本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，將臭氧化油用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預防、治療和與治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物的聯(lián)合用藥。具體涉及臭氧化油通過口服途徑預防和治療抑郁癥、焦慮癥、老年癡呆癥、帕金森病。
背景技術(shù)：
Velio Bocci在《臭氧治療學》一書中概述了使用低劑量的臭氧氣體能夠發(fā)揮許多有益功能，且無副作用，即臭氧療法（見Velio Bocci撰寫的《Oxygen-Ozone Therapy》，北京大學醫(yī)學出版社，2004）。臭氧療法可以通過多種給藥途徑來實現(xiàn)，并針對不同疾病產(chǎn)生不同的功效。臭氧化油外用作為抗菌劑、除臭劑用于褥瘡和潰瘍等皮膚病的治療藥物。因此，現(xiàn)已知臭氧具有氧化和抗菌作用。將臭氧化油直接灌胃用于幽門螺旋桿菌引起的胃炎的治療。肌肉或皮下注射臭氧氣體來治療慢性病毒肝炎和血管性疾病。陰道直接通入臭氧氣體能夠治愈炎癥和細菌感染。將臭氧氣體直接與一定體積的血液在體外混合，再回輸給患者被稱為自體血療法，能夠調(diào)理人體內(nèi)環(huán)境，降低機體的敏感性和增強機體免疫力。直腸直接吹臭氧氣體能夠改善帕金森病的癥狀（見Lamberto Re， Mohamed N. Mawsouf， Silvia Menendez， Olga S. Leon， Gregorio M. Sanchez， and Frank Hernandez 撰寫的《Ozone Therapy: Clinical and Basic Evidence of Its Therapeutic Potential》，Archives of Medical Research，2008， 39: 17-26）。腹腔給臭氧氣體能夠保護心臟免受急性心肌梗塞的損傷（Clara Di Filippo， Margherita Luongo， Raffaele Marfella， Franca Ferraraccio， Biagio Lettieri， Annalisa Capuano， Francesco Rossi， Michele D'Amico撰寫的《Oxygen/ozone protects the heart from acute myocardial infarction through local increase of eNOS activity and endothelial progenitor cells recruitment》，Naunyn-Schmied Arch Pharmacol，2010， 382:287–291）。從結(jié)構(gòu)上看，盡管臭氧化油和臭氧氣體（:O-O-O）并不是同一物質(zhì)，但臭氧化油是通過對油的加成臭氧得到，故在其分子中具有臭氧化物結(jié)構(gòu)，與臭氧氣體的功能相似。以上各種給藥途徑均表明臭氧能夠以氣體的方式直接被機體吸收并發(fā)揮功能。臭氧氣體的功能可能通過以下三個途徑來實現(xiàn)：（1）、臭氧在體內(nèi)通過生物化學反應，生成類似活性氧的物質(zhì)（羥基自由基OH-、超氧陰離子O2-等），廣泛影響著機體氧化還原系統(tǒng)；（2）、臭氧能夠引起內(nèi)皮祖細胞聚集和促進一氧化氮（NO）的生成，起到舒張血管的作用；（3）、臭氧能夠誘導骨髓干細胞到血管損傷部位，促進損傷血管修復重建，但具體機制尚不明確。
上述給藥途徑存在諸多缺陷：沿途與太多物質(zhì)接觸，難以保證氣體進入機體的有效濃度。若給予過量極易誘發(fā)機體產(chǎn)生不適反應，且操作過程繁瑣，再加上療程較長，患者難以接受。尤其是自體血療法，每周2～3次，連續(xù)10周為一療程。本發(fā)明以油與臭氧加成的方式，得到臭氧化油，再將此油以腸溶膠囊包裹，能夠克服直接使用臭氧氣體的諸多缺點。既保證臭氧化油不與外界任何物質(zhì)接觸，在常態(tài)下亦可長期穩(wěn)定保存；還能定量控制臭氧化油進入機體，從而避免通過其它給藥方式給藥，人為造成藥量不當。臭氧化油腸溶膠囊的給藥途徑為直接口服，對機體傷害最小，操作簡單易行，方便攜帶，為其推廣奠定了良好的基礎(chǔ)。
