優(yōu)先權(quán)要求

本申請要求2014年12月2日提交的美國臨時專利申請序列號62/086,535的優(yōu)先權(quán)，將其全部內(nèi)容通過引用結(jié)合在此。

本披露提供組合物、配制品以及通過向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呓o予包括15-羥基二十碳五烯酸(也稱為15-hepe或15-ohepa)的藥物組合物治療或預(yù)防纖維化(例如肝纖維化)的方法。

背景技術(shù)：

纖維化的特征在于在器官或組織中形成過量的結(jié)締組織。典型地，纖維化是響應(yīng)于器官或組織的損傷而發(fā)生的。因為該過程可以包括結(jié)締組織分子的交聯(lián)，所以用于逆轉(zhuǎn)纖維化的有效療法是少之又少。雖然預(yù)防性療法早已被理論化，但纖維化機制迄今已被證明太復(fù)雜以至于難以克服。例如，至今沒有經(jīng)fda批準(zhǔn)的肝纖維化療法，而在過去二十年中，只有少數(shù)提出的治療方法已經(jīng)示出了希望。參見例如，舒潘(schuppan)和金姆(kim)，臨床研究雜志(j.clin.invest.)，第123(5)卷，第1887-1901頁(2013)。

因此需要用于治療和/或預(yù)防纖維化的改進(jìn)的療法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

在一些實施例中，本披露提供在對其有需要的受試者中治療和/或預(yù)防纖維化的方法，該方法包括向該受試者給予包括15-hepe的組合物。

在一些實施例中，本披露提供在進(jìn)行纖維化療法的受試者中治療纖維化的方法，該方法包括向受試者給予包括15-hepe的組合物。

在一些實施例中，本披露提供用于在對其有需要的受試者中治療和/或預(yù)防纖維化的組合物，其中該組合物包括有效量的15-hepe。

在一些實施例中，本披露提供15-hepe在制造用于在受試者中治療和/或預(yù)防纖維化的藥物中的用途。

本文披露的技術(shù)的其他特征和優(yōu)點將從以下詳細(xì)描述中變得明顯。

附圖說明

圖1示出在出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用載體、替米沙坦(2-(4-{[4-甲基-6-(1-甲基-1h-1,3-苯并咪唑-2-基)-2-丙基-1h-1,3-苯并咪唑-1-基]甲基}苯基)苯甲酸，也稱為)、15-羥基二十碳-8(z),11(z),13(e)-三烯酸(15-hetre)或15-hepe治療8周的小鼠的血清甘油三酸酯的差異。

圖2示出在出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用載體、替米沙坦、15-hetre或15-hepe治療8周的小鼠的極低密度脂蛋白(vldl)水平的差異。

圖3示出在出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用載體、替米沙坦、15-hetre或15-hepe治療8周的小鼠的低密度脂蛋白(ldl)水平的差異。

圖4示出在出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用載體、替米沙坦、15-hetre或15-hepe治療8周的小鼠的總膽固醇水平的差異。

圖5示出在出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用載體、替米沙坦、15-hetre或15-hepe治療8周的小鼠的羥脯氨酸水平的差異。

圖6示出在出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用載體、替米沙坦、15-hetre或15-hepe治療8周的小鼠的血漿丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alt)水平的差異。

圖7a示出在出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用載體治療8周的小鼠中，示出膠原形成的組織學(xué)(天狼星紅染色，200x)。圖7b示出在出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用替米沙坦治療8周的小鼠中，示出膠原形成的組織學(xué)(天狼星紅染色，200x)。圖7c示出在出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用15-hepe治療8周的小鼠中，示出膠原形成的組織學(xué)(天狼星紅染色，200x)。圖7d圖示了在圖7a-7c的組織學(xué)樣品中觀察到的天狼星紅染色的程度。

圖8a示出了從出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用載體治療8周的小鼠中獲得的肝組織的組織學(xué)(蘇木精和伊紅染色，200x)。圖8b示出了從出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用替米沙坦治療8周的小鼠中獲得的肝組織的組織學(xué)(蘇木精和伊紅染色，200x)。圖8c示出了從出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用15-hepe治療8周的小鼠中獲得的肝組織的組織學(xué)(蘇木精和伊紅染色，200x)。圖8d示出在出生之后給予單劑量的鏈脲佐菌素，喂食高脂肪飲食4周，然后用載體、替米沙坦、15-hetre(低或高劑量)或15-hepe(低或高劑量)治療8周的小鼠的nafld活性評分(nas)。

