本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域。涉及一種注射用葛根素納米結(jié)晶處方及制備工藝。

背景技術(shù)：

中藥注射劑是我國獨(dú)創(chuàng)的新劑型，已廣泛應(yīng)用于危重疾病的急救及感染性、心腦血管和惡性腫瘤等疾病的治療，是制藥產(chǎn)業(yè)開拓未來國際市場獨(dú)具優(yōu)勢的項(xiàng)目之一，存在著巨大的市場需求。在國際市場上，尤其是德國等歐洲國家，植物藥注射劑的技術(shù)生產(chǎn)和臨床使用也得到了廣泛的認(rèn)可。

葛根素是從豆科植物野葛的根中所提取得到的一種異黃酮類化合物。實(shí)驗(yàn)證明有擴(kuò)張心腦血管，降低心肌氧耗，改善心肌收縮功能和促進(jìn)血液微循環(huán)作用，用于治療冠心病、視網(wǎng)膜動(dòng)、靜脈阻塞和突發(fā)性耳聾等微循環(huán)障礙病。治療冠心病患者的急性心肌梗塞和心絞痛癥狀的總有效率在93%~96%之間，與對照組相比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著意義；治療視網(wǎng)膜動(dòng)、靜脈阻塞和突出性耳聾的總有效率在70%~80%之間，亦明顯高于其它治療藥物。

到目前為止，我國獲準(zhǔn)上市的葛根素注射劑包括葛根素氯化鈉注射液、葛根素葡萄糖注射液、葛根素注射液、注射用葛根素四個(gè)品種，涉及203個(gè)批準(zhǔn)文號。隨著成品貯存期的延長，臨床使用量加大，各種問題逐漸顯現(xiàn)，葛根素注射液的不良反應(yīng)問題成了媒體聲討的對象。在國家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測中心病例報(bào)告數(shù)據(jù)庫中，有關(guān)葛根素注射劑的新發(fā)不良反應(yīng)病例報(bào)告共1006例（不良反應(yīng)發(fā)生時(shí)間為2003年1月1日-2005年6月30日）；其中，不良反應(yīng)發(fā)生時(shí)間為2005年1月1日-6月30日的243例（要求修訂說明書通知發(fā)出后）。1006例病例報(bào)告中嚴(yán)重不良反應(yīng)報(bào)告30例，其中11例死亡。嚴(yán)重不良反應(yīng)報(bào)告以急性血管內(nèi)溶血為主，共18例，其中8例死亡（占死亡病例的73%）。該品種想繼續(xù)生存下去，必須采取措施減輕不良反應(yīng)。

納米結(jié)晶技術(shù)是一種低毒、高效、安全、可靠的一種新型藥物傳輸系統(tǒng)，是改善難溶性藥物，如葛根素等化合物的重要途徑，是提高其溶解度和溶出速率的重要方法。通過化學(xué)合成或天然產(chǎn)物分離得到的候選藥物中，40%以上化合物為水難溶性，這為藥學(xué)研究和臨床試驗(yàn)帶來巨大困難，并急劇增大研發(fā)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。統(tǒng)計(jì)資料表明，因藥物的難溶性問題而導(dǎo)致的研發(fā)損失每年高達(dá)200億美元。納米結(jié)晶是納米技術(shù)中改善難溶性化合物功效的一重要技術(shù)，國外采用該技術(shù)而上市的藥物有6個(gè)品種，給藥途徑包括靜脈注射、口服給藥和外用制劑，并數(shù)十個(gè)品種處于臨床試驗(yàn)階段，但國內(nèi)尚沒有采用該技術(shù)而上市產(chǎn)品。關(guān)于納米結(jié)晶技術(shù)我實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)申請數(shù)項(xiàng)專利，擁有開展相關(guān)研發(fā)的專利權(quán)。因此，該技術(shù)在葛根素中的應(yīng)用有利于提高當(dāng)前葛根素注射液的安全性，亦有利于推動(dòng)中藥注射劑的發(fā)展。

注射用葛根素納米結(jié)晶的研究與開發(fā)，是首次將國外先進(jìn)制劑新技術(shù)應(yīng)用于我國中醫(yī)藥領(lǐng)域，這既有利于促進(jìn)納米結(jié)晶技術(shù)在我國的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用，更有有利于提高我國中藥注射劑的安全性。如果我國的中藥注射劑，如葛根素注射液，能夠有效控制藥物不良反應(yīng)，達(dá)到歐盟等國家植物藥注射劑的研制和生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，必能成為具有中國自主知識產(chǎn)權(quán)和中國特色的國際產(chǎn)品。

