lf可以結合轉運三價鐵離子，是鐵在機體內(nèi)代謝及轉運的關鍵載體。Lf還具有廣泛的生物學功能：抗氧化應激，抗癌，調控免疫炎癥反應等，可能與其鐵結合特性無關。在體內(nèi)Lf主要以兩種形式存在：不含鐵形式(apo-lactoferrin，apo-Lf)和鐵飽和形式(holo-lactoferrin，holo-Lf)。在腦內(nèi)只有激活的小膠質細胞合成釋放Lf，1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine，MPTP)模型小鼠中Lf mRNA的表達水平升高。LfR主要在神經(jīng)元上表達，腦組織染色發(fā)現(xiàn)PD患者中腦的神經(jīng)元和微血管中LfR反應性表達增加，提示Lf/LfR與PD鐵聚積和神經(jīng)元進行性退化之間有一定關聯(lián)性。我們以前的研究結果表明，Lf對體外培養(yǎng)的神經(jīng)元具有保護作用。本實驗的目的是在體研究Lf是否影響了PD中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周的鐵代謝，并探討兩種形式的Lf—鐵游離形式(Apo-Lf)和鐵飽和形式(Holo-Lf)的區(qū)別。在具體的機制方面，我們研究了Lf是否來通過調節(jié)鐵轉運蛋白表達的影響鐵在中樞以及外周的分布，以及它是否發(fā)揮了抗氧化和抗凋亡的保護作用。

中國專利申請200410004604.X公開了活化乳鐵蛋白的制造方法。中國專利申請200880114714.8公開了脫鐵乳鐵蛋白組合物及其用于治療病毒性丙型肝炎的方法。這些現(xiàn)有技術都公開了脫鐵乳鐵蛋白對于治療的疾病的重要性。然而，現(xiàn)有技術關于脫鐵乳鐵蛋白對于治療帕金森病的療效未見報道。

技術實現(xiàn)要素：

為解決上述現(xiàn)有技術存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療帕金森病的乳鐵蛋白。

為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案為：

乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用，所述藥物用于治療或預防MPTP的毒理學作用。

乳鐵蛋白在制備帕金森治療藥物中的應用，所述藥物用于治療或預防帕金森病。

所述乳鐵蛋白是脫鐵乳鐵蛋白或全鐵乳鐵蛋白，這兩種藥物均能降低腦內(nèi)黑質鐵的水平，發(fā)揮對PD的神經(jīng)保護作用，APO-Lf與HOLO-Lf對外周鐵水平均沒有影響，既不螯合鐵造成貧血，也不增加鐵造成鐵負載，APO-Lf與HOLO-Lf降低腦內(nèi)黑質鐵的作用與鐵螯合不相關，通過調節(jié)鐵轉運蛋白的表達而實現(xiàn)降低腦鐵的功能，即降低鐵轉入蛋白DMT1的表達，增加鐵轉出蛋白Fpn1表達。

所述脫鐵乳鐵蛋白的濃度為10mg/kg；所述全鐵乳鐵蛋白的濃度為15mg/kg。

其中，APO-Lf與HOLO-Lf除了降低腦鐵水平發(fā)揮神經(jīng)保護作用之外，還能通過抗凋亡，增加Bcl-2，Bcl-2/Bax及降低CleavedCaspase-3，抗氧化，增加SOD1發(fā)揮神經(jīng)保護作用。

其中所述乳鐵蛋白減輕MPTP所致實驗動物脾臟質量的丟失。

其中所述乳鐵蛋白拮抗MPTP對黑質DA能神經(jīng)元的神經(jīng)毒作用。

其中所述乳鐵蛋白可拮抗MPTP導致脾臟鐵減少的毒性作用，從而維持脾臟內(nèi)的鐵儲存量；但對肝臟鐵的水平?jīng)]有影響。

其中所述乳鐵蛋白減輕MPTP所致紋狀體內(nèi)DA含量的降低。

其中所述乳鐵蛋白降低MPTP處理組黑質的鐵沉積水平。

相對于現(xiàn)有技術，本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明基于以下意料不到的發(fā)現(xiàn)：脫鐵乳鐵蛋白和乳鐵蛋白促進了帕金森病的治療。

