相關(guān)申請(qǐng)的參照

本專利申請(qǐng)基于2014年11月7日申請(qǐng)的日本專利申請(qǐng)2014-227387號(hào)來主張優(yōu)先權(quán)，該在先專利申請(qǐng)的全部公開內(nèi)容通過引用構(gòu)成本說明書的一部分。

本發(fā)明涉及新的酒精代謝促進(jìn)劑。

背景技術(shù)：

眾所周知，乙醛是酒精代謝中不可避免的生成物，但有強(qiáng)毒性，形成過度攝入酒精飲料時(shí)的急性中毒、腸胃不適、惡心、頭痛、醉酒惡心、宿醉等不快癥狀的原因(專利文獻(xiàn)1)。

如果過量攝入酒精，則肝臟中的酒精代謝選擇性亢進(jìn)，作為其結(jié)果，肝臟內(nèi)的代謝體系發(fā)生大的變動(dòng)。攝入的酒精的大部分通過肝細(xì)胞的胞質(zhì)溶膠中存在的酒精脫氫酶系轉(zhuǎn)變?yōu)橐胰胰┻M(jìn)一步進(jìn)行乙醛脫氫酶介導(dǎo)的脫氫反應(yīng)，通常轉(zhuǎn)變?yōu)橐宜帷？墒?，如果酒精攝入量過多，身體狀況變差，酒精的代謝減緩，則乙醛無法被充分處理，血中的乙醛濃度變高，會(huì)產(chǎn)生乙醛的毒性引起的醉酒惡心、宿醉等不快癥狀。因此，如何促進(jìn)酒精代謝而抑制血中乙醛濃度的上升對(duì)預(yù)防醉酒惡心、宿醉等不快癥狀而言是重要的。

近年來，正在研究用于促進(jìn)酒精代謝、將血中乙醛濃度抑制至低水平的口服物質(zhì)的開發(fā)(專利文獻(xiàn)2、專利文獻(xiàn)3)?？墒?，依然需要能夠有效實(shí)現(xiàn)酒精代謝促進(jìn)或血中乙醛濃度上升的抑制的口服劑。

而對(duì)于貝類的加工品，報(bào)告了作為具有健康促進(jìn)功能的功能性食品的利用。已知例如使用貽貝軟體部和貽貝提取物中的任一種來抑制ast和alt值的增加，從而抑制肝損傷(專利文獻(xiàn)4)。

可是，關(guān)于簾蛤目雙殼貝與血中乙醛濃度上升的抑制作用的關(guān)系沒有任何報(bào)告。

現(xiàn)在，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，將含有糖原的簾蛤目雙殼貝的提取物給予對(duì)象后，能夠有效抑制血中乙醛濃度伴隨酒精攝入的上升。本發(fā)明是基于該見解提出的。

因此，本發(fā)明的目的在于，提供能夠抑制血中乙醛濃度上升的新的酒精代謝促進(jìn)劑。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1:日本特許第3793239號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)2:日本特開2013-189437號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)3:日本特開2007-246478號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)4:日本特開2011-37790號(hào)公報(bào)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

