本發(fā)明涉及一種促進(jìn)口腔腺體細(xì)胞、口腔黏膜內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞增殖再生，進(jìn)而再生修復(fù)口腔組織的再生液，具體是一種纖連蛋白口腔組織細(xì)胞再生液。

背景技術(shù)：

再生醫(yī)學(xué)是個(gè)快速發(fā)展的領(lǐng)域，它旨在探尋再生的機(jī)制并應(yīng)用于疾病或損傷組織結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)的治療策略。再生醫(yī)學(xué)包括細(xì)胞移植、生物化人工組織的構(gòu)建（即組織工程）及原位殘余組織的化學(xué)誘導(dǎo)再生。在健康醫(yī)療方面，由于組織損傷，人體再生能力缺損而導(dǎo)致的醫(yī)療費(fèi)用（僅在美國(guó)，每年估計(jì)已超過(guò)400億美元）和生產(chǎn)力損失、生命質(zhì)量下降、過(guò)早死亡等造成的經(jīng)濟(jì)損失是相當(dāng)巨大的。再生醫(yī)學(xué)作為一門嶄新的醫(yī)學(xué)學(xué)科，不僅要預(yù)防和治療基本的疾病，而且要修復(fù)因疾病和創(chuàng)傷所損害的組織器官的結(jié)構(gòu)和功能。

口腔損傷組織再生越來(lái)越受關(guān)注，口腔黏膜疾病、牙周組織損傷、口腔腺體再生等問(wèn)題亟待解決。隨著再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展，包括細(xì)胞移植、生物化人工組織的構(gòu)建及原位殘余組織的化學(xué)誘導(dǎo)再生等再生醫(yī)學(xué)方法在內(nèi)的新方法新技術(shù)已逐漸被臨床醫(yī)學(xué)接受，而且取得了較大成果。例如，對(duì)牙周炎破壞的牙周組織進(jìn)行再生的方法有牙周植骨術(shù)、引導(dǎo)組織再生術(shù)、生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)、干細(xì)胞移植等。

纖連蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）是一種高分子糖蛋白，廣泛存在于動(dòng)物組織和組織液中，具有多種生物學(xué)功能。它廣泛參與細(xì)胞遷移、黏附、增殖、止血及組織修復(fù)等過(guò)程，調(diào)動(dòng)單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)清除損傷組織處有害物質(zhì)，具有生長(zhǎng)因子作用。FN作為細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì)，可提高多種細(xì)胞的貼壁率、匯合率，縮短細(xì)胞匯合時(shí)間，使細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)良好，代謝率增強(qiáng)，DNA、RNA及蛋白質(zhì)合成速度顯著提高；細(xì)胞的集落率升高，原代培養(yǎng)成活率提高。在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，F(xiàn)N的應(yīng)用主要有以下三個(gè)方面：

（1）FN與細(xì)胞移植

移植細(xì)胞是懸浮還是聚集取決于它們分化并自我裝配成三維原始組織的立體結(jié)構(gòu)及與周圍宿主融合的需要。這取決于損傷部位細(xì)胞信號(hào)和黏附分子（FN）的出現(xiàn)以及周圍健康組織的三維立體結(jié)構(gòu)。我們知道進(jìn)行維持性再生的組織必須為維持組織重建提供必要的信號(hào)。同樣，受損組織的自主性再生也需要有必備的信號(hào)。同時(shí)，受損組織的環(huán)境一定有部分信號(hào)阻礙再生，這是由于這些組織常在啟動(dòng)再生應(yīng)答后被纖維化抑制。