圖9示出了在小鼠模型中4周之后，與載體、替米沙坦和epa相比，15-hepe的作用。

圖10示出了100ug/ml的as15-hepe對tgf-β誘導(dǎo)的α-sma的抑制。

圖11示出了與未治療的動物相比，給予15-hepe(ds102)500mg/kg7天的動物中的肝和肺15-hepe濃度。

具體實施方式

本披露提供包括15-hepe的組合物，以及使用其用于在對其有需要的受試者中治療和/或預(yù)防纖維化的方法。

15-羥基-二十-5,8,11,13,17-五烯酸是具有化學(xué)式(i)中所示的一般結(jié)構(gòu)的功能化的脂肪酸。

根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，可以從二十碳五烯酸(epa)合成15-hepe。如在此使用的，術(shù)語“15-hepe”可以指處于其游離酸形式的15-hepe(例如，15-羥基-二十-5,8,11,13,17-五烯酸；在化學(xué)式(i)中r＝r′＝h)和/或與化學(xué)式(i)一致的其衍生物，如藥學(xué)上可接受的酯(r≠h)、綴合物、或鹽(r是離子)、或任何前述項的混合物?？梢允褂?5-hepe的衍生物(例如，r≠h和/或r′≠h)作為代替。在一些實施例中，將15-hepe以游離酸形式(即r＝h)使用?？商娲?，在本披露的某些實施例中使用15-hepe的藥學(xué)上可接受的酯或鹽。在一些實施例中，15-hepe是處于c1-4烷基酯的形式，如甲基酯(r＝ch3)或乙基酯(r＝ch2ch3)形式。15-hepe是手性分子并且可以按15(s)-或15(r)-對映異構(gòu)體形式、對映異構(gòu)性富集形式或作為外消旋混合物使用。在此使用的“15-hepe”包括所有此類形式，而不限于立體專一性。在另一個實施例中，15-hepe包括15(s)形式：15(s)-羥基-(5z,8z,11z,13e,17z)-二十碳五烯酸，或其衍生物。在一些實施例中，可以將15-hepe以其乙基酯的形式使用。

如在此使用的，“epa”是指二十碳-5,8,11,14,17-五烯酸，也稱為20:5n-3、ω-3脂肪酸。通過商業(yè)來源容易地可獲得epa。

因此，在本披露的一方面,提供在受試者中治療和/或預(yù)防纖維化的方法，該方法包括向該受試者給予治療有效量的包括15-hepe的組合物。

本披露提供15-hepe或包括15-hepe的組合物，用于在治療和/或預(yù)防纖維化中使用。

本披露提供15-hepe或包括15-hepe的組合物在制造用于治療和/或預(yù)防纖維化的藥物中的用途。

在另一方面，本披露提供包括治療有效量的15-hepe的藥物組合物。15-hepe可以是在藥物組合物以及如在此所陳述的方法和用途中唯一的活性成分(例如，api)。15-hepe可以是唯一的活性成分?？商娲?，15-hepe可以與用于治療和/或預(yù)防纖維化的另外的一種或多種藥劑組合用于共制劑或共同給予。如果使用另外的一種或多種活性藥劑，15-hepe可以共配制為單一劑量單位，或15-hepe和另外的纖維化治療劑可以配制為兩個至多個劑量單位，用于協(xié)同、組合或相伴給予。

本披露還提供15-hepe的配制品和包括15-hepe的配制品，以及使用這些配制品用于治療和/或預(yù)防纖維化的方法。

本披露進(jìn)一步提供用于口服遞送的、包括15-hepe的藥物組合物。該組合物可以包括藥學(xué)上可接受的賦形劑。15-hepe可以處于如在此討論的任何形式。15-hepe可以從約50mg至約3000mg存在。

15-羥基二十碳五烯酸(15-hepe)

在一個實施例中，本披露的組合物包括作為活性成分的15-hepe。15-hepe是對于15-羥基二十碳五烯酸(二十碳五烯酸(epa)的代謝產(chǎn)物)的縮寫，可以經(jīng)由本領(lǐng)域已知的方式進(jìn)行合成，如將二十碳五烯酸暴露于酶(15-脂氧合酶)。如在此使用的，術(shù)語“15-hepe”是指以其游離酸形式存在的15-hepe(例如，15-羥基二十碳五烯酸)和/或其藥學(xué)上可接受的酯、綴合物或鹽，或任何前述項的混合物。可以使用15-hepe的衍生物作為代替，盡管這不包括缺少15-hepe的羥基基團的任何衍生的化合物。在本背景下，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”意指所討論的物質(zhì)不會對受試者產(chǎn)生不可接受的毒性或與不會與組合物中的其他組分相互作用。

在一個實施例中，15-hepe是處于酯的形式(在此也稱為e-15-hepe或乙基-15-hepe)。在另一個實施例中，15-hepe包括15-hepe的c1-c5烷基酯。在另一個實施例中，15-hepe包括15-hepe甲基酯、15-hepe丙基酯、或15-hepe丁基酯。在仍另一個實施例中，15-hepe包括光學(xué)活性15(s)-羥基-(5z,8z,11z,13e,17z)-二十碳五烯酸。此同分異構(gòu)體可以按任何上文討論的形式使用。

在另一個實施例中，15-hepe包括15-hepe鋰，15-hepe單、二或三甘油酯，或者15-hepe的任何其他酯或鹽，或者15-hepe的游離酸形式。

在不同實施例中，本披露提供藥物組合物，例如包括15-hepe的口服可遞送的組合物。在一個實施例中，組合物包括治療有效量的15-hepe。在一個實施例中，藥物組合物包括按重量計約0.1％至約99％、約1％至約95％、約5％至約90％的15-hepe。

在一個實施例中，藥物組合物包括按重量計約至少約70％、至少約80％或至少約90％的15-hepe。在一個實施例中，藥物組合物包括按重量計至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％或至少約90％的15-hepe。