在臭氧化油產(chǎn)品中，臭氧化橄欖油、葵花油、大豆油作為抗菌劑、除臭劑用于褥瘡和潰瘍等皮膚病的治療的外用藥品已經(jīng)上市。但將臭氧化油制成腸溶膠囊的形式通過直接口服的方式進入機體而產(chǎn)生功效，目前尚無報道。在本發(fā)明中，通過直接口服臭氧化油腸溶膠囊，腹腔注射、灌腸、灌胃、靜脈注射、皮下注射、肌肉注射和栓劑的方式，能夠產(chǎn)生藥物作用。
老年癡呆癥(又稱阿爾茲海默癥)的發(fā)病機制至今仍不清楚。目前市場上的藥物主要增加膽堿能功能的藥物，如膽堿酯酶抑制劑加蘭他敏、多奈哌齊(安理申)，M受體激動藥占諾美林等，這些藥物僅能延緩發(fā)病過程，但不能治愈老年癡呆癥，并且伴有心血管和胃腸道副作用。而其他常用的藥物如抗抑郁劑、抗焦慮、鎮(zhèn)靜催眠藥、抗精神病藥等藥物對老年癡呆癥的癥狀改善有限，且有神經(jīng)系統(tǒng)的副反應。鑒于此，需要一種更高效和安全的能治療老年癡呆癥的藥劑。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對上述現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)狀，提供能夠有效緩解老年癡呆癥癥狀，減緩老年癡呆癥的記憶功能減退，減緩老年癡呆癥的認知功能障礙，防止老年癡呆癥導致的神經(jīng)元損傷的一種用于治療老年癡呆癥的藥劑。
帕金森病(PD)又名震顫麻痹，是最常見的神經(jīng)退行性疾病之一。臨床上的主要病理改變是中腦黑質(zhì)致密部多巴胺(DA)能神經(jīng)元選擇性的死亡、缺失，導致紋狀體DA不足，從而導致基底節(jié)神經(jīng)調(diào)節(jié)功能的紊亂，其發(fā)病的病因，截至目前尚未清楚。然而研究已經(jīng)證實，該病與氧化應激和線粒體功能異常等具有密切關(guān)系，因此，減輕氧化應激損傷可以作為藥物作用靶點來治療帕金森病。此外，最新的研究顯示，臭氧可改善帕金森病等神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的臨床癥狀，顯示出明確的抗氧化保護作用，并且在神經(jīng)保護方面有一定的效果。帕金森病患者的黑質(zhì)致密區(qū)細胞凋亡，是該病的重要病理基礎(chǔ)，抑制此種凋亡，對該病的治療也會起到積極的作用。臭氧由于它廣泛地存在于常見的大氣中，具有多種生物活性，如：心血管保護作用、抗氧化作用、抗紫外及抗輻射作用、抗誘變及抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作用、降脂降糖作用、免疫調(diào)節(jié)作用等。在醫(yī)藥化工和食品等領(lǐng)域都具有廣泛的應用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是利用臭氧化油制劑和給藥途徑來預防和治療抑郁癥、焦慮癥、老年癡呆癥、帕金森病，制備簡便、成本低廉。經(jīng)臨床應用驗證，本發(fā)明具有療效顯著，口服劑量低，無毒副作用，有效率高等優(yōu)點。
在本發(fā)明中，之所以選擇權(quán)利要求1、2所述的各種油中的一種、兩種和兩種以上，是因為這些油不飽和脂肪酸含量較高，其中核桃油的不飽和脂肪酸高達92%以上，在不飽和脂肪酸結(jié)構(gòu)中至少有一個烯烴類雙鍵。若將權(quán)利要求1、2中的一種、兩種和兩種以上含不飽和脂肪酸高的油與權(quán)利要求3～7中的一種、兩種和兩種以上的表面活性劑混合，亦能與臭氧發(fā)生加成反應?？梢娭灰映晌锏慕Y(jié)構(gòu)中存在烯烴不飽和鍵即可與臭氧發(fā)生加成反應，不飽和鍵數(shù)目越多，反應越容易發(fā)生，且與臭氧加成的量越多，加成物能夠攜帶臭氧分子的數(shù)目也越多。
為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案將結(jié)合下面的制作流程和實施方式進行簡單的說明。
1、制備臭氧氣體。
2、制備臭氧化油。
3、制備臭氧化油腸溶膠囊。
4、制備含表面活性劑的臭氧化油。
5、制備含表面活性劑的臭氧化油腸溶膠囊。
6、臭氧化橄欖油膠囊對老年癡呆癥的防治實驗。
7、臭氧化橄欖油膠囊對抑郁癥的防治作用。
8、臭氧化橄欖油膠囊對焦慮癥的防治作用。
9、臭氧化橄欖油膠囊對帕金森癥的防治作用。
具體實施方式
下列非限制性實施例用于說明本發(fā)明。
實施例1臭氧化橄欖油腸溶膠囊制備
1、制備臭氧氣體。本發(fā)明采用醫(yī)用氧氣通過臭氧發(fā)生器來制備臭氧氣體。
選自西安德潤生物技術(shù)有限責任公司設(shè)計生產(chǎn)的DRO3-A型臭氧機（功率≦55W）。
