本發(fā)明涉及化合物L(fēng)inderolide H的新用途，尤其涉及Linderolide H在制備治療阿爾茨海默病藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

阿爾茨海默病是一種常見的老年性腦神經(jīng)退行性病變，發(fā)病率較高，已成為現(xiàn)代社會(huì)嚴(yán)重威脅老年人生命和健康的疾病之一。該疾病典型的病理變化包括β淀粉樣蛋白沉積形成老年斑，神經(jīng)纖維纏結(jié)，基底前腦膽堿能功能障礙和皮層、海馬廣泛的神經(jīng)元丟失和突觸形態(tài)的改變(參見：Roberson ED,Mucke L.100years and counting:prospects for defeating Alzheimer's disease.Science 2006；314(5800):781-4)。

研究發(fā)現(xiàn)阿爾茨海默病患者腦內(nèi)皮層及海馬區(qū)的病變比較明顯，以前腦基底核膽堿能神經(jīng)元破壞最多。因此，通過(guò)增加乙酰膽堿的含量，或作用于膽堿受體，可增強(qiáng)和改善中樞膽堿能系統(tǒng)的功能，從而達(dá)到促智治病的目的(Baskin DS,Browning JL,Pirozzolo FJ,Korporaal S,Baskin JA,Appel SH.Brain choline acetyltransferase and mental function in Alzheimer disease.Archives of Neurology 1999；56(9):1121-3)。乙酰膽堿酯酶抑制劑就是建立在這種理論基礎(chǔ)上開發(fā)出來(lái)的臨床上用于阿爾茨海默病治療的最早最成熟的一類藥物(Taylor P.Development of acetylcholinesterase inhibitors in the therapy of Alzheimer's disease.Neurology 1998；51(Supplement 1),S30–S35)，該類藥物對(duì)輕、中度阿爾茨海默病患者療效確切，可使其認(rèn)知功能及其它癥狀得到部分改善。目前多種乙酰膽堿酯酶抑制劑已經(jīng)用于阿爾茨海默病的治療。

本發(fā)明涉及的化合物L(fēng)inderolide H是一個(gè)2014年發(fā)表(Qing Liu,et al.,Sesquiterpene lactones from the roots of Lindera strychnifolia.Phytochemistry,87(2013)112–118.)的新化合物，該化合物擁有全新的骨架類型，目前的用途僅僅涉及抗炎作用(Qing Liu,et al.,Sesquiterpene lactones from the roots of Lindera strychnifolia.Phytochemistry,87(2013)112–118.)，對(duì)于本發(fā)明涉及的Linderolide H在制備治療阿爾茨海默病藥物中的用途屬于首次公開，由于屬于全新的結(jié)構(gòu)類型，而且其對(duì)于治療阿爾茨海默病的活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于治療阿爾茨海默病顯然具有顯著的進(jìn)步。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種具有乙酰膽堿酯酶抑制活性和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的Linderolide H，具體為L(zhǎng)inderolide H在制備治療阿爾茨海默病藥物的應(yīng)用。

所述化合物L(fēng)inderolide H結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示：

通過(guò)對(duì)該化合物的生物學(xué)活性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)該化合物具有較強(qiáng)的乙酰膽堿酯酶抑制作用及對(duì)β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。因此，該化合物可以作為多靶點(diǎn)的抗阿爾茨海默病化合物，用于防治阿爾茨海默病藥物的制備。

本發(fā)明涉及所述的Linderolide H在制備治療阿爾茨海默病藥物中的應(yīng)用。

Linderolide H作為一種多作用靶點(diǎn)的新型抗阿爾茨海默病的化合物，能夠同時(shí)具有乙酰膽堿酯酶抑制活性和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用，用于制備治療阿爾茨海默病的藥物中，對(duì)阿爾茨海默病具有良好的治療效果。

本發(fā)明涉及的Linderolide H在制備治療阿爾茨海默病藥物中的用途屬于首次公開，由于骨架類型屬于全新的骨架類型，而且其對(duì)于乙酰膽堿酯酶抑制活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于阿爾茨海默病的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。

以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明所涉及化合物L(fēng)inderolide H的制備方法參見文獻(xiàn)(Qing Liu,et al.,Sesquiterpene lactones from the roots of Lindera strychnifolia.Phytochemistry,87(2013)112–118.)

