本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種刺五加組合物、含其制劑及其檢測方法。
背景技術(shù)：
：刺五加(拉丁學(xué)名：Eleutherococcussenticosus)，別名:刺拐棒、坎拐棒子、一百針、老虎潦、五加參、俄國參、西伯利亞人參，落葉灌木，主要分布于亞洲東北部，西伯利亞一帶。其根部和根狀莖可入藥，具有益氣健脾、補腎安神、活血化瘀的功效，《本草綱目》記載刺五加能“補力益精，明目下氣”，能“補五勞七傷，久服輕身耐老”，常用于治療脾腎陽虛、體虛乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多夢。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究也表明，刺五加具有抗惡性瘧疾、抗病毒、抗腫瘤、降血糖、降血脂和止痛殺菌等多種藥理作用和臨床應(yīng)用。根據(jù)文獻(xiàn)報道，刺五加中的總苷類物質(zhì)、總黃酮類物質(zhì)和總糖類物質(zhì)為其主要活性成分。目前，刺五加總苷經(jīng)分離鑒定主要有其中形式，分別為胡蘿卜苷(刺五加苷A)、紫丁香苷(刺五加苷B)、7-羥基-6,8-二甲基香豆精葡萄糖苷(刺五加苷B1)、乙基半乳糖苷(刺五加苷C)、紫丁香樹脂酚二糖苷(刺五加苷D和E)，此外還有刺五加苷F和G等。隨著技術(shù)不斷提高，還從刺五加中分離得到以齊墩果酸為配基的五加苷I、K、L、M等，齊墩果酸被認(rèn)為是我國目前首次從植物中發(fā)掘出來的治療急性黃疽性肝炎和慢性病毒性肝炎較理想的藥物。刺五加總黃酮也是刺五加重要的活性成分之一，主要由槲皮素-3-O-半乳糖、槲皮素-3-O-鼠李糖、槲皮素和蘆丁等組成。經(jīng)研究，刺五加總黃酮具有抗心肌缺血、能擴張血管、增加冠狀動脈血流量、改善心電圖、降低心肌耗氧量、抗異位心律、降低血壓、鎮(zhèn)靜安神和抗菌消炎的藥理活性。研究表明，刺五加總糖為免疫活性成分之一，主要為堿性多糖和水溶性多糖。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，刺五加多糖具有較強的抗腫瘤作用，尤其是對小鼠S180肉瘤和人白血病粒細(xì)胞K562作用顯著；另一方面，刺五加多糖可以促進(jìn)T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等細(xì)胞因子的產(chǎn)生；再一方面，刺五加多糖還具有較強的抗氧化活性。國內(nèi)外對傳統(tǒng)中藥刺五加的化學(xué)成分進(jìn)行了大量研究，分離得到了大量有效成分。同時，也公開了多種刺五加提取物、組合物及其制劑。例如，中國專利申請201210533220公開了一種刺五加提取物及其制備與應(yīng)用，該提取物中多糖含量為50wt％～80wt％；中國專利申請201210049755公開了一種刺五加組合物，含其制劑及其檢測方法，每克該組合物中含有總黃酮50-120毫克、紫丁香苷12.5-30毫克和刺五加苷E4-15毫克；中國專利申請201010165556公開了一種刺五加提取物及其藥物組合物，以及該提取物在制備老年癡呆藥物中的應(yīng)用；中國專利申請201410508745公開了一種低毒的刺五加注射液及其制備方法，其含有以下活性成分：含總黃酮1.8-5.5mg/ml、紫丁香苷0.13-0.70mg/ml和刺五加苷E0.06-0.34mg/ml，鉀離子的數(shù)量≤800μg/ml。由于中藥制劑中成分復(fù)雜，既有活性物質(zhì)也有其他雜質(zhì)甚至存在毒性物質(zhì)和過敏原，因此經(jīng)常出現(xiàn)一類過敏反應(yīng)為主的藥物不良反應(yīng)。刺五加也不例外，現(xiàn)有的刺五加組合物或其制劑成分復(fù)雜，相對不夠明確，一方面使得實際活性成分不能更有效地發(fā)揮作用；另一方面，刺五加注射液不良反應(yīng)案例頻頻出現(xiàn)，說明其毒性和致敏性還有待進(jìn)一步降低；再一方面由于其中的主要大類活性成分的組成并不明確，在質(zhì)量控制上也存在隱患。而目前公開的刺五加提取物或組合物及其制劑并未能很好的解決上述問題。目前，現(xiàn)有的對刺五加制劑中主要活性成分進(jìn)行檢測的方法主要為高效液相色譜法及其改進(jìn)方法。該方法耗時長、樣品前處理過程復(fù)雜、檢測過程繁復(fù)并且對儀器的要求較高。當(dāng)面臨大批量檢測時，該方法很難在有效時間中完成檢測，也就難以及時地向生產(chǎn)部門提供檢測數(shù)據(jù)。中藥中成分復(fù)雜，通常是幾種活性成分協(xié)同發(fā)揮作用。目前的刺五加提取物在提取時通常采用水提和有機溶劑提取為主。提取過程中并不注重樣品前處理，煎煮時間和煎煮方式單一，一定程度使得刺五加中各種有效成分不能更加徹底的溶出，導(dǎo)致提取物中有效成分含量低或不均衡，甚至造成雜質(zhì)含量高。例如中國專利申請201010165556公開了一種刺五加提取物，其通過如下方法制備獲得：將刺五加切成碎片，加水煎煮，合并煎液，減壓濃縮，加入乙醇至醇含量為70-75％，靜置濾過，回收乙醇后加水稀釋至生藥重量的3-6倍，用石灰乳調(diào)pH值至10.0-12.0，靜置4小時以上，再用硫酸將pH值調(diào)至5.0-6.0，靜置過濾，濃縮，加入乙醇至醇含量為80-85％，靜置過濾，離心，濃縮干燥，即得。該方法中醇沉前僅進(jìn)行如下處理：刺五加切成碎片，加水煎煮，合并煎液，減壓濃縮，刺五加中的活性成分，尤其是總糖類不能被充分提出，并且無機鹽雜質(zhì)殘留相對較多。而為了較少雜質(zhì)，現(xiàn)有技術(shù)常采用增加醇沉次數(shù)以及利用樹脂進(jìn)行吸附等方式處理刺五加提取物，然而增加醇沉次數(shù)或利用樹脂吸附往往會使得其中的活性成分也隨之流失，使得制備的刺五加提取物及其利用其制備的制劑中活性成分含量較低。例如中國專利申請201410508745公開了一種低毒的刺五加注射液及其制備方法，其中刺五加提取物的制備方法包括：(1)提取、(2)第一次醇沉、(3)石硫法處理、(4)大孔樹脂吸附、(5)二次醇沉、(6)熱壓機超濾。該方法采用兩次醇沉以及大孔吸附樹脂去除雜質(zhì)，但同時也造成了活性成分的流失，技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的是提供一種刺五加組合物，所述的刺五加組合物中含有刺五加總苷31-167mg/g、總黃酮11-199mg/g、總糖224-736mg/g和總無機鹽20-173mg/g。