本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種含沙格雷酯的藥物組合物用于治療或預(yù)防脂肪肝、肝纖維化和/或肝損傷的用途，具體涉及5-羥色胺2受體拮抗劑沙格雷酯和5-羥色胺合成抑制劑組合的復(fù)方藥物組合物用于治療或預(yù)防脂肪肝、肝纖維化和/或肝損傷的用途。

背景技術(shù)：

脂肪肝，直接表現(xiàn)是肝臟產(chǎn)生明顯的脂質(zhì)沉積，可檢測到肝組織甘油三酯(TG)含量明顯升高，組織切片觀察可見肝細胞出現(xiàn)明顯脂滴。肝臟的進一步病變可發(fā)展為肝纖維化及肝損傷。肝纖維化可通過組織切片經(jīng)特殊染色觀察肝臟纖維組織的形成及檢測肝組織羥脯氨酸含量(一種纖維組織中特有的氨基酸)來確定，而肝損傷可通過檢測血液谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)來確定。多種原因可導(dǎo)致脂肪肝、肝纖維化及肝損傷。生活方式，如長期攝食過多的高熱量、高脂肪食物，長期飲酒等不良飲食習(xí)慣及缺乏體力活動、精神緊張、生活不規(guī)律等，被認為是重要的原因，而某些繼發(fā)性因素，如糖尿病、腎病綜合癥，或遺傳因素被認為可與生活方式相互作用導(dǎo)致脂肪肝、肝纖維化及肝損傷。

5-羥色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)也叫血清素，是一種存在于外周和中樞的小分子物質(zhì)，5-HT的生理功能復(fù)雜，至今未完全弄清。

Ⅰ.5-HT的合成分兩步，第一步：色氨酸在色氨酸羥化酶(tryptophan hydroxylase,TPH)的催化下轉(zhuǎn)變?yōu)?-羥色氨酸(TPH可分為兩個亞型：TPH1和TPH2，TPH1存在于外周，TPH2存在于中樞)；第二步：5-羥色氨酸在芳香族氨基酸脫羧酶(aromatic aminoacid decarboxylase,AADC)的催化下轉(zhuǎn)變?yōu)?-HT。因此，可分別通過抑制TPH或AADC實現(xiàn)對5-HT合成的抑制。

對氯苯丙氨酸(parachlorophenylalanine或p-chlorophenylalanine,pCPA)，別名:DL-4-氯苯丙氨酸、DL-對氯苯丙氨酸等，分子式：C₉H₁₀ClNO₂，是TPH抑制劑，無臨床應(yīng)用報導(dǎo)。

卡比多巴(Cabidoba,CDP)，分子式：C₁₀H₁₄N₂O₄。

芐絲肼(Benserazide,BSA)，別名：三羥基絲氨酰肼、色拉肼、絲氯酰肼、羥芐絲肼，分子式：C₁₀H₁₅N₃O₅。

CDP和BSA都是AADC抑制劑，臨床用于帕金森氏病的輔助治療，它們的共同作用特點是外周脫羧酶抑制劑，不易進入中樞，僅抑制外周左旋多巴轉(zhuǎn)化為多巴胺，使循環(huán)中左旋多巴含量增加，也可抑制5-羥色氨酸轉(zhuǎn)化為5-HT，使合成5-HT的細胞產(chǎn)生5-HT減少。CDP和BSA也沒有用于改善血脂異常的研究報導(dǎo)。

Ⅱ.5-HT受體5-HT受體(5-HT receptor,5-HTR)存在于細胞膜上，屬于膜受體，5-HT受體亞型復(fù)雜，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有7大類受體存在，即5-HT_1-7R，5-HT_1,4,5R主要分布在中樞，5-HT_2,3,6,7R主要分布在外周。這7類受體又被進一步分為若干個亞型。5-HT₂R可被分為5-HT_2AR、5-HT_2BR和5-HT_2CR。外周和中樞均有分布的是5-HT_2A,2BR，5-HT_2CR主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，肝臟、骨骼肌、內(nèi)臟脂肪組織分布有5-HT_2A,2BR。具有選擇性阻斷5-HT₂R的藥物不多，已知沙格雷酯屬于選擇性5-HT₂R拮抗劑。

沙格雷酯(Sarpogrelate,SAR)是一種專一性5-HT₂R阻斷劑，分子式：C₂₄H₃₁NO₆。臨床應(yīng)用中，SAR可抑制由5-HT增強的血小板凝集及抑制血管收縮作用等，臨床用于改善慢性動脈閉塞癥所引起的潰瘍、疼痛以及冷感等缺血性諸癥狀。臨床有SAR治療糖尿病性并發(fā)癥下肢動脈硬化閉塞癥的報導(dǎo)。