根據(jù)本發(fā)明，提供以下發(fā)明。

(1)一種酒精代謝促進(jìn)劑，其含有糖原。

(2)根據(jù)(1)所述的酒精代謝促進(jìn)劑，上述糖原來自簾蛤目雙殼貝的提取物。

(3)根據(jù)(1)或(2)所述的酒精代謝促進(jìn)劑，上述雙殼貝為北極蛤。

(4)一種酒精代謝促進(jìn)劑，其含有簾蛤目雙殼貝的提取物。

(5)根據(jù)(4)所述的酒精代謝促進(jìn)劑，上述雙殼貝為北極蛤。

(6)根據(jù)(1)～(5)中任一項(xiàng)所述的酒精代謝促進(jìn)劑，其為一次經(jīng)口攝入量單位的形態(tài)。

(7)根據(jù)(1)～(6)中任一項(xiàng)所述的酒精代謝促進(jìn)劑，其為血中乙醛濃度上升的抑制劑。

(8)根據(jù)(1)～(7)中任一項(xiàng)所述的酒精代謝促進(jìn)劑，其為醉酒惡心或宿醉的防止劑。

(9)一種血中乙醛濃度的上升的抑制方法，其包括使有需要的對(duì)象攝入有效量的糖原或簾蛤目雙殼貝的提取物。

(10)根據(jù)(9)所述的方法，其為酒精代謝促進(jìn)方法。

(11)根據(jù)(9)或(10)所述的方法，其為醉酒惡心或宿醉的防止方法。

(12)糖原或簾蛤目雙殼貝的提取物在血中乙醛濃度上升的抑制劑的制造中的應(yīng)用。

(13)根據(jù)(12)所述的應(yīng)用，上述抑制劑為酒精代謝促進(jìn)劑。

(14)根據(jù)(12)或(13)所述的應(yīng)用，上述抑制劑為醉酒惡心或宿醉的防止劑。

(15)糖原或簾蛤目雙殼貝的提取物作為血中乙醛濃度上升的抑制劑的應(yīng)用。

根據(jù)本發(fā)明，能夠有效抑制攝入了酒精的對(duì)象的血中乙醛濃度的上升。本發(fā)明的制劑在防止過量攝入酒精飲料時(shí)的急性中毒、腸胃不適、惡心、嘔吐、頭痛、頭重感、身體倦怠、嗜睡、肌肉痛、腹瀉、頭暈、身體發(fā)抖、醉酒惡心或宿醉等不快癥狀方面是有利的。

附圖說明

圖1是顯示簾蛤目雙殼貝的提取物粉末給藥組(反復(fù)給藥)和對(duì)照組(反復(fù)給藥)中，大鼠的血中乙醛濃度變化的圖表。

圖2是顯示簾蛤目雙殼貝的提取物粉末給藥組(單次給藥)和對(duì)照組(單次給藥)中，大鼠的血中乙醛濃度變化的圖表。

圖3是顯示簾蛤目雙殼貝的提取物粉末給藥組(反復(fù)給藥)、葡萄糖給藥組(反復(fù)給藥)和對(duì)照組(反復(fù)給藥)中，大鼠的血漿中乙醛濃度變化的圖表。

具體實(shí)施方式

酒精代謝促進(jìn)劑

本發(fā)明的酒精代謝促進(jìn)劑的一個(gè)特征在于，含有簾蛤目雙殼貝的提取物。簾蛤目雙殼貝的提取物實(shí)現(xiàn)顯著的血中乙醛濃度上升的抑制效果是出人意料的事實(shí)。

簾蛤目雙殼貝的種類只要不妨礙本發(fā)明的效果就沒有特別限定，可列舉史氏鋃邊蛤、硨磲貝、女神鳥尾蛤、脊?fàn)钚ㄐ呜?、蛋糕簾蛤、秀峰文蛤、長刺黃文蛤(prostitutevenus)、枯葉櫻蛤(phyllodafoliacea)、竹蟶、海神蛤、北極蛤(arcticaislandica)等，優(yōu)選為北極蛤。已知北極蛤是也被稱為海文蛤(ocean(quahog)clam)的通常3～5英寸左右大小的雙殼貝，在美國東海岸，可以在水深120～200英尺的海域采集。

本發(fā)明的簾蛤目雙殼貝的提取物可以從天然物制造，也可以使用市售品。作為市售品，可列舉例如由美國的seawatchinternationalltd.制造的swoceanclamjuice(code0431)、esfoceanclamjuice(code04es)等。

本發(fā)明的提取物只要不妨礙本發(fā)明的效果就沒有特別限定，優(yōu)選為利用水性介質(zhì)(乙醇、水、或它們的混合物等)得到的簾蛤目雙殼貝的提取物，更優(yōu)選為水提取物。