優(yōu)選地，所述的刺五加組合物中含有刺五加總苷80-142mg/g、總黃酮79-161mg/g、總糖342-692mg/g和總無機鹽20-49mg/g。更優(yōu)選地，所述的刺五加組合物中含有刺五加總苷82-115mg/g、總黃酮91-168mg/g、總糖394-628mg/g和總無機鹽20-25mg/g。所述的總無機鹽指總無機陽離子和總無機陰離子的總和。在一些優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明所述的刺五加組合物中刺五加苷B占刺五加總苷的15-26％。在另一些優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明所述的刺五加組合物中刺五加苷E占刺五加總苷的6-30％。在另一些優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明所述的刺五加組合物中刺五加苷E占刺五加總苷的6-30％，并且刺五加苷B占刺五加總苷的15-26％。本發(fā)明的另一個目的是提供所述的刺五加組合物的制備方法，所述的制備方法包括以下步驟：(1)、前處理：將刺五加清洗粉碎后，加水煎煮2-3次后，加入與水等體積的冰，待冷卻至室溫后，繼續(xù)煎煮1次，再加入與水等體積的冰，待冷卻至室溫后，繼續(xù)煎煮1次，合并煎液得液體A；(2)、石硫法處理：待液體A冷卻至40℃以下時，向其中加入重量百分比為20％的石灰乳調(diào)pH值至10.0-12.0，靜置16-24小時，再用硫酸將pH值調(diào)至5.0-6.0，攪拌均勻后，靜置16-30小時，濾取上清液，將上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.10-1.20的濃縮膏；(3)、醇沉：當(dāng)步驟(2)獲得的濃縮膏溫度降至25-40℃時，邊攪拌邊加入體積濃度為95％以上的乙醇至濃縮膏中乙醇濃度達(dá)到70-85％，攪拌均勻后，靜置16-40小時后，濾取上清液，在乙醇加入過程中維持濃縮膏溫度在25-40℃；(4)、濃縮：將步驟(3)獲得的上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.10-1.20的濃縮膏，既得。所述的制備方法步驟(1)中每次煎煮加入6-10倍量水；優(yōu)選為8-10倍量水；進(jìn)一步優(yōu)選為9-10倍量水。所述的制備方法步驟(1)中每次煎煮時間為2-5小時；優(yōu)選為3-5小時；進(jìn)一步優(yōu)選為3.5-4.5小時。所述的制備方法步驟(1)中使用到的水，包括制備冰所用到的水包括但不限于：飲用水、純化水或注射用水。所述的制備方法步驟(2)中液體A冷卻溫度優(yōu)選為冷卻至35℃以下；進(jìn)一步優(yōu)選為冷卻至30℃以下；更進(jìn)一步優(yōu)選為28℃以下；再進(jìn)一步優(yōu)選為25℃。所述的制備方法步驟(2)中第一次靜置時間優(yōu)選為16-22小時；進(jìn)一步優(yōu)選為18-22小時；更進(jìn)一步優(yōu)選為18-20小時。所述的制備方法步驟(2)中第二次靜置時間優(yōu)選為18-30小時；進(jìn)一步優(yōu)選為20-30小時；更進(jìn)一步優(yōu)選為26-30小時。所述的制備方法步驟(3)中加入乙醇的濃度優(yōu)選為96％以上；進(jìn)一步優(yōu)選為97％以上；更進(jìn)一步優(yōu)選為99％以上。所述的制備方法步驟(3)中在乙醇加入過程中維持濃縮膏溫度優(yōu)選在28-36℃；進(jìn)一步優(yōu)選為30-35℃；更進(jìn)一步優(yōu)選為32-34℃。所述的制備方法步驟(3)中靜置時間優(yōu)選為20-38小時；進(jìn)一步優(yōu)選為24-36小時；更進(jìn)一步優(yōu)選為28-34小時。如未特別說明，本發(fā)明中涉及到的乙醇的濃度均指其體積濃度。如未特別說明，本發(fā)明中涉及到冰可使用飲用水、純化水或注射用水制作。本發(fā)明的再一個目的是提供含有所述的刺五加組合物的制劑。所述的制劑由本發(fā)明所述的刺五加組合物或由本發(fā)明所述的刺五加組合物和藥學(xué)上可接受的輔料組成。所述的制劑為注射液、凍干粉針劑、顆粒劑、丸劑、片劑、噴霧劑、糖漿劑、膠囊劑或合劑。所述的輔料包括但不限于填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、潤濕劑、溶劑、表面活性劑或矯味劑中的一種或幾種。所述的填充劑包括但不限于淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素或葡萄糖中的一種或幾種。所述的粘合劑包括但不限于纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮中的一種或幾種。所述的崩解劑包括但不限于微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉中的一種或幾種。所述的潤滑劑包括但不限于硬脂酸、聚乙二醇、碳酸鈣、碳酸氫鈉、微粉硅膠、滑石粉或硬脂酸鎂中的一種或幾種。所述的助懸劑包括但不限于微粉硅膠、蜂蠟、纖維素、固態(tài)聚乙二醇中的一種或幾種。所述的潤濕劑包括但不限于甘油、吐溫-80、乙氧基氫化蓖麻油或卵磷脂中的一種或幾種。所述的溶劑包括但不限于乙醇、液態(tài)聚乙二醇、異丙醇、吐溫-80、甘油、丙二醇或植物油，所述的植物油選自大豆油、蓖麻油、花生油、調(diào)和油中的一種或幾種。所述的表面活性劑包括但不限于十二烷基苯磺酸鈉、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐溫)中的一種或幾種。所述的甜味劑包括但不限于自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、檸檬酸或糖精鈉中的一種或幾種。本發(fā)明提供的刺五加制劑中，所述的注射液中總固體的含量為16.7-71.9mg/mL。所述的注射液中總固體的含量為，按規(guī)格劃分如下：每支20mL：35.1-71.9mg/mL；每瓶250mL：16.7-36.4mg/mL。