目前還未有5-羥色胺2受體拮抗劑沙格雷酯和/或5-羥色胺合成抑制劑用于治療或預(yù)防脂肪肝、肝纖維化、肝損傷的用途的報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了以5-羥色胺2受體拮抗劑沙格雷酯和5-羥色胺合成抑制劑為藥物活性成分，沙格雷酯和5-羥色胺合成抑制劑組合的復(fù)方藥物組合物具有協(xié)同治療或預(yù)防脂肪肝、肝纖維化和/或肝損傷的作用?？捎行в糜谥委熍c脂肪肝、肝纖維化及肝損傷相關(guān)的疾病。

上述沙格雷酯和5-羥色胺合成抑制劑的重量比為15:1～1:15，優(yōu)選9:1～1:7。

所述的沙格雷酯為沙格雷酯或沙格雷酯衍生物，優(yōu)選沙格雷酯衍生物為沙格雷酯藥學(xué)上可接受的鹽。該沙格雷酯藥學(xué)上可接受的鹽優(yōu)選為沙格雷酯鹽酸鹽。所述的5-羥色胺合成抑制劑優(yōu)選為對氯苯丙氨酸、卡比多巴或芐絲肼。

其中，對氯苯丙氨酸為對氯苯丙氨酸或?qū)β缺奖彼嵫苌?，對氯苯丙氨酸衍生物?yōu)選氯苯丙氨酸藥學(xué)上可接受的鹽，卡比多巴為卡比多巴或卡比多巴衍生物，卡比多巴衍生物優(yōu)選為卡比多巴藥學(xué)上可接受的鹽，芐絲肼為芐絲肼或芐絲肼衍生物，芐絲肼衍生物優(yōu)選為芐絲肼藥學(xué)上可接受的鹽。

上述沙格雷酯和對氯苯丙氨酸的重量比更優(yōu)選為7:1～1:5。進一步優(yōu)選2:1。

上述沙格雷酯和卡比多巴的重量比更優(yōu)選為9:1～1:5。進一步優(yōu)選2:1。

上述沙格雷酯和芐絲肼的重量比更優(yōu)選為6:1～1:7。進一步優(yōu)選1:1。

所述的沙格雷酯和5-羥色胺合成抑制劑組合的復(fù)方藥物組合物通過添加藥學(xué)上可接受的輔料制備成適合臨床使用的劑型，優(yōu)選口服制劑或注射劑?？诜苿┛梢詾楣腆w制劑或液體制劑，固體制劑優(yōu)選片劑、膠囊劑、顆粒劑、微丸劑、滴丸劑等。

所述的輔料可以為崩解劑、稀釋劑、黏合劑、潤滑劑、拋射劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、著色劑、填充劑、潤濕劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、助流劑、矯味劑、防腐劑、助懸劑、包衣材料、芳香劑、抗黏合劑、整合劑、滲透促進劑、等滲調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、增塑劑、表面活性劑、發(fā)泡劑、消泡劑、增稠劑、包合劑、保濕劑、吸收劑、絮凝劑與反絮凝劑、助濾劑、阻滯劑、抗氧劑、抑菌劑等。