此外，本發(fā)明的提取物只要不妨礙本發(fā)明的效果就沒有特別限定，就可以含有例如水分、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、灰分(礦物質(zhì)：鈉等)、碳水化合物(葡萄糖、粘多糖、糖原、核酸(dna、rna等)等)。這些各成分的含有率沒有特別限定，例如以干物質(zhì)換算計(jì)，可以是水分0～10質(zhì)量％、蛋白質(zhì)0～30質(zhì)量％、脂質(zhì)0～5質(zhì)量％、灰分0～5質(zhì)量％、碳水化合物50～90質(zhì)量％。該含有率可以通過實(shí)施例1中記載的干燥和測定方法來確定。

此外，本發(fā)明的提取物優(yōu)選含有糖原。糖原的含量只要不妨礙本發(fā)明的效果就沒有特別限定，例如可以為80質(zhì)量％以上，優(yōu)選為50～90質(zhì)量％。

此外，本發(fā)明的糖原的分子量只要不妨礙本發(fā)明的效果就沒有特別限定，優(yōu)選為1萬以上，更優(yōu)選為10萬以上。此外，本發(fā)明的貝提取物的分子量只要不妨礙本發(fā)明的效果就沒有特別限定，優(yōu)選為1萬以上，更優(yōu)選為10萬以上。上述分子量的糖原或貝提取物均可以按照實(shí)施例1中記載的超濾處理進(jìn)行分級(jí)、濃縮。

本發(fā)明的提取物的制造方法只要不妨礙本發(fā)明的效果就沒有特別限定，例如可以直接使用利用水性介質(zhì)得到的簾蛤目雙殼貝的提取物，也可以通過下述方法取得：根據(jù)期望將簾蛤目雙殼貝壓縮、粉碎或熬煮后，回收將可食部分從身體分離時(shí)產(chǎn)生的提取物并濃縮，用水性介質(zhì)提取。進(jìn)而，本發(fā)明的提取物的制造方法中，也可以根據(jù)期望實(shí)施使用了公知方法的精制處理、濃縮處理、滅菌處理等。作為上述精制處理的例子，可列舉蛋白質(zhì)分解酶處理、脂質(zhì)分解酶處理、過濾處理、活性炭處理、滲析處理(電滲析等)、離心分離處理等。此外，作為濃縮處理的例子，可列舉超濾處理、凍干處理等。上述精制處理在將雙殼貝中的糖原以外的成分分解除去、將提取物濃縮而提高糖原含有濃度方面是優(yōu)選的。涉及的上述各處理只要不妨礙本發(fā)明的效果就可以在提取物的制造方法中的任一階段進(jìn)行。

此外，本發(fā)明的提取物可以是固態(tài)、粉末狀、顆粒狀、液態(tài)或漿料狀中的任一形態(tài)。

此外，在將本發(fā)明的提取物調(diào)制成粉末狀或固態(tài)的情況下，可以通過例如凍干法或噴霧干燥法進(jìn)行固態(tài)化或粉末化。

此外，本發(fā)明的提取物可以直接制成用于酒精代謝促進(jìn)、血中乙醛濃度的上升抑制、或者防止醉酒惡心或宿醉的劑型，也可以同時(shí)混合賦形劑、結(jié)合劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、香料、液體介質(zhì)等藥理學(xué)上或經(jīng)口攝入上能夠允許的成分而制成劑型。

本發(fā)明的劑型沒有特別限制，可列舉例如片劑、顆粒劑、膠囊劑、飲劑等。

此外，本發(fā)明的制劑優(yōu)選為以成為用于血中乙醛濃度上升的抑制的有效量的方式由一次經(jīng)口攝入量單位的形態(tài)構(gòu)成。本發(fā)明的制劑中，關(guān)于該單位，作為一次經(jīng)口攝入量，以干燥質(zhì)量換算計(jì)，可以優(yōu)選含有4mg以上的糖原，更優(yōu)選含有8mg以上。此外，本發(fā)明的制劑含有80質(zhì)量％以上的糖原的情況下，本發(fā)明的制劑通常優(yōu)選為成人每人每天一次性或連續(xù)性攝入5～5000mg，優(yōu)選為10～2000mg。

