本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及苯酞類(lèi)化合物在制備抗耐藥菌藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，微生物的耐藥強(qiáng)度越來(lái)越高、耐藥譜越來(lái)越廣，耐藥性形成的速度與抗菌素滅菌能力成比例上升。耐藥性一旦產(chǎn)生，將會(huì)保持下去?？股氐睦^續(xù)使用，只會(huì)為高耐藥菌株繼續(xù)提供選擇壓力，促進(jìn)其復(fù)制、組構(gòu)及共同享用耐藥基因，導(dǎo)致多重耐藥菌株的加快形成。目前，抗生素耐藥性已經(jīng)成為全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。

我國(guó)每年因抗生素濫用導(dǎo)致800億元醫(yī)療費(fèi)用增長(zhǎng)，同時(shí)致使8萬(wàn)病人因其不良反應(yīng)死亡。因?yàn)?，不論疾患輕重、手術(shù)大小，都在使用抗生素、并且傾向于高效價(jià)抗生素和經(jīng)常大量盲目長(zhǎng)時(shí)間聯(lián)合用藥、個(gè)別甚至在短期內(nèi)用到4種以上的抗生素而導(dǎo)致新的耐藥菌株不斷出現(xiàn)。有專(zhuān)家預(yù)言，我國(guó)可能率先進(jìn)入“后抗生素時(shí)代”，即回到抗生素發(fā)現(xiàn)之前的時(shí)代。

我國(guó)擁有極其豐富的中藥和天然藥物資源，藥用植物近萬(wàn)種，為新藥發(fā)現(xiàn)提供了豐富的物質(zhì)基礎(chǔ)和來(lái)源。而且，用中成藥替代抗生素進(jìn)行抗菌、消炎，具有不良反應(yīng)及副作用相對(duì)較小、不產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)。另一方面，世界醫(yī)學(xué)界已有40年的時(shí)間里沒(méi)有真正意義上的新型抗生素誕生。因此，許多科研工作者不由自主地把目光集中在天然藥材“抗生素”上。從傳統(tǒng)中藥資源中找到同樣有抗菌消炎療效的抗生素替代性產(chǎn)品，將能很好地解決抗生素耐藥性這一世界難題。

近年來(lái)，細(xì)菌群體感應(yīng)(quorumsensing,qs)系統(tǒng)已成為研究新型抗耐藥菌藥物的重要靶標(biāo)。qs是細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間信號(hào)傳遞的一種方式，通過(guò)監(jiān)控某些信號(hào)分子(又稱(chēng)自體誘導(dǎo)分子)如高絲氨酸內(nèi)酯(acyl-homoserinelactone,ahl)的濃度，來(lái)控制并協(xié)調(diào)整個(gè)細(xì)菌群體行為，共同對(duì)周?chē)h(huán)境刺激做出反應(yīng)，極大增強(qiáng)了整個(gè)細(xì)菌群體的生存能力。

銅綠假單胞菌(p.aeruginosa)具有很強(qiáng)的在組織表面形成生物膜的能力，并且其qs系統(tǒng)研究得也最為透徹，因此銅綠假單胞菌被選做本項(xiàng)目研究的模式菌。銅綠假單胞菌是一種重要的條件致病菌，常常引起呼吸道感染、肺炎、泌尿道感染等醫(yī)院內(nèi)感染，被認(rèn)為是病人在醫(yī)院期間發(fā)生感染的第三大致病菌，嚴(yán)重危害著人類(lèi)的健康與生命。銅綠假單胞菌高的內(nèi)在抗藥性與其群體感應(yīng)系統(tǒng)密不可分，該qs系統(tǒng)控制著包括生物膜、外毒素、彈性蛋白酶、溶血素、綠膿菌素等幾乎所有致病因子的表達(dá)。這些致病因子決定了銅綠假單胞菌對(duì)宿主的致病能力。其中，生物膜的形成和擴(kuò)散是造成p.aeruginosa多重耐藥的一個(gè)重要機(jī)制。美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(nih)發(fā)布的一份權(quán)威調(diào)查報(bào)告指出，人類(lèi)微生物感染有超過(guò)80％是通過(guò)細(xì)菌生物被膜(biofilm,bf)介導(dǎo)的。bf作為一種細(xì)菌群體行為，其分化與發(fā)育與細(xì)菌群體感應(yīng)密切相關(guān)。細(xì)菌群體感應(yīng)系統(tǒng)完整的細(xì)菌可以形成發(fā)育和分化正常的、典型的能對(duì)抗殺菌劑的生物膜，而細(xì)菌群體感應(yīng)系統(tǒng)殘缺的的細(xì)菌則不能形成典型的生物膜，對(duì)抗生素的抵抗力顯著下降，并且容易被沖洗掉以及對(duì)殺菌劑敏感。因此，通過(guò)猝滅控制細(xì)菌生物膜形成和病原菌毒力因子表達(dá)的qs系統(tǒng)，因不直接抑制細(xì)菌生長(zhǎng)、不會(huì)對(duì)細(xì)菌產(chǎn)生選擇性壓力，將很有希望獲得作用于新靶點(diǎn)、不會(huì)使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的群感抑制劑(qsinhibitors,qsi)。