優(yōu)選崩解劑包括淀粉及其衍生物、纖維素類表面活性劑、泡騰混合物以及瓊脂、海藻酸、皂土等，如羧甲基淀粉鈉，羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、交聯(lián)聚維酮，阻滯劑乙基纖維素、羥丙甲纖維素等；增稠劑包括甲基纖維素鈉等，助溶劑包括有機酸及其鈉鹽(如苯甲酸鈉、水楊酸鈉、對氨基苯甲酸等)、酰胺類化合物(如烏拉坦、尿素、煙酰胺、乙酰胺等)、無機鹽、多聚物、脂類、多元醇、丙二醇、甘油；乳化劑包括天然乳化劑(如阿拉伯膠、磷脂、明膠)，半合成或合成乳化劑(如陰離子型乳化劑、非離子型乳化劑)，輔助乳化劑(如海藻酸鈉、阿拉伯膠、黃原膠、果膠、HPC、MC、CMC-Na等)，固體粉末乳化劑(如氫氧化鎂、氫氧化鋁、二氧化硅、硅皂土、白陶土、氫氧化鈣、氫氧化鋅、硬脂酸鎂等)，助懸劑包括低分子助懸劑(如甘油、糖漿等)，高分子助懸劑(如天然助懸劑阿拉伯膠、淀粉漿，合成助懸劑甲基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、卡波普和硅皂土等)；矯味劑包括芳香劑(如天然香料檸檬、櫻桃、薄荷、茴香揮發(fā)油、麝香等)和人工香料(醇、醛、酮、胺、酯、醚、酸、酚、內(nèi)酯、萜、縮醛等以及香精)，甜味劑(如蔗糖、甜菊甙、阿司帕坦、糖精鈉)，膠漿劑(如羧甲基纖維素鈉、瓊酯、明膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉等)，泡騰劑(如碳酸氫鹽與有機酸：枸櫞酸、酒石酸)；防腐劑包括羥苯酯類、有機酸及其鹽類、季銨化合物類，醋酸氯己定類；著色劑包括天然色素和人工合成色素；抗氧劑包括水溶性抗氧劑(如亞硫酸鹽類、抗壞血酸類、硫代化合物、氨基酸類、胺類、有機酸類、酚類)和油溶性抗氧劑(如沒食子酸丙酯類、生育酚類)；pH值調(diào)節(jié)劑包括酸類(如鹽酸、硫酸、醋酸)，堿類(如氫氧化鈉、碳酸氫鈉、濃氨溶液等)，緩沖溶液(如磷酸鹽緩沖液、硼酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液等)；等滲調(diào)節(jié)劑包括無機等滲調(diào)節(jié)劑(如硼砂、氯化鈉)和有機等滲調(diào)節(jié)劑(如葡萄糖、果糖等)；抑菌劑包括季銨化合物(如苯扎溴銨、苯扎氯銨)、中性化合物類(如苯甲醇、三氯叔丁醇、苯氧乙醇等)、汞化合物類(如硝酸苯汞、硫柳汞)、羥苯酯類(如尼泊金類)、酸及其鹽類(如苯甲酸及其鹽、山梨酸及其鹽)、酚類(如苯酚、甲酚)；稀釋劑包括水溶性稀釋劑(如乳糖、甘露醇)和水不溶性稀釋劑(如微晶纖維素、淀粉)；黏合劑包括天然黏合劑(如淀粉漿、蔗糖、明膠漿、阿拉伯膠漿)和人工黏合劑(如PVP、MCC、MC、CMC-Na等)，潤滑劑包括水溶性和水不溶性潤滑劑，如硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石粉、聚乙二醇、硼酸、苯甲酸鈉；增塑劑包括多元醇類、聚醇類、酯類、醇酯類、聚酯類。

我們在研究中發(fā)現(xiàn)：

Ⅰ.在高脂肪高膽固醇飼料(高脂飼料)喂養(yǎng)建立小鼠脂肪肝的動物模型中，用SAR+pCPA、SAR+CDP、SAR+BSA按兩種藥物不同的重量配比組成不同的復(fù)方對模型進行治療。結(jié)果表明，高脂飼料導(dǎo)致的脂肪肝被明顯逆轉(zhuǎn)，表現(xiàn)為：藥物治療使模型動物肝組織TG含量明顯降低，肝組織切片素木精伊紅染色(HE染色)觀察到肝細胞內(nèi)脂滴明顯減少。并且，SAR+pCPA、SAR+CDP、SAR+BSA三種復(fù)方按藥物一定的重量配比，對治療脂肪肝顯示出明顯的協(xié)同作用，聯(lián)合用藥能明顯提高藥物療效。

Ⅱ.在高脂肪高膽固醇飼料(高脂飼料)喂養(yǎng)結(jié)合鏈脲佐菌素(STZ)刺激建立小鼠肝纖維化及肝損傷的動物模型中，用SAR+pCPA、SAR+CDP、SAR+BSA按兩種藥物不同的重量配比組成不同的復(fù)方對模型進行治療。結(jié)果表明，肝纖維化及肝損傷被明顯逆轉(zhuǎn)，表現(xiàn)為：藥物治療使模型動物肝組織羥脯氨酸含量明顯減少，肝組織切片MASSON染色觀察到肝組織纖維化明顯減輕，血清ASL、ALT活性明顯降低。并且，SAR+pCPA、SAR+CDP、SAR+BSA三種復(fù)方按藥物一定的重量配比，對治療肝纖維化及肝損傷顯示明顯的協(xié)同作用，聯(lián)合用藥能明顯提高藥物療效。

