相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求2014年7月30日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)第62/031,116號(hào)，2015年2月2日提交的62/110,744和2015年2月17日提交的62/117,366的權(quán)益，所述臨時(shí)專利申請(qǐng)的完整內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明尤其涉及用于接種的新組合物和方法，包括包含基于鞭毛蛋白的劑的佐劑。電子提交的文本文件的描述以電子方式與其一起提交的文本文件的內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文：序列表的計(jì)算機(jī)可讀格式拷貝(文件名：cle019pcsequencelisting.txt；記錄日期：2015年7月24日；文件大小：261kb)。背景疫苗是可用于抵抗傳染病、癌癥和過(guò)敏癥的最有效的預(yù)防性健康工具之一。接種旨在產(chǎn)生對(duì)施用的抗原的強(qiáng)烈免疫應(yīng)答并提供針對(duì)病癥的長(zhǎng)期保護(hù)。然而，通常僅抗原不足以刺激保護(hù)性免疫。疫苗佐劑是增強(qiáng)疫苗中針對(duì)抗原的特異性免疫應(yīng)答的化合物。目前，已知數(shù)百種天然和合成化合物具有佐劑活性，但在美國(guó)僅有明礬鹽和as04被許可用于人。該有限的佐劑列表不足以滿足有效接種的功能需要。例如，雖然明礬能夠誘導(dǎo)良好的th2應(yīng)答，但其幾乎沒有能力刺激對(duì)于防御許多病原體是如此重要的細(xì)胞(th1)免疫應(yīng)答。因此，仍然需要可有效刺激受試者的免疫應(yīng)答的改善的疫苗和/或佐劑。發(fā)明概述因此，在一些方面，本發(fā)明提供了改善的疫苗和/或佐劑。在一些方面，本發(fā)明提供了疫苗組合物，其包含佐劑和抗原，以及任選的另外的佐劑，所述佐劑包含基于鞭毛蛋白的劑(諸如例如cblb502(亦稱為entolimod)以及本文描述的任何基于鞭毛蛋白的劑或衍生物(例如表1))，以及鋁凝膠或鹽。在一些方面，本發(fā)明提供了包含佐劑的佐劑組合物，所述佐劑包含基于鞭毛蛋白的劑(包括cblb502以及本文所述的任何鞭毛蛋白基藥劑或衍生物(例如表1))以及鋁凝膠或鹽。在各種實(shí)施方案中，相對(duì)于僅包含抗原和鋁凝膠或鹽的疫苗，本文所述的疫苗引起佐劑性質(zhì)改善。在各種實(shí)施方案中，本文所述的疫苗和/或佐劑引起比僅包含抗原和鋁凝膠或鹽的疫苗和/或僅包含鋁凝膠或鹽的佐劑更廣泛、更多樣、更強(qiáng)勁和更持久的免疫刺激作用。在各種實(shí)施方案中，本文所述的疫苗和/或佐劑引起th1和th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中的一者或多者的免疫刺激(例如th1和th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答二者)和/或本文所述的疫苗和/或佐劑以比僅包含抗原和鋁凝膠或鹽的疫苗和/或僅包含鋁凝膠或鹽的佐劑高的水平引起th1介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的免疫刺激。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑可以是鞭毛蛋白分子或基于鞭毛蛋白的劑或具有tlr5激動(dòng)劑活性的其變體。基于鞭毛蛋白的劑可包含表1中的一條或多條序列(seqidno：1-252)或具有tlr5激動(dòng)劑活性的其變體以及可包括都柏林沙門氏菌(salmonelladublin)野生型鞭毛蛋白的變體(seqidno：1)、cblb502(seqidno：2)或其變體(包括密切相關(guān)的變體諸如s33ml(seqidno：35)、cblb502-485ct(cblb533，seqidno：71)和cblb502-s33mxseqidno：150))和更遠(yuǎn)相關(guān)的變體，諸如來(lái)自嗜熱微生物的鞭毛蛋白衍生物或來(lái)自人良好耐受的微生物的鞭毛蛋白衍生物(例如seqidno：243-252)。在一些實(shí)施方案中，鋁凝膠或鹽選自氫氧化鋁、磷酸鋁和硫酸鋁鉀，以及鋁膠(alhydrogel)。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗組合物是以下疫苗的一部分(例如這些疫苗的抗原可用作本發(fā)明疫苗的抗原)：dtp(白喉-破傷風(fēng)-百日咳疫苗)、dtap(白喉-破傷風(fēng)-無(wú)細(xì)胞百日咳疫苗)、hib(b型流感嗜血桿菌(haemophilusinfluenzaetypeb))結(jié)合疫苗、肺炎球菌(pneumococcal)結(jié)合疫苗、甲型肝炎疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、黃熱病疫苗、乙型肝炎疫苗、組合dtap、tdap、hib、人乳頭瘤病毒(hpv)疫苗、炭疽疫苗和狂犬病疫苗。在各種實(shí)施方案中，本文所述的疫苗部分地通過(guò)將基于鞭毛蛋白的劑與鋁凝膠或鹽混合以形成穩(wěn)定的復(fù)合物而形成，基于鞭毛蛋白的劑與鋁凝膠或鹽的比率(w/w)為約1∶500或更小(例如約1∶500，或約1∶600，或約1∶700，或約1∶800，或約1∶900，或約1∶1000，或約1∶2000，或約1∶5000)。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽以顯著低于鋁凝膠或鹽的負(fù)載能力的比率混合。在一些實(shí)施方案中，將基于鞭毛蛋白的劑和抗原吸附至鋁凝膠或鹽。在另一方面，本發(fā)明提供了對(duì)受試者進(jìn)行接種以抗病癥的方法，其包括施用有效量的包含佐劑和與所述病癥相關(guān)的抗原的疫苗，所述佐劑包含基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽。在另一方面，本發(fā)明提供了在接種之前或同時(shí)免疫刺激受試者的方法，其包括施用有效量的包含基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽的佐劑，其中th1和th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答被免疫刺激。在各種實(shí)施方案中，所述病癥選自感染性疾病、癌癥、過(guò)敏癥和自身免疫性疾病(例如，白喉、破傷風(fēng)、百日咳、流感、肺炎、甲型肝炎、乙型肝炎、脊髓灰質(zhì)炎、黃熱病、人乳頭狀瘤病毒(hpv)感染、各種癌癥、炭疽、狂犬病、日本腦炎、腦膜炎、麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹、胃腸炎、天花、傷寒、水痘(雞痘(chickenpox))、輪狀病毒和帶狀皰疹)。本發(fā)明的細(xì)節(jié)在下面的隨附描述中進(jìn)行了闡述。雖然與本文所述的方法和材料相似或等同的方法和材料可用于本發(fā)明的實(shí)踐或測(cè)試，但現(xiàn)在描述說(shuō)明性的方法和材料。本發(fā)明的其它特征、目的和有利方面將從說(shuō)明書和根據(jù)權(quán)利要求書中顯而易見。在說(shuō)明書和所附根據(jù)權(quán)利要求中，除非上下文另有明確規(guī)定，否則單數(shù)形式也包括復(fù)數(shù)。除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。附圖簡(jiǎn)述圖1a和1b顯示鞭毛蛋白的對(duì)于tlr5活性可以是重要的13個(gè)保守氨基酸。圖1a和1b顯示來(lái)自21種細(xì)菌的保守氨基(圖1a)和羧基(圖1b)末端的氨基酸序列的比較。對(duì)于tlr5活性重要的13個(gè)保守氨基酸以陰影顯示。氨基酸序列通過(guò)其來(lái)自trembl(第一個(gè)字母＝q)或swiss-prot(第一個(gè)字母＝p)的登錄號(hào)來(lái)鑒定。圖2顯示在加強(qiáng)后1周的時(shí)間點(diǎn)的5個(gè)小鼠處理組的平均應(yīng)答的elisa數(shù)據(jù)。圖a是總igg，圖b是igg1，圖c是igg2a，圖d是igg2b以及圖e是igg3。組1-5定義于表b(實(shí)施例2)中：組1也稱為“未處理的”；組2也稱為“ova”，組3也稱為“ova+alum”，組4也稱為“sa1μg”，以及組5也稱為“sa10μg”。圖3顯示在加強(qiáng)后2周的時(shí)間點(diǎn)的5個(gè)小鼠處理組的平均應(yīng)答的elisa數(shù)據(jù)。圖a是總igg，圖b是igg1，圖c是igg2a，圖d是igg2b以及圖e是igg3。組1-5定義于表b(實(shí)施例2)中：組1也稱為“未處理的”；組2也稱為“ova”，組3也稱為“ova+alum”，組4也稱為“sa1μg”，以及組5也稱為“sa10μg”。圖4顯示在加強(qiáng)后4周的時(shí)間點(diǎn)的5個(gè)小鼠處理組的平均應(yīng)答的elisa數(shù)據(jù)。圖a是總igg，圖b是igg1，圖c是igg2a，圖d是igg2b以及圖e是igg3。組1-5定義于表b(實(shí)施例2)中：組1也稱為“未處理的”；組2也稱為“ova”，組3也稱為“ova+alum”，組4也稱為“sa1μg”，以及組5也稱為“sa10μg”。圖5顯示使用基于細(xì)胞的nf-κb活化測(cè)定進(jìn)行的cblb502/鋁膠活性的測(cè)定。