進(jìn)而，本發(fā)明的制劑優(yōu)選以按一次經(jīng)口攝入量單位包裝的形態(tài)提供。作為每一次經(jīng)口攝入量的單位包裝形態(tài)，可列舉以包、容器等來規(guī)定一定量的形態(tài)，它們的表面可以帶有一次經(jīng)口攝入量的成分顯示；以及酒精代謝的促進(jìn)、血中乙醛濃度上升的抑制、或者醉酒惡心或宿醉的防止等用途顯示。作為涉及的單位包裝形態(tài)的優(yōu)選例，可列舉補(bǔ)充劑、醫(yī)藥制劑等。

根據(jù)本發(fā)明的制劑，能夠有效抑制攝入了酒精的對(duì)象的血中乙醛濃度的上升，能夠有效實(shí)施酒精代謝的促進(jìn)、醉酒惡心或宿醉的防止。因此，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方式，提供糖原或簾蛤目雙殼貝的提取物在酒精代謝促進(jìn)劑的制造中的應(yīng)用。此外，根據(jù)另一方式，提供糖原或簾蛤目雙殼貝的提取物在血中乙醛濃度上升的抑制劑的制造中的應(yīng)用。進(jìn)而，根據(jù)另一方式，提供糖原或簾蛤目雙殼貝的提取物在醉酒惡心或宿醉的防止劑的制造中的應(yīng)用。

關(guān)于本發(fā)明的制劑的給藥計(jì)劃，只要不妨礙本發(fā)明的效果，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)對(duì)象的年齡、性別、癥狀適當(dāng)設(shè)定。本發(fā)明的制劑可以連續(xù)對(duì)對(duì)象給藥，也可以單次給藥。根據(jù)優(yōu)選的方式，優(yōu)選將本發(fā)明的制劑的一次經(jīng)口攝入單位量在酒精的攝入前、攝入中或攝入后的任一情況下對(duì)對(duì)象給藥至少一次。

此外，根據(jù)本發(fā)明的另一方式，提供包括將用于抑制血中乙醛濃度上升的有效量的本發(fā)明的制劑對(duì)有需要的對(duì)象攝入的醉酒惡心或宿醉的防止方法。此外，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方式，醉酒惡心或宿醉的防止方法排除針對(duì)人的醫(yī)療行為。此外，本發(fā)明的醉酒惡心或宿醉的防止方法優(yōu)選為酒精代謝促進(jìn)方法，更優(yōu)選為血中乙醛濃度上升的抑制方法。這里，“用于抑制血中乙醛濃度上升的有效量”可以由上述一次經(jīng)口攝入量單位的形態(tài)構(gòu)成。此外，“防止”不僅包括治療已經(jīng)確立的病情、癥狀，還包括預(yù)防將來有可能確立的病情、癥狀。

此外，對(duì)象是哺乳動(dòng)物、例如嚙齒類、犬、貓、牛、靈長類等，優(yōu)選為人，更優(yōu)選為酒精攝入前、攝入中或攝入后的人。此外，對(duì)象可以是健康人也可以是病人，優(yōu)選為酒精攝入前、攝入中或攝入后的健康人。作為健康人，可列舉例如基于日本精密體檢協(xié)會(huì)的判斷分類(2014年4月1日修訂)，血液檢查的肝功能項(xiàng)目的結(jié)果分類為“a”或“b”(“無異常”或“輕度異?！?的人。根據(jù)日本精密體檢協(xié)會(huì)的上述判斷分類，該健康人的血中肝功能參數(shù)滿足ast(got)值為35u/l以下、alt(gpt)為40u/l以下、γ-gtp值為80u/l以下的范圍。

實(shí)施例

以下，通過實(shí)施例更具體地對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說明，但本發(fā)明的技術(shù)范圍不限定于這些例示。其中，除非特殊指明，否則，本發(fā)明中使用的全部百分比和比率根據(jù)的是質(zhì)量。此外，除非特殊指明，否則，本說明書中記載的單位和測定方法根據(jù)的是日本工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(jis標(biāo)準(zhǔn))。