優(yōu)選地，所述的注射液中總固體的含量為，按規(guī)格劃分如下：每支20mL：42.9-65.8mg/mL；每瓶250mL：22.3-28.9mg/mL。所述的注射液含有：刺五加總苷1.4-7.2mg/mL、總黃酮1.5-7.1mg/mL、總糖10.2-50.7mg/mL、總無機陽離子0.1-2.9mg/mL和總無機陰離子0.1-3.2mg/mL。所述的注射液含有，按規(guī)格劃分如下：每支20mL：刺五加總苷2.9-7.2mg/mL、總黃酮4.6-7.1mg/mL、總糖14.4-50.7mg/mL、總無機陽離子0.1-2.7mg/mL和總無機陰離子0.1-1.5mg/mL；每瓶250mL：刺五加總苷1.4-3.0mg/mL、總黃酮1.5-4.7mg/mL、總糖10.2-16.9mg/mL、總無機陽離子2.2-2.9mg/mL和總無機陰離子1.4-3.2mg/mL。優(yōu)選地，所述的注射液含有，按規(guī)格劃分如下：每支20mL：刺五加總苷3.8-6.4mg/mL、總黃酮5.3-6.0mg/mL、總糖17.3-41.1mg/mL、總無機陽離子0.8-2.6mg/mL和總無機陰離子0.1-1.4mg/mL；每瓶250mL：刺五加總苷1.7-1.9mg/mL、總黃酮1.9-2.1mg/mL、總糖8.3-14.5mg/mL、總無機陽離子2.4-2.8mg/mL和總無機陰離子2.7-3.1mg/mL。所述的刺五加組合物和注射液中，總無機陽離子包含Na+、K+、Ca2+和Mg2+。所述的刺五加組合物和注射液中，總無機陰離子包含Cl-、SO42-和NO3-。所述的注射液的制備方法包括以下步驟：取本發(fā)明所述的刺五加組合物，加注射用水稀釋為每1mL含總黃酮10-20mg，攪拌均勻后，3000-5000rpm離心2-10分鐘，取上清液，調(diào)節(jié)上清液pH值至4.0-5.5，攪拌均勻，得到藥液A；將藥液A經(jīng)115-121℃滅菌20-30分鐘后，于4℃靜置冷藏12小時以上，冷藏后的上清液經(jīng)過濾后得到的濾液為藥液B；將藥液B經(jīng)115-121℃滅菌30-40分鐘后，于4℃靜置冷藏12-36小時，得到藥液C；向藥液C中加入醫(yī)用活性炭后，于70-85℃下處理10-30分鐘，過濾脫碳，得到藥液D；采用0.22μm濾膜對藥液D進(jìn)行兩次過濾，得到藥液E；調(diào)節(jié)藥液E的pH值至5.0-6.5，測定其中總黃酮的含量后，加注射用水至全量，濾過，灌封，116℃滅菌40分鐘，即得。本發(fā)明所述的注射液的制備方法中，醫(yī)用活性炭的平均粒徑為2-5μm；優(yōu)選為3-4μm。本發(fā)明所述的注射液的制備方法中，醫(yī)用活性炭的加入量為0.4-0.6％；優(yōu)選為0.4-0.5％。如未特別說明，本發(fā)明中所述的“過濾”或“濾取”所使用的濾膜為0.45μm濾膜。如未特別說明，本發(fā)明中所述的調(diào)節(jié)pH值使用鹽酸或氫氧化鈉。本發(fā)明的又一個目的是提供所述的刺五加組合物和注射液的含量檢測方法，所述的檢測方法包括：(1)、總苷：以紫丁香苷為對照品，依照分光光度法在265nm波長處測定吸收度，計算刺五加注射液中總苷的含量；(2)、總糖：以葡萄糖為對照品，依照分光光度法在490nm波長處測定吸收度，計算刺五加注射液中總糖的含量；(3)、總黃酮：以蘆丁為對照品，依照分光光度法在510nm波長處測定吸收度，計算刺五加注射液中總黃酮的含量；(4)、總無機陽離子：分別以鈉、鉀、鈣、鎂為對照品，采用火焰法測定注射液中Na+、K+、Ca2+和Mg2+的含量，測定條件如下：(5)、總無機陰離子：分別以氯離子、硫酸根、硝酸根離子作為對照品，依照離子色譜法測定刺五加注射液中Cl-、SO42-和NO3-的含量，測定條件如下：色譜柱：IonPacAG15(4×50mm)和IonPacAS15(4×250mm)；淋洗液：KOH溶液；流速：每分鐘1.0mL；進(jìn)樣量：25μL；檢測方式：抑制電導(dǎo)檢測；梯度淋洗條件如下：時間(分鐘)淋洗液08mMKOH2650mMKOH26.28mMKOH308mMKOH(6)、總固體：蒸發(fā)干燥后，稱量計算總固體含量。本發(fā)明的在一個目的是提供所述的刺五加組合物或制劑在制備治療高血脂、高血糖或生殖系統(tǒng)疾病，及其相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。其中所述的生殖系統(tǒng)疾病為男性不育癥。本發(fā)明的有益效果：(1)、本發(fā)明提供的刺五加組合物和注射液中成分更加平衡，總黃酮、刺五加總苷、總糖和總無機鹽成分明確，含量更加均衡，在降血糖、降血脂等方面具有明顯效果，且其藥效相對現(xiàn)有技術(shù)更好。(2)、本發(fā)明提供的刺五加組合物和注射液中主要大類活性成分的組成相對更加明確，經(jīng)小鼠試驗和β-氨基己糖苷酶試驗證明，本發(fā)明提供的刺五加組合物和注射液引起的類過敏反應(yīng)為1-3例/100只小鼠，而現(xiàn)有技術(shù)的刺五加組合物、提取物以及注射液引起的類過敏反應(yīng)為4-15例/100只小鼠。因此，本發(fā)明提供的刺五加組合物和注射液毒性相對更小，相對更加安全。(3)、本發(fā)明提供的刺五加組合物的制備方法在前處理中多次加入冰，使得刺五加中的大類活性成分更加容易滲出，得到的制成品中大類活性成分含量更高且含量更加均衡，同時其中的雜質(zhì)相對更少，其安全性更高。(4)、本發(fā)明提供的刺五加組合物和注射液中主要大類活性成組成明確，相對更加易于質(zhì)量控制，減少了其質(zhì)量控制上的安全隱患。(5)、本發(fā)明提供的刺五加組合物的制備方法制得的刺五加組合物中大類活性成分含量相對更高，其中總黃酮含量可高達(dá)199mg/g、刺五加苷E可高達(dá)約50mg/g、刺五加苷B可高達(dá)約43mg/g、總糖可高達(dá)約736mg/g；均明顯高于現(xiàn)有技術(shù)(6)、本發(fā)明提供的注射液的含量檢測方法在對其中大類活性成分檢測時全部使用分光光度法即可完成，操作簡單快速，對設(shè)備要求低。而現(xiàn)有技術(shù)通常采用高效液相色譜法，對儀器設(shè)備要求高，且操作過程復(fù)雜、耗時長。在面對大批量檢測時，本發(fā)明提供的檢測方法相對更加方便易行，為刺五加制劑的制備、流通、使用等過程中的質(zhì)量控制提供了便利手段。