2、制備臭氧化油和臭氧化油腸溶膠囊整個過程須要在20～25℃進行，確保臭氧化油不會發(fā)生熱解反應。
3、橄欖油3kg置入反應釜中；臭氧以150m3/h流速加入，總反應時間為20小時。反應結(jié)束后，余氣滅活。
4、得到臭氧化橄欖油濃度為40 mg/L，25℃可穩(wěn)定保存十個月。
5、制備臭氧化橄欖油腸溶膠囊。
（1）、囊材的制備:按重量比3：3：1：1的比例稱取水、明膠、甘油和糯米粉或淀粉倒入膠罐中，溶膠時溫度先設(shè)置成75℃，在溫度到達60℃的時候開始加水，加水10分鐘，用手觸有微燙的感覺，開始加入甘油，攪拌2分鐘，從膠罐底部取2次，倒回膠罐中，迅速加明膠，攪拌時間為2小時，攪拌后溫度設(shè)定為60℃，靜置脫氣泡8小時。
（2）、采用壓制法制備臭氧化橄欖油腸溶膠囊，容量0.25mL。
室溫22℃制膠囊，膠皮厚度為0.7mm，容量為0.25mL，制得的軟膠囊在轉(zhuǎn)籠里冷卻8小時，出籠，干燥即得臭氧化橄欖油腸溶膠囊，于4℃避光冷藏備用。
實施例2臭氧化橄欖油、大豆油和花生油混合油的腸溶膠囊制備
1、制備臭氧氣體。本發(fā)明采用醫(yī)用氧氣通過臭氧發(fā)生器來制備臭氧氣體。
選自西安德潤生物技術(shù)有限責任公司設(shè)計生產(chǎn)的DRO3-A型臭氧機（功率≦55W）。
2、制備臭氧化油和臭氧化油腸溶膠囊整個過程須要在20～25℃進行，確保臭氧化油不會發(fā)生熱解反應。
3、橄欖油1kg，大豆油1kg和花生油1kg置入反應釜中；臭氧以150m3/h流速加入，總反應時間為20小時。反應結(jié)束后，余氣滅活。
4、得到臭氧化混合油濃度為40mg/L，25℃可穩(wěn)定保存十個月。
5、制備臭氧化混合油腸溶膠囊。
（1）、囊材的制備:按重量比3：3：1：1的比例稱取水、明膠、甘油和糯米粉或淀粉倒入膠罐中，溶膠時溫度先設(shè)置成75℃，在溫度到達60℃的時候開始加水，加水10分鐘，用手觸有微燙的感覺，開始加入甘油，攪拌2分鐘，從膠罐底部取2次，倒回膠罐中，迅速加明膠，攪拌時間為2小時，攪拌后溫度設(shè)定為60℃，靜置脫氣泡8小時。
（2）、采用壓制法制備臭氧化混合油腸溶膠囊，容量0.25mL。
室溫22℃制膠囊，膠皮厚度為0.7mm，容量為0.25mL，制得的軟膠囊在轉(zhuǎn)籠里冷卻8小時，出籠，干燥即得臭氧化混合油腸溶膠囊，于4℃避光冷藏備用。
實施例3含表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊制備
1、制備臭氧氣體。本發(fā)明采用醫(yī)用氧氣通過臭氧發(fā)生器來制備臭氧氣體。
選自西安德潤生物技術(shù)有限責任公司設(shè)計生產(chǎn)的DRO3-A型臭氧機（功率≦55W）。
2、制備臭氧化油和臭氧化油腸溶膠囊整個過程須要在20～25℃進行，確保臭氧化油不會發(fā)生熱解反應。
3、橄欖油3kg置入反應釜中，緩慢加入失水山梨醇單油酸酯聚氧乙烯醚（吐溫80）20mL，混勻，臭氧以150m3/h流速加入，總反應時間為20小時。反應結(jié)束后，余氣滅活。
4、得到臭氧化橄欖油濃度為40 mg/L，25℃可穩(wěn)定保存十個月。
5、制備含表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊。
（1）、囊材的制備:按重量比3：3：1：1的比例稱取水、明膠、甘油和糯米粉或淀粉倒入膠罐中，溶膠時溫度先設(shè)置成75℃，在溫度到達60℃的時候開始加水，加水10分鐘，用手觸有微燙的感覺，開始加入甘油，攪拌2分鐘，從膠罐底部取2次，倒回膠罐中，迅速加明膠，攪拌時間為2小時，攪拌后溫度設(shè)定為60℃，靜置脫氣泡8小時。
（2）、采用壓制法制備臭氧化橄欖油腸溶膠囊，容量0.25mL。
室溫22℃制膠囊，膠皮厚度為0.7mm，容量為0.25mL，制得的軟膠囊在轉(zhuǎn)籠里冷卻8小時，出籠，干燥即得含表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊，于4℃避光冷藏備用。
實施例4含表面活性劑和助表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊制備
1、制備臭氧氣體。本發(fā)明采用醫(yī)用氧氣通過臭氧發(fā)生器來制備臭氧氣體。
選自西安德潤生物技術(shù)有限責任公司設(shè)計生產(chǎn)的DRO3-A型臭氧機（功率≦55W）。