實(shí)施例1：簾蛤目雙殼貝的提取物的制造

在簾蛤目雙殼貝的濃縮液(oceanclamconcentrate/seawatchinternational,ltd.，簾蛤目雙殼貝的采集地：美國馬薩諸塞至弗吉尼亞距海岸3～200英里的海域)2200g中加入4倍量的精制水8800g，得到稀釋溶液。接下來，添加相當(dāng)于簾蛤目雙殼貝的濃縮液0.08％的蛋白酶(天野酶制品株式會(huì)社制蛋白酶p“amano”3sd1.76g)和肽酶(天野酶制品株式會(huì)社制肽酶r1.76g)，在35℃攪拌5小時(shí)，進(jìn)行酶分解處理。接下來，將得到的酶處理溶液在75℃加熱2小時(shí)進(jìn)行酶失活和滅菌處理，放置冷卻。將得到的溶液10925g離心分離(4200rpm/10min，日立工機(jī)株式會(huì)社制himaccr7)，將分離得到的上清液10566g過濾(默克公司制polysepii10”，1.2μm)，得到濾液10344g。進(jìn)而，將得到的濾液超濾處理(sartoriussutedimujapanltd.制sartoconslicecassettehydrosart100k)，濃縮至1794g。其中，在濃縮工序中，為了脫鹽和精制，重復(fù)兩次在濾液中加水并濃縮的操作。濃縮液使用噴霧干燥器(大川原化工機(jī)株式會(huì)社制l-8i型/atomizer25000rpm170℃-85℃)進(jìn)行噴霧干燥，得到簾蛤目雙殼貝的提取物粉末193g。進(jìn)行簾蛤目雙殼貝的提取物粉末的成分分析，結(jié)果如下。

成分分析

水分7.3g/100g(105℃/3hr干燥)

蛋白質(zhì)1.6g/100g(凱氏定氮法)

脂質(zhì)0.2g/100g(索氏提取法)

灰分0.6g/100g(直接灰化法)

碳水化合物93.3g/100g(計(jì)算式：100-(水分+蛋白質(zhì)+脂質(zhì)+灰分)

鈉163mg/100g(原子吸收分光光度法)

糖原79.6g/100g(索姆吉(somogyi)法)

葡萄糖90.1g/100g(高效液相色譜法)

粘多糖0.4g/100g(咔唑硫酸法)

dna0.12g/100g(高效液相色譜法)

rna0.04g/100g(高效液相色譜法)

重金屬(以pb的形式)未檢出(硫化鈉比色法/定量下限1ppm)

菌落總數(shù)(活菌數(shù))5.4×10³/g(標(biāo)準(zhǔn)瓊脂平板培養(yǎng)法)

大腸菌群陰性/2.22g(bglb法)

實(shí)施例2：簾蛤目雙殼貝的提取物粉末的反復(fù)口服給藥帶來的血中乙醛濃度上升的抑制作用的研究

將sd大鼠(7周齡、雄、japancharlesriverco.,ltd.制)預(yù)先飼養(yǎng)8天后，分為簾蛤目雙殼貝的提取物粉末給藥組和對(duì)照組這兩組(n＝6)進(jìn)行正式飼養(yǎng)(7天)。在提取物粉末給藥組中，將在注射用水(扶桑藥品工業(yè)株式會(huì)社)中將上述提取物粉末以50mg/ml的濃度溶解而得的溶液按10ml/kg的量1天1次口服給藥(給藥量500mg/kg)。在對(duì)照組中，將注射用水按10ml/kg的量1天1次給藥。7天口服給藥結(jié)束1小時(shí)后，按乙醇給藥量為1g/kg的方式將25％乙醇/生理鹽水在尾靜脈內(nèi)給藥。乙醇給藥后，在0.5、1.0、1.5、2.0、3.0小時(shí)，使用預(yù)先充入了肝素鈉(novoheparin注10000單位，持田制藥株式會(huì)社)的一次性注射器和針，在無麻醉下在各時(shí)刻從頸靜脈采集約0.5ml血液。將得到的血液與等量冰冷的1mol/l高氯酸混合，4℃、12,000g×3分鐘離心，得到上清液。得到的上清液分成小份分別注入血中乙醇濃度測定用樣品、以及血中乙醛濃度測定用樣品，在-80℃保存直至測定時(shí)。血中乙醇濃度測定使用fkitethanol(株式會(huì)社j.k.international)進(jìn)行，血中乙醛濃度測定使用fkitacetaldehyde(株式會(huì)社j.k.international)進(jìn)行。測定結(jié)果的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)是，通過f檢驗(yàn)進(jìn)行各組的等分散性檢驗(yàn)，通過student-t檢驗(yàn)進(jìn)行等分散情況下的組間比較，通過aspin-welch近似檢驗(yàn)進(jìn)行不等分散情況下的組間比較。