將cblb502/鋁膠制劑(5μg/100μl)和鋁膠對(duì)照在測(cè)定介質(zhì)中連續(xù)稀釋2000-至13122000-倍(2.6-0.0004μg/ml鋁)并與293-htlr5-lacz細(xì)胞一起孵育20小時(shí)。在加入細(xì)胞裂解緩沖液和onpg底物后測(cè)量β-半乳糖苷酶的活性，并將其表達(dá)為在414nm處的光密度(od414)。圖6顯示利用不同cblb502劑量配制的cblb502/鋁膠的nf-κb誘導(dǎo)活性。將293-htlr5-lacz細(xì)胞與以在2.5至0.00015μg/100μl的范圍內(nèi)的cblb502劑量制備的并用介質(zhì)稀釋200倍的cblb502/鋁膠懸浮液一起孵育。在20小時(shí)孵育后測(cè)量β-半乳糖苷酶報(bào)告酶的活性。圖7顯示用293-htlr5-lacz報(bào)告細(xì)胞產(chǎn)生的劑量-應(yīng)答滴定曲線cblb502/鋁膠。將cblb502以指定劑量(20μg/100μl：上圖，0.31μg/100μl：中圖和0.078μg/100μl：下圖)吸附至鋁膠上，用介質(zhì)連續(xù)稀釋，并將其與可溶性cblb502標(biāo)準(zhǔn)物一起分析。圖8顯示在4℃儲(chǔ)存2天和6天的cblb502/鋁膠(1μg/100μl劑量)的活性。使用293-htlr5-lacz報(bào)告細(xì)胞測(cè)定法測(cè)量nf-κb誘導(dǎo)活性。圖9顯示在皮下注射1μg劑量的吸附于鋁膠2％的cblb502后，小鼠血清中cblb502的藥代動(dòng)力學(xué)。該圖顯示每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的每組平均血清cblb502濃度和sem(平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差)。圖10顯示在皮下施用1μg劑量的吸附于鋁膠2％的cblb502后的kc、g-csf和il-6的誘導(dǎo)。使用r&dsystemsduoset試劑盒dy453(kc，上圖)、dy414(g-csf，中圖)和dy406(il-6，下圖)測(cè)定細(xì)胞因子的血清濃度。該圖顯示每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的每組平均血清細(xì)胞因子濃度和sem(平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差)。圖11顯示502佐劑的免疫增強(qiáng)作用。顯示了在明礬或entolimod(0至20μg的變化范圍)存在和不存在的情況下，初次接種后第2、4和6周收集的混合血清中通過(guò)elisa測(cè)定的針對(duì)tt-sma疫苗的抗maigg(μg/ml)應(yīng)答(圖a)和抗-502抗體應(yīng)答(圖b)。數(shù)據(jù)表示來(lái)自每個(gè)組(n＝5/組)的混合樣品中的抗體水平。發(fā)明詳述本發(fā)明還部分基于令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，即可將基于鞭毛蛋白的劑，包括cblb502和本文所述的任何基于鞭毛蛋白的劑(例如包含表1的序列的藥劑，包括mx-33)以遠(yuǎn)低于鋁凝膠或鹽的負(fù)載/吸附能力的比率(例如1∶500)與鋁凝膠或鹽(和，任選的抗原)混合，并且引起比僅包含抗原和鋁凝膠或鹽的疫苗和/或僅包含鋁凝膠或鹽的佐劑更廣泛、更多樣、更強(qiáng)健和更持久的免疫刺激作用。本發(fā)明人還已令人驚奇地發(fā)現(xiàn)免疫刺激作用可以影響th1和th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的臂。本發(fā)明人還令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于抗原，低量的基于鞭毛蛋白的劑(包括cblb502和任何基于鞭毛蛋白的劑(例如包含表1的序列的藥劑，包括mx-33))對(duì)于免疫刺激是有效的。在一方面，本發(fā)明提供了包含佐劑(其包含基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽)和抗原以及任選地另外的佐劑的疫苗組合物。在一方面，本發(fā)明提供了包含基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽的佐劑。在一些實(shí)施方案中，相對(duì)于僅包含抗原和鋁凝膠或鹽的疫苗，所述疫苗引起佐劑性質(zhì)改善。在各種實(shí)施方案中，本文所述的疫苗和/或佐劑引起比僅包含抗原和鋁凝膠或鹽的疫苗(或相較于僅包含抗原和基于鞭毛蛋白的疫苗)和/或僅包含鋁凝膠或鹽(或相較于僅包含基于鞭毛蛋白的劑的佐劑)更廣泛、更多樣、更穩(wěn)健和更持久的免疫刺激作用。在一些實(shí)施方案中，所述疫苗和/或所述佐劑引起th1和th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中的一者或多者的免疫刺激。在一些實(shí)施方案中，所述疫苗和/或所述佐劑引起th1和th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答兩者的免疫刺激。在一些實(shí)施方案中，所述疫苗和/或所述佐劑以高于僅包含抗原和鋁凝膠或鹽的疫苗或僅包含鋁凝膠或鹽的佐劑的水平引起th1介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的免疫刺激。th1介導(dǎo)的免疫應(yīng)答(或“1型應(yīng)答”)主要涉及與巨噬細(xì)胞和cd8+t細(xì)胞的相互作用，并且可與干擾素-γ、tnf-β、白介素-2和白細(xì)胞介素-10的產(chǎn)生相關(guān)。th1介導(dǎo)的免疫應(yīng)答促進(jìn)細(xì)胞免疫系統(tǒng)并且使巨噬細(xì)胞的殺傷功效和細(xì)胞毒性cd8+t細(xì)胞的增殖最大化。th1介導(dǎo)的免疫應(yīng)答還促進(jìn)調(diào)理的抗體(例如igg、igm和iga)產(chǎn)生。1型細(xì)胞因子ifn-γ通過(guò)樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增加白細(xì)胞介素-12的產(chǎn)生，并且通過(guò)正反饋，il-12刺激輔助t細(xì)胞中的ifn-γ的產(chǎn)生，從而促進(jìn)th1特征譜。干擾素-γ還抑制細(xì)胞因子諸如白細(xì)胞介素-4(一種與2型應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞因子)的產(chǎn)生，因此其也起著保持其自身應(yīng)答的作用。th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答(或“2型應(yīng)答”)主要涉及與b細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞的相互作用，并且可與白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-5、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-9、白細(xì)胞介素-10和白細(xì)胞介素-13相關(guān)聯(lián)。th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答促進(jìn)體液免疫系統(tǒng)并且可刺激b細(xì)胞進(jìn)入增殖，誘導(dǎo)b細(xì)胞抗體類別轉(zhuǎn)換和增加中和抗體產(chǎn)生(例如igg、igm和iga以及ige抗體)。2型應(yīng)答的其他功能包括使用兩種不同的細(xì)胞因子促進(jìn)其自身的特征譜。白細(xì)胞介素-4作用于輔助t細(xì)胞以促進(jìn)th2細(xì)胞因子(包括其本身；其是自調(diào)節(jié)的)的產(chǎn)生，而白介素-10(il-10)抑制多種細(xì)胞因子，包括助t細(xì)胞中的白細(xì)胞介素-2和ifn-γ以及樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中的il-12表達(dá)。這兩種細(xì)胞因子的聯(lián)合作用表明，一旦t細(xì)胞已決定產(chǎn)生這些細(xì)胞因子，該決定被保留(并且也鼓勵(lì)其它t細(xì)胞進(jìn)行同樣的行為)。除其它以外以及不希望受理論束縛，所述劃分(division)在醫(yī)學(xué)上與明礬佐劑僅在誘導(dǎo)th2介導(dǎo)的應(yīng)答而不是th1介導(dǎo)的應(yīng)答上有效的事實(shí)相關(guān)(參見，例如，smithkorsholm等immunology.2010年1月；129(1)：75-86，其內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文)。在各種實(shí)施方案中，th1和th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的刺激可通過(guò)本領(lǐng)域已知的測(cè)定(包括許多抗體替代測(cè)定(例如elisa等))來(lái)測(cè)量。例如，不希望受理論束縛，igg1與th2樣應(yīng)答相關(guān)，而th1應(yīng)答與igg2a、igg2b和igg3抗體的誘導(dǎo)相關(guān)。在一些實(shí)施方案中，所述疫苗和/或所述佐劑引起igg1、igg2a、igg2b和igg3抗體中的一者或多者的滴度增加(例如相對(duì)于僅包含鋁凝膠或鹽或基于鞭毛蛋白的劑，或相對(duì)于僅包含抗原和鋁凝膠或鹽(或基于鞭毛蛋白的劑)的疫苗))。