具體實施方式以下實施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。對所公開的實施例的下述說明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。對這些實施例的多種修改對本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實施例中實現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會被限制于本文所示的這些實施例中，而是可以應(yīng)用于符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的更寬的范圍。除非另外定義，本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員通常理解的相同意義。實施例1一種刺五加組合物及其制備方法和含量測定1、制備方法：(1)、前處理：將1000g刺五加清洗粉碎后，加6倍體積純化水煎煮2小時后，分離煎液；再加6倍體積純化水煎煮2小時后，分離煎液；然后加入6倍體積的的冰，待冷卻至室溫后，煎煮2小時后，分離煎液；再加入6倍體積的冰，待冷卻至室溫后，煎煮2小時后，分離煎液；合并煎液得液體A；(2)、石硫法處理：待液體A冷卻至40℃以下時，向其中加入重量百分比為20％的石灰乳調(diào)pH值至10.0，靜置16小時，再用硫酸將pH值調(diào)至5.0，攪拌均勻后，靜置16小時，濾取上清液，將上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.10的濃縮膏；(3)、醇沉：當(dāng)步驟(2)獲得的濃縮膏溫度降至25℃時，邊攪拌邊加入體積濃度為96％的乙醇至濃縮膏中乙醇濃度達(dá)到70％，攪拌均勻后，靜置16小時后，濾取上清液，在乙醇加入過程中維持濃縮膏溫度在25℃；(4)、濃縮：將步驟(3)獲得的上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.10的濃縮膏，既得。2、含量測定：含量測定方法中使用的水均為純化水。(1)、總苷：儀器：T6型紫外可見分光光度計，購自北京普析通用儀器有限公司；MettlerXS105型電子天平，購自MettlerToledo公司。試劑：色譜純甲醇，購自Merk公司。對照品：刺五加苷B(紫丁香苷)，批號為130504，HPLC純度為99.25％，購自上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司。測定方法：對照品溶液的制備：取刺五加苷B對照品約10mg，精密稱定，置25mL量瓶中，加25％甲醇適量使溶解，加25％甲醇至刻度，搖勻；精密量取1mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；再精密量取3mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每1mL對照品溶液中含刺五加苷B0.012mg。供試品溶液的制備：稱取制備得到的刺五加組合物，使用9倍體積甲醇將制備得到的刺五加組合物溶解后，精密量取0.5mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，再精密量取0.5mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定：分別取對照品溶液及供試品溶液，以甲醇為空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄附錄ⅤA)，在265nm波長處測定吸光度，計算其中總苷類物質(zhì)(以刺五加苷B計)的含量(單位為mg/mL)，根據(jù)其質(zhì)量即可換算出刺五加組合物中總苷類物質(zhì)的含量。(2)、總糖：儀器：T6型紫外可見分光光度計，購自北京普析通用儀器有限公司；MettlerXS105型電子天平，購自MettlerToledo公司。試劑：苯酚(GC純度≥99％)，購自上海晶純實業(yè)有限公司；濃硫酸(分析純)，購自衢州巨化試劑有限公司。對照品：葡萄糖，批號E1330031，GC純度≥99.5％，購自上海晶純實業(yè)有限公司。測定方法：對照品溶液的制備：取葡萄糖對照品約10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加水適量使溶解，加水至刻度，搖勻，即得對照品儲備液，每1mL對照品儲備液中含葡萄糖0.2mg；精密量取對照品儲備液1mL、2mL、3mL、4mL與4.5mL，分別置10mL量瓶中，各加水至刻度，搖勻，即得系列濃度對照品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：各精密量取系列濃度對照品溶液1mL，分別置10mL具塞試管中，各加6％苯酚溶液1mL，再加入5mL的濃硫酸，搖勻，沸水浴放置20分鐘，取出，置冰水浴放置20分鐘。以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄附錄ⅤA)，在490nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。供試品溶液的制備：稱取制備得到的刺五加組合物，使用9倍體積甲醇將制備得到的刺五加組合物溶解后，精密量取0.5mL，置10mL量瓶中，加水至刻度，搖勻；精密量取0.5mL置10mL量瓶中，加水至刻度，搖勻；即得。測定：精密量取供試品溶液1mL，置10mL具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法，自“各加6％苯酚溶液1ml”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，計算其中總糖(以葡萄糖計)的含量(單位為mg/mL)，根據(jù)其質(zhì)量即可換算出刺五加組合物中總糖類物質(zhì)的含量。(3)、總黃酮：儀器：T6型紫外可見分光光度計，購自北京普析通用儀器有限公司；MettlerXS105型電子天平，購自MettlerToledo公司。試劑：亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、無水乙醇均為分析純。