本發(fā)明涉及中藥應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及蕨麻多糖在制備治療胸腺損傷的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

鎘（Cd）是一種常見(jiàn)的重金屬物質(zhì)，在環(huán)境中廣泛分布，可通過(guò)食物、污染水質(zhì)、煙草煙霧等進(jìn)入人體或動(dòng)物體內(nèi)。鎘具有細(xì)胞毒性和致癌、致突變作用，在體內(nèi)半衰期長(zhǎng)且無(wú)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定機(jī)制和有效消除途徑，可積累在肝臟、腎臟、骨骼、血液等器官和組織中，對(duì)多個(gè)系統(tǒng)和器官產(chǎn)生損傷。鎘對(duì)免疫系統(tǒng)有抑制免疫反應(yīng)、降低免疫功能的作用，具體表現(xiàn)在促進(jìn)免疫器官氧化損傷、影響淋巴細(xì)胞分化和增殖、抑制細(xì)胞因子生成等方面。

蕨麻主要分布在甘肅、青海、西藏等中國(guó)西部地區(qū)，具有豐富的藥材資源，為藏醫(yī)傳統(tǒng)藥物。蕨麻來(lái)源于薔薇科植物鵝絨委陵菜（Potentilla anserina L）的塊根，有悠久的藥食同用的歷史，既具有較好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，也具有較高的藥用價(jià)值，是一味極具開(kāi)發(fā)價(jià)值和良好開(kāi)發(fā)前景的中藥。中醫(yī)本草古籍記載此藥性味甘溫，具有養(yǎng)陰生津、益胃健脾、益補(bǔ)血?dú)獾墓π?，兼可止血、止瀉、止咳，主治婦人崩中、下血、吐血、癰瘡瘧疾、脾虛腹瀉、下痢等證。近年來(lái)蕨麻在中醫(yī)臨床疾病上的應(yīng)用也取得較大進(jìn)展，可用于慢性腎衰、狼瘡性腎炎等疾病的治療。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供了蕨麻多糖在制備治療胸腺損傷的藥物中的應(yīng)用，蕨麻多糖可有效治療急性鎘染毒所致胸腺損傷，保護(hù)組織細(xì)胞，抵抗細(xì)胞氧化損傷和凋亡，促進(jìn)組織細(xì)胞修復(fù)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：蕨麻多糖在制備治療胸腺損傷的藥物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，上述的蕨麻多糖在制備治療胸腺損傷藥物中的應(yīng)用，所述治療胸腺損傷的藥物為治療由急性鎘染毒所致胸腺損傷的藥物。

進(jìn)一步的，上述的蕨麻多糖在制備治療胸腺損傷藥物中的應(yīng)用，所述藥物中，蕨麻多糖的應(yīng)用形式為水溶液，保護(hù)濃度為10mg/kg。

進(jìn)一步的，上述的蕨麻多糖在制備治療胸腺損傷藥物中的應(yīng)用，所述蕨麻多糖是由以下方法制備的：

1）取自然干燥的蕨麻并粉碎，將10g蕨麻樣品裝入燒瓶，加入100ml石油醚，以85.5℃恒溫水浴條件回流提取1h，冷卻后離心5min，回收石油醚后揮干殘?jiān)軇?，得到脫脂蕨麻殘?jiān)?/p>

2）將步驟1）得到的脫脂蕨麻殘?jiān)c蒸餾水加入燒瓶，在500W超聲波、按照脫脂蕨麻殘?jiān)c蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:15的條件提取40min，離心5min，抽濾后收集濾液并旋蒸，得到蕨麻粗多糖溶液；

3）將步驟2）得到的蕨麻粗多糖溶液倒入錐形瓶，以體積比為5:1的三氯甲烷-正丁醇混合溶液脫蛋白，攪拌10min后離心5min，收集上層溶液至無(wú)蛋白沉淀出現(xiàn)，得到脫蛋白后的多糖溶液；