在一些實(shí)施方案中，所述疫苗和/或所述佐劑引起所有igg1、igg2a、igg2b和igg3抗體的滴度相對(duì)增加。在一些實(shí)施方案中，所述疫苗和/或所述佐劑引起比在基于鞭毛蛋白的劑不存在的情況下的所述疫苗和/或所述佐劑(或在僅鋁凝膠或鹽不存在的情況下的所述疫苗和/或所述疫苗)更多的igg3抗體的滴度的相對(duì)增加。因此，在一些實(shí)施方案中，所述疫苗和/或所述佐劑引起多樣化的免疫應(yīng)答。例如，在一些實(shí)施方案中，由所述疫苗和/或佐劑產(chǎn)生的總igg大于不含基于鞭毛蛋白的劑的所述疫苗和/或佐劑。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑可以是鞭毛蛋白分子或鞭毛蛋白相關(guān)多肽或具有tlr5激動(dòng)劑活性的其變體?；诒廾鞍椎膭┛蓙?lái)自各種來(lái)源，包括多種革蘭陽(yáng)性和革蘭陰性細(xì)菌物種。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑可具有源自來(lái)自例如美國(guó)專利公布第2003/0044429號(hào)(其內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文)的圖7中描繪的細(xì)菌物種的任何鞭毛蛋白的氨基酸序列?；诒廾鞍椎膭┛梢跃哂信c編碼例如u.s.2003/0044429的圖7中所列的鞭毛蛋白多肽的那些核苷酸序列相關(guān)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可在包括ncbigenbank數(shù)據(jù)庫(kù)的來(lái)源公開中公開獲得?；诒廾鞍椎膭┛梢允羌?xì)菌鞭毛的主要組分?；诒廾鞍椎膭┛捎?個(gè)，或2個(gè)，或3個(gè)，或4個(gè)，或5個(gè)，或6個(gè)，或7個(gè)結(jié)構(gòu)域或其片段組成(參見，例如美國(guó)專利8,324,163的圖10，其內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文)。結(jié)構(gòu)域可以選自nd0、nd1、nd2、d3、cd2、cd1和cd0。結(jié)構(gòu)域0(d0)、1(d1)和2(d2)可以是不連續(xù)的，并且可在氨基末端和羧基末端的殘基通過(guò)形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)并置時(shí)形成。包含d1和d2的氨基和羧基末端結(jié)構(gòu)域可以是最保守的，而中間高可變結(jié)構(gòu)域(d3)可以是高度可變的。非保守d3結(jié)構(gòu)域可以在鞭毛絲的表面上并且可以包含主要抗原表位。鞭毛蛋白的有效促炎活性可存在于高度保守的n以及cd1和cd2區(qū)域中。基于鞭毛蛋白的劑可以來(lái)自沙門氏菌屬(salmonella)的種，其代表性實(shí)例是鼠傷寒沙門氏菌(s.typhimurium)和都柏林沙門氏菌(s.dublin)(由genbank登錄號(hào)m84972編碼的)。鞭毛蛋白相關(guān)多肽可以是野生型鞭毛蛋白(seqidno：1)的片段、變體、類似物、同源物或衍生物或其組合。鞭毛蛋白的片段、變體、類似物、同源物或衍生物可通過(guò)基于鞭毛蛋白的結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)和被tlr5識(shí)別的保守結(jié)構(gòu)的基于合理的設(shè)計(jì)獲得。基于鞭毛蛋白的劑可與來(lái)自任何革蘭陽(yáng)性或革蘭陰性細(xì)菌物類的鞭毛蛋白多肽相關(guān)，所述鞭毛蛋白多肽包括但不限于美國(guó)專利公布2003/0044429(其內(nèi)容并入本文)中公開的鞭毛蛋白多肽，和對(duì)應(yīng)于美國(guó)專利公布2003/0044429的圖7(圖a-f)所示的blast結(jié)果中所列的登錄號(hào)的鞭毛蛋白肽或其變體。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含表1中所列的任何多肽或編碼所述多肽的核酸或由其組成。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑由表1所列的核苷酸序列編碼。在另外的實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含表1中所列的多肽。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含seqidno：1-252中的一個(gè)或多個(gè)。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含柔性接頭。在另外的實(shí)施方案中，柔性接頭包含seqidno：16。在另外的實(shí)施方案中，柔性接頭包含seqidno：242。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑是seqidno：1的變體。在各種實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑不是seqidno：1。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含cblb502(seqidno：2)或由其組成或?yàn)閏blb502(seqidno：2)的變體。在各種實(shí)施方案中，cblb502提供了除其它以外，除去產(chǎn)生中和抗-鞭毛蛋白抗體的表位，從而允許此處看到的與明礬組合的令人驚訝的佐劑特性的有利方面。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含被中和抗-cblb502抗體識(shí)別的表位中的突變。基于鞭毛蛋白的劑可在被中和抗-cblb502抗體識(shí)別的表位中包含一個(gè)或多個(gè)突變，所述突變抑制或消除抗體中和組合物的能力。在另外的實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含在一個(gè)或多個(gè)表位中的截短和突變。在另外的實(shí)施方案中，突變包括丙氨酸對(duì)表位殘基的替換。在另外的實(shí)施方案中，突變的表位包含以下殘基的一個(gè)或多個(gè)：e153、s444、t154、n440、q142、f131、d443、n68、t447、s110、q117、r124、d113、e120、n127和q128?；诒廾鞍椎膭┛砂瑢?duì)d0、d1、d2和可變d3結(jié)構(gòu)域中的任一個(gè)的插入、缺失、轉(zhuǎn)座子插入和變化。d3結(jié)構(gòu)域可以部分或全部被允許d1和d2結(jié)構(gòu)域正確折疊的鉸鏈或接頭多肽取代，以使得變體刺激tlr5活性。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑可以是鞭毛蛋白的最小功能性核心，例如相對(duì)于已經(jīng)縮短的cblb502分子刪除殘基。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑相對(duì)于野生型具有改變的氨基酸同一性，包括缺失、添加和取代，其提供改善的活性。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑源自cblb502(seqidno：2)。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含在一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)域中的截短。在另外的實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含在n-末端結(jié)構(gòu)域中的缺失。在另外的實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含在nd0結(jié)構(gòu)域中的缺失。在另外的實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含整個(gè)nd0結(jié)構(gòu)域中的缺失。在另外的實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含在c末端結(jié)構(gòu)域中的缺失。在另外的實(shí)施方案中，鞭毛蛋白相關(guān)性組合物包含在cd0結(jié)構(gòu)域中的缺失。在另外的實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑保留cd0結(jié)構(gòu)域的氨基酸470-485。在另外的實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑是cblb502-s33(seqidno：17)?；诒廾鞍椎膭┛砂瑘D1a和圖1b中所示的13個(gè)保守氨基酸殘基(位置89、90、91、95、98、101、115、422、423、426、431、436和452)所示的13個(gè)保守氨基酸中的至少10個(gè)、11個(gè)、12個(gè)或13個(gè)?；诒廾鞍椎膭┛膳cseqidno：1的氨基酸1-174和418-505具有至少30-99％同一性。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含標(biāo)簽。在另外的實(shí)施方案中，所述標(biāo)簽附接于基于鞭毛蛋白的劑的n末端。在另外的實(shí)施方案中，所述標(biāo)簽附接于基于鞭毛蛋白的劑的c末端。