本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說(shuō)，是具有藥理活性的藥物組合物。
背景技術(shù)：
金花茶Camellia nitidissima是山茶科Theaceae山茶屬Camellia的常綠灌木或小喬木，其花和葉為廣西壯族民間的傳統(tǒng)用藥，2010年已被納入新資源食品(衛(wèi)生部公告2010年第9號(hào))。在《廣西民族藥簡(jiǎn)編》、《中國(guó)本草國(guó)錄》、《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》和《藥用植物辭典》等書籍中有藥理作用記載，可用于防治咽喉炎，腎炎，痢疾，腫瘤，便血，高血壓和月經(jīng)不調(diào)等病癥。
紫芝為多孔菌科真菌Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子實(shí)體，別名：黑芝、玄芝。從古至今許多經(jīng)典醫(yī)學(xué)書籍將紫芝列為上品中藥，對(duì)其有詳細(xì)記載?！吨袊?guó)藥典》(2015版)記載紫芝的性味與歸經(jīng)：甘，平。歸心、肺、肝、腎經(jīng)。其功能與主治為：補(bǔ)氣安神，止咳平喘。用于心神不寧，失眠心悸，肺虛咳喘，虛勞短氣，不思飲食。具有極高的營(yíng)養(yǎng)、保健和醫(yī)藥價(jià)值?，F(xiàn)代藥理研究已證明，靈芝有抗腫瘤，延緩衰老，抗炎癥，降血糖，降血脂等療效。
補(bǔ)體(complement，C)是由30余種廣泛存在于血清、組織液和細(xì)胞膜表面的蛋白質(zhì)組成的，具有精密調(diào)控機(jī)制的蛋白質(zhì)反應(yīng)系統(tǒng)，其活化過(guò)程表現(xiàn)為一系列絲氨酸蛋白酶的級(jí)聯(lián)酶解反應(yīng)。在正常生理狀態(tài)下，補(bǔ)體系統(tǒng)對(duì)外來(lái)入侵物起到調(diào)理、溶解清除的作用。在病理情況下，補(bǔ)體被過(guò)度激活，并對(duì)入侵的病毒、細(xì)菌及機(jī)體本身造成非特異性損傷。
補(bǔ)體能使溶血素敏化的紅細(xì)胞發(fā)生溶血，其溶血程度與血清中補(bǔ)體的含量有關(guān)。補(bǔ)體含量與溶血程度之間呈正相關(guān)，但不是直線關(guān)系，而呈S曲線關(guān)系，故通常取反應(yīng)曲線中間部位即50％溶血(CH50)為判定終點(diǎn)。將供試品做不同濃度稀釋后與補(bǔ)體混勻，與紅細(xì)胞反應(yīng)，測(cè)定溶血程度，以導(dǎo)致50％溶血所需最小供試品濃度(CH50)評(píng)價(jià)供試品的抗補(bǔ)體活性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題，是提供一種對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)有抑制作用的藥物組合物。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案如下：
1.金花茶用乙醇水溶液提取后依次過(guò)大孔樹脂、聚酰胺、Sephadex LH-20柱，得到提取物(1)；紫芝依次用乙醇水溶液和水提取，濃縮后得到提取物(2)；
2.制備補(bǔ)體，分別用提取物(1)、提取物(2)以及兩者的組合物制備供試品；兩者的組合物比例范圍是提取物(1)∶提取物(2)＝1∶0.2～5；
3.測(cè)定供試品的抗補(bǔ)體活性。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
實(shí)施例1
1)金花茶提取物制備：干燥的金花茶花朵5kg，用10倍重量的80％乙醇水溶液(乙醇與水的體積百分?jǐn)?shù)，下同)回流提取2次，每次回流2小時(shí)。合并提取液，在45℃下減壓濃縮回收乙醇，得浸膏573g。將浸膏混懸于適量水中得到混懸液，依次用與混懸液大致相等體積的環(huán)己烷、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，分別合并，減壓回收溶劑后分別得環(huán)己烷層CH(43g)、乙酸乙酯層CE(92g)、正丁醇層CB(150g)、水層CW(273g)。
