本文具體涉及載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒及其制備方法，屬于藥物制劑領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

肝癌是一種常見(jiàn)的癌癥，在全世界尤其是發(fā)展中國(guó)家具有較高的發(fā)病率和死亡率?；熤两袢匀皇前┌Y的主要治療方法之一。然而，因缺乏選擇作用，化療藥物在殺傷癌癥細(xì)胞的同時(shí)，也殺傷大量的正常細(xì)胞。因此，傳統(tǒng)的化療具有嚴(yán)重的副作用，比如嚴(yán)重的系統(tǒng)毒性，并發(fā)癥，依從性差以及容易產(chǎn)生耐藥性。

納米給藥系統(tǒng)因其眾多的優(yōu)點(diǎn)一直是腫瘤靶向給藥方面研究的焦點(diǎn)。納米給藥系統(tǒng)可以改善藥物的藥效學(xué)和藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)，在明顯增強(qiáng)藥物治療效果的同時(shí)，最大化的減少藥物的副作用。介孔二氧化硅納米粒因具有易修飾和功能化的表面，巨大的表面積和較高的孔體積，獨(dú)特的介孔結(jié)構(gòu)和很好的穩(wěn)定性等特點(diǎn)，成為了腫瘤靶向給藥系統(tǒng)方面新的研究熱點(diǎn)。

姜黃素為植物姜黃的根莖中的提取物?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)姜黃素具有抗炎、抗肝纖維化、抗血管生成和抗腫瘤等眾多藥理學(xué)活性。然而，由于姜黃素具有水難溶性，低生物利用度和給藥劑量大等特點(diǎn)，其臨床應(yīng)用受到了很大的限制。本發(fā)明中，通過(guò)將姜黃素載入到載藥量高的介孔二氧化硅納米粒的介孔中，有望解決上述問(wèn)題。

甘草次酸提取于甘草的根莖，被作為甜味劑廣泛的應(yīng)用于糖果和罐頭食品之中。近年的研究發(fā)現(xiàn)，肝臟中存在特異的甘草次酸受體，這些受體可以和甘草次酸特異性結(jié)合，并且研究發(fā)現(xiàn)甘草次酸受體在肝腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)量明顯高于其在周圍正常肝細(xì)胞中的表達(dá)量。另有大量的研究證實(shí)，表面修飾了甘草次酸的納米?？梢蕴禺愋缘陌邢蚋文[瘤細(xì)胞。

在本發(fā)明專利中，通過(guò)本發(fā)明專利所述的方法，可以通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合的方式將甘草次酸修飾在介孔二氧化硅納米粒的表面。制備得到的甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒具有巨大的比表面積，很高的孔體積以及可調(diào)節(jié)的粒徑。該納米粒對(duì)姜黃素具有較高的載藥量。本發(fā)明制備的載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒經(jīng)尾靜脈注射進(jìn)入體循環(huán)后，可以利用腫瘤組織血管的epr效應(yīng)穿過(guò)腫瘤血管到達(dá)肝臟腫瘤組織。到達(dá)腫瘤組織的載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒可以通過(guò)其表面修飾的甘草次酸分子與肝臟腫瘤細(xì)胞表面的甘草次酸受體實(shí)現(xiàn)受體配體特異性結(jié)合，然后通過(guò)受體介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)吞機(jī)制進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)部，隨即釋放其所攜帶的治療藥物姜黃素，最終實(shí)現(xiàn)肝臟腫瘤細(xì)胞特異性靶向給藥。

綜上所述，本發(fā)明制備的該載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒在改善難溶性藥物的溶解度低和生物利用度等特性的同時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)肝臟腫瘤細(xì)胞特異性靶向給藥，在減少治療藥物所帶來(lái)的副作用的同時(shí)，大大的增強(qiáng)藥物的治療作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于針對(duì)普通治療藥物靶向效率低和毒性大等問(wèn)題，提供一種載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒。本發(fā)明制備的載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒具有制備簡(jiǎn)單，成本低和靶向效果好等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)解決方案實(shí)現(xiàn)：

步驟1：稱取十六烷基三甲基溴化銨(ctab)和氫氧化鈉(naoh)溶于80℃的去離子水中。吸取正硅酸乙酯(teos)滴加到上述溶液中，恒溫?cái)嚢璺磻?yīng)3h。6％鹽酸甲醇溶液(v/v)回流洗去模板劑ctab，離心收集，得到介孔二氧化硅納米粒。

步驟2：使用3-氨丙基三乙氧基硅烷(aptes)修飾步驟1制得的介孔二氧化硅納米粒，得到氨基修飾介孔二氧化硅納米粒。

步驟3：稱取甘草次酸，催化劑活化，得到活化的甘草次酸活性酯。

步驟4：稱取處方量的步驟2得到的氨基修飾介孔二氧化硅納米粒和處方量的步驟3得到甘草次酸活性酯，分散于處方量的無(wú)水二甲亞砜中，加熱攪拌反應(yīng)，得到甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒。

步驟5：稱取處方量的姜黃素和步驟3制得的甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒，溶解或分散于處方量的乙醇中，旋蒸除去乙醇，干燥得到載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)例1所制備的甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒(a)，氨基修飾介孔二氧化硅納米粒(b)和介孔二氧化硅納米粒(c)的傅里葉紅外光譜圖