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含柔性接頭。在另外的實(shí)施方案中，柔性接頭包含seqidno：16。在另外的實(shí)施方案中，柔性接頭包含seqidno：242。在各種實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑是衍生自seqidno：2的一種或多種鞭毛蛋白相關(guān)性組合物。在各種實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑是cblb502-s33ml(seqidno：35)、cblb502-485ct(cblb533，seqidno：71)和cblb502-s33mx(seqidno：150)。在各種實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑是來(lái)自嗜熱微生物的鞭毛蛋白衍生物。在各種實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑是來(lái)自被人良好耐受的微生物的鞭毛蛋白衍生物。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑是seqidno：243-252中的一者或多者。在一些實(shí)施方案中，變體包括具有tlr5激動(dòng)劑活性的分子。在一些實(shí)施方案中，變體包括這樣的分子，其包含與seqidno：1或seqidno：2具有至少約70％(例如約70％，或約71％，或約72％，或約73％，或約74％，或約75％，或約76％，或約77％，或約78％，或約79％，或約80％，或約81％，或約82％，或約83％，或約84％，或約85％，或約86％，或約87％，或約88％，或約89％，或約90％，或約91％，或約92％，或約93％，或約94％，或約95％，或約96％，或約97％，或約98％，或約99％)序列同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含表1中所列的多肽中的任一種多肽或編碼所述多肽的核酸或由所述多肽或核酸組成。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑由表1中所列的核苷酸序列編碼。在另外的實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含表1中所列的一種或多種多肽。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含由seqidno：69或70編碼的多肽或由所述多肽組成。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含seqidno：71的多肽“cblb543”或由所述多肽組成。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含由seqidno：149或151編碼的多肽或由所述多肽組成。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑包含seqidno：150的多肽“cblb533”或由所述多肽組成。在一些實(shí)施方案中，鋁凝膠或鹽選自氫氧化鋁、磷酸鋁和硫酸鋁鉀、as04(其由鋁鹽和mpl組成)和鋁膠。在一些實(shí)施方案中，鋁凝膠或鹽是與本文所述的任何額外佐劑的制劑或混合物。在一些實(shí)施方案中，除了所述的基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽以外的佐劑可用于本發(fā)明。在一些實(shí)施方案中，另外的佐劑選自水包油乳液制劑、皂苷佐劑、卵清蛋白、弗氏佐劑(freundsadjuvant)、細(xì)胞因子和殼聚糖。說(shuō)明性另外的佐劑包括但不限于：(1)卵清蛋白(例如endofit)，其通常用于生物化學(xué)研究；(2)水包油乳液制劑(具有或不具有其它特異性免疫刺激劑諸如胞壁?；幕蚣?xì)菌細(xì)胞壁組分)，諸如(a)mf59(pct公布第wo90/14837號(hào))，含有5％角鯊烯、0.5％tween80和0.5％span85(任選地含有各種量的mtp-pe)，使用微流化儀諸如，例如modelhoy微流化儀(microfluidics，newton，mass.)配制成亞微米顆粒的，(b)saf，含有10％角鯊?fù)椤?.4％tween80、5％pluronic嵌段聚合物l121和thr-mdp，微流化成亞微米乳液或經(jīng)渦旋以產(chǎn)生較大粒度的乳液，(c)ribi佐劑系統(tǒng)(ras)，(ribiimmunochem，hamilton，mo.)，含有2％角鯊烯，0.2％tween80和任選地來(lái)自單磷?；|(zhì)a(mpl)、海藻糖二霉菌酸酯(tdm)和細(xì)胞壁骨架(cws)的組的一種或多種細(xì)菌細(xì)胞壁組分，包括mpl+cws(detoxtm)；和(d)addavax(invitrogen)；(3)皂苷佐劑，諸如stimulon(cambridgebioscience，worcester，mass.)可被使用或由其產(chǎn)生的顆粒，諸如iscom(免疫刺激復(fù)合物)；(4)完全弗氏佐劑(cfa)和不完全弗氏佐劑(ifa)；(5)細(xì)胞因子，諸如白介素(作為非限制性實(shí)例，il-1、il-2、il-4、il-5、il-6、il-7、il-12等)、干擾素(例如，γ干擾素)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(m-csf)、腫瘤壞死因子(tnf)等；(6)殼聚糖和幾丁質(zhì)或聚-n-乙?；?d-葡糖胺的其它衍生物，其中更大比率的n-乙?；呀?jīng)通過(guò)水解除去(參見例如，歐洲專利申請(qǐng)460020(其由此通過(guò)引用整體并入)，其公開了包括殼聚糖作為粘膜吸收促進(jìn)劑的藥物制劑)；和(7)用作免疫刺激劑以增強(qiáng)組合物的效力的其它物質(zhì)，例如單磷?；|(zhì)a。在其它實(shí)施方案中，另外的佐劑是基于鞭毛蛋白的劑(例如cblb502或表1的任何藥劑)、鋁鹽或凝膠、模式識(shí)別受體(prr)激動(dòng)劑、cpgodn和咪唑并喹啉的一者或多者。在一些實(shí)施方案中，另外的佐劑是以下的一者或多者：環(huán)[g(3’，5’)pa(3’，5’)p](例如3′3′-cgampvaccigrade)；環(huán)[g(2’，5’)pa(3’，5’)p]2’3’(例如2’3’-cgampvaccigrade)；環(huán)[g(2’，5’)pa(2’，5’)p](例如2’2’-cgampvaccigrade)；環(huán)二腺苷酸單磷酸(例如c-二-ampvaccigrade)；環(huán)二鳥苷酸單磷酸(例如c-二-gmpvaccigrade)；tlr7激動(dòng)劑-咪唑并喹啉化合物(例如tlr7激動(dòng)劑，諸如，例如噶德莫特vaccigrade、咪喹莫特vaccigrade、r848vaccigrade)；脂質(zhì)多糖(例如tlr4激動(dòng)劑)，諸如來(lái)自大腸桿菌(e.coli)0111:b4株的脂多糖(例如lps-ebvaccigrade)；單磷?；|(zhì)a(例如mpla-smvaccigrade和mpla合成vaccigrade)；n-糖基化的胞壁酰二肽(例如n-糖基-mdpvaccigrade)；cpgodn，a類和/或cpgodn，b類和/或cpgodn，c類(例如odn1585vaccigrade、odn1826vaccigrade、odn2006vaccigrade、odn2395vaccigrade)、三?；鞍?例如pam3csk4vaccigrade)；聚肌苷-聚胞苷酸(例如poly(i:c)(hmw)vaccigrade)；和索狀因子(即分枝桿菌細(xì)胞壁組分海藻糖6，6’二霉菌酸酯(tdm))或其類似物(例如tdbvaccigrade、tdb-hs15vaccigrade)。在一些實(shí)施方案中，另外的佐劑是tlr激動(dòng)劑(例如tlr1，和/或tlr2，和/或tlr3，和/或tlr4，和/或tlr5，和/或tlr6，和/或tlr7，和/或tlr8，和/或tlr9，和/或tlr10，和/或tlr11，和/或tlr12和/或tlr13)、核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域(nod)激動(dòng)劑、干擾素基因刺激劑(sting)配體的刺激劑或相關(guān)藥劑。在一些實(shí)施方案中，另外的佐劑是以下試劑的一者或多者：礦物佐劑、基于凝膠佐劑、張力活性劑、細(xì)菌產(chǎn)物、油乳劑、顆粒佐劑、融合蛋白和脂肽。其它礦物鹽佐劑，除了別處描述的鋁佐劑之外，還包括鈣(例如磷酸鈣)、鐵和鋯的鹽。除了別處描述的基于鋁凝膠的佐劑之外，其它基于凝膠的佐劑包括醋孟南。張力活性劑包括quila，衍生自阜樹樹皮的水性提取物的皂苷；皂苷，包含具有連接至核的糖類鏈的三萜結(jié)構(gòu)的疏水核的張力活性糖苷，和qs-21。細(xì)菌產(chǎn)物包括革蘭陰性細(xì)菌(例如，來(lái)自分枝桿菌屬某些種(mycobacteriumspp)、短小棒狀桿菌(corynebacteriumparvum)、粒狀棒狀桿菌(c.granulosum)、百日咳博德特氏菌(bordetellapertussis)和腦膜炎奈瑟球菌(neisseriameningitidis))的細(xì)胞壁肽聚糖或脂多糖、n-乙酰胞壁酰-l-丙氨酰-d-異谷氨酰胺(mdp)、衍生自mdp(例如蘇氨酰-mmp)、脂多糖(lps)(例如來(lái)自革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁)、海藻糖二霉菌酸酯(tdm)和含有cpg基序的dna的不同化合物。