當(dāng)歸為傘形科藁本植物當(dāng)歸angelicasinensis(oliv)diels的干燥根莖，味甘，性辛、溫，歸肝、心、脾經(jīng)，具補(bǔ)血和血、調(diào)經(jīng)止痛之功效。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，其藥效獨(dú)特，歷來(lái)是醫(yī)家珍品，素有“十方九歸”之稱(chēng)，當(dāng)歸提取物中包含多種化學(xué)成分，如苯酞類(lèi)的東當(dāng)歸酞內(nèi)酯、正丁基苯酞、亞丁基苯酞、蛇床酞內(nèi)酯等，系統(tǒng)查閱當(dāng)歸的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)代藥理和臨床研究也表明當(dāng)歸具有良好的抗菌抗炎作用，但是沒(méi)有發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸提取物中的苯酞類(lèi)化合物抗耐藥菌及其抑制細(xì)菌群體感應(yīng)系統(tǒng)的文獻(xiàn)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的首要目的在于提供苯酞類(lèi)化合物在制備抗耐藥菌藥物中的應(yīng)用，具體的本發(fā)明涉及苯酞類(lèi)化合物在制備抗耐藥銅綠假單胞菌藥物中的應(yīng)用，所述苯酞類(lèi)化合物通過(guò)抑制耐藥銅綠假單胞菌生物膜發(fā)揮抗銅綠假單胞菌和耐藥銅綠假單胞菌的作用。

所述的苯酞類(lèi)化合物具有以下結(jié)構(gòu)：

本發(fā)明的另一目的在于提供一種抗耐藥菌藥物組合物，其包括10％-90％的苯酞類(lèi)化合物及10％-90％的藥學(xué)上可接受的輔料，所述藥物組合物為口服藥物，進(jìn)一步的所述的口服藥物組合物為片劑、膠囊劑、顆粒劑等。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明提供了苯酞類(lèi)化合物的一種新的用途，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明的苯酞類(lèi)化合物均可以抑制銅綠假單胞菌9027、銅綠假單胞菌27853和耐藥銅綠假單胞菌的生物膜，顯示了本發(fā)明苯酞類(lèi)化合物對(duì)于銅綠假單胞菌的抑制效果，更突出的是本發(fā)明的苯酞類(lèi)化合物對(duì)于耐藥銅綠假單胞菌同樣顯示了明顯的抑制作用，從而提供了一種非抗生素類(lèi)的抗耐藥菌藥物，并有助于避免抗生素耐藥問(wèn)題。

具體實(shí)施方式

下面將進(jìn)一步的來(lái)舉例說(shuō)明本發(fā)明。需要指出的是，以下說(shuō)明僅僅是對(duì)本發(fā)明要求保護(hù)的技術(shù)方案的舉例說(shuō)明，并非對(duì)這些技術(shù)方案的任何限制。本發(fā)明的保護(hù)范圍以所附權(quán)利要求書(shū)記載的內(nèi)容為準(zhǔn)。

實(shí)施例1：苯酞類(lèi)化合物的生物膜抑制實(shí)驗(yàn)

測(cè)試化合物：以呋喃酮化合物(z)-4-溴-5-(溴亞甲基)-2(5h)-呋喃酮為陽(yáng)性對(duì)照，以dmso為陰性對(duì)照，將陽(yáng)性藥物及本發(fā)明的式i-式x的苯酞類(lèi)化合物分別配制成32、64、128μg/ml。

實(shí)驗(yàn)方法：往孔板中分別加入100μl所準(zhǔn)備的待測(cè)試化合物，接種100μl菌液。設(shè)置空白對(duì)照組(lb培養(yǎng)基200μl)和陰性對(duì)照組(lb培養(yǎng)基及菌液各100μl)。置于37攝氏度溫箱中孵化。20h后，吸取孔內(nèi)表層菌液，蒸餾水洗滌三次，洗去浮游細(xì)菌。干燥或者烘箱烘干后，加入220ul濃度為1％的結(jié)晶紫，室溫放置30min，然后蒸餾水小心洗滌3次；加入230ul95％乙醇溶解生物膜-結(jié)晶紫復(fù)合物，酶標(biāo)儀630nm波長(zhǎng)處測(cè)定孔板吸光度值，平行測(cè)定三次。

表1苯酞類(lèi)化合物對(duì)于三種銅綠假單胞菌生物膜的抑制作用

三種銅綠假單胞菌生物膜的抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示了本發(fā)明的苯酞類(lèi)化合物對(duì)于三種銅綠假單胞菌的生物膜均具有抑制效果，其中又以式i、式ii、式iii對(duì)于atcc9027具有更加突出的抑制效果，式v、式vi、式iv、式viii、式ix、式i對(duì)于atcc27853具有突出的抑制效果，本發(fā)明的苯酞類(lèi)化合物除式vi外對(duì)于耐藥銅綠假單胞菌的生物膜均具有與陽(yáng)性藥物呋喃酮化合物相當(dāng)或者更好的抑制效果，其中又以式v、式iv、式viii、式ix、式i、式x、式iii的抑制效果更為突出，表明了本發(fā)明苯酞類(lèi)化合物對(duì)于綠假單胞菌和耐藥綠假單胞菌均具有抑制效果。

實(shí)施例2抗銅綠假單胞菌膠囊劑

抗銅綠假單胞菌膠囊劑的制備步驟為：

(1)式i化合物首先與乳糖混合10-15分鐘；

(2)再加入微晶纖維素后混合10-15分鐘；

(3)再加入滑石粉后混合3-5分鐘；

(4)混合物裝入明膠膠囊殼，即得本發(fā)明抗銅綠假單胞菌膠囊。

實(shí)施例3抗耐藥銅綠假單胞菌片劑

抗耐藥銅綠假單胞菌片劑的制備步驟為：

(1)式iii化合物首先與乳糖混合10-15分鐘；

(2)加入10％淀粉漿制軟材，過(guò)14目篩，制粒后干燥，過(guò)12目篩整粒；

(3)然后加入交聯(lián)聚維酮和硬脂酸鎂，混合3-5分鐘；

(4)混合均勻后壓片，即得本發(fā)明抗耐藥銅綠假單胞菌片劑。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原料的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。