綜上所述，用沙格雷酯與5-羥色胺合成抑制劑如對氯苯丙氨酸或卡比多巴或芐絲肼在一定的重量比范圍內(nèi)組成復(fù)方，對治療脂肪肝、肝纖維化及肝損傷有明顯的協(xié)同作用，用于脂肪肝、肝纖維化和/或肝損傷的治療具有顯著的效果。

下面通過試驗例及實施例對本發(fā)明的復(fù)方藥物組合物做進一步的藥效學(xué)實驗的闡述。

附圖說明

圖1為藥物組合物治療對高脂飼料喂養(yǎng)誘導(dǎo)的脂肪肝模型肝細胞內(nèi)脂滴含量的影響圖。

HR染色，圖片放大倍數(shù)為200倍。

圖2為藥物組合物治療對高脂飼料喂養(yǎng)結(jié)合鏈脲佐菌素刺激致肝纖維化的治療作用觀察圖。MASSON染色，圖片放大倍數(shù)為200倍，示匯管區(qū)周圍肝纖維化。

具體實施方式

以下通過具體試驗例及實施例對本發(fā)明進行進一步闡述：

試驗例1

藥物對高脂飼料喂養(yǎng)致小鼠脂肪肝模型的治療作用

比較SAR(沙格雷酯)與對氯苯丙氨酸(pCPA)、卡比多巴(CDP)或芐絲肼(BSA)聯(lián)合給藥，及各自單獨給藥對高脂飼料喂養(yǎng)致大鼠血脂異常模型的治療作用，從而驗證SAR與pCPA、CDP或BSA聯(lián)合給藥對血脂異常治療的協(xié)同效應(yīng)。

2.1實驗方法

(1)動物處理

180只雄性ICR小鼠除對照組(10只，喂以普通飼料)外，其他動物均喂以高脂飼料(高脂飼料中含脂肪23％，膽固醇2.6％，蛋白質(zhì)17.5％)，連續(xù)喂養(yǎng)12周建立脂肪肝動物模型。然后，高脂飼料喂養(yǎng)動物隨機分為17組(每組10只)：脂肪肝模型組，脂肪肝模型SAR治療組，脂肪肝模型SAR+pCPA復(fù)方治療組(SAR:pCPA按不同重量配比的4種復(fù)方)，脂肪肝模型pCPA治療組，脂肪肝模型SAR+CDP復(fù)方治療組(SAR:CDP按不同重量配比的4種復(fù)方)，脂肪肝模型CDP治療組，脂肪肝模型SAR+BSA復(fù)方治療組(SAR:BSA按不同重量配比的4種復(fù)方)，脂肪肝模型BSA治療組。動物籠養(yǎng)于普通鼠籠，保持室溫24±2℃、光照控制保證12h明、暗條件，普通水喂養(yǎng)。連續(xù)給藥4周，給藥期間，除對照組喂以普通飼料外，各組仍喂以高脂飼料。最后一次給藥后各組動物禁食(不禁水)12小時后，動物經(jīng)麻醉后處死，取肝臟檢測TG含量及肝組織福爾馬林固定后作組織切片HE染色觀察肝細胞內(nèi)脂滴含量。

實驗中，SAR+pCPA復(fù)方按不同重量配比的四種復(fù)方為：

SAR+pCPA-1—SAR:pCPA＝1:5；SAR+pCPA-2—SAR:pCPA＝1:2；

SAR+pCPA-3—SAR:pCPA＝2:1；SAR+pCPA-4—SAR:pCPA＝7:1。

實驗中，SAR+CDP復(fù)方按不同重量配比的四種復(fù)方為：

SAR+CDP-1—SAR:CDP＝1:5；SAR+CDP-2—SAR:CDP＝1:2；

SAR+CDP-3—SAR:CDP＝2:1；SAR+CDP-4—SAR:CDP＝9:1。

實驗中，SAR+BSA復(fù)方按不同重量配比的四種復(fù)方為：

SAR+BSA-1—SAR:BSA＝1:7；SAR+BSA-2—SAR:BSA＝1:3；

SAR+BSA-3—SAR:BSA＝1:1；SAR+BSA-4—SAR:BSA＝6:1。

(2)給藥劑量

對照組—經(jīng)口給藥(p.o.)0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液0.20ml/10g體重/次；