納米結(jié)晶技術(shù)提高葛根素注射液的安全性具有良好的示范意義和產(chǎn)業(yè)化前景。當(dāng)前，具有國家批準(zhǔn)文號的109種中藥注射劑均因安全性問題未能進(jìn)入國家醫(yī)保目錄，并多次因嚴(yán)重不良反應(yīng)受到國家不良反應(yīng)監(jiān)測中心的通報(bào)。采用納米結(jié)晶技術(shù)開發(fā)具有高度安全性的中藥注射劑-注射用葛根素，不僅是對該品種生存發(fā)展的重大貢獻(xiàn)，對其它中藥注射劑的改進(jìn)與提高具有良好的示范意義。這有利于推動(dòng)我國中藥注射劑的發(fā)展，更有利于樹立可靠、可信的我國中醫(yī)藥的國際形象。

當(dāng)前，應(yīng)用納米結(jié)晶技術(shù)開發(fā)成功的難溶性藥物有6個(gè)品種，處于臨床階段的有23項(xiàng)。但納米結(jié)晶技術(shù)在中藥注射劑尚未有應(yīng)用和報(bào)道，具有廣闊的發(fā)展和應(yīng)用前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對當(dāng)前葛根素注射液的高助溶劑添加量、高臨床不良反應(yīng)發(fā)生率等問題，進(jìn)行高安全性的注射用葛根素的開發(fā)，例如為提高葛根素的溶解度，現(xiàn)上市葛根素注射液含有50%（w/w）的丙二醇，這是嚴(yán)重的潛在致敏原和致敏性成分。采用納米結(jié)晶技術(shù)，增加葛根素的溶解度，提高溶出速率，減少輔料添加量，制備成注射用凍干粉。因此，本發(fā)明將采用高壓均質(zhì)法制備注射用葛根素納米混懸劑，再將納米混懸液冷凍干燥后制成納米結(jié)晶，以供臨床注射用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明的黃豆苷元納米結(jié)晶制劑的原輔料組成如下，均為重量份：

葛根素100份，穩(wěn)定劑1～100份；

優(yōu)先的，原輔料組成比例為：

葛根素100份，穩(wěn)定劑5～50份；

本發(fā)明的葛根素納米結(jié)晶制備過程如下：

首先，采用高壓均質(zhì)法制備葛根素納米混懸劑。具體步驟為：將穩(wěn)定劑和葛根素按照上述比例加入100ml注射用水中，高速剪切機(jī)以24000rpm轉(zhuǎn)速預(yù)分散5min，將得到葛根素粗混懸劑。為了進(jìn)一步減小葛根素混懸劑粒徑，將采用高壓均質(zhì)法進(jìn)行處理，具體操作為：將粗品加入高壓均質(zhì)機(jī)的料斗，分別在300bar、700bar、1000bar和1500bar下均質(zhì)5次，再在1800bar下均質(zhì)20次，得到黃豆苷元納米混懸劑。此外，為將均質(zhì)過程中葛根素及分散溶劑的溫度控制在室溫，采用冷凝水進(jìn)行冷卻。上述穩(wěn)定劑包括離子型及非離子型表面活性劑和高分子助懸劑，本發(fā)明選用泊洛沙姆F68、注射用卵磷脂、羥丙甲纖維素、聚乙烯吡咯烷酮K30。

為進(jìn)一步提高葛根素納米結(jié)晶的穩(wěn)定性，采用真空冷凍干燥法除去葛根素納米結(jié)晶中的水分。具體步驟為：按照一定（w/v）的比例加入不同的冷凍干燥保護(hù)劑，稍微震蕩溶解后，分裝至10ml的西林瓶中，隨后迅速放入超低溫冰箱以-80 ℃進(jìn)行預(yù)凍48 h，再取出迅速放入溫度已降至-50℃的凍干機(jī)擱板上，蓋上真空罩，開啟真空泵，真空度從常壓開始迅速降低，當(dāng)降低至10 mTorr時(shí)真空冷凍干燥開始計(jì)時(shí)并持續(xù)48 h，并最終得白色塊狀、表面光滑圓整、無塌陷無萎縮、無噴瓶的葛根素納米結(jié)晶凍干品。為適應(yīng)工業(yè)化生產(chǎn)和大規(guī)模制劑制備，本發(fā)明選用低毒、無生物活性且價(jià)格低廉的多元醇或高分子材料作為冷凍干燥保護(hù)劑，本發(fā)明凍干保護(hù)劑優(yōu)選甘露醇、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、β-環(huán)糊精和乳糖為候選保護(hù)劑，可單獨(dú)使用或兩種及多種混合使用，保護(hù)劑的濃度選擇范圍為2%~10%（w/v），且優(yōu)選2~5%（w/v）。

