本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及鹽酸地匹福林的新用途，具體涉及鹽酸地匹福林的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：鹽酸地匹福林的化學(xué)名稱為(±)3，4-二羥基-α-〔(甲氨基)甲基〕-苯甲醇-3，4-二新戊酸酯鹽酸鹽。臨床用于治療開角型青光眼、高眼壓癥、色素性青光眼、新生血管性青光眼和手術(shù)時(shí)止血，以及與麻醉劑合用以延長麻醉時(shí)間。也可用于散瞳和患者瞳孔散大的鑒別診斷。對(duì)閉角型青光眼虹膜切除后的殘余性青光眼有效。對(duì)其他類型的繼發(fā)性開角型青光眼和青光眼睫狀體炎綜合癥也有效。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸地匹福林的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽酸地匹福林和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸地匹福林和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療腎陽虛。本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，一種鹽酸地匹福林的藥物組合物，包括鹽酸地匹福林、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將旋覆花粉碎，用65～85％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用6％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8～14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。上述化合物(Ⅰ)在制備治療腎陽虛的藥物中的應(yīng)用。上述鹽酸地匹福林的藥物組合物在制備治療腎陽虛的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的鹽酸地匹福林的藥物組合物中含有鹽酸地匹福林和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸地匹福林、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)小鼠腎陽虛具有治療作用；鹽酸地匹福林和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)小鼠腎陽虛的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療腎陽虛的藥物。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。實(shí)施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證分離方法：(a)將旋覆花(3kg)粉碎，用75％乙醇熱回流提取(20L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水飽和的正丁醇(4L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用6％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1(8個(gè)柱體積)、25:1(8個(gè)柱體積)、15:1(8個(gè)柱體積)和5:1(10個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1(8個(gè)柱體積)、5:1(10個(gè)柱體積)和2:1(5個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8～14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(HPLC歸一化純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z441.2598，結(jié)合核磁特征可得分子式為C27H36O5，不飽和度為10。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，CD3OD，500MHz)：H-1(6.76，br，s)，H-4(5.96，s)，H-5(5.38，s)H-9(2.12，s)，H-10(2.67，d，J＝11.4Hz)，H-11(2.08，m)，H-12a(2.29，m)，H-12b(1.53，m)，，H-13(4.01，tt，J＝11.4，4.5Hz)，H-14a(2.85，m)，H-14b(2.41，dd，J＝13.4，11.3Hz)，H-16(1.02，d，J＝6.7Hz)，H-18a(3.27，dd，J＝17.1，1.9Hz)，H-18b(2.81，m)，H-20(2.64，m)，H-21a(1.67，m)，H-21b(1.34，m)，H-22a(1.26，m)，H-22b(1.20，m)，H-23(1.24，m，2H)，H-24(1.24，m，2H)，H-25(1.25，m，2H)，H-26(0.88，t，J＝7.2Hz)，H-27(1.21，d，J＝7.2Hz)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，CD3OD，125MHz)：143.3(CH，1-C)，156.6(C，3-C)，110.8(CH，4-C)，144.2(C，4a-C)，107.3(CH，5-C)，189.8(C，6-C)，122.4(C，7-C)，153.5(C，8-C)，112.3(C，8a-C)，16.2(CH3，9-C)，62.1(CH，10-C)，30.1(CH，11-C)，42.6(CH2，12-C)，68.5(CH，13-C)，50.8(CH2，14-C)，204.1(C，15-C)，20.3(CH3，16-C)，51.1(CH2，18-C)，206.3(C，19-C)，46.3(CH，20-C)，32.7(CH2，21-C)，27.6(CH2，22-C)，29.0(CH2，23-C)，31.3(CH2，24-C)，22.2(CH2，25-C)，14.2(CH3，26-C)，16.6(CH3，27-C)。紅外波譜中的1710cm-1吸收帶與UV譜中的224nm吸收帶表明該化合物含有α,β-不飽和羰基結(jié)構(gòu)，紅外波譜中的3537cm-1吸收帶表明存在羥基。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有27個(gè)碳信號(hào)，包括四個(gè)甲基，八個(gè)亞甲基，七個(gè)次甲基(一個(gè)連氧碳，三個(gè)烯烴碳)，以及八個(gè)季碳(三個(gè)羰基碳和五個(gè)烯烴碳)，以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為三環(huán)結(jié)構(gòu)。