對照品：蘆丁，批號130829，或140629，純度為>99.0％，購自上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司。測定方法：對照品溶液的制備：取蘆丁對照品約10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加60％乙醇適量，置80℃水浴中加熱使溶解，放冷，加60％乙醇至刻度，搖勻；精密量取25mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得，每1mL對照品溶液中含蘆丁0.1mg。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對照品溶液1mL、2mL、3mL、4mL與5mL，分別置10mL量瓶中，各加5％亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉溶液(1mol/L)4mL，再加30％乙醇至刻度，搖勻，放置10分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄附錄ⅤA)，在510nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定：稱取制備得到的刺五加組合物，使用9倍體積甲醇將制備得到的刺五加組合物溶解后，精密量取1mL，置10mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法，自“各加5％亞硝酸鈉溶液0.3mL”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出其中含蘆丁的重量(mg)，根據(jù)其質(zhì)量即可換算出刺五加組合物中總黃酮類物質(zhì)的含量。本品含總黃酮類物質(zhì)以蘆丁(C27H30O16)計，應(yīng)為標(biāo)示量的90.0％-110.0％。(4)、總無機陽離子：儀器：HITACHI180-50型原子吸收分光光度計，購自日本日立公司。對照品溶液的制備：取K，Na，Ca，Mg儲備液用超純水稀釋制成高、低2種濃度的對照品溶液。供試品溶液的制備：取刺五加組合物，用去離子水稀釋500-1000倍，搖勻，即得。測定：取對照品溶液和供試品溶液采用火焰法測定供試品溶液中K，Na，Ca，Mg的含量，計算4種離子的總量(mg/mL)。測試參數(shù)及對照品溶液濃度如下：參數(shù)Na+K+Ca2+Mg2+波長(nm)285.2422.7589.0766.5燈電流(mA)7.57.510.010.0狹縫(nm)2.62.60.42.6燃燒頭高度7.512.57.57.5空氣流量(L/min)9.49.49.49.4乙炔氣流量(L/min)2.02.62.22.3標(biāo)準(zhǔn)品濃度系列(mg/L)0,1,20,10,200,10,200,10,20(5)、總無機陰離子：儀器：ICS-2000型離子色譜儀。試劑：氯離子、硫酸根、硝酸根標(biāo)準(zhǔn)品溶液購于國家鋼鐵材料測試中心鋼鐵研究總院。對照品溶液的制備：精密量取氯離子、硫酸根、硝酸根標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用去離子水稀釋制成含6mg/L氯離子、5mg/L硫酸根、5mg/L硝酸根的對照品溶液。供試品溶液的制備：取刺五加組合物，用去離子水稀釋500-1000倍，搖勻，稀釋液過C18柱，收集洗脫液，用濾膜過濾，取續(xù)濾液即得。測定：分別以氯離子、硫酸根、硝酸根離子作為對照品，依照離子色譜法測定刺五加注射液中Cl-、SO42-和NO3-的含量，測定條件如下：色譜柱：IonPacAG15(4×50mm)和IonPacAS15(4×250mm)；淋洗液：KOH溶液；流速：每分鐘1.0mL；進(jìn)樣量：25μL；檢測方式：抑制電導(dǎo)檢測；梯度淋洗條件如下：時間(分鐘)淋洗液08mMKOH2650mMKOH26.28mMKOH308mMKOH3、含量測定結(jié)果：刺五加總苷(mg/g)30.9總黃酮(mg/g)11.2總糖(mg/g)224.4總無機陽離子(mg/g)6.9總無機陰離子(mg/g)17.6實施例2一種刺五加組合物及其制備方法和含量測定1、制備方法：(1)、前處理：將1000g刺五加清洗粉碎后，加10倍體積純化水煎煮3.5小時后，分離煎液；再加10倍體積純化水煎煮3.5小時后，分離煎液；再加10倍體積純化水煎煮3.5小時后，分離煎液；然后加入10倍體積的的冰，待冷卻至室溫后，煎煮3.5小時后，分離煎液；再加入10倍體積的的冰，待冷卻至室溫后，煎煮3.5小時后，分離煎液；合并煎液得液體A；(2)、石硫法處理：待液體A冷卻至28℃以下時，向其中加入重量百分比為20％的石灰乳調(diào)pH值至12.0，靜置20小時，再用硫酸將pH值調(diào)至6.0，攪拌均勻后，靜置30小時，濾取上清液，將上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.10的濃縮膏；(3)、醇沉：當(dāng)步驟(2)獲得的濃縮膏溫度降至40℃時，邊攪拌邊加入體積濃度為97％的乙醇至濃縮膏中乙醇濃度達(dá)到85％，攪拌均勻后，靜置34小時后，濾取上清液，在乙醇加入過程中維持濃縮膏溫度在40℃；(4)、濃縮：將步驟(3)獲得的上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.10的濃縮膏，既得。2、含量測定：同實施例1。3、含量測定結(jié)果：刺五加總苷(mg/g)141.9總黃酮(mg/g)161.3總糖(mg/g)692.1總無機陽離子(mg/g)3.1總無機陰離子(mg/g)16.8實施例3一種刺五加組合物及其制備方法和含量測定1、制備方法(1)、前處理：將1000g刺五加清洗粉碎后，加8倍體積純化水煎煮5小時后，分離煎液；再加8倍體積純化水煎煮5小時后，分離煎液；然后加入8倍體積的的冰，待冷卻至室溫后，煎煮5小時后，分離煎液；再加入8倍體積的的冰，待冷卻至室溫后，煎煮5小時后，分離煎液；合并煎液得液體A；(2)、石硫法處理：待液體A冷卻至35℃以下時，向其中加入重量百分比為20％的石灰乳調(diào)pH值至10.0，靜置24小時，再用硫酸將pH值調(diào)至5.5，攪拌均勻后，靜置30小時，濾取上清液，將上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.20的濃縮膏；(3)、醇沉：當(dāng)步驟(2)獲得的濃縮膏溫度降至28℃時，邊攪拌邊加入體積濃度為99％的乙醇至濃縮膏中乙醇濃度達(dá)到82％，攪拌均勻后，靜置40小時后，濾取上清液，在乙醇加入過程中維持濃縮膏溫度在28℃；(4)、濃縮：將步驟(3)獲得的上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.15的濃縮膏，既得。