所獲得的注射用葛根素納米結(jié)晶經(jīng)物相分析，粒徑分布較窄，納米結(jié)晶表面被穩(wěn)定劑覆蓋，外觀基本一致，葛根素的溶解度和溶出速率有了大幅度提高，且與原料藥相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在進(jìn)行的藥物代謝動(dòng)力學(xué)及安全性評價(jià)試驗(yàn)中，注射用葛根素納米結(jié)晶顯示出可以延長藥物在血液的循環(huán)時(shí)間，增加半衰期并降低藥物的最初血藥濃度，增加給藥期間的血藥濃度的穩(wěn)定性，這有利于減小藥物不良反應(yīng)事件的發(fā)生；經(jīng)長期毒性試驗(yàn)和急性毒性試驗(yàn)證實(shí)，與現(xiàn)上市葛根素注射液相比，注射用葛根素納米結(jié)晶可顯著減小毒副作用，減小藥物刺激性，受試動(dòng)物體征無明顯變化，具有良好的順應(yīng)性和安全性。

附圖說明

圖1：注射用葛根素納米結(jié)晶粒徑分布圖。

圖2：注射用葛根素納米結(jié)晶原子力顯微鏡圖。

圖3：葛根素原料藥及注射用葛根素納米結(jié)晶的掃描電鏡圖。

圖4：注射用葛根素納米結(jié)晶透射電鏡圖。

具體實(shí)施方式

一下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作詳細(xì)的闡述，但不限于這些具體記載的實(shí)施例。

實(shí)施例1：

稱取2 g葛根素，0.1 g泊洛沙姆F68、0.3 g羥丙甲纖維素，懸浮于100 ml注射用水中，高速剪切機(jī)24000rpm預(yù)分散5min。以300bar、1000bar的壓力分別均質(zhì)5次，然后在1800bar壓力下均質(zhì)20次，即得葛根素納米混懸液。

將上述葛根素納米混懸液按照2％（w/v）比例加入凍干保護(hù)劑甘露醇，震蕩溶解后分裝至西林瓶，并迅速放入超低溫冰箱，在-80℃溫度下冷凍48小時(shí)，再取出迅速放入溫度已降至-50℃的凍干機(jī)擱板上，蓋上真空罩，開啟真空泵開關(guān)，凍干48小時(shí)。在凍干結(jié)束時(shí)將凍干機(jī)翻填氮?dú)猓⒆詣?dòng)進(jìn)行壓蓋。凍干結(jié)束后即得注射用葛根素納米結(jié)晶。

實(shí)施例2：

精密稱取2 g黃豆苷元，0.3 g注射用卵磷脂、0.1 g泊洛沙姆F68，懸浮于100 ml雙蒸水中，高速剪切機(jī)24000rpm預(yù)分散5min。以500bar、1500bar的壓力分別均質(zhì)5次，然后在1800bar壓力下均質(zhì)20次，即得葛根素納米混懸液。

取上述混懸液分別按照1％（w/v）比例加入凍干保護(hù)劑葡萄糖和乳糖，震蕩溶解后分裝至西林瓶，并迅速放入超低溫冰箱，在-80℃溫度下冷凍48小時(shí)，再取出迅速放入溫度已降至-50℃的凍干機(jī)擱板上，蓋上真空罩，開啟真空泵開關(guān)，凍干48小時(shí)。在凍干結(jié)束時(shí)將凍干機(jī)翻填氮?dú)猓⒆詣?dòng)進(jìn)行壓蓋。凍干結(jié)束后即得注射用葛根素納米結(jié)晶。

實(shí)施例3：

稱取2 g葛根素，0.1 g 聚乙烯吡咯烷酮K30，0.3 g泊洛沙姆F68懸浮于100 ml注射用水中高速剪切機(jī)24000rpm預(yù)分散5min。以500bar、1500bar的壓力分別均質(zhì)5次，然后在1800bar壓力下均質(zhì)20次，即得葛根素納米混懸液。

取上述混懸液加入凍干保護(hù)劑，比例為1％（w/v）的海藻糖和2%（w/v）的甘露醇，震蕩溶解后分裝至西林瓶，并迅速放入超低溫冰箱，在-80℃溫度下冷凍48小時(shí)，再取出迅速放入溫度已降至-50℃的凍干機(jī)擱板上，蓋上真空罩，開啟真空泵開關(guān)，凍干48小時(shí)。在凍干結(jié)束時(shí)將凍干機(jī)翻填氮?dú)?，并自?dòng)進(jìn)行壓蓋。凍干結(jié)束后即得注射用葛根素納米結(jié)晶。