在另一個實施例中，15-hepe以約1mg至約10,000mg、25mg至約7500mg、約25mg至約5000mg、約50mg至約5000mg、約50mg至約3000mg、約75mg至約2500mg、或約100mg至約1000mg的量存在于本披露的組合物中，例如約25mg、約50mg、約75mg、約100mg、約125mg、約150mg、約175mg、約200mg、約225mg、約250mg、約275mg、約300mg、約325mg、約350mg、約375mg、約400mg、約425mg、約450mg、約475mg、約500mg、約525mg、約550mg、約575mg、約600mg、約625mg、約650mg、約675mg、約700mg、約725mg、約750mg、約775mg、約800mg、約825mg、約850mg、約875mg、約900mg、約925mg、約950mg、約975mg、約1000mg、約1025mg、約1050mg、約1075mg、約1100mg、約1025mg、約1050mg、約1075mg、約1200mg、約1225mg、約1250mg、約1275mg、約1300mg、約1325mg、約1350mg、約1375mg、約1400mg、約1425mg、約1450mg、約1475mg、約1500mg、約1525mg、約1550mg、約1575mg、約1600mg、約1625mg、約1650mg、約1675mg、約1700mg、約1725mg、約1750mg、約1775mg、約1800mg、約1825mg、約1850mg、約1875mg、約1900mg、約1925mg、約1950mg、約1975mg、約2000mg、約2025mg、約2050mg、約2075mg、約2100mg、約2125mg、約2150mg、約2175mg、約2200mg、約2225mg、約2250mg、約2275mg、約2300mg、約2325mg、約2350mg、約2375mg、約2400mg、約2425mg、約2450mg、約2475mg、約2500mg、約2525mg、約2550mg、約2575mg、約2600mg、約2625mg、約2650mg、約2675mg、約2700mg、約2725mg、約2750mg、約2775mg、約2800mg、約2825mg、約2850mg、約2875mg、約2900mg、約2925mg、約2950mg、約2975mg、約3000mg、約3025mg、約3050mg、約3075mg、約3100mg、約3125mg、約3150mg、約3175mg、約3200mg、約3225mg、約3250mg、約3275mg、約3300mg、約3325mg、約3350mg、約3375mg、約3400mg、約3425mg、約3450mg、約3475mg、約3500mg、約3525mg、約3550mg、約3575mg、約3600mg、約3625mg、約3650mg、約3675mg、約3700mg、約3725mg、約3750mg、約3775mg、約3800mg、約3825mg、約3850mg、約3875mg、約3900mg、約3925mg、約3950mg、約3975mg、約4000mg、約4025mg、約4050mg、約4075mg、約4100mg、約4125mg、約4150mg、約4175mg、約4200mg、約4225mg、約4250mg、約4275mg、約4300mg、約4325mg、約4350mg、約4375mg、約4400mg、約4425mg、約4450mg、約4475mg、約4500mg、約4525mg、約4550mg、約4575mg、約4600mg、約4625mg、約4650mg、約4675mg、約4700mg、約4725mg、約4750mg、約4775mg、約4800mg、約4825mg、約4850mg、約4875mg、約4900mg、約4925mg、約4950mg、約4975mg、約5000mg、約5025mg、約5050mg、約5075mg、約5100mg、約5125mg、約5150mg、約5175mg、約5200mg、約5225mg、約5250mg、約5275mg、約5300mg、約5325mg、約5350mg、約5375mg、約5400mg、約5425mg、約5450mg、約5475mg、約5500mg、約5525mg、約5550mg、約5575mg、約5600mg、約5625mg、約5650mg、約5675mg、約5700mg、約5725mg、約5750mg、約5775mg、約5800mg、約5825mg、約5850mg、約5875mg、約5900mg、約5925mg、約5950mg、約5975mg、約6000mg、約6025mg、約6050mg、約6075mg、約6100mg、約6125mg、約6150mg、約6175mg、約6200mg、約6225mg、約6250mg、約6275mg、約6300mg、約6325mg、約6350mg、約6375mg、約6400mg、約6425mg、約6450mg、約6475mg、約6500mg、約6525mg、約6550mg、約6575mg、約6600mg、約6625mg、約6650mg、約6675mg、約6700mg、約6725mg、約6750mg、約6775mg、約6800mg、約6825mg、約6850mg、約6875mg、約6900mg、約6925mg、約6950mg、約6975mg、約7000mg、約7025mg、約7050mg、約7075mg、約7100mg、約7125mg、約7150mg、約7175mg、約7200mg、約7225mg、約7250mg、約7275mg、約7300mg、約7325mg、約7350mg、約7375mg、約7400mg、約7425mg、約7450mg、約7475mg、約7500mg、約7525mg、約7550mg、約7575mg、約7600mg、約7625mg、約7650mg、約7675mg、約7700mg、約7725mg、約7750mg、約7775mg、約7800mg、約7825mg、約7850mg、約7875mg、約7900mg、約7925mg、約7950mg、約7975mg、約8000mg、約8025mg、約8050mg、約8075mg、約8100mg、約8125mg、約8150mg、約8175mg、約8200mg、約8225mg、約8250mg、約8275mg、約8300mg、約8325mg、約8350mg、約8375mg、約8400mg、約8425mg、約8450mg、約8475mg、約8500mg、約8525mg、約8550mg、約8575mg、約8600mg、約8625mg、約8650mg、約8675mg、約8700mg、約8725mg、約8750mg、約8775mg、約8800mg、約8825mg、約8850mg、約8875mg、約8900mg、約8925mg、約8950mg、約8975mg、約9000mg、約9025mg、約9050mg、約9075mg、約9100mg、約9125mg、約9150mg、約9175mg、約9200mg、約9225mg、約9250mg、約9275mg、約9300mg、約9325mg、約9350mg、約9375mg、約9400mg、約9425mg、約9450mg、約9475mg、約9500mg、約9525mg、約9550mg、約9575mg、約9600mg、約9625mg、約9650mg、約9675mg、約9700mg、約9725mg、約9750mg、約9775mg、約9800mg、約9825mg、約9850mg、約9875mg、約9900mg、約9925mg、約9950mg、約9975mg、或約10,000mg。

在一個實施例中，存在于本披露的組合物中的15-hepe包括按重量計至少90％的15-hepe。15-hepe組合物可以包括甚至更高純度的15-hepe，例如按重量計至少95％15-hepe、或按重量計至少97％15-hepe，其中15-hepe是處于如本文所述的15-hepe的任何形式。15-hepe的純度可以通過在此提供的任何15-hepe的描述進(jìn)一步定義(例如，雜質(zhì)分布)。