如圖1所示，與對(duì)照組相比，在簾蛤目雙殼貝的提取物粉末給藥組中，血中乙醛濃度(平均±標(biāo)準(zhǔn)誤差)的上升受到顯著抑制(student-t檢驗(yàn)，*:p<0.05，**:p<0.01vs對(duì)照組)。

實(shí)施例3：簾蛤目雙殼貝的提取物粉末的單次口服給藥帶來的血中乙醛濃度上升的抑制作用的研究

將sd大鼠(7周齡、雄、japancharlesriverco.,ltd.)預(yù)先飼養(yǎng)8天后，分為簾蛤目雙殼貝的提取物粉末給藥組和對(duì)照組這兩組(n＝6)進(jìn)行正式飼養(yǎng)(1天)。在提取物粉末給藥組中，將在注射用水(扶桑藥品工業(yè)株式會(huì)社)中將上述提取物粉末以50mg/ml的濃度溶解而得的溶液按10ml/kg的量1天1次口服給藥(給藥量500mg/kg)。在對(duì)照組中，將注射用水按10ml/kg的量1天1次給藥?？诜o藥結(jié)束1小時(shí)后，以乙醇給藥量為1g/kg的方式將25％乙醇/生理鹽水在尾靜脈內(nèi)給藥。乙醇給藥后，在0.5、1.0、1.5、2.0、3.0小時(shí)，使用預(yù)先充入了肝素鈉(novoheparin注10000單位，持田制藥株式會(huì)社)的一次性注射器和針，在無麻醉下在各時(shí)刻從頸靜脈采集約0.5ml血液。將得到的血液與等量冰冷的1mol/l高氯酸混合，4℃、12,000g×3分鐘離心，得到上清液。得到的上清液分成小份分別注入血中乙醇濃度測定用樣品、以及血中乙醛濃度測定用樣品，在-80℃保存直至測定時(shí)。血中乙醇濃度測定使用fkitethanol(株式會(huì)社j.k.international)進(jìn)行，血中乙醛濃度測定使用fkitacetaldehyde(株式會(huì)社j.k.international)進(jìn)行。測定結(jié)果的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)是，通過f檢驗(yàn)進(jìn)行各組的等分散性檢驗(yàn)，通過student-t檢驗(yàn)進(jìn)行等分散情況下的組間比較，通過aspin-welch近似檢驗(yàn)進(jìn)行不等分散情況下的組間比較。

如圖2所示，與對(duì)照組相比，在簾蛤目雙殼貝的提取物粉末給藥組中，血中乙醛濃度(平均±標(biāo)準(zhǔn)誤差)的上升受到顯著抑制(student-t檢驗(yàn)，*:p<0.05，**:p<0.01vs對(duì)照組)。