血脂異常模型組—p.o.0.5％CMC-Na 0.20ml/10g體重/次；

血脂異常模型藥物治療組—p.o.各組藥物，所有給藥組給藥劑量均相同為：30.0mg/kg/次。

各藥物用0.5％CMC-Na混懸，濃度相同均為：1.50mg/ml，各組藥物p.o.給藥容積為0.20ml/10g體重/次；每天給藥兩次，上下午各給藥一次。

2.2實驗指標檢測方法

試劑盒、分光光度法檢測肝組織TG含量，肝組織切片后HE染色觀察肝細胞內(nèi)脂滴含量。

2.3實驗結(jié)果

所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)檢測用單因素方差分析LSD檢測，p<0.05表示有明顯統(tǒng)計學(xué)差異，p<0.01表示有非常明顯統(tǒng)計學(xué)差異。表中數(shù)據(jù)用均值±標準差(X±SD)表示,N＝10；$p<0.05,$$p<0.01與對照組比較；*p<0.05,**p<0.01與血脂異常模型組比較；#p<0.05,##p<0.01復(fù)方組與SAR單方組比較；&p<0.05,&&p<0.01復(fù)方組與pCPC或CDP或BSA單方組比較。

(1)SAR+pCPA復(fù)方對高脂飼料喂養(yǎng)致脂肪肝的治療作用研究結(jié)果

結(jié)果見表1及圖1。高脂飼料喂養(yǎng)致脂肪肝模型中，肝組織TG含量大幅升高及肝細胞中出現(xiàn)大量脂滴，提示出現(xiàn)明顯脂肪肝。用相同給藥劑量的SAR，pCPA，SAR+pCPA四種復(fù)方：SAR+pCPA-1、SAR+pCPA-2、SAR+pCPA-3、SAR+pCPA-4對脂肪肝進行治療，均能明顯降低肝組織TG并使肝細胞內(nèi)脂滴明顯減少；復(fù)方SAR+pCPA-3治療顯示其降低肝組織TG含量效果明顯好于SAR或pCPA單獨治療，提示產(chǎn)生明顯的協(xié)同效應(yīng)(注：復(fù)方組與單方組為等劑量給藥，因此只要復(fù)方組療效好于單方組就表明有協(xié)同效應(yīng))；復(fù)方SAR+pCPA-1、SAR+pCPA-2、SAR+pCPA-4治療的降低肝組織TG含量作用好于或等于pCPA及SAT單獨治療。各組HE染色肝細胞內(nèi)脂滴含量觀察結(jié)果與肝組織TG含量測量結(jié)果一致。結(jié)果提示，SAR與pCPA組成一定比例的復(fù)方，對治療脂肪肝有明顯的協(xié)同作用，按重量配比，SAR:pCPA的比例范圍為：7:1～1:5，本實驗中以SAR:pCPA＝2:1復(fù)方(SAR+pCPA-3)療效最好。

表1SAR+pCPA復(fù)方藥物對小鼠高脂飼料喂養(yǎng)致脂肪肝模型肝組織內(nèi)TG含量的影響

注：各給藥組給藥劑量相同，均為30.0mg/kg.次，一天兩次，上下午各一次

$:P<0.05,$$:P<0.01,與對照組比較；*:P<0.05,**:P<0.01,與模型組比較；

#:P<0.05,##:P<0.01,與SAR組比較；&:P<0.05,&&:P<0.01,與pCPA組比較

(2)SAR+CDP復(fù)方對高脂飼料喂養(yǎng)致脂肪肝的治療作用研究結(jié)果

結(jié)果見表2、圖1。用相同給藥劑量的CDP，SAR+CDP四種復(fù)方：SAR+CDP-1、SAR+CDP-2、SAR+CDP-3、SAR+CDP-4對高脂飼料喂養(yǎng)致脂肪肝進行治療，均能明顯降低肝組織TG含量、減少肝細胞內(nèi)脂滴數(shù)量；復(fù)方SAR+CDP-2、SAR+CDP-3治療均顯示降低肝組織TG含量療效明顯好于SAR或CDP單獨治療，提示產(chǎn)生明顯的協(xié)同效應(yīng)(注：復(fù)方組與單方組為等劑量給藥，因此只要復(fù)方組療效好于單方組就表明有協(xié)同效應(yīng))；復(fù)方SAR+CDP-1、SAR+CDP-4治療效果好于或等于CDP、SAR單獨治療。各組HE染色肝細胞內(nèi)脂滴含量觀察結(jié)果與肝組織TG含量測量結(jié)果一致。結(jié)果提示，SAR與CDP組成一定比例的復(fù)方，對治療脂肪肝有明顯的協(xié)同作用，按重量配比，SAR:CDP的比例范圍為：9:1～1:5，本實驗中以SAR:CDP＝2:1復(fù)方(SAR+CDP-3)療效最好。