（2）FN與生物化人工組織

生物化人工組織的目的是在其移植到體內(nèi)之前，使用形似受損組織器官的支架構(gòu)建合適的組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)替代物。理想狀態(tài)下，生物化人工組織可以在人體內(nèi)模擬ECM功能，不僅提供幾何形狀及理化特性，使細(xì)胞能夠最大限度的移行穿過(guò)支架，而且有能力整合和釋放細(xì)胞增殖及分化所必須的生物信號(hào)，纖連蛋白（FN）在這一連續(xù)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。FN或獨(dú)立存在或與其他ECM分子結(jié)合或通過(guò)去細(xì)胞化成為結(jié)締組織基質(zhì)而被廣泛用作生物化人工組織的支架或從宿主組織誘導(dǎo)的再生模板。

（3）原位再生的誘導(dǎo)

再生醫(yī)學(xué)原位再生的誘導(dǎo)就是識(shí)別各類生長(zhǎng)因子或小分子并模擬它們的行為或運(yùn)行局部注射激活它們的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，或通過(guò)受損部位再生模板原位誘導(dǎo)或循環(huán)系統(tǒng)中有再生能力的細(xì)胞進(jìn)行再生。纖連蛋白（FN）作為“支持再生”環(huán)境所需的生長(zhǎng)因子，在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及誘導(dǎo)細(xì)胞再生過(guò)程中具有不可替代的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的正是利用以上技術(shù)原理、基于上述現(xiàn)有技術(shù)狀況，并根據(jù)實(shí)踐應(yīng)用效果而研制的一種纖連蛋白口腔組織細(xì)胞再生液，實(shí)踐應(yīng)用研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)N可促進(jìn)口腔腺體細(xì)胞、口腔黏膜內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞等增殖再生，這些細(xì)胞的增殖再生為口腔損傷組織的再生修復(fù)提供了必備條件。

本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種纖連蛋白口腔組織細(xì)胞再生液。其配方是由以下成分配比組成：

纖連蛋白（FN） 0.10-1.50mg/ml

聚乙二醇4000-8000 0.5-5%（重量比）

甘氨酸 0.5-5%（重量比）

木糖醇 3-10%（重量比）

生理鹽水 余量

PH值 6.0—8.0

在本發(fā)明中，纖連蛋白（FN）可促進(jìn)口腔腺體細(xì)胞、口腔黏膜內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞增殖再生，可以再生修復(fù)口腔損傷組織，屬于核心功效成分。

本發(fā)明中的聚乙二醇、甘氨酸作為穩(wěn)定劑，對(duì)維持纖連蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、保持纖連蛋白生物活性具有非常重要的作用，同時(shí)可作為促進(jìn)劑促進(jìn)口腔黏膜對(duì)纖連蛋白的吸收。本發(fā)明中的聚乙二醇分子量范圍選定為4000-8000，是因?yàn)樵摲肿恿糠秶木垡叶紝?duì)人體無(wú)毒副作用，且具有較高的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，最適合維持纖連蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、保持纖連蛋白生物活性、促進(jìn)口腔黏膜對(duì)纖連蛋白的吸收，其它分子量范圍的聚乙二醇不具有這方面的優(yōu)勢(shì)。

本發(fā)明中的木糖醇起到調(diào)節(jié)口味的作用，適用于各類人群（如糖尿病人和宜患齲齒的兒童等），也可作為穩(wěn)定劑保護(hù)纖連蛋白的穩(wěn)定性。

本發(fā)明的纖連蛋白口腔組織細(xì)胞再生液的制備方法是：按組份比例稱取各原料，將木糖醇、甘氨酸、聚乙二醇分別用生理鹽水稀釋溶解后投入反應(yīng)釜內(nèi)加熱至120-150度，滅菌30-40分鐘，靜置降至室溫密封待用。將纖連蛋白在凈化室用孔徑為1.0μm、0.65μm、0.22μm的生物濾膜除菌，最后在百級(jí)凈化條件下將各種料液混合，攪拌均勻，用50%HCl及40%NaOH調(diào)PH至6-8，加滅菌生理鹽水達(dá)擬定體積，按規(guī)格及質(zhì)量要求灌封，包裝、檢驗(yàn)、出廠。