上文討論了在藥物組合物中的15-hepe的量及其純度。必需脂肪酸的性質(zhì)及其合成是這樣：使得15-hepe組合物可以來自包括來自必需脂肪酸代謝級聯(lián)中其他必需脂肪酸的部分。

在一個實施例中，本披露的組合物包含按重量計不超過約10％、不超過約9％、不超過約8％、不超過約7％、不超過約6％、不超過約5％、不超過約4％、不超過約3％、不超過約2％、不超過約1％或不超過約0.5％的其他ω-3脂肪酸(包括α亞麻酸、十八碳四烯酸、二十二碳六烯酸(dha))或其衍生物。在其他實施例中，基本上不存在或不存在此類其他ω-3脂肪酸。

在另一個實施例中，15-hepe代表存在于本披露的組合物中的按重量計至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、至少約95％、至少約97％、至少約98％、至少約99％、或100％的所有脂肪酸。

從15-hepe的合成可以存在一些殘余的二十碳五烯酸?？梢源嬖诎粗亓坑嫴怀^約10％、不超過約9％、不超過約8％、不超過約7％、不超過約6％、不超過約5％、不超過約4％、不超過約3％、不超過約2％、不超過約1％、或不超過約0.5％的epa。可替代地，基本上沒有或沒有處于其未被修飾為羥基形式的形式的epa。

另外的活性劑

在一個實施例中，該藥物組合物進(jìn)一步包括至少一種或多種另外的活性劑。在一個實施例中，該藥物組合物包括小于此藥劑普遍認(rèn)可的治療有效量的另外的活性劑的量。在一個實施例中，該藥物組合物包括等于或大于此藥劑劑普遍認(rèn)可的治療有效量的另外的活性劑的量。

在一些實施例中，該另外的活性劑是丙型肝炎病毒(hcv)非抗病毒劑、hcv抗病毒劑、乙型肝炎病毒(hbv)非抗病毒劑、hbv抗病毒劑、原發(fā)性膽汁性肝硬化藥劑、酒精性肝炎藥劑、原發(fā)性硬化性膽管炎藥劑、非酒精性脂肪性肝炎(nash)藥劑、自身免疫性肝炎藥劑、肺纖維化藥劑、囊胞性纖維病藥劑、腎纖維化藥劑、皮膚纖維化藥劑、骨髓纖維化藥劑、嗜酸細(xì)胞性食管炎藥劑、抗-tgf-β藥劑、抗-ctgf藥劑、重組人血清淀粉樣蛋白p藥劑、抗-il-4藥劑、抗-il-5藥劑(例如，美泊利單抗)、抗-il-13藥劑、神經(jīng)化學(xué)受體藥劑、抗-il-17a藥劑、hh或hh(r)smo拮抗劑、ccr5拮抗劑、ccr4細(xì)胞募集抑制劑、cxcr4拮抗劑、抗-cxcr4藥劑、cxcr3拮抗劑、抗-ccl17藥劑、nox抑制劑、醋酸格拉替雷、脂聯(lián)素、ampk激動劑、y-box結(jié)合蛋白-1、成肌纖維細(xì)胞募集抑制劑、抗-th17mmp誘導(dǎo)劑、抗細(xì)胞外基質(zhì)沉積化合物、腺苷受體拮抗劑、微小-rna(mir)藥劑、干細(xì)胞、替諾福韋、抗膠原交聯(lián)劑(例如，simtuzumab、莫加木珠單抗(mogamulizumab))、或選自下組的血管緊張素ii受體阻斷劑(arb)，該組由以下各項組成：纈沙坦、替米沙坦、洛沙坦、厄貝沙坦、阿齊沙坦、依普沙坦、奧美沙坦、或任何前述項的組合。

在一個實施例中，該一種或多種另外的活性劑包括、基本上由、或者由替米沙坦組成。

在一個實施例中，15-hepe和一種或多種活性劑存在于本披露的組合物中，或以約1:1000至約1000:1、約1:500至約500:1、約1:100至約100:1、約1:50至約50:1、約1:25至約25:1、約1:10至約10:1、約1:5至約5:1、約1:4至約4:1、約1:3至約3:1、約1:2至約2:1或約1:1的15-hepe:另外的藥劑的重量比共給予。

劑型

用于根據(jù)本披露使用的組合物可以配制為一個或多個劑量單位。術(shù)語“劑量單位(doseunit和dosageunit)”在本文中是指這樣的藥物組合物的一部分，該部分包含適用于單次給予從而提供治療效果的治療劑的量。這樣的劑量單位可以每天給予一次至多次(即，1至約10，1至8，1至6，1至4或1至2次)，或者引起治療反應(yīng)所需要的許多次。

在一些實施例中，本披露的組合物是處于口服可遞送的劑形或單位的形式。適合的劑形的非限制性實例包括片劑(例如懸浮液片劑、咬懸浮液片劑、快速分散片劑、咀嚼片劑等)、囊片、膠囊(例如軟或硬明膠膠囊或hpmc膠囊)、錠劑、小藥囊、扁囊劑、糖錠劑、丸劑、懸浮液、酏劑、糖漿)或適合口服給予的任何其他固體劑型。術(shù)語“口服遞送”和“口服給予”在本文中包括任何形式的遞送，其中將該藥劑或組合物放置于在治療下的受試者的口中，不管是否被吞咽。因此這包括口頰的和舌下的給予，連同食道給予。