表2SAR+CDP復(fù)方藥物對小鼠高脂飼料喂養(yǎng)致脂肪肝模型肝組織TG含量的影響

注：各給藥組給藥劑量相同，均為30.0mg/kg.次，一天兩次，上下午各一次

$:P<0.05,$$:P<0.01,與對照組比較；*:P<0.05,**:P<0.01,與模型組比較；

#:P<0.05,##:P<0.01,與SAR組比較；&:P<0.05,&&:P<0.01,與CDP組比較

(3)SAR+BSA復(fù)方對高脂飼料喂養(yǎng)致脂肪肝的治療作用研究結(jié)果

結(jié)果見表3及圖1。用相同給藥劑量的BSA，SAR+BSA四種復(fù)方：SAR+BSA-1、SAR+BSA-2、SAR+BSA-3、SAR+BSA-4對高脂飼料喂養(yǎng)致脂肪肝進行治療，均能明顯降低肝組織TG含量并減少肝細胞內(nèi)脂滴數(shù)量；復(fù)方SAR+BSA-2、SAR+BSA-3治療均顯示降低肝組織內(nèi)TG含量療效明顯好于SAR或BSA單獨治療，產(chǎn)生明顯的協(xié)同效應(yīng)；復(fù)方SAR+BSA-1、SAR+BSA-4治療效果好于或等于BSA、SAR單獨治療。各組HE染色肝細胞內(nèi)脂滴含量觀察結(jié)果與肝組織TG含量測量結(jié)果一致。結(jié)果提示，SAR與BSA組成一定比例的復(fù)方，對治療脂肪肝有明顯的協(xié)同作用，按重量配比，SAR:BSA的比例范圍為：6:1～1:7，本實驗中以SAR:BSA＝1:1復(fù)方(SAR+BSA-3)療效最好。

表3SAR+BSA復(fù)方藥物對小鼠高脂飼料喂養(yǎng)致脂肪肝模型肝組織TG含量的影響

注：各給藥組給藥劑量相同，均為30.0mg/kg.次，一天兩次，上下午各一次

$:P<0.05,$$:P<0.01,與對照組比較；*:P<0.05,**:P<0.01,與模型組比較；

#:P<0.05,##:P<0.01,與SAR組比較；&:P<0.05,&&:P<0.01,與BSA組比較

試驗例2

藥物對高脂飼料喂養(yǎng)結(jié)合鏈脲佐菌素刺激致小鼠高血糖、肝纖維化、肝損傷模型的治療作用

比較SAR與pCPA、CDP、BSA聯(lián)合給藥，及各自單獨給藥對DEX致大鼠血脂異常模型的治療作用(模擬人長期精神緊張或慢性應(yīng)激的情形)，從而再次驗證SAR與pCPA、CDP、BSA聯(lián)合給藥對血脂異常治療的協(xié)同效應(yīng)。

3.1實驗方法

(1)動物處理

實驗用雄性ICR小鼠235只。除對照組(10只，喂以普通飼料)外，其他動物首先用高脂飼料喂養(yǎng)(高脂飼料配方同試驗例1)喂養(yǎng)4周建立高脂血癥及脂肪肝動物模型，然后腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)(80mg/kg)，72h后測定空腹血糖(FBG)，選擇FBG≥11.1mM作為為造模成功標準，隨機分為17組(每組10只)：肝纖維化、肝損傷模型組，模型SAR治療組，模型SAR+pCPA復(fù)方治療組(SAR:pCPA按不同重量配比的4種復(fù)方)，模型pCPA治療組，模型SAR+CDP復(fù)方治療組(SAR:CDP按不同重量配比的4種復(fù)方)，模型CDP治療組，模型SAR+BSA復(fù)方治療組(SAR:BSA按不同重量配比的4種復(fù)方)，模型BSA治療組。動物籠養(yǎng)于普通鼠籠，保持室溫24±2℃、光照控制保證12h明、暗條件，普通水喂養(yǎng)。給藥期間模型組及各治療組繼續(xù)喂以高脂飼料，對照組喂以普通飼料。連續(xù)給藥21天后，動物于實驗前4h最后一次給藥，并禁食12h后處死動物取血、取臟器，檢測指標，肝組織福爾馬林固定后作組織切片MASSON染色觀察肝組織纖維化情況。