2、制備臭氧化油和臭氧化油腸溶膠囊整個過程須要在20～25℃進行，確保臭氧化油不會發(fā)生熱解反應。
3、橄欖油3kg置入反應釜中，緩慢加入失水山梨醇單油酸酯聚氧乙烯醚（吐溫80）20mL和純乙醇20mL，混勻，臭氧以150m3/h流速加入，總反應時間為20小時。反應結(jié)束后，余氣滅活。
4、得到臭氧化橄欖油濃度為40 mg/L，25℃可穩(wěn)定保存十個月。
5、制備含表面活性劑和助表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊。
（1）、囊材的制備:按重量比3：3：1：1的比例稱取水、明膠、甘油和糯米粉或淀粉倒入膠罐中，溶膠時溫度先設(shè)置成75℃，在溫度到達60℃的時候開始加水，加水10分鐘，用手觸有微燙的感覺，開始加入甘油，攪拌2分鐘，從膠罐底部取2次，倒回膠罐中，迅速加明膠，攪拌時間為2小時，攪拌后溫度設(shè)定為60℃，靜置脫氣泡8小時。
（2）、采用壓制法制備臭氧化橄欖油腸溶膠囊，容量0.25mL。
室溫22℃制膠囊，膠皮厚度為0.7mm，容量為0.25mL，制得的軟膠囊在轉(zhuǎn)籠里冷卻8小時，出籠，干燥即得含表面活性劑和助表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊，于4℃避光冷藏備用。
實施例5臭氧化橄欖油膠囊對老年癡呆癥的防治實驗
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案
1、實驗動物:
實驗采用雄性ICR小鼠，體重22-28g。分為4個組，正常對照組，Aβ淀粉樣蛋白(Aβ)組，臭氧化橄欖油給藥組2.5mg/只/d空腹灌胃，Aβ和臭氧化橄欖油膠囊給藥組，每組8只。每天的試驗時間固定于9:00AM-4:30PM。實驗操作遵循NIH實驗動物使用指南(NIH publications No.80-23，1996)。
2、老年癡呆癥動物模型的建立:
給小鼠注射水合氯醛，劑量10mg/kg，將其麻醉，固定在立體定位儀上，剪掉頭部毛發(fā)，暴露皮膚，以兩眼連線的中點為起點，兩耳后緣連線的中點為終點剪開一道切口，暴露前鹵，以前鹵為坐標原點，后退1.5 mm，左右旁開1.2mm，這兩個點即為海馬CAl區(qū)的坐標，鉆孔，進針1.5mm，注射Aβlμg，對照組和臭氧化橄欖油給藥組注射生理鹽水，縫合皮膚，消毒，放回籠子里飼養(yǎng)。
3、給藥:
模型建立完成之后，對照組注射生理鹽水，臭氧化橄欖油給藥采取灌胃2.5mg/只/d，每天空腹給藥一次，持續(xù)給藥14天，之后進行行為學檢驗。
4、學習和記憶能力的行為學檢驗(水迷宮實驗):
水迷宮裝置是一個圓形的黑色水池，直徑110cm，高50cm，里面注滿水，水深24cm，水溫22-24℃，水面下1cm處有一直徑8cm的平臺，水池周圍有黑色的幕布遮擋，四周掛有可見的標記物以便小鼠記憶位置方向，水迷宮人為分成4個象限，小鼠每次訓練都從不同的象限入水，4個象限結(jié)束為一個訓練周期，小鼠在水中自由游泳，直到找到平臺，如果小鼠90秒內(nèi)無法找到平臺，則人為引導小鼠到平臺，讓其在平臺上停留15秒。每只小鼠每天訓練8次(2個周期)，連續(xù)訓練4天。第5天，撤掉水下平臺，從原有平臺對面象限放入小鼠，讓其在水迷宮裝置中自由游泳60秒。采用視頻監(jiān)控系統(tǒng)跟蹤錄像。實驗結(jié)束后，軟件分析小鼠運動軌跡。
5、認知能力的檢驗(新物體識別):
新物體識別實驗在一個自制的白色塑料行為箱中進行，行為箱的長寬高分別為50*50*30cm，整個實驗分3個階段3天完成。第一階段，第1天適應期，將小鼠放入行為箱中讓其自由探索5分鐘，在這一階段，沒有數(shù)據(jù)收集。第二階段，第2天訓練期，兩個相同的物體被放入行為箱中，物體距離行為箱大約5cm，兩個物體相距20cm，放入小鼠讓其自由探索5分鐘。我們對探索行為進行了定義:小鼠的鼻子距離物體小于2cm或者用鼻子觸碰物體。在物體周圍走動或者趴在物體附近不能作為探索行為。在這一階段，記錄小鼠探索，每個物體的時間，結(jié)束后，小鼠立刻放回原來的籠子。第三階段，第3天測試期，小鼠被放回原來行為箱自由探索5分鐘，其中一個物體換成一個新的物體。采用分辨指數(shù)衡量小鼠的認知功能，分辨指數(shù)=探索新物體的時間/(探索新物體的時間+探索舊物體的時間)。
6、統(tǒng)計分析處理
本部分的數(shù)據(jù)均用mean±SD(均數(shù)±標準差)的格式表示。數(shù)據(jù)用方差分析(one-way ANOVA)。P<0.05定為顯著性差異有統(tǒng)計學意義。