可替代地，本披露的組合物還可以配制用于直腸的、局部的或胃腸道外的(例如皮下的、肌內(nèi)的、靜脈內(nèi)的和真皮內(nèi)的或輸注)遞送。

在討論本披露的組合物中的15-hepe的量時，這可以分成若干種劑型。關(guān)于用于口服給予的規(guī)模是存在限度的。如果一天將1至4克的15-hepe給予受試者，這可以多達(dá)4個膠囊，每個膠囊提供1g15-hepe。

本披露的組合物可以是處于直接吸入的液體劑型或劑量單位的形式，或者它們可以在攝入之前與食物或飲料混合。適合的液體劑型的非限制性實例包括溶液、懸浮液、酏劑、糖漿、液體氣霧劑配制品等。

在另一個實施例中，本披露的組合物包括一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。術(shù)語“藥學(xué)上可接收的賦形劑”在本文中意指以下所述的任何物質(zhì)，自身不是治療劑，所述的物質(zhì)被用作運載體或載體從而用于將治療劑遞送給受試者，或者該物質(zhì)添加至藥物組合物中，從而改進(jìn)該組合物的處理或儲存特性，或者允許或有利于形成單位劑量的組合物，并且其不產(chǎn)生不可接受的毒性或不與組合物中的其他組分相互作用。僅通過舉例的方式，根據(jù)本披露的藥物組合物可以包括以下各項中的一個或多個：抗氧化劑、表面活性劑、防腐劑、調(diào)味劑、共溶劑、粘度助劑、懸浮助劑、和親脂相。

在一個實施例中，該藥物組合物包括一種或多種抗氧化劑，如抗壞血酸、棕櫚酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、α-生育酚、艾地苯醌、泛醌、阿魏酸、輔酶q10、番茄紅素、綠茶、兒茶素、表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯(egcg)、綠茶多酚(gtp)、水飛薊素、咖啡漿果、白藜蘆醇、葡萄籽、石榴提取物、金雀異黃素、碧蘿芷、煙酰胺、丁基化羥基甲苯(bht)、丁基化羥基苯甲醚(bha)等。在一個實施例中，藥物組合物包括約0.01wt.％至約2wt.％的抗氧化劑，例如約0.01wt.％、約0.02wt.％、約0.03wt.％、約0.04wt.％、約0.05wt.％、約0.06wt.％、約0.07wt.％、約0.08wt.％、約0.09wt.％、約0.1wt.％、約0.11wt.％、約0.12wt.％、約0.13wt.％、約0.14wt.％、約0.15wt.％、約0.16wt.％、約0.17wt.％、約0.18wt.％、約0.19wt.％、約0.2wt.％、約0.21wt.％、約0.22wt.％、約0.23wt.％、約0.24wt.％、約0.25wt.％、約0.26wt.％、約0.27wt.％、約0.28wt.％、約0.29wt.％、約0.3wt.％、約0.31wt.％、約0.32wt.％、約0.33wt.％、約0.34wt.％、約0.35wt.％、約0.36wt.％、約0.37wt.％、約0.38wt.％、約0.39wt.％、約0.4wt.％、約0.41wt.％、約0.42wt.％、約0.43wt.％、約0.44wt.％、約0.45wt.％、約0.46wt.％、約0.47wt.％、約0.48wt.％、約0.49wt.％、約0.5wt.％、約0.51wt.％、約0.52wt.％、約0.53wt.％、約0.54wt.％、約0.55wt.％、約0.56wt.％、約0.57wt.％、約0.58wt.％、約0.59wt.％、約0.6wt.％、約0.61wt.％、約0.62wt.％、約0.63wt.％、約0.64wt.％、約0.65wt.％、約0.66wt.％、約0.67wt.％、約0.68wt.％、約0.69wt.％、約0.7wt.％、約0.71wt.％、約0.72wt.％、約0.73wt.％、約0.74wt.％、約0.75wt.％、約0.76wt.％、約0.77wt.％、約0.78wt.％、約0.79wt.％、約0.8wt.％、約0.81wt.％、約0.82wt.％、約0.83wt.％、約0.84wt.％、約0.85wt.％、約0.86wt.％、約0.87wt.％、約0.88wt.％、約0.89wt.％、約0.9wt.％、約0.91wt.％、約0.92wt.％、約0.93wt.％、約0.94wt.％、約0.95wt.％、約0.96wt.％、約0.97wt.％、約0.98wt.％、約0.99wt.％、約1wt.％、約1.1wt.％、約1.2wt.％、約1.3wt.％、約1.4wt.％、約1.5wt.％、約1.6wt.％、約1.7wt.％、約1.8wt.％、約1.9wt.％、或約2wt.％的一種或多種抗氧化劑。

治療方法

在此披露的組合物和配制品可以用于治療纖維化。在一個實施例中，該纖維化與器官或組織相關(guān)，該器官或組織與肺、肝、心臟、腎臟、一個或多個眼睛、縱隔、骨髓、腹膜后腔、皮膚、腸、關(guān)節(jié)、生殖器官或其組合相關(guān)。在一些實施例中，該纖維化與肝組織相關(guān)。在一個實施例中，該纖維化包括特發(fā)性肺纖維化。

在一些實施例中，該纖維化與非酒精性脂肪肝疾病(nafld)相關(guān)。在一些實施例中，在給予組合物之后在受試者中的nafld活性評分(nas)減小。在一些實施例中，與基線相比，在受試者中的nas減小。在一些實施例中，與沒有給予組合物的第二受試者相比，nas減小。在一些實施例中，已經(jīng)向該第二受試者給予安慰劑。在一些實施例中，該第二受試者是進(jìn)行纖維化療法。