實驗中，SAR+pCPA、SAR+CDP、SAR+BSA三種復(fù)方形式按不同重量配比的四種復(fù)方配伍同試驗例1。

(2)給藥劑量

對照組—經(jīng)口給藥(p.o.)0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液5.0ml/kg/次；

模型組—p.o.CMC-Na 5.0ml/kg/次；

模型藥物治療組—p.o.各組藥物，所有給藥組給藥劑量均相同為：30.0mg/kg/次；

各藥物用0.5％CMC-Na混懸，濃度相同均為：1.50mg/ml，各組藥物p.o.給藥容積為0.20ml/10g體重/次；每天給藥兩次，上下午各給藥一次。

3.2實驗結(jié)果

肝組織羥脯氨酸含量用ELISA方法檢測，血清AST、ALT檢測用試劑盒分光光度法，肝組織切片后MASSON染色觀察肝組織纖維化情況。統(tǒng)計學(xué)處理同試驗例1。

(1)SAR+pCPA復(fù)方對肝纖維化、肝損傷的治療作用研究結(jié)果

結(jié)果見表4及圖2。高脂飼料喂養(yǎng)結(jié)合STZ刺激使動物出現(xiàn)明顯的肝纖維化，可檢測到肝組織羥脯氨酸含量大幅升高、MASSON染色可見肝組織內(nèi)纖維組織形成明顯增多(圖中染色成蘭色條紋狀結(jié)構(gòu))，主要分布在匯管區(qū)周圍；另外，血清AST、ALT活力檢測表明，模型組AST、ALT活力明顯升高，提示出現(xiàn)肝損傷。用相同給藥劑量的SAR，pCPA，SAR+pCPA四種復(fù)方：SAR+pCPA-1、SAR+pCPA-2、SAR+pCPA-3、SAR+pCPA-4對模型進行治療，均能明顯降低肝組織羥脯氨酸含量、減少肝組織纖維生成，并降低血清AST、ALT活力，提示均具有明顯的抑制肝纖維化、降低肝損傷療效；復(fù)方SAR+pCPA-2、SAR+pCPA-3治療均顯示其降低肝組織羥脯氨酸含量及血清AST活力好于SAR或pCPA單獨治療，復(fù)方SAR+pCPA-3治療降低血清ALT活力也明顯好于SAR或pCPA單獨治療，提示產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)；復(fù)方SAR+pCPA-1、SAR+pCPA-4治療降低肝組織羥脯氨酸含量及血清AST、ALT活力的療效好于或等于pCPA及SAR單獨治療。各組MASSON染色肝纖維化的觀察結(jié)果與肝組織羥脯氨酸的測量結(jié)果一致。結(jié)果提示，SAR與pCPA組成一定比例的復(fù)方，對治療肝纖維化及肝損傷有明顯的協(xié)同作用，按重量配比，SAR:pCPA的比例范圍為：7:1～1:5，本實驗中以SAR:pCPA＝2:1復(fù)方(SAR+pCPA-3)療效最好。

表4SAR+pCPA復(fù)方藥物對小鼠肝纖維化、肝損傷的影響

注：各給藥組給藥劑量相同，均為30.0mg/kg.次，一天兩次，上下午各一次

$:P<0.05,$$:P<0.01,與對照組比較；*:P<0.05,**:P<0.01,與模型組比較；

#:P<0.05,##:P<0.01,與SAR組比較；&:P<0.05,&&:P<0.01,與pCPA組比較

(2)SAR+CDP復(fù)方對肝纖維化、肝損傷的治療作用研究結(jié)果

結(jié)果見表5、圖2。用相同給藥劑量的CDP，SAR+CDP四種復(fù)方：SAR+CDP-1、SAR+CDP-2、SAR+CDP-3、SAR+CDP-4對肝纖維化、肝損傷模型進行治療，均能明顯降低肝組織羥脯氨酸含量、減少肝組織纖維化，并且降低血清AST、ALT活力；復(fù)方SAR+CDP-2、SAR+CDP-3的療效明顯好于SAR或CDP單獨治療，產(chǎn)生明顯的協(xié)同效應(yīng)；復(fù)方SAR+CDP-1、SAR+CDP-4治療效果好于或等于CDP、SAR單獨治療。各組MASSON染色肝纖維化的觀察結(jié)果與肝組織羥脯氨酸的測量結(jié)果一致。結(jié)果提示，SAR與CDP組成一定比例的復(fù)方，對治療肝纖維化、肝損傷有明顯的協(xié)同作用，按重量配比，SAR:CDP的比例范圍為：9:1～1:5，本實驗中以SAR:CDP＝2:1復(fù)方(SAR+CDP-3)療效最好。