實驗結(jié)果:
(1)臭氧化橄欖油處理改善老年癡呆癥模型小鼠空間學習和記憶(如表1所示)：
在訓練期第4天，測量小鼠從水中逃離到平臺的時間，注射Aβ后小鼠找到平臺花費更長的時間。臭氧化橄欖油灌胃后(2.5mg/只/d)，小鼠找到平臺的時間明顯縮短(P<0.05)。在第5天探索期，我們將第二象限的平臺撤掉，來檢測小鼠的記憶能力。結(jié)果顯示，Aβ小鼠在第二象限的路程明顯少于正常對照組(p<0.0l)，Aβ注射后臭氧化橄欖油灌胃組比Aβ注射組花更多的時間在第二象限(p<0.0l)。對小鼠穿越原有平臺位置的次數(shù)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，立體定位注射Aβ后，小鼠穿越原有平臺位置的次數(shù)明顯少于正常組(p<0.0l)，臭氧化橄欖油灌胃后，小鼠穿越原有平臺位置的次數(shù)明顯增加(p<0.0l)。
表1臭氧化橄欖油對老年癡呆癥模型小鼠空間學習和記憶的影響
與模型組比較，** p<0.0l
(2)臭氧化橄欖油處理改善老年癡呆癥模型小鼠認知功能(如表2所示):
通過新物體識別實驗測試小鼠探索新舊物體的時間比例。分辨指數(shù)=識別物體1的時間/(識別物體1時間+識別物體2時間)，表2中發(fā)現(xiàn)小鼠探索兩個相同物體的分辨指數(shù)和總探索時間基本相等，各組之間比較無顯著性差異。表2中顯示測試期小鼠對新物體(物體1換成一個之前未接觸過的新物體，物體2不變)的分辨指數(shù)。在測試期，Aβ小鼠的分辨指數(shù)較對照組降低，差異有統(tǒng)計學意義; 臭氧化橄欖油處理小鼠的分辨指數(shù)較Aβ小鼠顯著升高。各組和Aβ定位組比較，差異有統(tǒng)計學意義;Aβ定位組灌胃臭氧化橄欖油后，分辨指數(shù)較Aβ對照組提高。
表2臭氧化橄欖油對老年癡呆癥模型小鼠認知功能的影響
與模型組比較，* p<0.05
結(jié)論: 臭氧化橄欖油能夠有效改善老年癡呆癥的記憶功能減退和認知功能損傷。因此，本發(fā)明的用于治療老年性癡呆癥的藥劑具有顯著的臨床意義和應用價值。
本發(fā)明的最佳實施例已闡明，由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員做出的各種變化或改型都不會脫離本發(fā)明的范圍。
有關(guān)臨床實驗資料如下:
1、臨床資料
1.1資料選取自2013年2月至2015年12月患者50例，以1:l的比例隨機分為治療組與對照組各25例。其中治療組男20例，女5例;年齡60-80(67.2±5.4)歲;病程1-12 (4.4±1.3)年;癥狀計分10-28 (16.1±1.6)分。對照組男18例，女7例;年齡62-85（68.9±4.5）歲；病程1-10 (4.2±1.4)年;癥狀計分11-28 (17.2±1.7)分。兩組患者在性別、年齡、病程、病情等一般資料經(jīng)統(tǒng)計學分析無顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。
2、診斷標準
美國神經(jīng)病學會第四版《精神病的診斷和統(tǒng)計手冊(DSM-IV)》中老年性癡呆的診斷標準。
（1） 發(fā)生多方面認知缺陷、變?yōu)橐韵聝烧撸?/p>
A.記憶缺損(學習新信息的能力受損或不能回憶以前的所學到的信息)；
B.至少有下列認知障礙之一:(1)失語(2)失認(3)失用(4)執(zhí)行管理能力的障礙；
（2）上述表現(xiàn)導致社交或職業(yè)功能的缺損，并可發(fā)現(xiàn)這些功能明顯不如以前;
（3）病程的起病特點是逐漸起病，持續(xù)衰退；
（4）上述認知缺陷并非由下列原因引起；
A.其他導致記憶或認知進行性缺陷的中樞神經(jīng)系統(tǒng)情況，如:腦血管病等
B.原因已明的導致癡呆的全身疾??；
（5）并非由于譫妄所致；
（6）并非由于重癥抑郁和精神分裂所致；
3、納入標準:
（1）符合美國精神障礙對癡呆臨床診斷標準，MMSE評分均在10-24分之間，文化程度均在初中以上，屬于輕中度老年癡呆，將伴有嚴重性神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者，嚴重性心肺，肝腎疾病均排除;(2)均伴有記憶障礙，失用及判斷力障礙等癥狀;(3)年齡在60-85歲;(4)同意參加實驗，簽署知情同意書。