圖2為本發(fā)明實(shí)施例1所制備的介孔二氧化硅納米粒(a)和甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒(b)的透射圖，圖中標(biāo)尺為100nm

圖3為本發(fā)明實(shí)施例1中原料藥姜黃素(a)，載姜黃素介孔二氧化硅納米粒(b)和載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒(c)的hepg2細(xì)胞攝取圖。

具體實(shí)施方式

為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明及其優(yōu)點(diǎn)，給出了下列特定的實(shí)施例，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅限于具體說(shuō)明而不是作為本發(fā)明范圍的限制。

實(shí)施例1

1.介孔二氧化硅納米粒的制備

分別稱取1.0份ctab和0.28份naoh溶于80℃480份去離子水中，吸取5份teos滴加到上述溶液中，恒溫機(jī)械攪拌3h，離心收集產(chǎn)物。6％鹽酸甲醇溶液(v/v)回流洗去產(chǎn)物中的模板劑ctab，離心洗滌收集產(chǎn)物，干燥，制得空白介孔二氧化硅納米粒。

2.氨基修飾介孔二氧化硅納米粒的制備

稱取0.4份空白介孔二氧化硅納米粒加入到25份甲醇中，超聲分散，向上述溶液中滴加1.5份的aptes，室溫下攪拌反應(yīng)24h后，無(wú)水乙醇洗滌數(shù)次，離心收集產(chǎn)品，干燥，得到氨基修飾介孔二氧化硅納米粒。

3.甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒的制備

分別取1.0份甘草次酸，0.52份nhs，0.94份dcc和0.5份三乙胺溶于20份無(wú)水二甲亞砜中，25℃避光攪拌反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后過(guò)濾，乙醚洗滌，干燥得到甘草次酸活性酯。

稱取0.5份氨基修飾介孔二氧化硅納米粒和0.3份甘草次酸活性酯，加入到20份無(wú)水二甲亞砜中，60℃避光攪拌反應(yīng)24h。離心洗滌，收集，得到甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒。

將制備得到的甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒以及前面制備的介孔二氧化硅納米粒和氨基修飾介孔二氧化硅納米粒真空干燥，送傅里葉紅外檢測(cè)，得到的光譜圖見(jiàn)圖1。三個(gè)樣品均出現(xiàn)了介孔二氧化硅納米粒的特征吸收峰，具有代表性的幾個(gè)特征吸收峰如下：1076cm^-1為si-o-si的伸縮振動(dòng)峰，470cm^-1為si-o-si的彎曲震動(dòng)峰，960cm^-1為si-oh的伸縮振動(dòng)峰。相比空白介孔二氧化硅納米粒的紅外光譜圖，氨基修飾介孔二氧化硅納米粒光譜圖在2922cm^-1和2855cm^-1處出現(xiàn)了兩個(gè)明顯的新吸收峰，這兩個(gè)吸收峰為氨基修飾介孔二氧化硅納米粒丙基中的c-h伸縮振動(dòng)峰，這兩個(gè)新吸收峰的出現(xiàn)證明了氨基修飾介孔二氧化硅納米粒的成功制備。另外，相比空白介孔二氧化硅納米粒和氨基修飾介孔二氧化硅納米粒的紅外圖譜，甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒在1700cm^-1，1606cm^-1和1447cm^-1處出現(xiàn)了新的吸收峰，1700cm^-1和1447cm^-1是酰胺鍵的特征吸收峰，1606cm^-1推測(cè)為甘草次酸分子中碳碳不飽和雙鍵的伸縮振動(dòng)峰，這些峰的出現(xiàn)成功證明了甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒的成功制備。

將制備成的甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒和空白介孔二氧化硅納米粒制成合適濃度的水分散液，送檢作透射顯微鏡觀察，結(jié)果如圖2。從圖中可以看出，甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒和空白介孔二氧化硅納米粒大小均一，形狀呈類圓形，粒徑分布在110nm左右。與空白介孔二氧化硅納米粒相比，甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒表面有一種類似膜狀物，間接證明了甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒的成功制備。

4.載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒的制備

稱取0.16份甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒和0.04份姜黃素分散于20份的無(wú)水乙醇中，超聲分散，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，50％乙醇溶液(40份)洗去多余的藥物，得到載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒。稱取一定量的載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒，乙醇溶解其中的藥物，稀釋合適的倍數(shù)，采取紫外分光光度法測(cè)定其載藥量為8.78±1.24％。

5.細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)

選用hepg2細(xì)胞(由重慶市生物化學(xué)與分子藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供)考察該發(fā)明所制備的載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒的細(xì)胞靶向能力。具體操作步驟如下：12孔板培養(yǎng)hepg2細(xì)胞至一定的濃度，每孔給一定體積的不同濃度的含有原料藥姜黃素，載姜黃素介孔二氧化硅納米粒和載姜黃素甘草次酸修飾介孔二氧化硅納米粒的培養(yǎng)液，孵箱中培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集細(xì)胞，采用高效液相法測(cè)定細(xì)胞對(duì)藥物姜黃素的攝取量，結(jié)果見(jiàn)圖3。由圖可以看出，相比原料藥姜黃素組和載姜黃素介孔二氧化硅納米粒組，載姜黃素甘草次酸修飾二氧化硅納米粒能夠明顯增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)藥物的攝取，結(jié)果證實(shí)該發(fā)明所制備的載姜黃素介孔二氧化硅納米粒具有良好的細(xì)胞靶向能力。