在一些實施例中，該受試者是進(jìn)行纖維化療法。在一些實施例中，在給予組合物期間繼續(xù)纖維化療法。在其他實施例中，在給予組合物期間中斷纖維化療法。例如，在一些實施例中，受試者是進(jìn)行替米沙坦療法，并且在開始治療方法(該治療方法包括給予如在此披露的包括15-hepe的組合物)之后，中斷替米沙坦療法。

在一些實施例中，該組合物是口服給予。

在一些實施例中，15-hepe是組合物中的唯一活性成分。在其他實施例中，該組合物進(jìn)一步包括影響纖維化療法的另外的藥劑。

在一些實施例中，本披露提供在進(jìn)行纖維化療法的受試者中治療纖維化的方法，該方法包括向受試者給予包括15-hepe的組合物。在一些實施例中，該纖維化與選自下組的器官或組織相關(guān)，該組由以下各項組成：肺、肝、心臟、腎臟、眼睛、縱隔、骨髓、腹腔后膜、皮膚、腸、關(guān)節(jié)、生殖器官及其組合。在一些實施例中，該纖維化是肝纖維化。在一些實施例中，該纖維化與非酒精性脂肪肝疾病(nafld)相關(guān)。在一些實施例中，在給予組合物之后在受試者中的nafld活性評分(nas)減小。在一些實施例中，與基線相比，在受試者中的nas減小。在一些實施例中，與沒有給予組合物的第二受試者相比，nas減小。在一些實施例中，已經(jīng)向該第二受試者給予安慰劑。在一些實施例中，該第二受試者是進(jìn)行纖維化療法。在一些實施例中，該纖維化療法包括給予hcv非抗病毒劑、hcv抗病毒劑、hbv非抗病毒劑、hbv抗病毒劑、原發(fā)性膽汁性肝硬化藥劑、酒精性肝炎藥劑、原發(fā)性硬化性膽管炎藥劑、nash藥劑、自身免疫性肝炎藥劑、肺纖維化藥劑、囊胞性纖維病藥劑、腎纖維化藥劑、皮膚纖維化藥劑、骨髓纖維化藥劑、嗜酸細(xì)胞性食管炎藥劑、抗-tgf-β藥劑、抗-ctgf藥劑、重組人血清淀粉樣蛋白p藥劑、抗-il-4藥劑、抗-il-5藥劑(例如，美泊利單抗)、抗-il-13藥劑、神經(jīng)化學(xué)受體藥劑、抗-il-17a藥劑、hh或hh(r)smo拮抗劑、ccr5拮抗劑、ccr4細(xì)胞募集抑制劑、cxcr4拮抗劑、抗-cxcr4藥劑、cxcr3拮抗劑、抗-ccl17藥劑、nox抑制劑、醋酸格拉替雷、脂聯(lián)素、ampk激動劑、y-box結(jié)合蛋白-1、成肌纖維細(xì)胞募集抑制劑、抗-th17mmp誘導(dǎo)劑、抗細(xì)胞外基質(zhì)沉積化合物、腺苷受體拮抗劑、微小-rna(mir)藥劑、干細(xì)胞、替諾福韋、抗膠原交聯(lián)劑(例如，simtuzumab、莫加木珠單抗(mogamulizumab))、或選自下組的血管緊張素ii受體阻斷劑(arb)，該組由以下各項組成：纈沙坦、替米沙坦、洛沙坦、厄貝沙坦、阿齊沙坦、依普沙坦、奧美沙坦或任何前述項的組合。在一些實施例中，該受試者是進(jìn)行纖維化療法。在一些實施例中，在給予組合物期間繼續(xù)纖維化療法。在一些實施例中，該第二受試者是進(jìn)行纖維化療法。在一些實施例中，該組合物是口服給予。

在此披露的方法一些實施例中，15-hepe是組合物中的唯一活性成分。在一些實施例中，該組合物進(jìn)一步包括影響纖維化療法的另外的藥劑。

在一些實施例中，該方法進(jìn)一步包括在給予包括15-hepe的組合物之前鑒定受試者為患有纖維化。在一些實施例中，該方法進(jìn)一步包括在給予包括15-hepe的組合物之前鑒定受試者為具有發(fā)展纖維化的增加的風(fēng)險。在一些實施例中，鑒定的步驟包括確定與受試者相關(guān)的nas。在一些實施例中，與受試者相關(guān)的nas是至少3。在一些實施例中，鑒定的步驟包括括篩選與受試者相關(guān)的核酸分子中的遺傳突變。在一些實施例中，鑒定的步驟包括獲得與受試者相關(guān)的血液和/或血清的分析。在一些實施例中，鑒定的步驟包括檢查與受試者相關(guān)的組織。在一些實施例中，檢測的步驟包括分析與受試者相關(guān)的組織學(xué)組織樣品(例如，活組織檢查)。

在一些實施例中，本披露的方法引起在受試者中nas值減小。在一些實施例中，該方法進(jìn)一步包括在給予組合物一段時間之后，確定與受試者相關(guān)的第二更低的nas值。

在一個實施例中，該方法包括向受試者每天一次、每天兩次、每天三次、或每天三次以上給予如在此披露的藥物組合物。

在一個實施例中，本發(fā)明提供15-hepe或包括15-hepe的組合物在對其有需要的受試者中治療或預(yù)防纖維化的用途，并且任選地其中(a)直至(m)中的任何一項或多項是真實的：