排除標準:①年齡在60周歲以下或85周歲以上者;②合并有心血管、肺、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾病者;③精神病患者;④凡未按規(guī)定用藥或資料不全等影響療效判斷者。
4、治療方案
4.1對照組患者均予鹽酸多奈哌齊(天津力生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，每片5mg) 5mg，睡前10min口服。
4.2治療組服用本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊，空腹，每次1粒，每天1次，90天為一個療程，一個療程后統(tǒng)計兩組療效。
4.3療效判定標準依據(jù)《老年癡呆病的診斷、辨證分型及療效評定標準》:
顯效:主要癥狀基本恢復，神志清楚，定位準確，回答問題正確，反應靈敏，生活自理，能進行一般社會活動;
有效:主要精神癥狀有所減輕或部分消失，生活基本自理，回答問題基本正確，但反應遲鈍，智力、人格仍有障礙;控制:主要精神狀態(tài)無加重，生活自理情況變化不明顯，反應遲鈍，智力、人格仍有障礙但無加重;
無效:主要癥狀無改變，病情有發(fā)展生活不能自理，回答問題不正確，神志癡呆。
治療總有效=(顯效+有效)/總?cè)藬?shù)。
5、統(tǒng)計學處理
5.1療效評定:采用智能綜合評分法，(1)記憶力(6分);(2)定向力(4分);(3)思維能力(4分);(4)計算力(4分);(5)情感活動(3分);(6)二便功能(3分)(7)日常生活能力(4分)。
5.2療效評定標準：根據(jù)患者治療前治療后MMSE評分增減情況進行療效評定。療效指數(shù):(治療后積分-治療前積分)/治療前積分X 100%。
顯效治療指數(shù)≥20%
有效治療指數(shù)≥12%
無效治療指數(shù)<12%
惡化治療指數(shù)<-12%
療效判斷標準
顯效 積分增加>8分或達28分;
有效 積分增加4-7分;
無效 積分增加<3分。
全部病例經(jīng)本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊治療一個療程，按上述標準進行治療前后的對照比較，以判定療效。見表1。
表1兩組臨床療效比較例(%)
注:與對照組比較，*P<0.05
6、結(jié)論
本發(fā)明原料豐富，價格低廉，有效用于治療老年癡呆癥，療效好，用藥安全，具有臨床意義。
實施例6臭氧化橄欖油膠囊對抑郁癥的防治作用
現(xiàn)階段抑郁癥發(fā)病率很高，以腦力勞動者多見。越是抱負遠大，身負重任的社會精英，越是易患此癥，IT行業(yè)更為多見。青少年也大量加入其中。電子產(chǎn)品普及，無節(jié)制使用，對此病起了推波助瀾作用。此病隱匿，醫(yī)學上檢測手段缺乏，患者疲憊不堪，只想求死，不想求醫(yī)，身邊人又難以察覺，疏于防范。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，抑郁癥目前已經(jīng)成為世界第四大疾病。預計到2020年，可能成為僅次于心臟病的人類第二大疾病。有醫(yī)學專家稱，抑郁癥如果不治療，或治不得法，30%能夠挨過首次發(fā)作，但過一段時間又會再次發(fā)作;30%拖成慢性，拖延終身;30%自殺身亡。這時找心理咨詢師開導或是讓患者適當休息，已經(jīng)不是解決問題的主要方法。當務之急是要對患者進行正確的扶正調(diào)理治療，改善身體內(nèi)部環(huán)境，顯得極為重要。本實施例的目的在于提供一種特效治療抑郁癥的臭氧化油。
一、臨床療效
1、一般資料
治療病例50例。
2、治療效果
自覺癥狀療效:治愈40例，顯效8例、無效2例，總有效率96 %。
以下為使用臭氧化橄欖油膠囊的幾個典型病案，每日空腹1次1粒，3個月1個療程。
病案1:
何某某，女，46歲，教師，1989年初診。患者早年從事教師工作，腦力勞動強度很大，大腦長期處于極度疲勞狀態(tài)，使得患者在三十多歲時患上抑郁癥，歷時十幾年，期間2次自殺未遂。后用本臭氧化橄欖油膠囊治療，空腹，每次1粒，每天1次，90天為一個療程。在3個月服用后，飲食睡眠很快恢復正常。疲勞、抑郁、悲觀厭世的感覺未再出現(xiàn)。與之熟悉的人均有同感，其人變得開朗健談。食欲、睡眠、精神狀態(tài)始終良好。
病案2:
謝某某，男，51歲，公務員，2004年初診。患者常使用電腦，長期睡眠食欲差，經(jīng)常感覺疲勞。服用本臭氧化橄欖油膠囊治療，空腹，每次1粒，每天1次，90天為一個療程。在3個月服用后，病愈。
病案3:
霍某某，女，四十多歲，職員，2006年初診?；颊?003年剖腹產(chǎn)，平時電腦前工作任務繁重，2005年患上抑郁癥。后用本臭氧化橄欖油膠囊治療，空腹，每次1粒，每天1次，90天為一個療程。在3個月服用后，病愈。落發(fā)癥狀和臉上色斑也同時消失。
實施例7臭氧化橄欖油膠囊對焦慮癥的防治作用
以下結(jié)合非限制性實施例用于說明本發(fā)明。
臭氧化橄欖油膠囊治療焦慮癥臨床研究
1一般性資料:臭氧化橄欖油膠囊應用于臨床觀察焦慮癥病例100例，其中男55例，女45例，年齡23-62歲。病程最短者半年，最長者達3年，平均1.5年。
2診斷標準:臨床表現(xiàn)（1）心理障礙:主觀疑慮、焦躁不安、敏感激惹、注意力不集中、驚恐萬分、瀕死感。（2）軀體癥狀:口干、胸悶、心動過速、尿頻、腹瀉、便秘、發(fā)抖出汗、心悸、呼吸困難。（3）運動癥狀:手抖、肌肉緊張、不安地來回走動。（4）分型:廣泛性焦慮和驚恐發(fā)作臨床可有急性及慢性兩類。診斷依據(jù): (1)廣泛性焦慮①過分的焦慮持續(xù)時間在半年以上; ②伴植物神經(jīng)功能亢進、運動性不安和過分警惕; ③不符合強迫癥、恐怖癥、抑郁性神經(jīng)癥的診斷標準，且焦慮并非器質(zhì)性疾病引起的。（2）驚恐發(fā)作①無明顯原因突然發(fā)生的強烈驚恐，伴瀕死感或失控感; ②發(fā)作時伴有嚴重的植物神經(jīng)癥狀; ③每次發(fā)作短暫(一般不超過2小時)，發(fā)作明顯影響日常工作; ④1個月至少發(fā)作3次; ⑤特別要注意排除甲狀腺機能亢進及腎上腺嗜絡細胞瘤、心血管病、自發(fā)性低血糖、內(nèi)分泌病、藥物戒斷反應和顳葉癲癇所致的類似發(fā)作。⑥不符合癔癥和恐怖癥的診斷標準。⑦腦電圖示X活動減少，B活動增加。
3試驗方法:臭氧化橄欖油膠囊臨床樣品，規(guī)格為粒0.25ml，三個月為一療程，一天一次，早空腹服用。治療2個療程。
4療效標準:(1)痊愈:臨床癥狀消失，能參加正常勞動和工作。(2)好轉(zhuǎn):臨床癥狀減輕。(3)無效:癥狀無改善。
5治療效果:見表1
表1兩組療效比較
可見，本發(fā)明制得的藥物能夠安全有效治療焦慮癥，且無毒副作用。
實施例8臭氧化橄欖油膠囊對帕金森癥的防治作用
下列非限制性實施例用于說明本發(fā)明。
動物實驗臭氧化橄欖油對帕金森模型小鼠的治療
1.實驗材料
1.1實驗試劑和儀器
魚藤酮(SIGMA)，二甲基亞颯(DMSO，SIGMA)，玉米油(山東魯花集團有限公司)，丙二醛含量及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶試劑盒(南京建成生物工程有限公司)。其余試劑均為國產(chǎn)市售分析純。
1.2動物造模及分組
本實驗采用皮下注射魚藤酮的方法構(gòu)建帕金森病的小鼠模型。購買成年雄性C57BL/6小鼠30只，體重25-28g，由中科院上海實驗動物中心提供。小鼠按體重隨機平均分為正常對照組(NC組，n=10)、魚藤酮(PD模型組，n=10)、臭氧化橄欖油治療組(n=10)。實驗中，將魚藤酮先溶于極低體積的DMSO，然后溶于玉米油(配成2mg/ml油溶液)。魚藤酮組(PD模型組)每日于頸背部皮下注射魚藤酮油溶液(3mg/kg小鼠體重)，正常對照組(NC組)于頸背部皮下注射等體積的玉米油(含相應體積的DMSO)，臭氧化橄欖油治療組每日于頸背部皮下注射魚藤酮，同時按劑量2.5mg/只/d空腹灌胃臭氧化橄欖油。實驗期間所有小鼠自由飲食和飲水，溫度25±2 ℃，相對濕度(65±15)%。每日觀察動物一般狀態(tài)表現(xiàn)并記錄動物行為變化，持續(xù)5周。
2.實驗檢測指標
2.1 WMT-200水迷路
WMT-200水迷路視頻分析系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)采用計算機視覺相關(guān)算法，實時跟蹤動物的行為狀態(tài)，并分析和記錄動物入水后搜索目標所需的時間:實驗前將小鼠置于站臺上適應20s，隨后將小鼠隨機從不同象限面壁置入池內(nèi)，小鼠登上站臺5s后終止記錄，最長記錄時間為30s(若30s內(nèi)不能上臺，引導小鼠登上站臺適應10s，最后將小鼠擦干放人鼠籠)。如此將小鼠置入游泳池，5次為1組，分別測量四組小鼠平均逃逸時間，以評價其空間學習能力。在實驗處理后第2，3，4和5周按上述步驟進行實驗。
2.2氧化應激指標檢測