1.乳鐵蛋白在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療或預防MPTP的毒理學作用。

2.乳鐵蛋白在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療或預防帕金森病。

3.項1或2的用途，其中所述乳鐵蛋白是脫鐵乳鐵蛋白或全鐵乳鐵蛋白。

4.項3的用途，其中所述脫鐵乳鐵蛋白Apo-Lf的濃度為10mg/kg。

5.項3的用途，其中所述全鐵乳鐵蛋白Holo-Lf的濃度為15mg/kg。

6.項1的用途，其中所述乳鐵蛋白減輕MPTP所致實驗動物脾臟質量的丟失。

7.項1的用途，其中所述乳鐵蛋白拮抗MPTP對黑質DA能神經(jīng)元的神經(jīng)毒作用。

8.項1的用途，其中所述乳鐵蛋白減輕MPTP所致紋狀體內(nèi)DA含量的降低。

9.項1的用途，其中所述乳鐵蛋白降低MPTP處理組黑質的鐵沉積水平。

附圖說明

圖1:MPTP組小鼠在接受Lf處理后體重損失減輕(Figure.1A)，爬竿實驗時間縮短(Fugure.1B)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。

圖2 MPTP小鼠在接受Lf處理后脾臟組織重量損失程度降低，高劑量Lf的效果更為顯著。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。

圖3 Lf通過拮抗MPTP所致的小鼠黑質TH陽性細胞數(shù)量減少發(fā)揮對DA神經(jīng)元的保護作用。15mg/kg Holo-Lf和10mg/kgApo-Lf均表現(xiàn)出最佳保護作用。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。

圖4 Lf拮抗MPTP所致的紋狀體中DA與其代謝產(chǎn)物含量下降。圖示各組小鼠紋狀體中DA水平(A)，DOPAC水平(B),HVA水平(C)以及DA([DOPAC+HVA]/DA)的數(shù)值(D)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。

圖5免疫組織化學鐵著色陽性細胞在黑質的分布(A)。MPTP組小鼠在Lf處理后鐵著色細胞減少。15mg/kg Holo-Lf和10mg/kgApo-Lf均表現(xiàn)出最佳效果。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝8.

圖6 MPTP組小鼠血清鐵(A)與血清鐵蛋白(B)均顯著升高，TIBC(C)則降低。15mg/kg Holo-Lf和10mg/kg Apo-Lf均能逆轉MPTP組小鼠血清鐵的上升趨勢，并降低血清鐵蛋白的水平。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖7免疫組化鐵著色并未發(fā)現(xiàn)鐵在各組間小鼠肝組織中的分布有明顯差異。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖8脾組織普魯士藍染色示小鼠脾組織鐵分布(A)。MPTP小鼠在經(jīng)Lf處理后脾組織鐵的特征性分布明顯減輕(B)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖9 Western blot檢測Lf表達量(A)。MPTP組與Lf組均出現(xiàn)Lf表達量的升高(B)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖10 Western blot示DMT1與Fpn1的表達量(A and C)。Lf使MPTP組小鼠的DMT1(B)表達量上升，是Fpn1(D)表達量降低。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖11 Western blot示小鼠黑質中Bcl-2水平(A),Bax水平(B),Bcl-2/Bax比值(C)和Cleaved Caspase-3水平(D)。與MPTP組相比，Apo和Holo-Lf處理均能使Bcl-2和Bcl-2/Bax比值上調，同時使Cleaved Caspase-3水平下降。各組間Bax表達量未見明顯差異。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖12 Western blot示黑質中SOD1水平(A)。Lf可通過減輕SOD1表達量的降低拮抗MPTP毒性作用(B)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施方式對本發(fā)明技術方案做進一步詳細描述：

本發(fā)明提供以下內(nèi)容以便于本領域技術人員理解本發(fā)明，但是這些僅僅是例示性的，而非限制性的。本發(fā)明應當以所附權利要求書為限。

如圖1-12所示：

圖1:MPTP組小鼠在接受Lf處理后體重損失減輕(Figure.1A)，爬竿實驗時間縮短(Fugure.1B)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。

圖2MPTP小鼠在接受Lf處理后脾臟組織重量損失程度降低，高劑量Lf的效果更為顯著。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。

圖3Lf通過拮抗MPTP所致的小鼠黑質TH陽性細胞數(shù)量減少發(fā)揮對DA神經(jīng)元的保護作用。15mg/kg Holo-Lf和10mg/kgApo-Lf均表現(xiàn)出最佳保護作用。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。

圖4Lf拮抗MPTP所致的紋狀體中DA與其代謝產(chǎn)物含量下降。圖示各組小鼠紋狀體中DA水平(A)，DOPAC水平(B),HVA水平(C)以及DA([DOPAC+HVA]/DA)的數(shù)值(D)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6。

圖5免疫組織化學鐵著色陽性細胞在黑質的分布(A)。MPTP組小鼠在Lf處理后鐵著色細胞減少。15mg/kg Holo-Lf和10mg/kgApo-Lf均表現(xiàn)出最佳效果。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝8.