2、含量測定：同實施例1。3、含量測定結(jié)果：刺五加總苷(mg/g)114.6.總黃酮(mg/g)168.4總糖(mg/g)393.9總無機陽離子(mg/g)57.1總無機陰離子(mg/g)116.8實施例4一種刺五加組合物及其制備方法和含量測定1、制備方法：(1)、前處理：將1000g刺五加清洗粉碎后，加7倍體積純化水煎煮2.5小時后，分離煎液；再加7倍體積純化水煎煮2.5小時后，分離煎液；然后加入7倍體積的的冰，待冷卻至室溫后，煎煮2.5小時后，分離煎液；再加入7倍體積的的冰，待冷卻至室溫后，煎煮2.5小時后，分離煎液；合并煎液得液體A；(2)、石硫法處理：待液體A冷卻至35℃以下時，向其中加入重量百分比為20％的石灰乳調(diào)pH值至11.5，靜置22小時，再用硫酸將pH值調(diào)至5.5，攪拌均勻后，靜置26小時，濾取上清液，將上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.10的濃縮膏；(3)、醇沉：當(dāng)步驟(2)獲得的濃縮膏溫度降至30℃時，邊攪拌邊加入體積濃度為99％的乙醇至濃縮膏中乙醇濃度達(dá)到73％，攪拌均勻后，靜置30小時后，濾取上清液，在乙醇加入過程中維持濃縮膏溫度在30℃；(4)、濃縮：將步驟(3)獲得的上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.15的濃縮膏，既得。2、含量測定：同實施例1。3、含量測定結(jié)果：刺五加總苷(mg/g)126.7總黃酮(mg/g)164.2總糖(mg/g)451.9總無機陽離子(mg/g)10.5總無機陰離子(mg/g)27.6實施例5一種刺五加組合物及其制備方法和含量測定1、制備方法：(1)、前處理：將1000g刺五加清洗粉碎后，加9倍體積純化水煎煮4小時后，分離煎液；再加9倍體積純化水煎煮4小時后，分離煎液；然后加入9倍體積的的冰，待冷卻至室溫后，煎煮4小時后，分離煎液；再加入9倍體積的的冰，待冷卻至室溫后，煎煮4小時后，分離煎液；合并煎液得液體A；(2)、石硫法處理：待液體A冷卻至25℃以下時，向其中加入重量百分比為20％的石灰乳調(diào)pH值至11.0，靜置18小時，再用硫酸將pH值調(diào)至5.5，攪拌均勻后，靜置28小時，濾取上清液，將上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.20的濃縮膏；(3)、醇沉：當(dāng)步驟(2)獲得的濃縮膏溫度降至33℃時，邊攪拌邊加入體積濃度為99％的乙醇至濃縮膏中乙醇濃度達(dá)到80％，攪拌均勻后，靜置30小時后，濾取上清液，在乙醇加入過程中維持濃縮膏溫度在33℃；(4)、濃縮：將步驟(3)獲得的上清液減壓濃縮成在80℃測定相對密度為1.20的濃縮膏，既得。2、含量測定：同實施例1。3、含量測定結(jié)果：刺五加總苷(mg/g)167.4總黃酮(mg/g)197.9總糖(mg/g)736.1總無機陽離子(mg/g)17.3總無機陰離子(mg/g)31.4實施例6一種刺五加注射液及其制備方法和含量測定1、制備方法：取本發(fā)明實施例1制備的刺五加組合物，加注射用水稀釋為每1mL含總黃酮10mg，攪拌均勻后，3000rpm離心10分鐘，取上清液，調(diào)節(jié)上清液pH值至4.0，攪拌均勻，得到藥液A；將藥液A經(jīng)115℃滅菌30分鐘后，于4℃靜置冷藏12小時以上，冷藏后的上清液經(jīng)過濾后得到的濾液為藥液B；將藥液B經(jīng)121℃滅菌30分鐘后，于4℃靜置冷藏12小時，得到藥液C；向藥液C中加入重量百分比為0.6％的平均粒徑為2μm的醫(yī)用活性炭后，于70℃下處理30分鐘，過濾脫碳，得到藥液D；采用0.22μm濾膜對藥液D進(jìn)行兩次過濾，得到藥液E；調(diào)節(jié)藥液E的pH值至5.0，測定其中總黃酮的含量后，加注射用水至全量，濾過，灌封，116℃滅菌40分鐘，即得，灌封為兩種規(guī)格：每支20mL和每支250mL。2、含量測定：基本同實施例1區(qū)別在于：(1)、總苷：供試品溶液制備：精密量取刺五加注射液0.5mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，再精密量取0.5mL(20mL規(guī)格)、1.3mL(250mL規(guī)格)，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。(2)、總糖：供試品溶液制備：精密量取刺五加注射液0.5mL，置10mL量瓶中，加水至刻度，搖勻；精密量取0.5mL(20mL規(guī)格)、1.0ml(250mL規(guī)格)，置10mL量瓶中，加水至刻度，搖勻；即得。(3)、總黃酮：測定：精密量刺五加注射液，用30％乙醇制成每1mL約含總黃酮類物質(zhì)0.3mg的溶液。精密量取1mL，置10mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法，自“各加5％亞硝酸鈉溶液0.3mL”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含蘆丁的重量(mg)，計算，即得。(4)、總無機陽離子：供試品溶液制備：取刺五加注射液，用去離子水稀釋50-100倍，搖勻，即得。(5)、總無機陰離子：供試品溶液的制備：精密量取刺五加注射液0.1mL，用去離子水稀釋至10mL，搖勻，稀釋液過C18柱，收集洗脫液，用濾膜過濾，取續(xù)濾液即得。