實(shí)施例4：簾蛤目雙殼貝的提取物粉末或葡萄糖的反復(fù)口服給藥帶來的血漿中乙醛濃度上升的抑制作用的研究

將sd大鼠(7周齡、雄、japancharlesriverco.,ltd.制)預(yù)先飼養(yǎng)8天后，分為簾蛤目雙殼貝的提取物粉末給藥組、葡萄糖給藥組和對(duì)照組這三組(n＝6)進(jìn)行正式飼養(yǎng)(7天)。在簾蛤目雙殼貝的提取物粉末給藥組中，將在注射用水(扶桑藥品工業(yè)株式會(huì)社)中將上述提取物粉末以50mg/ml的濃度溶解而得的溶液按10ml/kg的量1天1次口服給藥(給藥量500mg/kg)。在葡萄糖給藥組中，將葡萄糖水溶液(日本藥局方葡萄糖注射液，葡萄糖濃度5％，大塚制藥制)1天1次口服給藥(給藥量500mg/kg)。在對(duì)照組中，將注射用水按10ml/kg的量1天1次給藥。7天口服給藥結(jié)束1小時(shí)后，以乙醇給藥量為1g/kg的方式將25％乙醇/生理鹽水在尾靜脈內(nèi)給藥。乙醇給藥后，在0.5、2.0、4.0小時(shí)，使用預(yù)先充入了肝素鈉(novoheparin注10000單位、持田制藥株式會(huì)社)的一次性注射器和針，在無麻醉下在各時(shí)刻從頸靜脈采集約1.0ml血液。將得到的血液離心分離(1800g，4℃，15分鐘)，分離血漿，在-80℃冷凍保存。在凍融的血漿中添加等量的1mol/l高氯酸并混合，進(jìn)一步離心分離，得到上清液，以一半量的0.7mol/l磷酸三鈉中和處理，使用其作為血漿中乙醛濃度測定用樣品。血漿中乙醛濃度測定使用fkitacetaldehyde(株式會(huì)社j.k.international)進(jìn)行。測定結(jié)果的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)是，通過f檢驗(yàn)進(jìn)行各組的等分散性檢驗(yàn)，通過student-t檢驗(yàn)進(jìn)行等分散情況下的組間比較，通過aspin-welch近似檢驗(yàn)進(jìn)行不等分散情況下的組間比較。

血漿中乙醛濃度測定的結(jié)果如圖3所示。

與對(duì)照組和葡萄糖給藥組相比，在簾蛤目雙殼貝的提取物粉末給藥組中，血漿中乙醛濃度(平均±標(biāo)準(zhǔn)誤差)的上升受到顯著抑制(aspin-welch近似檢驗(yàn)，*:p<0.05，**:p<0.01vs對(duì)照組)。

在將簾蛤目雙殼貝的提取物粉末酸水解的情況下，在實(shí)施例1中，其分解物的約90％對(duì)應(yīng)于葡萄糖。這是因?yàn)?，簾蛤目雙殼貝的提取物粉末含有葡萄糖的多聚體即糖原作為主要成分。由本實(shí)施例4的結(jié)果確認(rèn)到，簾蛤目雙殼貝的提取物粉末的血漿中乙醛濃度上升抑制效果并非簾蛤目雙殼貝的提取物粉末分解得到的葡萄糖所導(dǎo)致的。

實(shí)施例5：簾蛤目雙殼貝的提取物粉末帶來的醉酒惡心、宿醉的防止作用的研究

作為受試者，選擇11名健康人(男性9名、女性2名，年齡23歲～55歲)。根據(jù)日本精密體檢協(xié)會(huì)的判斷分類(2014年4月1日修訂)，受試者均為血液檢查的肝功能項(xiàng)目分類為“a”或“b”的人。

試驗(yàn)開始時(shí)，作為試驗(yàn)樣品，準(zhǔn)備在3個(gè)明膠制膠囊中以共計(jì)1000mg的方式填充有簾蛤目雙殼貝的提取物粉末的膠囊，將每3個(gè)(1000mg)該膠囊放入記載有編號(hào)(隨機(jī)數(shù)字)和試驗(yàn)日期的小袋。

此外，作為安慰劑樣品，準(zhǔn)備在3個(gè)明膠制膠囊中以共計(jì)1000mg的方式填充有糊精(pinedex#2，來自木薯，松谷化學(xué)工業(yè)制)的膠囊，將每3個(gè)(1000mg)該膠囊放入記載有編號(hào)(隨機(jī)數(shù)字)和試驗(yàn)日期的小袋。