圖6MPTP組小鼠血清鐵(A)與血清鐵蛋白(B)均顯著升高，TIBC(C)則降低。15mg/kg Holo-Lf和10mg/kg Apo-Lf均能逆轉MPTP組小鼠血清鐵的上升趨勢，并降低血清鐵蛋白的水平。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖7免疫組化鐵著色并未發(fā)現(xiàn)鐵在各組間小鼠肝組織中的分布有明顯差異。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖8脾組織普魯士藍染色示小鼠脾組織鐵分布(A)。MPTP小鼠在經(jīng)Lf處理后脾組織鐵的特征性分布明顯減輕(B)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖9Western blot檢測Lf表達量(A)。MPTP組與Lf組均出現(xiàn)Lf表達量的升高(B)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖10Western blot示DMT1與Fpn1的表達量(A and C)。Lf使MPTP組小鼠的DMT1(B)表達量上升，是Fpn1(D)表達量降低。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖11Western blot示小鼠黑質中Bcl-2水平(A),Bax水平(B),Bcl-2/Bax比值(C)和Cleaved Caspase-3水平(D)。與MPTP組相比，Apo和Holo-Lf處理均能使Bcl-2和Bcl-2/Bax比值上調，同時使Cleaved Caspase-3水平下降。各組間Bax表達量未見明顯差異。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

圖12Western blot示黑質中SOD1水平(A)。Lf可通過減輕SOD1表達量的降低拮抗MPTP毒性作用(B)。*P<0.05,與對照相比；#P<0.05,與MPTP組相比；n＝6.

在體內(nèi)Lf主要以兩種形式存在：不含鐵形式(apo-lactoferrin，apo-Lf)和鐵飽和形式(holo-lactoferrin，holo-Lf)。

在本文中，不含鐵形式的乳鐵蛋白與脫鐵乳鐵蛋白或apo-Lf可互換使用。

在本文中，鐵飽和形式的乳鐵蛋白與全鐵乳鐵蛋白或holo-Lf可互換使用。

帕金森病是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，老年人多見，平均發(fā)病年齡為60歲左右，40歲以下起病的青年帕金森病較少見。我國65歲以上人群PD的患病率大約是1.7％。大部分帕金森病患者為散發(fā)病例，僅有不到10％的患者有家族史。帕金森病最主要的病理改變是中腦黑質多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)元的變性死亡，由此而引起紋狀體DA含量顯著性減少而致病。導致這一病理改變的確切病因目前仍不清楚，遺傳因素、環(huán)境因素、年齡老化、氧化應激等均可能參與PD多巴胺能神經(jīng)元的變性死亡過程。

實施例

方法：我們的實驗動物采用出生10周后的雄性C57BL/6小鼠。每天記錄體重，隔天進行一次爬竿實驗測定。我們用鐵染色和普魯士藍染色的方法對黑質，肝臟和脾臟中的非血紅素鐵進行了免疫組化染色，用免疫熒光的方法對黑質中的表達酪氨酸羥化酶(TH)細胞進行染色，用高效液相的方法對紋狀體多巴胺(dopamine，DA)含量極其代謝產(chǎn)物進行了測定。血清鐵(serum iron，SI)、血清鐵蛋白(serum ferritin，SI)和總鐵結合力(total iron binding capacity,TIBC)用ELISA法檢驗。用Western blot的方法檢測Lf、乳鐵蛋白受體(lactoferrin receptor,LfR)、二價金屬離子轉運體(divalent metal transporter,DMT1)，膜鐵轉運蛋白(ferriportin1，F(xiàn)pn1)，Bcl-2、Bax以及caspase-3在黑質中的表達。

Lf減輕MPTP所致體重損失與行為異常：

MPTP的毒理學作用導致了實驗動物體重的損失，而應用高劑量Lf(如10mg/kg Apo-Lf或15mg/kg Holo-Lf)處理MPTP組之后，體重損失明顯減輕。爬竿實驗用于測定運動遲緩程度。MPTP組爬竿時動作緩慢、僵硬，不能糾正姿態(tài)，停留在爬竿上的時間顯著延長，這可能與嚴重的肌緊張有關。經(jīng)10mg/kg Apo-Lf或15mg/kg Holo-Lf處理后的MPTP組，爬竿時間明顯縮短。同時，單純應用Lf灌胃處理與進行對照的組別間并無顯著差異。