4）將步驟3）得到的脫蛋白后的多糖溶液加入5倍體積的無(wú)水乙醇，將混合溶液靜置24h，抽濾后收集濾渣并真空干燥，即得到蕨麻多糖。

本發(fā)明的有益效果為：蕨麻多糖是蕨麻中的主要藥用成分之一，具有抗氧化、抗衰老、降血糖、調(diào)節(jié)免疫等生物學(xué)活性，其生產(chǎn)工藝成熟、制備簡(jiǎn)單，體內(nèi)外毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)蕨麻多糖無(wú)依賴性和明顯的毒副作用。本發(fā)明經(jīng)過(guò)驗(yàn)證表明：蕨麻多糖可以有效減緩急性鎘染毒所致的胸腺損傷，提高組織抗氧化、抗凋亡能力，減輕急性炎癥反應(yīng)，提高胸腺淋巴細(xì)胞CD4、CD8分子表達(dá)水平，改變Bcl-2、Bax等凋亡蛋白的表達(dá)，對(duì)胸腺組織的急性鎘損傷具有保護(hù)作用。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明小鼠胸腺組織病理切片示意圖（400×）：其中，A. 正常對(duì)照組胸腺組織結(jié)構(gòu)；B. 實(shí)驗(yàn)對(duì)照組胸腺組織結(jié)構(gòu)；C. 蕨麻多糖組胸腺組織結(jié)構(gòu)；D. 蕨麻多糖治療組胸腺組織結(jié)構(gòu)。

圖2為小鼠胸腺組織Fas蛋白免疫組化染色示意圖（400×）：其中，A. 正常對(duì)照組胸腺組織Fas蛋白免疫組化結(jié)果；B. 實(shí)驗(yàn)對(duì)照組胸腺組織Fas蛋白免疫組化結(jié)果；C.蕨麻多糖組胸腺組織Fas蛋白免疫組化染色結(jié)果；D.蕨麻多糖治療組胸腺組織Fas蛋白免疫組化結(jié)果。

圖3為小鼠胸腺淋巴細(xì)胞CD4、CD8分子流式檢測(cè)結(jié)果：其中，A. 正常對(duì)照組胸腺淋巴細(xì)胞CD4、CD8分子流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果；B. 實(shí)驗(yàn)對(duì)照組胸腺淋巴細(xì)胞CD4、CD8分子流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果；C.蕨麻多糖組胸腺淋巴細(xì)胞CD4、CD8分子流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果；D.蕨麻多糖治療組胸腺淋巴細(xì)胞CD4、CD8分子流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果。

圖4為小鼠胸腺組織抗/促凋亡蛋白水平變化示意圖：其中，A. 免疫印跡蛋白表達(dá)結(jié)果；B. Bcl-2/Bax比值水平變化。（注：* 與正常對(duì)照組相比，** P<0.01；# 與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比，## P<0.01）。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

蕨麻多糖的制備方法：

取自然干燥蕨麻并粉碎，將10g蕨麻樣品裝入燒瓶，加入100ml石油醚，以85.5℃恒溫水浴條件回流提取1h，冷卻后離心5min，回收石油醚后揮干殘?jiān)軇?。將脫脂后的蕨麻殘?jiān)驼麴s水加入燒瓶，在500W超聲波、15倍料液比條件下提取40min,離心5min，抽濾后收集濾液并旋蒸，得到粗多糖。將粗多糖溶液倒入錐形瓶，以三氯甲烷-正丁醇（5:1，V/V）混合溶液脫蛋白，攪拌10min后離心5min，收集上層溶液至不出現(xiàn)蛋白沉淀。脫蛋白后的多糖溶液加入5倍量無(wú)水乙醇，將混合溶液靜置24h，抽濾后收集濾渣并真空干燥，得到蕨麻多糖樣品。

實(shí)施例2：

蕨麻多糖的含量測(cè)定：

采用苯酚-硫酸法，以葡萄糖為參照物測(cè)定多糖含量。制備葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液后分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml,定容至10ml容量瓶中，分別吸取1ml入10ml帶塞試管中，并加入1ml 4%苯酚溶液、6ml濃硫酸，震蕩3min后顯色30min,顯色后于490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。稱取蕨麻多糖10mg，溶解于100ml蒸餾水中制備成蕨麻多糖溶液，吸取1ml蕨麻多糖溶液作同樣顯色和測(cè)定。計(jì)算吸光度后可得出回歸方程為y=0.045x+0.638 R=0.9975,根據(jù)回歸方程計(jì)算，蕨麻多糖含量為60.8%。