本發(fā)明產(chǎn)品可應(yīng)用于免疫能力低下口腔疾患長(zhǎng)期不愈人群的保健和治療。應(yīng)用方法：每次餐后清潔口腔，將纖連蛋白口腔組織細(xì)胞再生液直接噴于口腔，反復(fù)做漱口動(dòng)作，盡量延長(zhǎng)在口腔的停留時(shí)間，最后緩慢吐出或咽下均可。每日3-4次，睡前加用一次更好。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比創(chuàng)新點(diǎn)如下：

1、本發(fā)明充分發(fā)揮纖連蛋白促進(jìn)口腔腺體細(xì)胞、口腔黏膜內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞增殖再生的生物學(xué)特性，擴(kuò)大了纖連蛋白的應(yīng)用領(lǐng)域，以滿足市場(chǎng)客戶更加廣泛的需求，可應(yīng)用于免疫能力低下口腔牙齒疾患長(zhǎng)期不愈人群的保健和治療。

2、發(fā)明產(chǎn)品配方組合科學(xué)適用，各組份均為純生物原料，對(duì)人體無(wú)毒副作用，各個(gè)成分之間相互協(xié)同作用，特別是聚乙二醇、甘氨酸對(duì)維持纖連蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、保持纖連蛋白生物活性、促進(jìn)口腔黏膜對(duì)纖連蛋白的吸收具有重要的作用，可實(shí)現(xiàn)口腔健康功效最大化。該產(chǎn)品配方目前未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外報(bào)道。

另外，我公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)在中國(guó)核心醫(yī)學(xué)期刊《基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床》2014年12月第34卷第12期P1655—1657發(fā)表的題目為“纖連蛋白（FN）治療口腔潰瘍”的論文中已提到纖連蛋白制劑對(duì)治療口腔潰瘍具有很好的療效，與其對(duì)比，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢(shì)：（1）論文中提到的纖連蛋白制劑為成分單一制劑，而本發(fā)明產(chǎn)品配方為多成分制劑，各成分之間具有很好的協(xié)調(diào)、促進(jìn)作用，對(duì)促進(jìn)口腔組織細(xì)胞再生具有更顯著效果；（2）通過(guò)口腔組織細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)比實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明產(chǎn)品配方對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的速度比論文中提到的纖連蛋白制劑快1.5倍；通過(guò)臨床應(yīng)用對(duì)比發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明產(chǎn)品配方對(duì)治療口腔潰瘍的有效率及治愈率比論文中提到的纖連蛋白制劑分別高12.1%、9.8%，對(duì)治療牙齦炎的有效率及治愈率比論文中提到的纖連蛋白制劑分別高15.8%、11.3%。由此表明，本發(fā)明產(chǎn)品配方比論文中提到的纖連蛋白制劑在促進(jìn)口腔組織細(xì)胞再生、治療口腔潰瘍、修復(fù)口腔黏膜損傷及消炎方面具有更好的療效。

3、與我公司另一個(gè)發(fā)明專利“可食用型纖連蛋白口香糖”相比，本發(fā)明專利具有以下創(chuàng)新點(diǎn)：本發(fā)明專利產(chǎn)品配方經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證而得來(lái)，對(duì)促進(jìn)口腔腺體細(xì)胞、口腔黏膜內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞增殖再生具有很好的作用，而“可食用型纖連蛋白口香糖”的配方只對(duì)治療口腔潰瘍、牙周炎、牙髓炎等口腔疾病方面具有療效，在促進(jìn)細(xì)胞增殖再生方面并未表現(xiàn)出良好效果。通過(guò)口腔組織細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)比實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明產(chǎn)品配方對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的速度比“可食用型纖連蛋白口香糖”的配方快1.7倍。