(a)該纖維化與選自下組的器官或組織相關(guān)，該組由以下各項組成：肺、肝、心臟、縱隔、骨髓、腹腔后膜、皮膚、腸、關(guān)節(jié)、生殖器官及其組合；

(b)該纖維化是肝纖維化或特發(fā)性肺纖維化；

(c)該纖維化與非酒精性脂肪肝疾病(nafld)相關(guān)；

(d)在給予組合物之后，在受試者中的nafld活性評分(nas)減?。?/p>

(e)與基線相比，在受試者中的nas減?。?/p>

(f)與沒有給予組合物的第二受試者和/或已經(jīng)給予安慰劑的第二受試者相比，nas減??；

(g)該受試者是進(jìn)行纖維化療法；

(h)在給予組合物期間繼續(xù)纖維化療法；

(i)15-hepe或組合物是口服給予；

(j)15-hepe是處于游離酸形式；

(k)15-hepe是處于酯化的形式；

(l)該酯化的形式是烷基酯形式或甘油三酸酯形式；

(m)15-hepe是處于鹽形式；

(n)15-hepe包括15(s)-hepe；和/或

(o)15-hepe包括15(r)-hepe。

除非另外定義，否則在此所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本披露所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解相同的含義。盡管與本文描述那些相似或等價的方法和材料可以用于本披露的實踐中，但下文描述了合適的方法和材料。在此提及的所有出版物、專利申請、專利以及其他參考文獻(xiàn)通過引用以其全文明文規(guī)定地結(jié)合在此。在有矛盾的情況下，將以本說明書(包括定義)為準(zhǔn)。此外，本文描述的材料、方法和實例僅是說明性的并不旨在是限制性的。

盡管本披露能夠以不同形式體現(xiàn)，但是本說明書的以下若干個實施例是為了理解本披露內(nèi)容被認(rèn)為是本披露的示例而舉出的，并不旨在將本披露的技術(shù)限制于所示的具體實施例中。標(biāo)題僅為方便起見而提供，不應(yīng)被解釋為以任何方式限制本文披露的技術(shù)。可以將在任何標(biāo)題下所述的實施例與任何其他標(biāo)題下所述的實施例相組合。

除非另有明確表示，否則在本申請中規(guī)定的不同定量值中使用數(shù)值陳述為近似為陳述范圍內(nèi)的附有前綴詞語“約”的最小值和最大值。以這種方式，可以使用與規(guī)定值的輕微變化來實現(xiàn)與規(guī)定值基本相同的結(jié)果。而且，范圍的披露內(nèi)容旨在作為包括所列舉的最小值和最大值之間的每個值的連續(xù)范圍連同可以由這樣的值所形成的任何范圍。本文還披露了可以通過將所列舉的數(shù)值分為任何其他列舉的數(shù)值而形成的任何和所有比率(和任何這樣的比率的范圍)。因此，技術(shù)人員將理解的是，許多這樣的比率、范圍、和比率的范圍可以明確來源于本文給出的數(shù)值，并且在所有情況下，如比率、范圍和比率的范圍都表示本披露的不同實施例。

如在此使用的，疾病、障礙或病癥的“治療(treating或treatment)”至少部分地包括：(1)預(yù)防疾病、障礙、或病癥，即使疾病、障礙、或病癥的臨床癥狀不在暴露于或易患疾病、障礙、或病癥但尚未經(jīng)歷或顯示疾病、障礙、或病癥的癥狀的哺乳動物中發(fā)展；(2)抑制疾病、障礙、或病癥，即阻止或減小疾病、障礙、或病癥或其臨床癥狀的發(fā)展；或(3)緩解疾病、障礙、或病癥，即引起疾病、障礙、或病癥或其臨床癥狀的消退；與給出疾病或障礙相關(guān)的術(shù)語“預(yù)防”意指：如果沒有發(fā)作，預(yù)防疾病發(fā)展的發(fā)作，預(yù)防疾病或障礙在易患障礙或疾病但尚未診斷患有障礙或疾病的受試者中發(fā)生，和/或如果已經(jīng)存在，預(yù)防疾病/障礙的進(jìn)一步發(fā)展。

如在此使用的“有效量”是指賦予受試者治療效果需要的活性組合物的量。本文所用術(shù)語“治療有效量”指使所治療疾病、障礙或病癥的一種或多種癥狀得到某種程度緩解的藥劑或化合物的充足給予量。在一些實施例中，結(jié)果是征象、癥狀、或疾病原因的減少和/或緩和，或者任何其他需要的生物系統(tǒng)變化。例如，在一些實施例中，治療用途的“有效量”是包括本文披露的化合物的組合物用于臨床提供疾病癥狀的顯著減少而沒有過度不良副作用的所需量。在一些實施例中，任何個案中的適當(dāng)“有效量”是使用例如劑量增加研究等技術(shù)確定的。術(shù)語“治療有效量”包括例如預(yù)防有效量。在其他實施例中，在此披露的化合物(如具有化學(xué)式(a)或化學(xué)式(i)的化合物)的“有效量”是有效實現(xiàn)所希望的藥理學(xué)效果或治療改進(jìn)而沒有過度不良的副作用的量。在其他實施例中，應(yīng)理解的是，對不同的受試者“有效量”或“治療有效量”不同，是由于新陳代謝、年齡、體重、受試者的整體狀態(tài)、被治療的病癥、被治療的病癥的嚴(yán)重程度和處方醫(yī)師的判斷的變化。在本背景下，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”意指所討論的物質(zhì)不會對受試者產(chǎn)生不可接受的毒性或與不會與組合物中的其他組分相互作用。

無需進(jìn)一步描述，認(rèn)為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可使用前述說明和以下說明性實例制造且利用本披露的這些藥劑并實踐所要求保護的方法。提供以下工作實例以便于本披露的實踐，且不應(yīng)理解為以任何方式限制本披露的其余部分。

實例

實例1.