其余步驟同本發(fā)明實施例13、含量測定結(jié)果：每支20mL規(guī)格：刺五加總苷(mg/mL)2.9總黃酮(mg/mL)4.6總糖(mg/mL)17.3總無機陽離子(mg/mL)2.6總無機陰離子(mg/mL)1.5實施例7一種刺五加注射液及其制備方法和含量測定1、制備方法：取本發(fā)明實施例2制備的刺五加組合物，加注射用水稀釋為每1mL含總黃酮20mg，攪拌均勻后，5000rpm離心2分鐘，取上清液，調(diào)節(jié)上清液pH值至5.5，攪拌均勻，得到藥液A；將藥液A經(jīng)121℃滅菌20分鐘后，于4℃靜置冷藏12小時以上，冷藏后的上清液經(jīng)過濾后得到的濾液為藥液B；將藥液B經(jīng)115℃滅菌40分鐘后，于4℃靜置冷藏36小時，得到藥液C；向藥液C中加入重量百分比為0.4％的平均粒徑為5μm的醫(yī)用活性炭后，于85℃下處理10分鐘，過濾脫碳，得到藥液D；采用0.22μm濾膜對藥液D進(jìn)行兩次過濾，得到藥液E；調(diào)節(jié)藥液E的pH值至6.5，測定其中總黃酮的含量后，加注射用水至全量，濾過，灌封，116℃滅菌40分鐘，即得，灌封為兩種規(guī)格：每支20mL和每支250mL。2、含量測定：同實施例63、含量測定結(jié)果：每支250mL規(guī)格：刺五加總苷(mg/mL)3.0總黃酮(mg/mL)1.5總糖(mg/mL)16.9總無機陽離子(mg/mL)2.4總無機陰離子(mg/mL)3.2實施例8一種刺五加注射液及其制備方法和含量測定取本發(fā)明實施例3制備的刺五加組合物，加注射用水稀釋為每1mL含總黃酮15mg，攪拌均勻后，4000rpm離心5分鐘，取上清液，調(diào)節(jié)上清液pH值至5.0，攪拌均勻，得到藥液A；將藥液A經(jīng)121℃滅菌20分鐘后，于4℃靜置冷藏12小時以上，冷藏后的上清液經(jīng)過濾后得到的濾液為藥液B；將藥液B經(jīng)115℃滅菌40分鐘后，于4℃靜置冷藏24小時，得到藥液C；向藥液C中加入重量百分比為0.4％的平均粒徑為3μm的醫(yī)用活性炭后，于80℃下處理20分鐘，過濾脫碳，得到藥液D；采用0.22μm濾膜對藥液D進(jìn)行兩次過濾，得到藥液E；調(diào)節(jié)藥液E的pH值至6.5，測定其中總黃酮的含量后，加注射用水至全量，濾過，灌封，116℃滅菌40分鐘，即得，灌封為兩種規(guī)格：每支20mL和每支250mL。2、含量測定：同實施例63、含量測定結(jié)果：每支20mL規(guī)格：刺五加總苷(mg/mL)6.4總黃酮(mg/mL)6.0總糖(mg/mL)41.1總無機陽離子(mg/mL)2.7總無機陰離子(mg/mL)1.4實施例9一種刺五加注射液及其制備方法和含量測定取本發(fā)明實施例4制備的刺五加組合物，加注射用水稀釋為每1mL含總黃酮12mg，攪拌均勻后，3500rpm離心4分鐘，取上清液，調(diào)節(jié)上清液pH值至5.5，攪拌均勻，得到藥液A；將藥液A經(jīng)121℃滅菌20分鐘后，于4℃靜置冷藏12小時以上，冷藏后的上清液經(jīng)過濾后得到的濾液為藥液B；將藥液B經(jīng)115℃滅菌40分鐘后，于4℃靜置冷藏20小時，得到藥液C；向藥液C中加入重量百分比為0.4％的平均粒徑為5μm的醫(yī)用活性炭后，于75℃下處理15分鐘，過濾脫碳，得到藥液D；采用0.22μm濾膜對藥液D進(jìn)行兩次過濾，得到藥液E；調(diào)節(jié)藥液E的pH值至6.5，測定其中總黃酮的含量后，加注射用水至全量，濾過，灌封，116℃滅菌40分鐘，即得，灌封為兩種規(guī)格：每支20mL和每支250mL。2、含量測定：同實施例63、含量測定結(jié)果：每支250mL規(guī)格：刺五加總苷(mg/mL)1.4總黃酮(mg/mL)4.7總糖(mg/mL)10.2總無機陽離子(mg/mL)2.9總無機陰離子(mg/mL)1.4實施例10一種刺五加注射液及其制備方法和含量測定取本發(fā)明實施例5制備的刺五加組合物，加注射用水稀釋為每1mL含總黃酮18mg，攪拌均勻后，4500rpm離心7分鐘，取上清液，調(diào)節(jié)上清液pH值至5.5，攪拌均勻，得到藥液A；將藥液A經(jīng)121℃滅菌20分鐘后，于4℃靜置冷藏12小時以上，冷藏后的上清液經(jīng)過濾后得到的濾液為藥液B；將藥液B經(jīng)115℃滅菌40分鐘后，于4℃靜置冷藏32小時，得到藥液C；向藥液C中加入重量百分比為0.5％的平均粒徑為4μm的醫(yī)用活性炭后，于80℃下處理25分鐘，過濾脫碳，得到藥液D；采用0.22μm濾膜對藥液D進(jìn)行兩次過濾，得到藥液E；調(diào)節(jié)藥液E的pH值至6.5，測定其中總黃酮的含量后，加注射用水至全量，濾過，灌封，116℃滅菌40分鐘，即得，灌封為兩種規(guī)格：每支20mL和每支250mL。2、含量測定：同實施例63、含量測定結(jié)果：每支20mL規(guī)格：刺五加總苷(mg/mL)7.2總黃酮(mg/mL)7.1總糖(mg/mL)50.7總無機陽離子(mg/mL)0.1總無機陰離子(mg/mL)0.1對比例1一種刺五加提取物中國專利申請201210533220公開的方法及制備的刺五加提取物。對比例2一種刺五加注射液中國專利申請201210049755中實施例6公開的刺五加注射液。對比例3一種刺五加注射液中國專利申請201010165556中實施例5公開的刺五加注射液。對比例4一種刺五加注射液中國專利申請201410508745中實施例4公開的刺五加注射液。對比例5一種刺五加組合物及其制備方法和含量測定制備方法基本同本發(fā)明實施例5，區(qū)別在于：(1)、前處理：將1000g刺五加清洗粉碎后，加9倍體積純化水煎煮4小時后，分離煎液；再加9倍體積純化水煎煮4小時后，分離煎液；合并煎液得液體A。含量測定方法同實施例5含量測定結(jié)果：刺五加總苷(mg/g)35.1總黃酮(mg/g)13.9總糖(mg/g)146.8總無機陽離子(mg/g)29.2總無機陰離子(mg/g)67.4根據(jù)含量可看出，去掉加冰步驟后，制備的刺五加組合物中的大類成分含量明顯降低，且無機鹽雜質(zhì)增多。對比例6一種刺五加組合物中國專利申請201210049755中實施例2公開的刺五加組合物。對比例7一種刺五加提取物中國專利申請201010165556中實施例2公開的刺五加提取物。實驗例1對高血脂癥的影響志愿者：共160人，清晨空腹血脂符合下列標(biāo)準(zhǔn)之一：甘油三酯(TG)≥1.70mmol/L；總膽固醇(TC)≥5.20mmol/L。有嚴(yán)重內(nèi)分泌、肝腎疾病及家族性純合子高膽固醇血癥，近3個月內(nèi)發(fā)生過心腦血管病，難以控制的高血壓患者除外。200例患者中，男88例，女72例，年齡42-69歲，平均年齡51歲。試驗方法：志愿者隨機分為4組，每組40人，男女比例隨機。