Lf減輕MPTP所致實驗動物脾臟質量的丟失：

凡經(jīng)MPTP處理的實驗組與對照組相比均有不同程度的脾臟質量減小。而應用10mg/kg Apo-Lf或15mg/kg Holo-Lf可以減輕這種影響，其原因可能是Lf的抗炎作用與抗毒性作用保護脾臟免受MPTP的毒性損傷。同時，僅給予Lf處理的實驗組并未表現(xiàn)出較對照組更好的保護作用。

Lf拮抗MPTP對黑質DA能神經(jīng)元的神經(jīng)毒作用：

DA能神經(jīng)元均呈酪氨酸羥化酶陽性(TH-ir)，能將酪氨酸轉化為多巴——多巴胺的前體。我們使用免疫熒光技術檢測黑質中TH-ir細胞發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，單純MPTP損傷組可減少約40個神經(jīng)元，其變化顯著。10mg/kg Apo-Lf組或15mg/kg Holo-Lf組與單純MPTP損傷組相比，損失的神經(jīng)元可減少至約10個，而5mg/kg Apo-Lf組和5mg/kg Holo-Lf組的黑質神經(jīng)元數(shù)量并無明顯回升，這顯示高劑量Lf能拮抗MPTP的神經(jīng)毒作用。另外，單純應用Lf灌胃處理與進行對照的組別間差別不明顯。

Lf減輕MPTP所致紋狀體內(nèi)DA含量的降低：

我們使用高效液相色譜法及電化學技術測定DA及其代謝產(chǎn)物DOPAC與HVA在紋狀體內(nèi)含量，并以[DOPAC+HVA]/DA作為DA代謝指標。結果提示，MPTP顯著降低C57BL/6小鼠紋狀體內(nèi)DA、DOPAC和HVA的含量，且明顯提高[DOPAC+HVA]/DA(即DA代謝率)。同時，應用高劑量Lf(如10mg/kg Apo-Lf或15mg/kg Holo-Lf)可減輕MPTP的毒性作用，使DA及其代謝率恢復至接近正常。而低劑量(5mg/kg Apo-Lf或5mg/kg Holo-Lf)發(fā)揮的保護作用有限，并且對照組與僅用Lf處理組之間沒有明顯差異。

Lf降低MPTP處理組黑質的鐵沉積水平：

為探索Lf的鐵螯合能力，我們使用免疫組化技術測定了黑質的鐵沉積水平。結果證實經(jīng)MPTP處理的小鼠，黑質中的鐵著色細胞可增加約25個；而應用Lf處理的MPTP組，鐵沉積水平有所下降，10mg/kg Apo-Lf組和15mg/kg Holo-Lf組下降尤為明顯，與單純MPTP損傷組相比可減少約20個。同時，單純Lf處理組與對照組相比鐵沉積水平無明顯改觀，提示Lf可能不具備鐵螯合能力。

Elisa檢測血清鐵、血清鐵蛋白及總鐵結合力(TIBC)的結果：

血清鐵指示了血清或血漿中Fe3+的含量，其來源于食物攝取、紅細胞破壞和肝、脾儲存鐵的釋放。我們觀察到MPTP可使血清鐵升高，而高劑量Lf(如10mg/kg Apo-Lf或15mg/kg Holo-Lf)可減弱MPTP的作用。血清鐵蛋白是Fe3+與游離鐵蛋白的結合體，也是體內(nèi)鐵的一種儲存形式，其作用包括調節(jié)鐵水平，及通過結合或釋放血清鐵以維持血紅蛋白穩(wěn)定性。我們發(fā)現(xiàn)在MPTP損傷后，血清鐵蛋白可反應性升高，同時高劑量Lf對MPTP有拮抗作用。TIBC代表血清轉鐵蛋白尚能結合鐵的最大量，反映了轉鐵蛋白的真實水平。Lf處理的MPTP組與單純MPTP組相比，TIBC升高。單純應用Lf灌胃處理與進行對照的組別間差別不明顯。

肝組織鐵含量測定顯示組間鐵沉積水平無差異：

我們使用免疫組化技術探索肝臟鐵的分布，結果顯示，鐵的沉積主要表現(xiàn)在肝小葉的邊緣區(qū)及肝臟血管內(nèi)皮，而在匯管區(qū)少有鐵沉積。各實驗組間并無明顯差別，提示MPTP可能不會導致肝臟鐵代謝紊亂。

普魯士藍染色顯示Lf處理的MPTP小鼠脾臟中鐵顆粒增加：

普魯士藍染色可將鐵顆粒染為藍色，將脾臟細胞染為紅色。結果顯示，鐵顆粒主要分布于含有大量紅細胞的白髓。周圍被鐵顆粒環(huán)繞的區(qū)域為紅髓，包括脾索和脾竇。鐵顆粒含量的分析使用Image J，結果顯示與對照組相比，MPTP可導致鐵顆粒減少約0.7％。高劑量Lf可使MPTP損傷后的鐵顆粒數(shù)量有所回升，從而維持脾臟內(nèi)的鐵儲存量。