本研究的目的是檢查與載體或相比于替米沙坦相比，15-hepe和15-hetre在nafld的小鼠模型中的作用。

方案

將獲得自美國查爾斯河實驗室(charlesriverlaboratories)的c57/bl6小鼠分為如下的6個研究組：

組1(載體)：在出生之后，向十二個小鼠各自給予單劑量的鏈脲佐菌素，并喂食高脂肪飲食四周。然后將小鼠從5至12周齡以10ml/kg的體積每天一次喂食載體。

組2(替米沙坦)：在出生之后，向十二個小鼠各自給予單劑量的鏈脲佐菌素，并喂食高脂肪飲食四周。然后將小鼠從5至12周齡以5mg/kg的量每天一次喂食替米沙坦。

組3(15-hepe，低劑量)：在出生之后，向十二個小鼠各自給予單劑量的鏈脲佐菌素，并喂食高脂肪飲食四周。然后將小鼠從5至12周齡以50mg/kg的量每天一次喂食15-hepe。

組4(15-hepe，高劑量)：在出生之后，向十二個小鼠各自給予單劑量的鏈脲佐菌素，并喂食高脂肪飲食四周。然后將小鼠從5至12周齡以500mg/kg的量每天一次喂食15-hepe。

組5(15-hetre，低劑量)：在出生之后，向十二個小鼠各自給予單劑量的鏈脲佐菌素，并喂食高脂肪飲食四周。然后將小鼠從5至12周齡以10mg/kg的量每天一次喂食15-hetre。

組6(15-hetre，高劑量)：在出生之后，向十二個小鼠給予單劑量的鏈脲佐菌素，并喂食高脂肪飲食四周。然后將小鼠從5至12周齡以100mg/kg的量每天一次喂食15-hetre。

在12周齡，評估所有小鼠在以下各項的改變：

·血清生化(例如alt水平、ldl水平、vldl水平、hdl水平、甘油三酸酯水平、總膽固醇含量水平)，

·纖維化(例如，組織學(xué)，使用天狼星紅染色)，和

·nafld活性評分(包括例如h&e染色組織學(xué))

結(jié)果

如圖1所示，低劑量15-hetre組的血清甘油三酸酯比載體顯著更低(曼惠特尼(mannwhitney)檢驗)。類似地，與載體相比，低劑量15-hetre組的vldl和ldl水平顯著更低(圖2-3)。與載體相比，低劑量15-hetre組和低劑量15-hetre組的總膽固醇水平顯著更低(圖4)。如圖5所示，與載體相比，任何組中的羥脯氨酸水平?jīng)]有顯著差異。如圖6所示，與載體相比并與高劑量15-hetre組相比，高劑量15-hepe組中的血漿alt水平顯著更低。值得注意的是，與載體相比，替米沙坦組的血清甘油三酯、vldl、ldl、總膽固醇、羥脯氨酸、或血漿alt未示出統(tǒng)計學(xué)上的顯著減少。

組織學(xué)結(jié)果(天狼星紅染色)示出在圖7a-7d中，并揭示當(dāng)替米沙坦與載體相比時，高劑量15-hepe組發(fā)展了統(tǒng)計學(xué)上相當(dāng)?shù)土康睦w維化。

如揭示在圖8a-d中，與安慰劑相比(圖8a)，高劑量15-hepe組(圖8c)中的小鼠示出顯著更低的nas(p<0.01)。與載體相比，替米沙坦組(圖8b)也示出顯著地更低的nas(p<0.001)。

實例2.

通過在出生后兩天單次皮下注射200μg的鏈脲霉素(西格瑪奧德里奇公司(sigmaaldrich))，并且在4周齡后用高脂肪飲食(57kcal％脂肪，clea公司，日本)喂食，在小鼠中誘導(dǎo)非酒精性脂肪性肝炎(nash)。在隨機化之后，從5至9周齡，每只小鼠每天一次口服給予載體、替米沙坦(10mg/kg)、15-hepe(500mg/kg)或epa(500mg/kg)。在第9周結(jié)束時，將小鼠處死并進(jìn)行分析。

如圖9所示，在小鼠模型中，在治療和/或預(yù)防肝纖維化時，15-hepe(500mg/kg)比epa(500mg/kg)或載體(圖9)更有效。

實例3.

來自特發(fā)性肺纖維化(ipf)患者的肺成纖維細(xì)胞在其各自生長培養(yǎng)基中以每孔10000個細(xì)胞鋪板并允許貼壁過夜。在貼壁之后，將細(xì)胞用在其各自測定培養(yǎng)基中用15(s)-hepe預(yù)治療2小時。在2小時之后，然后將細(xì)胞用化合物+/-tgfβ(20ng/ml)處理48小時。在48小時之后，將條件培養(yǎng)基收集并在-80℃下冷凍用于未來的膠原分析。在收集之后，將細(xì)胞針對smai表達(dá)染色。根據(jù)制造商的說明書進(jìn)行膠原elisa。如圖10所示，100ug/ml的15-hepe抑制tgf-β誘導(dǎo)的α-sma的產(chǎn)生。沒有觀察到細(xì)胞毒性。

實例4.

將大鼠(n＝5)用15-hepe(ds102)500mg/kg給藥7天，并切除器官以分析治療的動物比未治療的動物組織中的15-hepe水平。如圖11所示，與未治療的對照相比，治療的動物的肝和肺中的15-hepe顯著更多。