油乳劑包括fia、montanide、佐劑65、lipovant、油基佐劑的montanide家族和各種脂質(zhì)體。在顆?；途酆衔矬w系中，聚(dl-丙交酯-共-乙交酯)微球已經(jīng)被廣泛研究并且在本文中使用。另外，在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子是本發(fā)明的佐劑(例如ifn-γ和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(gm-csf))。此外，糖類佐劑(例如菊粉衍生的佐劑，諸如γ菊粉、阿伽目林(algammulin)(γ-菊糖與氫氧化鋁的組合)和基于葡萄糖和甘露糖的多糖，諸如葡聚糖、葡聚糖(dextrans)、香菇多糖、葡甘露聚糖和半乳甘露聚糖)也用于本發(fā)明。在一些實(shí)施方案中，佐劑制劑可用于本發(fā)明，并且包括與其它佐劑諸如脂質(zhì)a、阿伽目林、免疫刺激性復(fù)合物(iscoms)組合的明礬鹽，所述免疫刺激性復(fù)合物為30-40nm的十二面體結(jié)構(gòu)的病毒樣顆粒，由quila、脂質(zhì)和膽固醇組成。在一些實(shí)施方案中，另外的佐劑描述于jennings等adjuvantsanddeliverysystemsforviralvaccines-mechanismsandpotential.in：brownf，haaheimlr，(編輯).modulationoftheimmuneresponsetovaccineantigens.dev.biol.stand，第92卷basel：karger1998；19-28和/或sayers等jbiomedbiotechnol.2012；2012：831486，和/或petrovsky和aguilar，immunologyandcellbiology(2004)82，488-496(所述文獻(xiàn)的內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文)中。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑(例如基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽)可以是活的和減毒的，或殺死的或滅活的的疫苗，或類毒素，或亞單位或結(jié)合疫苗的一部分。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑(例如基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽)可以是一種或多種批準(zhǔn)的疫苗的一部分，和/或一種或多種批準(zhǔn)的疫苗的抗原可以是本發(fā)明的抗原。在一些實(shí)施方案中，批準(zhǔn)的疫苗包括：腺病毒；炭疽(biothrax)；bcg(tice)；dt(sanofi)；dtap(daptacel)；dtap(infanrix)；dtap-hepb-ipv(pediarix)；dtap-ipv(kinrix)；dtap-ipv/hib(pentacel)；hib(acthib)；hib(hiberix)；hib(pedvaxhib)；hib/hepb(comvax)；hib/mening.cy(menhibrix)；hepa(havrix)；hepa(havrix)；hepb(engerix-b)；hepb(recombivax)；hepa/hepb(twinrix)；人乳頭瘤病毒(hpv)(cerverix)；人乳頭瘤病毒(hpv)(gardasil)；流感(afluria)；流感(agriflu)；流感病毒(fluarix)；流感(flublok)；流感(flucelvax)；流感(fluvirin)；流感(flulaval)；流感(fluzone：標(biāo)準(zhǔn)，高劑量及真皮內(nèi)的)；流感(flumist)；日本腦炎(ixiaro)；腦膜炎球菌(meningococcal)(mcv4-menactra)；腦膜炎球菌(mcv4-menveo)；腦膜炎球菌(mpsv4-menomune)；mmr(mmr-ii)；mmrv(proquad)；肺炎球菌(pneumococcal)(pcv13-prevnar13)；肺炎球菌(ppsv-23-pneumovax)；脊髓灰質(zhì)炎(ipv-ipol)；狂犬病(imovax)；狂犬病(rabavert)；輪狀病毒(rotavirus)(rotateq)；輪狀病毒(rotarix)；天花(smallpox)(痘苗-acam2000)；td(decavac)；td(tenivac)；td(massbiologics)；tdap(adacel)；tdap(boostrix)；傷寒(滅活的-typhimvi)；傷寒(口服的-ty21a)；水痘(varivax)；黃熱病(yf-vax)和帶狀皰疹(帶狀皰診(shingles)-zostavax)。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑(例如基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽)可以是一種或多種說(shuō)明性疫苗的一部分，和/或一種或多種說(shuō)明性疫苗的抗原可以是本發(fā)明的抗原發(fā)明。說(shuō)明性疫苗包括例如亞單位疫苗和滅活或“殺死”的疫苗(例如infanrix-ipv/hib(百日咳博德特氏菌)、infanrix-ipv/hib(流感嗜血桿菌)、infanrix-ipv/hib(脊髓灰質(zhì)炎病毒(poliovirus))、infanrix-ipv/hib(破傷風(fēng)梭菌(clostridiumtetani))、infanrix-ipv/hib(白喉棒桿菌(corynebacteriumdiphtheria))、infanrix-hexa(百日咳博德特氏菌)、infanrix-hexa(流感嗜血桿菌)、infanrix-hexa(脊髓灰質(zhì)炎病毒)、infanrix-hexa(乙型肝炎病毒)、infanrix-hexa(破傷風(fēng)梭菌)、infanrix-hexa(白喉棒桿菌)、infanrix-ipv(百日咳博德特氏菌)、infanrix-ipv(脊髓灰質(zhì)炎病毒)、infanrix-ipv(破傷風(fēng)梭菌)、infanrix-ipv(白喉棒桿菌)、infanrix/hib(白喉棒桿菌)、pediarix(破傷風(fēng)梭菌)、pediarix(脊髓灰質(zhì)炎病毒)、pediarix(乙型肝炎病毒)、vivaxim(沙門菌屬某些種)、vivaxim(甲型肝炎病毒)；亞單位疫苗(例如5cvmb(腦膜炎奈瑟球菌)、百日咳博德特氏菌cyaa蛋白疫苗(百日咳博德特氏菌)、百日咳博德特氏菌ptx蛋白疫苗(百日咳博德特氏菌)、癌癥vegfa蛋白疫苗(癌癥)、使用緊密粘附素(intimin)多肽的大腸桿菌疫苗(大腸桿菌)、engerix-b(乙型肝炎病毒)、幽門螺桿菌(h.pylori)vaca蛋白疫苗(幽門螺桿菌)、c型和d型hc(肉毒梭菌(clostridiumbotulinum))、infanrix/hib(百日咳博德特氏菌)、infanrix/hib(流感嗜血桿菌)、infanrix/hib(破傷風(fēng)梭菌)、雞敗血支原體(m.gallisepticum)tm-1蛋白質(zhì)亞單位疫苗(雞敗血支原體)、mda修飾的人apob-100肽疫苗(動(dòng)脈粥樣硬化)、具有氫氧化鋁的msp3-lsp(瘧原蟲屬(plasmodium)某些種)、流行性腮腺炎hn蛋白亞單位疫苗(腮腺炎病毒)、腦膜炎奈瑟球菌tbp2蛋白疫苗(腦膜炎奈瑟球菌)、銅綠假單胞菌(p.aeruginosa)opri蛋白疫苗(銅綠假單胞菌)、惡性瘧原蟲亞單位se36蛋白疫苗(瘧原蟲屬某些種(plasmodiumspp.))、梯牧草(phleumpratense)過(guò)敏癥phlp12亞單位疫苗(過(guò)敏癥)、recombivaxhb(乙型肝炎病毒)、肺炎鏈球菌(s.pneumoniae)clpp蛋白疫苗(肺炎鏈球菌)；類毒素疫苗(例如bont/f(hc)(肉毒梭菌)、daptacel(白喉棒桿菌)、infanrix(百日咳博德特氏菌)、infanrix(破傷風(fēng)梭菌)、kinrix(破傷風(fēng)梭菌)、pbt(肉毒梭菌)、pediarix(百日咳博德特氏菌)、滅活或“殺死的”疫苗(例如avaxim(甲型肝炎病毒)、avaxim-pediatric(甲型肝炎病毒)、fsme-immun(蜱傳腦炎病毒(tick-borneencephalitisvirus)(tbev))、infanrix(白喉棒桿菌)、ixiaro(日本腦炎病毒)、kinrix(白喉棒桿菌)和pediarix(白喉棒桿菌))；和結(jié)合疫苗(例如、阿拉伯半乳聚糖-破傷風(fēng)類毒素綴合物(結(jié)核分枝桿菌)(mycobacteriumtuberculosis))、ccps-p64kr(腦膜炎奈瑟球菌)、comvax(流感嗜血桿菌)、menjugate(腦膜炎奈瑟球菌)、neisvac-c(腦膜炎奈瑟菌)和pedvaxhib(流感嗜血桿菌))。在一些實(shí)施方案中，在靶向藥物濫用的疫苗中組合本發(fā)明的佐劑(例如基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽)。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑用于疫苗中，以抗對(duì)以下物質(zhì)的成隱：芬太尼、海洛因、嗎啡、鴉片、羥考酮、氫可酮、氯胺酮、pcp、巴比妥酸鹽、苯二氮卓類、氟硝西泮、ghb、甲喹酮、哈希什(hashish)、大麻、lsd、美登木素(mescaline)、賽洛西賓、安非他明、可卡因、mdma、甲基苯丙胺、哌甲酯和尼古丁(例如ta-cd(celticpharma)、美國(guó)專利公布第2013/0011432號(hào)(其內(nèi)容通過(guò)引用并入本文)中描述的那些(例如使用6-(2r，3s)-3-(苯甲酰基氧基)-8-甲基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-2-羰基氧基-己酸(gnc)或6-((2r，3s)-3-(苯甲?