5周行為檢測后，采用脫頸法迅速斷頭取腦，在冰面上迅速分離出中腦黑質(zhì)和紋狀體，玻璃勻漿器制成10%組織勻漿，-80℃冰箱保存。實驗時用BCA法定量蛋白，按照試劑盒說明書，采用化學比色法檢測腦組織中SOD，GSH-Px，CAT活性及MDA含量。
2.3統(tǒng)計學處理
采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
3.實驗結(jié)果
3.1各組小鼠的行為狀態(tài)及體重
PD模型組小鼠從實驗開始第11天出現(xiàn)精神萎靡，活動緩慢，毛發(fā)松散而無光澤，食欲明顯減退，第17天開始相繼出現(xiàn)身體屈曲，運動減少，時而伴有強直、震顫表現(xiàn)，顯示帕金森的典型行為特征，表明帕金森病小鼠造模成功。其余2組小鼠未出現(xiàn)身體屈曲，運動減少，強直、震顫表現(xiàn)。對各組小鼠每日體重測量發(fā)現(xiàn)，PD模型組小鼠體重增長較其它各組緩慢，但組間比較均無顯著性差異。
3.2各組小鼠腦黑質(zhì)氧化應激指標
對各組小鼠的黑質(zhì)氧化應激指標的測定結(jié)果顯示，PD模型組的小鼠，其被測定的各項生化指標均偏離NC組的小鼠所測定的值。臭氧化橄欖油治療組的小鼠各項氧化應激指標均得到了較大程度的恢復。所測定的結(jié)果如表1所示:
表1小鼠中腦黑質(zhì)氧化應激指標(X±SD，n =10)
與模型組比較*p<0.05
臭氧化橄欖油治療組的各組數(shù)據(jù)與PD模型組之間比較均有顯著性差異(P<0. 05)。
(1)小鼠水迷路神經(jīng)行為分析
實驗處理后第2，3，4和5周末，分別測量小鼠平均逃逸時間，結(jié)果顯示，PD模型組小鼠在第3周末平均逃逸時間顯著高于NC組(P<0.05)，第4和5周末差異極顯著(P<0.01)。而臭氧化橄欖油治療組小鼠在第3周末平均逃逸時間顯著低于PD模型組(P<0.05)，第4和5周末差異極顯著(P<0.01)，實驗具體結(jié)果如表2所示:
表2小鼠在實驗處理后各周末平均逃逸時間(x±SD，n=5)
與模型組比較*p<0.05，**p<0.01；## p<0.01，與NC組比較。
綜上所述，臭氧化橄欖油可有效改善魚藤酮制作的帕金森小鼠模型的病理癥狀，降低黑質(zhì)神經(jīng)元的毒性，對帕金森病具有預防和治療的作用。
下面是患者使用本發(fā)明藥物的臨床統(tǒng)計資料:
一、一般資料
收治患者100例，其中男性62人，女性38人，年齡50-80歲，平均年齡68歲，病程2-8年不等。
二、治療方法
按照本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊，每日空腹1次1粒，3個月為一個療程。
三、療效評定標準:
1、治愈:臨床癥狀消失，四肢震顫、肌肉僵直、動作遲緩的現(xiàn)象消失，感覺和吞咽功能均正常，生活能夠自理;
2、好轉(zhuǎn):臨床癥狀得到控制，各項生理指標均有所好轉(zhuǎn);
3、未愈:患者臨床癥狀無任何改善甚至加重。
四、治療結(jié)果統(tǒng)計
從上述結(jié)果可以看出，本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊治療帕金森病具有良好的臨床效果，能有效提高治療的治愈率，值得在臨床應用上推廣。
典型病例:
病例一、朱某，男，49歲，患者半年前出現(xiàn)四肢不自主的顫動，變換位置后震顫減輕或消失，并有輕微的活動障礙，患者確診為帕金森病，采用本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊治療，每日空腹1次1粒，3個月為一個療程。服用兩個療程后，患者四肢震顫的現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn)，肌肉僵直的現(xiàn)象完全消失，后又繼續(xù)服用一個療程，患者行走活動比之前明顯靈活，生活能夠自理。
病例二、顧某，女，62歲，患者家人敘述患有帕金森病一年左右，走路步態(tài)蹣跚僵硬，有明顯的慌張步態(tài)，患者采用本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊制劑治療，每日空腹1次1粒，3個月為一個療程。服用兩個療程后，患者行動和語言能力都得到提升，能夠正常的交流，肢體顫動現(xiàn)象得到好轉(zhuǎn)，繼續(xù)使用兩個療程，患者行走和活動都很靈活，可以做一些簡單的家務，生活能夠自理。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。