表5SAR+CDP復(fù)方藥物對小鼠肝纖維化、肝損傷的影響

注：各給藥組給藥劑量相同，均為30.0mg/kg.次，一天兩次，上下午各一次

$:P<0.05,$$:P<0.01,與對照組比較；*:P<0.05,**:P<0.01,與模型組比較；

#:P<0.05,##:P<0.01,與SAR組比較；&:P<0.05,&&:P<0.01,與CDP組比較

(6)SAR+BSA復(fù)方對肝纖維化、肝損傷的治療作用研究結(jié)果

結(jié)果見表6和圖2。用相同給藥劑量的BSA，SAR+BSA四種復(fù)方：SAR+BSA-1、SAR+BSA-2、SAR+BSA-3、SAR+BSA-4對肝纖維化、肝損傷模型進行治療，均能明顯降低肝組織羥脯氨酸含量、抑制肝纖維化，并且降低血清AST、ALT活力；復(fù)方SAR+BSA-2、SAR+BSA-3治療效果明顯好于SAR或BSA單獨治療，產(chǎn)生明顯的協(xié)同效應(yīng)；復(fù)方SAR+BSA-1、SAR+BSA-4治療效果好于或等于BSA、SAR單獨治療。各組MASSON染色肝纖維化的觀察結(jié)果與肝組織羥脯氨酸的測量結(jié)果一致。結(jié)果提示，SAR與BSA組成一定比例的復(fù)方，對治療肝纖維化、肝損傷有明顯的協(xié)同作用，按重量配比，SAR:BSA的比例范圍為：6:1～1:7，本實驗中以SAR:BSA＝1:1復(fù)方(SAR+BSA-3)療效最好。

表6SAR+BSA復(fù)方藥物對小鼠肝纖維化、肝損傷的影響

注：各給藥組給藥劑量相同，均為30.0mg/kg.次，一天兩次，上下午各一次

$$:P<0.01,與對照組比較；*:P<0.05,**:P<0.01,與模型組比較；

#:P<0.05,##:P<0.01,與SAR組比較；&:P<0.05,&&:P<0.01,與BSA組比較

實施例1

沙格雷酯1重量份，對氯苯丙氨酸5重量份，與糊精等顆粒劑常用的輔料采用常規(guī)技術(shù)制成顆粒劑。

實施例2

沙格雷酯1重量份，對氯苯丙氨酸2重量份，與微晶纖維素等片劑常用輔料壓制成片劑。

實施例3

沙格雷酯2重量份，對氯苯丙氨酸1重量份，與糊精等顆粒劑常用的輔料采用常規(guī)技術(shù)制成顆粒劑，再灌入硬膠囊皮中制成膠囊劑。

實施例4

鹽酸沙格雷酯7重量份，對氯苯丙氨酸1重量份，與藥學(xué)可接受的輔料采用常規(guī)技術(shù)制成滴丸劑。

實施例5

沙格雷酯1重量份，卡比多巴5重量份，與藥學(xué)可接受的輔料采用常規(guī)技術(shù)制成微丸劑。

實施例6

沙格雷酯1重量份，卡比多巴2重量份，與藥學(xué)可接受的輔料采用常規(guī)技術(shù)制成口服溶液劑。實施例7

沙格雷酯2重量份，卡比多巴1重量份，與藥學(xué)可接受的輔料采用常規(guī)技術(shù)制成注射劑。

實施例8

鹽酸沙格雷酯9重量份，卡比多巴1重量份，與糊精等顆粒劑常用的輔料采用常規(guī)技術(shù)制成顆粒劑。

實施例9

沙格雷酯1重量份，芐絲肼7重量份，與淀粉等片劑常用輔料采用常規(guī)技術(shù)壓制成片劑。

實施例10

沙格雷酯1重量份，芐絲肼3重量份，與藥學(xué)可接受的輔料采用常規(guī)技術(shù)制成微丸劑

實施例11

沙格雷酯1重量份，芐絲肼1重量份，與藥學(xué)可接受的輔料采用常規(guī)技術(shù)制成乳劑。

實施例12

鹽酸沙格雷酯6重量份，芐絲肼1重量份，與藥學(xué)可接受的輔料采用常規(guī)技術(shù)制成軟膠囊。