；趸?-8-甲基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-2-甲酰氨基)己酸)(gne)作為抗原)，和ta-nic(celticpharma))。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑(例如基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽)和/或本發(fā)明的疫苗可包含violin或vaxjo數(shù)據(jù)庫(kù)中注釋的佐劑或抗原中的任一種(如在he等.nucleicacidsresearch.2014.42(d1)：d1124-d1132和xiang等nucleicacidsres.2008年1月；36：d923-8，其內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文)。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑(例如基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽)可以是一種或多種癌癥疫苗的一部分，和/或一種或多種癌癥疫苗的抗原可以是本發(fā)明的抗原。說(shuō)明性癌癥疫苗包括治療性和預(yù)防性疫苗。例如，癌癥疫苗包括oncophage(antigenicsinc.，于2008年在俄羅斯被批準(zhǔn)用于腎癌)、apc8015/sipuleucel-t/provenge(dendreon，用于例如轉(zhuǎn)移性激素難治性前列腺癌)、cancervax(canvaxin)、genitopecorp(myvax個(gè)性化免疫療法)和favrilleinc(favid)、攻擊引發(fā)癌癥的病毒人乳頭瘤病毒(例如cervarix(gsk)和gardasil(merck))、甲型肝炎病毒(例如cervarix(gsk)和gardasil(merck))以及乙型肝炎病毒(例如recombivaxhb(merck)、engerix-b(gsk)、elovacb(humanbiologicalsinstitute)、genevacb(seruminstitute)、shanvacb等)的預(yù)防性疫苗。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑(例如基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽)可以是一種或多種變應(yīng)原疫苗的一部分，和/或一種或多種變應(yīng)原疫苗的抗原可以是本發(fā)明的抗原。例如，皮下免疫療法(scit)變應(yīng)原組合物和方法適用于本發(fā)明(例如“脫敏(allergyshots)”)。例如，用于過(guò)敏性鼻炎和結(jié)膜炎(例如花粉(包括豚草)、塵螨、動(dòng)物皮屑和空氣中的霉菌孢子)；過(guò)敏性或外源性支氣管哮喘(例如房塵螨、花粉、動(dòng)物皮屑、霉菌(枝孢屬(cladosporium))、膠乳)；和昆蟲毒液超敏反應(yīng)的接種。變應(yīng)原包括花粉(例如樹、草、雜草)、寵物毛皮(例如貓的毛皮)、塵螨、空氣中的霉菌、職業(yè)性空氣過(guò)敏原、蜂蜜毒液、黃夾克毒液、大黃蜂毒液、胡蜂毒液和火蟻毒液。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗的抗原可以是活的和減毒的或殺死的或滅活的疫苗或類毒素或亞單位或結(jié)合疫苗的抗原。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗的抗原是本文所述的任何疫苗的抗原。例如，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原是一種或多種以下疫苗的抗原：dtp(白喉-破傷風(fēng)-百日咳疫苗)、dtap(白喉-破傷風(fēng)-無(wú)細(xì)胞百日咳疫苗)、hib(b型流感嗜血桿菌)結(jié)合疫苗、肺炎球菌結(jié)合疫苗、甲型肝炎疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、黃熱病疫苗、乙型肝炎疫苗、組合dtap、tdap、hib、人乳頭瘤病毒(hpv)疫苗、炭疽疫苗、卡介苗(bacilluscalmette-guérin)(tb)和狂犬病疫苗。在各種實(shí)施方案中，將基于鞭毛蛋白的劑和抗原吸附至鋁凝膠或鹽。在一些實(shí)施方案中，將基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽混合以形成穩(wěn)定的復(fù)合物。在一些實(shí)施方案中，將基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽以顯著低于鋁鹽的負(fù)載容量的比率混合。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的試劑和鋁凝膠或鹽以顯著低于鋁鹽的負(fù)載能力的比率存在。在各種實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽以約1∶500，或約1∶600，或約1∶700，或約1∶800，或約1∶900，或約1∶1000，或約1∶2000，或約1∶5000，或約1∶6000，或約1∶7000，或約1∶8000，或約1∶9000，或約1∶10000的比率(w/w)混合或存在。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽以約1∶500或更小的比率(w/w)混合。在一些實(shí)施方案中，即使在抗原存在的情況下，基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽以顯著低于鋁鹽的負(fù)載能力的比率存在。佐劑(例如鋁凝膠或鹽)的負(fù)載(或吸附)能力可使用多種分析方法來(lái)測(cè)量。通常，通過(guò)比較吸附至佐劑上之前與之后的加載或吸附的試劑(例如基于鞭毛蛋白的劑和/或抗原溶液)的水相中的蛋白質(zhì)含量來(lái)進(jìn)行所述測(cè)量。例如，可使用ramon絮凝測(cè)試(這用于測(cè)定白喉和破傷風(fēng)類毒素的吸附)。另外，可使用免疫沉淀技術(shù)(例如定量免疫電泳或單輻射免疫擴(kuò)散)或分光光度技術(shù)(例如bca法)測(cè)量負(fù)載。也可象免疫電泳或hplc那樣使用elisa法。最終疫苗中的鋁含量可使用多種已知技術(shù)，包括光譜測(cè)定法，諸如例如原子吸收光譜法來(lái)監(jiān)測(cè)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的疫苗和/或佐劑中的鋁凝膠或鹽的量為約0.05至約1.0mg/劑量，或約0.125至約0.625mg/劑量。在一些實(shí)施方案中，本文所述的疫苗和/或佐劑中的鋁凝膠或鹽的量為約0.05mg/劑量，或約0.10mg/劑量，或約0.15mg/劑量，或約0.20mg/劑量，或約0.25mg/劑量，或約0.30mg/劑量，或約0.35mg/劑量，或約0.40mg/劑量，或約0.45mg/劑量，或約0.50mg/劑量，或約0.55mg/劑量，或約0.60mg/劑量，或約0.65mg/劑量，或約0.70mg/劑量，或約0.75mg/劑量，或約0.80mg/劑量，或約0.85mg/劑量，或約0.90mg/劑量，或約0.95mg/劑量，或約1.0mg/劑量。在一些實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑的量為約0.03至約5μg/劑量(例如約0.03μg/劑量，約0.1μg/劑量，約0.3μg/劑量，約0.5μg/劑量，約1.0μg/劑量，約1.5μg/劑量，約2.0μg/劑量，約2.5μg/劑量，約3.0μg/劑量，約4.0μg/劑量，約4.5μg/劑量，約5.0μg/劑量)。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法包括小于約5μg/劑量，或小于4μg/劑量，或小于3μg/劑量，或小于2μg/劑量，或小于1μg/劑量，或小于0.5μg/劑量的基于鞭毛蛋白的劑的劑量。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法包含低劑量的基于鞭毛蛋白的劑。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法不涉及將抗原作為融合蛋白或通過(guò)化學(xué)綴合共價(jià)附接至基于鞭毛蛋白的劑。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物不具有等摩爾比率的抗原與基于鞭毛蛋白的劑(如在融合蛋白中)或每一分子鞭毛蛋白基的藥劑數(shù)個(gè)分子的半抗原分子(如在化學(xué)綴合物中)。在各種實(shí)施方案中，任何本發(fā)明的疫苗中的基于鞭毛蛋白的劑的量小于抗原的量。在各種實(shí)施方案中，任何本發(fā)明的疫苗中的基于鞭毛蛋白的劑的量小于抗原的量。在各種實(shí)施方案中，任何本發(fā)明疫苗中的基于鞭毛蛋白的劑的量顯著小于抗原的量。在各種實(shí)施方案中，任何本發(fā)明的疫苗中的基于鞭毛蛋白的劑的量為抗原的量的約1/500，或約1/450，或約1/400，或約1/350，或約1/325，或約1/300或約1/250，或約1/200，或約1/150，或約1/100，或約1/50。