1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示四個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)δH2.12(3H，s)、1.02(3H，d，J＝6.5Hz)、0.88(3H，t，J＝7.2Hz)、1.21(3H，d，J＝7.2Hz)，八組亞甲基質(zhì)子信號(hào)δH2.29(1H，m)與1.53(1H，m)、2.85(1H，m)與2.41(1H，dd，J＝13.4，11.3Hz)、3.27(1H，dd，J＝17.1，1.9Hz)與2.81(1H，m)、1.77(1H，m)與1.34(1H，m)、1.26(1H，m)與1.20(1H，m)、1.24(2H，m)、1.24(2H，m)、1.25(2H，m)，三個(gè)烯烴質(zhì)子信號(hào)δH6.81(1H，s)、6.05(1H，s)、5.38(1H，s)，三個(gè)次甲基質(zhì)子信號(hào)δH2.67(1H，d，J＝11.4Hz)、2.08(1H，m)，2.64(1H，m)，一個(gè)連氧次甲基質(zhì)子信號(hào)δH4.01(1H，tt，J＝11.4，4.5Hz)。1H-1HCOSY譜中顯示的H-10/H-11/H2-12/H-13/H2-14、H3-27/H-20/H2-21/H2-22/H2-23/H2-24/H2-25/H3-26相關(guān)信號(hào)，結(jié)合HMBC譜中顯示的H-1與C-4a、C-8a和C-8，H-4與C-3、C-4a和C-8a，H-5與C-4、C-4a和C-6，H-10與C-3、C-11、C-15和C-16，H2-12與C-11、C-13、C-14和C-16，H2-14與C-12、C-13和C-15，H2-18與C-8和C-19，H-20與C-19相關(guān)信號(hào)，通過上述NMR譜中的相關(guān)信息可以構(gòu)建該化合物的連接方式，并且根據(jù)上述波譜數(shù)據(jù)確認(rèn)該化合為Cohaerin衍生物。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：實(shí)施例2：藥理作用本實(shí)施例使用氫化可的松注射液制備小鼠腎陽虛模型，觀察藥物對(duì)各組小鼠檢測(cè)血清睪丸酮(T)、促黃體生成激素(LH)、促卵泡生成激素(FSH)水平，精子密度、精子活力改變的影響。1、材料與方法1.1動(dòng)物普通級(jí)健康雄性昆明種小鼠50只，日齡50d，體質(zhì)量17～22g，室溫16～20℃，濕度65％～70％，自由飲水進(jìn)食(以上均由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。1.2試劑與樣品鹽酸地匹福林購自中國藥品生物制品檢定所?；衔?Ⅰ)自制，制備方法見實(shí)施例1。氫化可的松注射液(規(guī)格：10mg/2mL；天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司生產(chǎn))。人血清睪酮(T)放射免疫試劑盒(北京北免東雅生物技術(shù)研究所生產(chǎn))。人促黃體生成激素(LH)放射免疫試劑盒(北京北免東雅生物技術(shù)研究所生產(chǎn))。人促卵泡生成激素(FSH)放射免疫試劑盒。1.3小鼠分組及模型制備先從50只小鼠中用隨機(jī)數(shù)字表法抽取10只作為正常組，余下40只作為造模組：均每日臀部肌肉注射氫化可的松注射液25mg/(kg·d)，連續(xù)12d，根據(jù)腎陽虛癥狀的客觀指標(biāo)：怕冷、畏寒喜暖、四肢不溫、小便清長、脈細(xì)、舌淡胖、精神萎縮、消瘦等確定模型成功與否。造模成功后，再采用隨機(jī)數(shù)字表法將造模小鼠分為模型對(duì)照組、鹽酸地匹福林組(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg-1)、鹽酸地匹福林與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg-1鹽酸地匹福林+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。除正常組外，其余各組于第13天開始連續(xù)灌胃28d，2次/d，上午8：30～9：30，下午3：00～4：00各1次。模型組及正常組每次均給予等量生理鹽水。1.4血清T、LH、FSH水平檢測(cè)小鼠灌胃4周，禁食不禁水12h，乙醚麻醉，毛細(xì)玻璃管從眼底靜脈叢采血，分離血清，4℃保存。根據(jù)試劑盒說明書上的方法，對(duì)小鼠血清中T、LH、FSH水平進(jìn)行測(cè)定。1.5精液質(zhì)量情況檢測(cè)小鼠灌胃4周，禁食不禁水12h，顯微鏡下進(jìn)行精子計(jì)數(shù)，精子活率，精子活力測(cè)定。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1對(duì)腎陽虛模型小鼠血清T、LH、FSH水平的影響與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的雄激素睪酮(T)水平明顯下降，與雄性小鼠生殖機(jī)能有關(guān)的促黃體生成激素(LH)、促卵泡生成激素(FSH)水平也明顯下降(P＜0.01)。與模型組相比，鹽酸地匹福林組和化合物(Ⅰ)組T、LH、FSH水平升高(P＜0.05)，鹽酸地匹福林與化合物(Ⅰ)組合物組T、LH、FSH顯著升高(P＜0.01)。結(jié)果見表1。表1腎陽虛小鼠T、LH、FSH變化情況比較(mIU/mL)組別TLHFSH正常對(duì)照組246.86±14.803.07±0.131.78±0.19模型對(duì)照組152.24±35.301.65±0.230.81±0.22鹽酸地匹福林組240.98±9.362.93±0.161.63±0.23化合物(Ⅰ)組246.80±14.583.02±0.151.67±0.24鹽酸地匹福林與化合物(Ⅰ)組合物組270.23±7.513.56±0.941.84±0.782.2對(duì)腎陽虛模型小鼠精液質(zhì)量情況的影響與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的精液質(zhì)量明顯下降(P＜0.01)。與模型組相比，鹽酸地匹福林組和化合物(Ⅰ)組精子密度與精子活力升高(P＜0.05)，鹽酸地匹福林與化合物(Ⅰ)組合物組精子質(zhì)量顯著升高(P＜0.01)。結(jié)果見表2。表2對(duì)腎陽虛小鼠精子質(zhì)量比較組別精子密度(106)精子活力(％)正常對(duì)照組22.37±1.1914.52±1.35模型對(duì)照組16.91±0.7510.61±1.26鹽酸地匹福林組21.35±1.4413.43±1.17化合物(Ⅰ)組21.44±1.4113.61±1.51鹽酸地匹福林與化合物(Ⅰ)組合物組24.79±0.4616.25±0.41本實(shí)驗(yàn)采用氫化可的松進(jìn)行小鼠腎陽虛模型的制作，這是經(jīng)典的腎陽虛造模方法，其特點(diǎn)是模型與腎陽虛的表現(xiàn)吻合，能夠體現(xiàn)腎陽虛的病變機(jī)制，且造模方法固定，成功率高。本實(shí)驗(yàn)造模后，動(dòng)物表現(xiàn)出的癥狀與腎陽虛癥狀較為一致。上述結(jié)果表明，鹽酸地匹福林、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)小鼠腎陽虛具有治療作用；鹽酸地匹福林和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)小鼠腎陽虛的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療腎陽虛的藥物。上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3