4、本發(fā)明生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)便規(guī)范，適用性強(qiáng)，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化規(guī)模化生產(chǎn)。核心功效成分纖連蛋白原料的生產(chǎn)是我們的專利技術(shù)，我們研發(fā)的纖連蛋白口服液已取得了權(quán)威認(rèn)證機(jī)構(gòu)瑞士SGS的安全性認(rèn)證，包括重金屬理化指標(biāo)、微生物指標(biāo)等安全性認(rèn)證，各類指標(biāo)均完全合格。其它輔料均為市場(chǎng)常規(guī)原料，所以開(kāi)發(fā)本產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

5、本產(chǎn)品使用方法簡(jiǎn)單方便，經(jīng)試用很受用戶歡迎，具有市場(chǎng)需求潛力。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明以下結(jié)合實(shí)例做進(jìn)一步描述：

實(shí)例1：

配制100毫升纖連蛋白口腔組織細(xì)胞再生液，可按下列用量稱取各組份：纖連蛋白：0.06g，聚乙二醇：1g，木糖醇：5g，甘氨酸：1g。

制備方法是：按組份比例稱取各原料，首先，將聚乙二醇4000、甘氨酸、木糖醇混合，用50毫升生理鹽水溶解投入容器中加熱至130℃，保溫30分鐘密封、靜置降至室溫放凈化室待用為原料A。用30毫升生理鹽水將纖連蛋白經(jīng)孔徑為1.0μm、0.65μm生物膜過(guò)濾，在百級(jí)凈化臺(tái)內(nèi)用0.22μm生物膜除菌待用為原料B，最后在萬(wàn)級(jí)凈化條件下百級(jí)凈化操作臺(tái)內(nèi)將原料A和原料B混合，調(diào)PH為7.0，加滅菌的生理鹽水至100毫升，攪拌均勻，按規(guī)格和質(zhì)量要求灌封、包裝即可。

實(shí)例2：

配制100毫升纖連蛋白口腔組織細(xì)胞再生液，可按下列用量稱取各組份：纖連蛋白：0.15g，聚乙二醇：5g，木糖醇：10g，甘氨酸：5g。

制備方法是：按組份比例稱取各原料，首先，將聚乙二醇4000、甘氨酸、木糖醇混合，用50毫升生理鹽水溶解投入容器中加熱至130℃，保溫30分鐘密封、靜置降至室溫放凈化室待用為原料A。用30毫升生理鹽水將纖連蛋白經(jīng)孔徑為1.0μm、0.65μm生物膜過(guò)濾，在百級(jí)凈化臺(tái)內(nèi)用0.22μm生物膜除菌待用為原料B，最后在萬(wàn)級(jí)凈化條件下百級(jí)凈化操作臺(tái)內(nèi)將原料A和原料B混合，調(diào)PH為7.0，加滅菌的生理鹽水至100毫升，攪拌均勻，按規(guī)格和質(zhì)量要求灌封、包裝即可。

實(shí)例3：

配制100毫升纖連蛋白口腔組織細(xì)胞再生液，可按下列用量稱取各組份：纖連蛋白：0.01g，聚乙二醇：0.5g，木糖醇：3g，甘氨酸：0.5g。

制備方法是：按組份比例稱取各原料，首先，將聚乙二醇4000、甘氨酸、木糖醇混合，用50毫升生理鹽水溶解投入容器中加熱至130℃，保溫30分鐘密封、靜置降至室溫放凈化室待用為原料A。用30毫升生理鹽水將纖連蛋白經(jīng)孔徑為1.0μm、0.65μm生物膜過(guò)濾，在百級(jí)凈化臺(tái)內(nèi)用0.22μm生物膜除菌待用為原料B，最后在萬(wàn)級(jí)凈化條件下百級(jí)凈化操作臺(tái)內(nèi)將原料A和原料B混合，調(diào)PH為7.0，加滅菌的生理鹽水至100毫升，攪拌均勻，按規(guī)格和質(zhì)量要求灌封、包裝即可。