正丁醇層CB過(guò)D101大孔樹脂柱，依次用30％、50％、70％、90％的乙醇水溶液梯度洗脫，等量接收洗脫液，根據(jù)薄層層析結(jié)果合并，減壓濃縮后得到五個(gè)部分：CB-1(24.8g)、CB-2(15.6g)、CB-3(25.1g)、CB-4(30.3g)、CB-5(27.2g)。
將CB-3過(guò)聚酰胺柱，依次用10％、30％、50％、70％、90％的乙醇水溶液梯度洗脫，等量接收洗脫液，根據(jù)薄層層析結(jié)果合并，減壓濃縮后得到三個(gè)部分：CB-3-1(8.8g)、CB-3-2(6.2g)、CB-3-3(7.4g)。
將CB-3-1過(guò)Sephadex LH-20柱，用氯仿∶甲醇＝1∶1洗脫，按色帶接收洗脫液，根據(jù)薄層層析結(jié)果合并，減壓濃縮后得到兩個(gè)部分：CB-3-1-1(3.5g)、CB-3-1-2(4.9g)。
詳細(xì)的分離流程圖如圖1所示。
2)紫芝提取物制備：干燥的紫芝2kg，打成粗粉，用8倍重量的80％乙醇水溶液回流提取2次，每次回流2小時(shí)，再用8倍重量水回流提取2次，每次回流2小時(shí)。分別合并提取液，減壓濃縮得到醇提浸膏和水提浸膏，合并兩種浸膏，50℃下減壓干燥，得到紫芝提取物GS 171克。
3)補(bǔ)體制備：取豚鼠股動(dòng)脈血約10ml，4℃下放置1h使其凝固，4000rpm離心10min，取上清液，加入以5×巴比妥緩沖液(BBS)洗滌后的2％羊紅細(xì)胞(SRBC)約2ml，吹打混勻，4000rpm離心5min，取上清液作為補(bǔ)體，分裝后于-70℃冷凍保存。
4)供試品溶液：稱取金花茶提取物CB-3-1-1和紫芝提取物GS適量(約3mg)，加入3×20μl DMSO和800μl BBS，超聲溶解得到1∶1溶液，加入BBS對(duì)倍稀釋，配成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128，共計(jì)8個(gè)濃度的供試品溶液。
5)補(bǔ)體制備及效價(jià)測(cè)定：補(bǔ)體(豚鼠血清)40μl加入EP管，再加入BBS至400μl。另取7支EP管，分別加入200μl BBS，一次從前一支EP管取200μl至下一管，得到1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280的溶液。這8支管分別加入200μl BBS、100μl溶血素、100μl SRBC，對(duì)照管A為0.4ml BBS+0.1ml SRBC+0.1ml溶血素(自身溶血不能用)。這10支管分別混勻，于37℃水浴30min后，在4000rpm、4℃的條件下離心5min。分別取每管上清0.2ml于96孔板，在405am測(cè)定吸光度。以三蒸水溶血管的吸光度作為全溶血標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算溶血率。以補(bǔ)體稀釋度為X軸，各稀釋濃度補(bǔ)體造成的溶血百分率為Y軸作圖。選擇達(dá)到相似高溶血率的最低補(bǔ)體濃度作為確保體系能正常溶血所需的臨界補(bǔ)體濃度。
取上述測(cè)得的臨界補(bǔ)體濃度的補(bǔ)體與供試品混勻，于37℃預(yù)水浴10min后，按照表1加入適量BBS、溶血素和2％SRBC。
表1補(bǔ)體經(jīng)典途經(jīng)溶血實(shí)驗(yàn)中所加各成分的體積(ml)
將每管37℃水浴30min后4000rpm、4℃條件下離心5min，分別取每管上清0.2ml于96孔板，用酶標(biāo)儀在405nm下測(cè)定吸光度。實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)置對(duì)照組、補(bǔ)體組和全溶血組。將測(cè)定組吸光度值扣除相應(yīng)中藥對(duì)照組吸光度值后計(jì)算溶血率。以樣品濃度作為X軸，溶血抑制率作為Y軸作圖。計(jì)算CH50值。
6)結(jié)果：金花茶提取物CB-3-1-1、靈芝提取物GS以及它們的組合物均表現(xiàn)出不同程度的抗補(bǔ)體活性，其中CB-3-1-1與GS的1∶2.5組合物(提取物的質(zhì)量之比)抗補(bǔ)體活性最好。具體活性結(jié)果見(jiàn)表2。
表2不同藥物抗補(bǔ)體活性結(jié)果