在各種實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑和明礬的組合不會(huì)顯著影響tlr5與基于鞭毛蛋白的劑的相互作用。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法不誘導(dǎo)tnfα的產(chǎn)生。在各種實(shí)施方案中，基于鞭毛蛋白的劑和明礬的本發(fā)明組合在低溫下基本穩(wěn)定約一周(例如在約4℃下穩(wěn)定約3天，或約5天，或約6天，或約7天，或約10天)。在另一方面，本發(fā)明涉及對(duì)受試者進(jìn)行接種以抗病癥的方法，其包括施用有效量的包含佐劑和與所述病癥相關(guān)的抗原的疫苗，所述佐劑包含基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽。在另一方面，本發(fā)明涉及疫苗用于對(duì)受試者進(jìn)行接種以抗病癥的用途，所述疫苗包含含有基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽的佐劑和與所述病癥相關(guān)的抗原。在另一方面，本發(fā)明涉及有效量的疫苗在制備用于對(duì)受試者進(jìn)行接種以抗病癥的藥劑中的用途，所述疫苗包含含有基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽的佐劑和與所述病癥相關(guān)的抗原。在另一方面，本發(fā)明涉及在接種之前或同時(shí)免疫刺激受試者的方法，其包括施用有效量的包含基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽的佐劑，其中th1和th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答均被免疫刺激。在另一方面，本發(fā)明涉及有效量的佐劑(包含基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽)用于在接種之前或同時(shí)免疫刺激受試者的用途。在另一方面，本發(fā)明涉及有效量的佐劑(包含基于鞭毛蛋白的劑和鋁凝膠或鹽)在制備用于在接種之前或同時(shí)免疫刺激受試者的藥劑中的用途。在各種實(shí)施方案中，相對(duì)于僅包含抗原和鋁凝膠或鹽(或僅基于鞭毛蛋白的劑和抗原)的疫苗，本文所述的疫苗引起佐劑性質(zhì)改善。在各種實(shí)施方案中，本文所述的疫苗和/或佐劑引起比僅包含抗原和鋁凝膠或鹽(或僅基于鞭毛蛋白的劑和抗原)的疫苗和/或僅包含鋁凝膠或鹽的佐劑(或僅包含基于鞭毛蛋白的劑的佐劑)更廣泛、更多樣、更強(qiáng)勁和更持久的免疫刺激作用。在一些實(shí)施方案中，所述疫苗和/或所述佐劑引起igg1、igg2a、igg2b和igg3抗體中的1種或更多種，或2種或更多種，或3種或更多種或全部的滴度的增加(例如相對(duì)于僅包含鋁凝膠或鹽或僅包含基于鞭毛蛋白的劑的佐劑，或相對(duì)于僅包含抗原和鋁凝膠或鹽或僅包含基于鞭毛蛋白的劑的疫苗)。在一些實(shí)施方案中，所述疫苗和/或所述佐劑引起所有igg1、igg2a、igg2b和igg3抗體的滴度的相對(duì)增加。在一些實(shí)施方案中，所述疫苗和/或所述佐劑引起比在基于鞭毛蛋白的劑不存在的情況下的所述疫苗和/或所述佐劑(或在僅鋁凝膠或鹽不存在的情況下的所述疫苗和/或所述疫苗)更多igg3抗體的滴度的相對(duì)增加。在一些實(shí)施方案中，將抗原與佐劑同時(shí)或順序施用。在一些實(shí)施方案中，所述病癥選自感染性疾病、癌癥、過(guò)敏癥和自身免疫性疾病。在一些實(shí)施方案中，所述疾病選自白喉、破傷風(fēng)、百日咳、流感、肺炎、甲型肝炎、乙型肝炎、脊髓灰質(zhì)炎、黃熱病、人乳頭瘤病毒(hpv)感染、炭疽、狂犬病、日本腦炎、腦膜炎、麻疹、腮腺炎、風(fēng)疹、胃腸炎、天花、傷寒、水痘(雞痘)、輪狀病毒和帶狀皰疹。在一些實(shí)施方案中，所述病癥是癌癥，所述癌癥選自，但不限于基底細(xì)胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥；乳腺癌；腹膜癌；宮頸癌；絨毛膜癌；結(jié)腸和直腸癌；結(jié)締組織癌；消化系統(tǒng)的癌癥；子宮內(nèi)膜癌；食管癌；眼癌；頭頸癌；胃癌(包括胃腸癌)；膠質(zhì)母細(xì)胞瘤；肝癌；肝細(xì)胞瘤；上皮內(nèi)腫瘤；腎或腎臟癌；喉癌；白血病；肝癌；肺癌(例如，小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、腺癌肺和肺鱗狀細(xì)胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；神經(jīng)母細(xì)胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽癌)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；橫紋肌肉瘤；直腸癌；呼吸系統(tǒng)癌；唾液腺癌；肉瘤；皮膚癌；鱗狀細(xì)胞癌；胃癌；睪丸癌；甲狀腺癌；子宮或子宮內(nèi)膜癌；泌尿系統(tǒng)癌；外陰癌；淋巴瘤包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤(hodgkin′sandnon-hodgkin′slymphoma)以及b細(xì)胞淋巴瘤(包括低度/濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)；小淋巴細(xì)胞(sl)nhl；中度/濾泡性nhl；中度彌漫性nhl；高度免疫母細(xì)胞性nhl；高度淋巴母細(xì)胞性nhl；高度小無(wú)核裂細(xì)胞性nhl；巨塊型nhl；套細(xì)胞淋巴瘤；aids相關(guān)淋巴瘤；和瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥(waldenstrom′smacroglobulinemia)；慢性淋巴細(xì)胞性白血病(cll)；急性成淋巴細(xì)胞性白血病(all)；毛細(xì)胞白血病；慢性成髓細(xì)胞白血??；以及其它癌和其它肉瘤；和移植后淋巴增生性障礙(ptld)，以及與斑痔性錯(cuò)構(gòu)瘤病(phakomatoses)、水腫(諸如與腦瘤有關(guān))或梅格斯氏綜合征(meigs′syndrome)相關(guān)的異常血管增殖。在一些實(shí)施方案中，所述病癥是過(guò)敏癥，選自(通過(guò)非限制性實(shí)例)過(guò)敏性鼻炎和結(jié)膜炎、過(guò)敏性或外源性支氣管哮喘和昆蟲毒液超敏反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，所述病癥是藥物濫用病癥(芬太尼、海洛因、嗎啡、鴉片、羥考酮、氫可酮、氯胺酮、pcp、巴比妥酸鹽、苯二氮卓類、氟硝西泮、ghb、甲喹酮、哈希什、大麻、lsd、美登木素、賽洛西賓、安非他明、可卡因、mdma、甲基苯丙胺、哌甲酯和尼古丁)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物(例如，所述佐劑和疫苗)可具有足夠堿性的官能團(tuán)，其可與無(wú)機(jī)或有機(jī)酸或羧基反應(yīng)，其可與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)，形成藥學(xué)上可接受的鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽從藥學(xué)上可接受的酸形成，這在本領(lǐng)域中是熟知的。此類鹽包括例如journalofpharmaceuticalscience，66，2-19(1977)和thehandbookofpharmaceuticalsalts；properties，selection，anduse.p.h.stahl和c.g.wermuth(編輯)，verlag，zurich(switzerland)2002(將所述文獻(xiàn)通過(guò)引用整體并入本文)中所列的藥學(xué)上可接受的鹽。作為非限制性實(shí)例，藥學(xué)上可接受的鹽包括硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來(lái)酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、蔗糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、雙羥萘酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、氯代苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、α-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二羧酸鹽、己炔-1，4-二羧酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、肉桂酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、蘋果酸鹽、羥基馬來(lái)酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對(duì)苯二甲酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯丙酸鹽、癸二酸鹽、辛二酸鹽、對(duì)溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙基磺酸鹽、2-羥基乙基磺酸鹽、甲基磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、萘-1，5-磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽和酒石酸鹽。