Lf處理后的MPTP小鼠黑質中Lf表達量上升：

Lf表達水平可由Western Blot測定，結果表明單純MPTP損傷組較對照組Lf有升高趨勢，同時體外補充Lf也可以提高黑質內(nèi)Lf的含量。但應用Lf處理的MPTP組與單純Lf灌注組之間并無Lf含量的明顯差別。

黑質中DMT1與Fpn1表達量的改變與鐵穩(wěn)態(tài)相關：

DMT1是細胞主要的鐵轉入蛋白，而Fpn1是主要的鐵轉出蛋白，兩種蛋白在黑質中的含量均可由Western Blot測得。我們觀察到Lf可降低DMT1的表達量，提高Fpn1的表達量，從而降低黑質中鐵的沉積。單純Lf灌胃處理與進行對照的組別間差別不明顯。

Apo-Lf與Holo-Lf對Bcl-2，Bax，Bcl-2/Bax及Cleaved Caspase-3表達量的影響：

細胞調往途徑被公認為PD中DA能神經(jīng)元丟失的重要原因。我們使用Western Blot測定Bcl-2，Bax，Bcl-2/Bax及Cleaved Caspase-3的表達量，以探索Apo-Lf或Holo-Lf誘導的抗凋亡作用。腹腔注射MPTP可降低Bcl-2水平及Bcl-2/Bax，并提高Cleaved Caspase-3水平，而高劑量Lf可明顯拮抗MPTP的作用。然而各組間Bax水平并無明顯變化，此外，單純Lf處理組與對照組相比改變也不明顯。

Lf通過提高SOD1的表達量拮抗MPTP：

SOD1可將·O2-轉化為H2O2，因此在神經(jīng)元中發(fā)揮重要的抗氧化作用。其含量可通過Western Blot進行測定。MPTP可導致SOD1表達量下降，而Lf，尤其是高劑量Lf，可減弱MPTP此效應，使SOD1表達量有所上升，以保護神經(jīng)元。單純應用Lf灌胃處理與進行對照的組別間無顯著差別。

結果：Lf的保護作用隨著劑量增高而上升，最高劑量的Apo-Lf和Holo Lf之間的保護效果并無差異，但Holo-Lf的保護作用上升的比Apo-Lf的慢。我們發(fā)現(xiàn)Lf能減少MPTP導致的多巴胺能神經(jīng)元丟失，降低黑質的鐵沉積以及增加紋狀體DA的含量。血清鐵、血清鐵蛋白在MPTP組中均增加，TIBC降低，Lf可以拮抗這種損傷現(xiàn)象。肝臟鐵含量沒未發(fā)現(xiàn)明顯的變化，脾臟組織鐵染色在MPTP組中呈減少狀態(tài)，而高劑量Lf可以逆轉這種現(xiàn)象。在黑質，乳鐵蛋白能夠降低DMT1的表達，增加Fpn1表達。它還增加了黑質SOD1和Bcl-2蛋白水平以及降低caspase-3的表達。

結論：我們的研究結果表明，Lf通過增加黑質多巴胺能神經(jīng)元的數(shù)量，紋狀體多巴胺含量，以及降低黑質鐵沉積發(fā)揮了良好的神經(jīng)保護作用。它通過降低DMT1的表達來降級黑質中鐵轉入，通過增加Fpn1的表達來增加黑質的鐵轉出，因此能夠降低黑質的鐵沉積。MPTP的老鼠血清鐵水平、鐵蛋白含量的升高可能是黑質中過多沉積的鐵的來源，而脾臟非血紅素鐵的含量降低意味著血清中的鐵很可能來自于脾臟，從而導致了體內(nèi)系統(tǒng)性的鐵代謝的紊亂。此外，Lf在中樞通過上調SOD1的表達，上調bcl-2的表達以及降低caspase-3的表達發(fā)揮了它的抗氧化、抗凋亡作用。中樞和外周的鐵含量在僅給藥Lf的保護組和對照組之間無明顯差異，表明apo-Lf在整體水平并沒有鐵螯合作用,而holo-Lf并沒有造成鐵的蓄積，說明不管哪種形式的Lf對機體是無害的。。

以上所述，僅為本發(fā)明的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何不經(jīng)過創(chuàng)造性勞動想到的變化或替換，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護范圍應該以權利要求書所限定的保護范圍為準。