實施例1組40人，男23人，女17人，施用本發(fā)明實施例6的刺五加注射液；對比例2組40人，男20人，女20人，施用對比例2的刺五加注射液；對比例3組40人，男24人，女16人，施用對比例3的刺五加注射液；對比例4組40人，男21人，女19人，施用對比例4的刺五加注射液。施用方法為：分別取100mL，加入到5％葡萄糖注射液250mL中，靜脈滴注，每天1次，連續(xù)10天為一個療程，停藥5天后再用下一個療程，連續(xù)使用三個療程。結(jié)果測定：血脂測定方法為：治療結(jié)束后測定血脂水平，取血前1晚禁止飲酒及高脂飲食，空腹12小時以上取靜脈血，及時分離血清。療效評定標(biāo)準(zhǔn)：按衛(wèi)生部1998年頒發(fā)的心血管藥物臨床研究指導(dǎo)原則進(jìn)行判定。采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。有效判定：TC下降達(dá)10％-20％，TG下降達(dá)20％-40％，HDL-C上升0.18-0.26mmol/L。試驗結(jié)果：治療前后血脂變化見下表：由試驗結(jié)果可知本發(fā)明實施例1在降低總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、甘油三酯(TG)上以及提高高密度脂蛋白(HDL-C)上的效果明顯優(yōu)于對比例2-4；實施例1組對TC、TG、HDL-C治療的總有效率為95.7％，對比例2-4組的總有效率分別為90.1％、85.6％、87.0％。本發(fā)明其他實施例與實施例6有相同或相似的效果。因此，本發(fā)明提供的刺五加組合物對高血脂癥的效果明顯優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。實驗例2對高血糖的影響實驗動物：昆明種小鼠，體重18-22g，雌雄各半。實驗試劑：四氧嘧啶，購自Sigma公司。實驗分組：空白對照組、模型組、實施例1組、實施例2組、實施例3組、實施例4組、實施例5組、對比例1組、對比例6組、對比例7組。試驗方法：(1)模型制備：將四氧嘧啶用生理鹽水配成2％水溶液(現(xiàn)用現(xiàn)配)。取昆明種小鼠，雌雄各半，按四氧嘧啶溶液50mg/kg的劑量，對禁食12小時后的小鼠進(jìn)行尾靜脈注射。連續(xù)飼養(yǎng)3天后，禁食12小時，眼眶采血，分離血清，測定空腹血糖，以血糖大于14mmol/L作為糖尿病模型小鼠。(2)分組給藥：取糖尿病模型小鼠90只，雌雄各半，隨機分為9組，每組10只，分別為模型組、實施例1-5組、對比例1、6、7組；另取重量相近正常昆明種小鼠10只，雌雄各半，作為空白對照組。實施例1-5組、對比例1、6、7分別灌胃給予實施例1-4的刺五加組合物、對比例1、6、7的提取物或組合物，劑量均為1.0g生藥量/kg體重，模型組和空白對照組分別按照15mL/kg體重灌胃給予同體積的生理鹽水。連續(xù)灌胃15天，每天觀察小鼠外貌特征的改變。試驗結(jié)束后對試驗動物禁食12小時，眼眶靜脈叢采血，測定空腹血糖。試驗結(jié)果：(1)外貌：在試驗結(jié)束后，四氧嘧啶模型組動物有明顯多飲、多尿、體型消瘦、毛發(fā)失去光澤、蜷臥弓背沒精神等現(xiàn)象。而空白對照組動物精神狀況良好，毛發(fā)光澤，生長發(fā)育正常。實施例1-5組動物外貌特征得到顯著改善，對比例1、6、7組動物外貌特征有所改善，但效果不如實施例1-5組明顯，實施例1-5組效果改善明顯程度從大到小依次是：實施例5、實施例4、實施例3、實施例1、實施例2。(2)血糖變化：組別血糖值空白對照組6.46±0.59模型組19.87±1.30實施例1組13.05±0.69實施例2組13.82±0.95實施例3組12.98±0.94實施例4組12.25±0.77實施例5組11.29±0.61對比例1組16.45±0.82對比例6組14.01±0.99對比例7組17.95±1.02由試驗結(jié)果可知本發(fā)明提供的刺五加組合物對高血糖模型小鼠的血糖值的降低效果明顯優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。實驗例3對小鼠睪丸的影響實驗動物：昆明種小鼠，體重18-22g，雄性。實驗分組：空白對照組、實施例1組、實施例2組、實施例3組、實施例4組、實施例5組、對比例1組、對比例2組、對比例3組、對比例4組。試驗方法：實施例1-5組分別給予本發(fā)明實施例6-10的刺五加注射液，對比例1組給予用生理鹽水稀釋過的刺五加提取物溶液，對比例2-4組分別給予對比例2-4的注射液，各組給藥劑量均為0.2mL?？瞻讓φ战M給予等體積的生理鹽水。每日腹腔注射一次，連續(xù)給藥30天，于末次給藥次日經(jīng)頸椎脫臼處死小鼠，稱體重，剖取雙側(cè)睪丸并稱重，隨機將每組動物左側(cè)或右側(cè)睪丸作常規(guī)石蠟切片，H.E染色后作鏡檢觀察。試驗結(jié)果：(1)對睪丸重量的影響：本發(fā)明實施例1-5組小鼠睪丸重量分別增加了實施例1-5組小鼠睪丸重量分別增加了39.1％、43.4％、52.2％、47.8％、56.5％；對比例1-4組小鼠睪丸重量分別增加了17.4％、30.4％、21.7％、26.1％。(2)對小鼠睪丸曲細(xì)精管直徑的影響組別曲細(xì)精管直徑空白對照組87.9±5.1實施例1組119.3±6.2實施例2組116.8±6.5實施例3組112.6±6.0實施例4組114.5±5.9實施例5組121.7±6.1對比例1組104.6±5.4對比例2組109.3±5.9對比例3組103.7±5.5對比例4組106.4±5.1實施例1-5組小鼠睪丸曲細(xì)精管直徑分別增加35.7％、32.9％、28.1％、30.3％、38.5％；對比例1-45組小鼠睪丸曲細(xì)精管直徑分別增加19.0％、24.3％、18.0％、21.0％。光鏡下觀察小鼠睪丸切片，各組曲細(xì)精管的組織結(jié)構(gòu)均正常，均有正常精子產(chǎn)生。實施例1-5組的曲細(xì)精管比對比例1-4組更粗，管壁生精細(xì)胞的層數(shù)更多。因此，本發(fā)明提供的刺五加組合物在不孕不育治療方面的效果優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。以上所述僅為本發(fā)明的部分對比例和部分較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3