以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

實(shí)施例1：本發(fā)明所涉及化合物L(fēng)inderolide H片劑的制備：

取20克化合物L(fēng)inderolide H加入制備片劑的常規(guī)輔料180克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成1000片。

實(shí)施例2：本發(fā)明所涉及化合物L(fēng)inderolide H膠囊劑的制備：

取20克化合物L(fēng)inderolide H加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉180克，混勻，裝膠囊制成1000粒。

下面通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明其藥物活性。

實(shí)驗(yàn)例1：Linderolide H的乙酰膽堿酯酶抑制活性

1、Linderolide H對(duì)電鰻乙酰膽堿酯酶抑制活性

酶反應(yīng)在25℃，0.1M pH8.0的磷酸緩沖液中進(jìn)行，總反應(yīng)體積為200μL，內(nèi)含3.33mM 5，5’-二硫-聯(lián)(2-硝基苯甲酸)20μL，0.35U/mL乙酰膽堿酯酶溶液20μL和5.3mM碘化硫代乙酰膽堿溶液20μL，測(cè)試該化合物溶液10μL，在412nm用酶標(biāo)儀(Sunrise,Tecan,Austria)檢測(cè)5min。樣品重復(fù)三次。以未加化合物孔的光密度值作為100％，化合物測(cè)定孔的光密度與之比較，降低的百分率即為酶抑制率。該化合物至少測(cè)5個(gè)濃度梯度對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制活性，通過(guò)化合物濃度對(duì)數(shù)對(duì)抑制率作圖求IC50值(抑制50％酶活性時(shí)化合物的濃度)。

本發(fā)明測(cè)試了Linderolide H的乙酰膽堿酯酶抑制活性。該化合物具有顯著的乙酰膽堿酯酶抑制活性，其抑制乙酰膽堿酯酶的IC50值為0.20μM，與陽(yáng)性對(duì)照他克林相當(dāng)(IC50值0.17μM)。

實(shí)驗(yàn)例2：Linderolide H對(duì)β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

SH-SY5Y細(xì)胞以1×104個(gè)/mL接種于多孔板，培養(yǎng)24h貼壁后更換含10μM視黃酸(RA)的DMEM培養(yǎng)基。每?jī)商旄鼡Q一次培養(yǎng)基，處理7天，誘導(dǎo)細(xì)胞分化。誘導(dǎo)分化的細(xì)胞，用D-Hank’s液輕輕洗滌2次，試驗(yàn)分為空白對(duì)照組、模型組、藥物處理組、陽(yáng)性對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組更換含10％活性炭/葡聚糖處理胎牛血清的無(wú)酚紅1640培養(yǎng)基；模型組加入終濃度為15μM的β-淀粉樣蛋白；藥物處理組在加入不同濃度的Linderolide H預(yù)孵3h后加入15μMβ-淀粉樣蛋白；陽(yáng)性對(duì)照組在加入雌激素2nM3h后加入β-淀粉樣蛋白。各處理組細(xì)胞培養(yǎng)72h后用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 Linderolide H對(duì)β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

*P<0.05與模型組比較

由表1可以看出，15μMβ-淀粉樣蛋白處理分化的SH-SY5Y細(xì)胞72h后，細(xì)胞存活率下降為空白對(duì)照的7.24％。化合物L(fēng)inderolide H處理細(xì)胞都能明顯提高細(xì)胞的存活率。

結(jié)論：Linderolide H具有顯著的乙酰膽堿酯酶抑制活性和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用，可以作為阿爾茲海默癥的治療藥物。