接下來，將放入了試驗(yàn)樣品、安慰劑樣品的2個(gè)小袋分別放入1個(gè)鋁袋。

其中，為了實(shí)施由2期構(gòu)成的雙盲試驗(yàn)，在放入鋁袋的小袋中的一個(gè)上記載第1期的試驗(yàn)日期，另一個(gè)上記載第2期的試驗(yàn)日期。這是由于，以受試者在2期中的一個(gè)中攝入試驗(yàn)樣品、在另一個(gè)中攝入安慰劑樣品的方式進(jìn)行調(diào)整。此外，預(yù)先以各期各組的人數(shù)分別為5名或6名、兩期合計(jì)各組的人數(shù)為同一數(shù)目的方式進(jìn)行了調(diào)整。

在試驗(yàn)第1期，受試者根據(jù)小袋中記載的試驗(yàn)日期從鋁袋中選擇樣品，與100ml飲用水一起攝入樣品。樣品剛攝入之后，各受試者全部同樣進(jìn)食，同時(shí)用2～3小時(shí)攝入比通常飲酒量稍多量的酒精(28～143g，平均94g)。

酒精攝入結(jié)束約10小時(shí)后的第二天早上，關(guān)于“胃部不適”、“惡心、嘔吐”、“頭痛、頭重感”、“身體倦怠”、“嗜睡”、“肌肉痛”、“腸(腹瀉)”、“頭暈、身體發(fā)抖”的自我感覺癥狀，各受試者進(jìn)行基于以下的得分的4級(jí)評(píng)價(jià)。

4分：嚴(yán)重存在

3分：稍微有

2分：幾乎沒有

1分：完全沒有

此外，第1期的試驗(yàn)日期1周后(沖刷(wash-out)后)，實(shí)施第2期的試驗(yàn)。具體而言，受試者用100ml飲用水?dāng)z入與第1期同一鋁袋中剩下的另一個(gè)小袋中的樣品。這里，對(duì)于受試者，預(yù)先以樣品剛攝入之后進(jìn)行與第1期相同內(nèi)容、等量的進(jìn)食和酒精攝入的方式進(jìn)行了指導(dǎo)。

酒精攝入結(jié)束約10小時(shí)后，各受試者與第1期同樣地評(píng)價(jià)自我感覺癥狀。

由上述2期的試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)于醉酒惡心、宿醉的防止作用進(jìn)行了驗(yàn)證。

驗(yàn)證是以遵守?cái)z入與第1期和第2期中相同內(nèi)容、等量的酒精的7人(男性6名、女性1名，酒精攝入量42～143g，平均100g)作為對(duì)象。而且，分為攝入了試驗(yàn)樣品的情況和攝入了安慰劑樣品的情況，算出各評(píng)價(jià)項(xiàng)目的得分平均值。

結(jié)果如表1所示。

[表1]

在全部評(píng)價(jià)項(xiàng)目中，簾蛤目雙殼貝的提取物給藥組的得分平均值與安慰劑給藥組的得分平均值相比顯示低值，尤其是對(duì)于“胃部不適”、“身體倦怠”，確認(rèn)到有顯著差異(paired-t檢驗(yàn)，p<0.05)。

此外，各受試者分別算出全部評(píng)價(jià)項(xiàng)目的總分的情況下，在4名受試者中，與攝入安慰劑相比，攝入簾蛤目雙殼貝的提取物一方顯示出2分以上的低值。由這些結(jié)果也暗示簾蛤目雙殼貝的提取物攝入對(duì)醉酒惡心、宿醉的緩和的有效性。

其中，在第2期中，產(chǎn)生了4名無法攝入與第1期相同內(nèi)容、等量的酒精的受試者。這4名中，3名是在第2期攝入了安慰劑的受試者。可以說，關(guān)于這3名受試者，與攝入了安慰劑的第2期相比，攝入了簾蛤目雙殼貝的提取物的第1期更容易攝入酒精。從這些結(jié)果也可認(rèn)為，簾蛤目雙殼貝的提取物的攝入暗示對(duì)促進(jìn)酒精代謝產(chǎn)生影響。