實(shí)施例3：

蕨麻多糖對(duì)急性鎘染毒所致胸腺損傷的保護(hù)作用：

1.實(shí)驗(yàn)分組及步驟：

雄性BalB/c小鼠40只（20±2g），隨機(jī)分為正常對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、蕨麻多糖組和蕨麻多糖治療組，每組10只。正常對(duì)照組每天均注射生理鹽水。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組給予生理鹽水腹腔注射（實(shí)驗(yàn)第1天開(kāi)始，共4d）；給予氯化鎘水溶液腹腔注射（實(shí)驗(yàn)第5天開(kāi)始，注射劑量為3mg/kg的氯化鎘水溶液，共3d）。蕨麻多糖組每天注射劑量為10mg/kg的蕨麻多糖。蕨麻多糖治療組小鼠給予蕨麻多糖水溶液腹腔注射（腹腔注射劑量為10mg/kg的蕨麻多糖水溶液，共7d）；給予氯化鎘水溶液腹腔注射（實(shí)驗(yàn)第5天開(kāi)始，注射蕨麻多糖1小時(shí)后注射劑量為3mg/kg的氯化鎘水溶液，共3d）。分組具體情況如表1所示。

表1

給藥共7d，處死前一天禁食不禁水。經(jīng)心臟行生理鹽水灌注，取胸腺組織。將胸腺組織固定、包埋，制備4um厚度的組織切片，分別進(jìn)行HE染色、Fas蛋白免疫組化染色并攝片；制備組織勻漿，測(cè)定谷胱甘肽光氧化物酶（GSH-px）、丙二醛（MDA）水平；提取胸腺淋巴細(xì)胞進(jìn)行CD4、CD8分子的流式檢測(cè)；提取組織蛋白并應(yīng)用免疫印跡法測(cè)定抗/促凋亡蛋白（Bcl-2/Bax）水平。

2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

如圖1～4所示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠胸腺臟器指數(shù)下降，胸腺組織MDA水平顯著升高（p＜0.01）、GSH-px水平下降（p＜0.01）；鏡下可見(jiàn)胸腺組織皮髓分界不清，皮質(zhì)變薄，血管管腔狹窄，淋巴細(xì)胞腫脹，胞漿著色淺淡；免疫組織化學(xué)染色見(jiàn)Fas蛋白高表達(dá)；胸腺淋巴細(xì)胞CD4、CD8分子表達(dá)水平降低；免疫印跡法測(cè)定結(jié)果見(jiàn)促凋亡蛋白（Bax）表達(dá)水平升高（p＜0.01）、抗凋亡蛋白（Bcl-2）表達(dá)水平下降（p＜0.01），Bcl-2/Bax比值降低。與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比，蕨麻多糖治療組小鼠胸腺組織MDA水平下降（p＜0.01）、GSH-px水平升高（p＜0.01）；組織切片見(jiàn)胸腺組織皮髓分界清楚，皮質(zhì)淋巴細(xì)胞密集，結(jié)構(gòu)正常；免疫組織化學(xué)染色見(jiàn)Fas蛋白表達(dá)降低；胸腺淋巴細(xì)胞CD4、CD8分子表達(dá)水平升高；免疫印跡法測(cè)定結(jié)果見(jiàn)促凋亡蛋白（Bax）表達(dá)水平下降（p＜0.01）、抗凋亡蛋白（Bcl-2）表達(dá)水平升高（p＜0.01），Bcl-2/Bax比值升高。與正常對(duì)照組相比，蕨麻多糖組未見(jiàn)明顯異常。小鼠胸腺組織臟器指數(shù)及相關(guān)參數(shù)結(jié)果如表2所示。

表2

（注：* 與正常對(duì)照組相比，** P<0.01；# 與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比，#P<0.05，## P<0.01）

上述實(shí)驗(yàn)表明：

蕨麻多糖可以有效減緩鎘染毒所致的胸腺損傷，提高組織抗氧化、抗凋亡能力，減輕急性炎癥反應(yīng)，胸腺淋巴細(xì)胞CD4、CD8分子表達(dá)水平，改變Bcl-2、Bax等凋亡蛋白的表達(dá)，對(duì)胸腺組織的急性鎘損傷具有保護(hù)作用。

最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。