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”還指具有酸性官能團(tuán)(諸如羧酸官能團(tuán))和堿的本發(fā)明組合物的鹽。合適的堿包括但不限于堿金屬諸如鈉、鉀和鋰的氫氧化物；堿土金屬諸如鈣和鎂的氫氧化物；其它金屬諸如鋁和鋅的氫氧化物；氨和有機(jī)胺諸如未取代的或羥基取代的單-、二-或三-烷基胺、二環(huán)己基胺；三丁基胺；吡啶；n-甲基、n-乙基胺；二乙基胺；三乙基胺；單-、雙-或三-(2-oh-低級(jí)烷基胺)，諸如單-雙-或或三-(2-羥乙基)胺、2-羥基-叔丁基胺或三-(羥基甲基)甲基胺、n，n-二-低級(jí)烷基-n-(羥基-低級(jí)烷基)-胺，諸如n，n-二甲基-n-(2-羥基乙基)胺或三-(2-羥基乙基)胺；n-甲基-d-葡糖胺；和氨基酸諸如精氨酸、賴氨酸等。在一些實(shí)施方案中，本文所述的本發(fā)明的組合物(例如，所述佐劑和疫苗)呈藥學(xué)上可接受的鹽的形式。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物(例如所述佐劑和疫苗)可包含藥學(xué)上可接受的載體或媒介物。此類組合物可任選地包含合適量的藥學(xué)上可接受的賦形劑，以提供用于適當(dāng)施用的形式。藥物賦形劑可以是液體，諸如水和油，包括石油、動(dòng)物、植物或合成來(lái)源的那些油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。藥物賦形劑可以是，例如鹽水、阿拉伯樹膠、明膠、淀粉糊、滑石、角蛋白、膠體二氧化硅、尿素等。另外，可使用輔助劑、穩(wěn)定劑、增稠劑、潤(rùn)滑劑和著色劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥學(xué)上可接受的賦形劑當(dāng)向受試者施用時(shí)是無(wú)菌的。當(dāng)靜脈內(nèi)施用本文所述的任何試劑時(shí)，水是有用的賦形劑。鹽溶液和葡萄糖水溶液以及甘油溶液也可用作液體賦形劑，特別地用于注射液。合適的藥物賦形劑還包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂乳、甘油、丙二醇、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，本文所述的任何組合物還可包含少量的潤(rùn)濕劑或乳化劑或ph緩沖劑。本發(fā)明包括在各種制劑中的本發(fā)明的組合物(例如所述佐劑和疫苗)。本發(fā)明的任何組合物可采取溶液、混懸劑、乳劑、滴劑、片劑、丸劑、丹劑(pellet)、膠囊劑、含有液體的膠囊劑、粉劑、持續(xù)釋放、栓劑、乳劑、氣霧劑、噴霧劑、混懸劑的形式或適合使用的任何其它形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物呈膠囊劑的形式(參見，例如，美國(guó)專利第5,698,155號(hào))。合適的藥物賦形劑的其它實(shí)例描述于remington’spharmaceuticalsciences1447-1676(alfonsor.gennaro編輯，第19版，1995)中，其通過(guò)引用并入本文。必要時(shí)，本發(fā)明的組合物還可包含增溶劑。同樣地，試劑也可用本領(lǐng)域已知的合適的媒介物或遞送裝置進(jìn)行遞送?？蓪⒈疚母攀龅穆?lián)合治療在單一遞送媒介物或遞送裝置中共遞送。用于施用的組合物可任選地包括局部麻醉劑諸如，例如利多卡因，以減輕注射部位的疼痛。包含本發(fā)明的組合物的制劑可以方便地以單位劑型提供，并且可以通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域熟知的任何方法制備。此類方法通常包括使治療劑與載體結(jié)合的步驟，所述載體構(gòu)成一種或多種輔助成分。通常，通過(guò)將治療劑均勻且緊密地與液體載體、細(xì)碎的固體載體或兩者結(jié)合，然后如果需要，將產(chǎn)品塑形為所需制劑的劑型(例如，濕法或干法制粒、粉末混合物等)，隨后使用本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法壓片來(lái)制備制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，將本發(fā)明的任何組合物按照常規(guī)方法配制為適用于本文所述的施用模式的組合物。施用途徑包括肌內(nèi)，例如通過(guò)注射或輸注。在一些實(shí)施方案中，所述基于鞭毛蛋白的劑(例如cblb502)和鋁凝膠或鹽的佐劑可防止基于鞭毛蛋白的劑的全身遞送并誘導(dǎo)局部遞送。在其它實(shí)施方案中，施用途徑包括經(jīng)鼻、口服和舌下遞送。施用途徑還可包括真皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、口服、舌下、鼻內(nèi)、經(jīng)皮，或通過(guò)吸入。在一些實(shí)施方案中，所述施用通過(guò)口服或通過(guò)腸胃外注射來(lái)實(shí)現(xiàn)。施用模式可以由從醫(yī)師判定，并且部分地取決于醫(yī)學(xué)病況的部位。在大多數(shù)情況下，施用導(dǎo)致本文所述的任何藥劑釋放至血流中?？煽诜┯帽景l(fā)明的的任何組合物(例如所述佐劑和疫苗)。此類組合物還可通過(guò)任何其它方便的途徑施用，例如，通過(guò)靜脈內(nèi)輸注或推注，經(jīng)由通過(guò)上皮或粘膜內(nèi)襯(例如，口腔粘膜、直腸和腸粘膜等)的吸收，并且可與另一種生物活性劑一起施用。施用可以是全身性的或局部的。各種遞送系統(tǒng)是已知的，例如，脂質(zhì)體中的包封、微粒、微膠囊、膠囊等中，并且可以用于施用。適于腸胃外施用(例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下和關(guān)節(jié)內(nèi)注射和輸注)的劑型包括例如溶液、混懸劑、分散體、乳液等。還可以以無(wú)菌固體組合物(例如凍干組合物)的形式制備它們，可在即將使用前將其溶解或懸浮在無(wú)菌可注射介質(zhì)中。它們可含有例如本領(lǐng)域已知的懸浮劑或分散劑。本發(fā)明的任何組合物(例如所述的佐劑和疫苗)的劑量以及給藥方案可以取決于各種參數(shù)，包括但不限于所治療的病癥、受試者的一般健康狀況和執(zhí)行醫(yī)生的判定?？梢圆捎皿w外或體內(nèi)測(cè)定來(lái)幫助鑒定最佳劑量范圍。例如，可以參考physicians’deskreference，第66版，pdrnetwork；2012版(2011年12月27日)(其內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文)來(lái)確定劑量。對(duì)于通過(guò)腸胃外注射進(jìn)行的本發(fā)明的組合物(例如所述佐劑和疫苗)的施用，劑量通常為約0.1mg至約250mg/日，約1mg至約20mg/日，或約3mg至約5mg/日?？山o予注射多達(dá)每日4次。通常，當(dāng)口服或腸胃外施用時(shí)，本文所述的任何試劑的劑量通常為約0.1mg至約1500mg/日，或約0.5mg至約10mg/日，或約0.5mg至約5mg/日?？梢允┯酶哌_(dá)約3000mg/日的劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以在囊泡中，特別地脂質(zhì)體中進(jìn)行遞送(參見，langer，1990，science249∶1527-1533；treat等，于liposomesinthetherapyofinfectiousdiseaseandcancer，lopez-berestein和fidler(編輯)，liss，newyork，第353-365頁(yè)(1989))。本文所述的任何組合物(例如所述佐劑和疫苗)可以通過(guò)控制或持續(xù)釋放手段或通過(guò)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的遞送裝置來(lái)施用。實(shí)例包括，但不限于美國(guó)專利第3,845,770號(hào)、第3,916,899號(hào)、第3,536,809號(hào)、第3,598,123號(hào)、第4,008,719號(hào)、第5,674,533號(hào)、第5,059,595號(hào)、第5,591,767號(hào)、第5,120,548號(hào)、第5,073,543號(hào)、第5,639,476號(hào)、第5,354,556號(hào)和第5,733,556號(hào)(其各自通過(guò)引用整體并入本文)中描述的那些手段或裝置。此類劑型可用于使用例如羥丙基甲基纖維素、其它聚合物基質(zhì)、凝膠、可滲透膜、滲透系統(tǒng)、多層包衣、微粒、脂質(zhì)體、微球體或其組合提供一種或多種活性成分的控制釋放或持續(xù)釋放，以提供不同比例的所需釋放譜。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的合適的控制釋放或持續(xù)釋放(包括本文所述的那些)可容易地被選擇來(lái)與本文所述的試劑的活性成分一起使用。本發(fā)明因而提供了適于口服施用的單一單位劑型，諸如但不限于適于控制釋放或持續(xù)釋放的片劑、膠囊、軟膠囊和小膠囊。活性成分的控制或持續(xù)釋放可通過(guò)各種條件刺激，包括但不限于ph的變化、溫度的變化、適當(dāng)波長(zhǎng)的光的刺激、酶的濃度或可用性、水的濃度或可用性或其它生理?xiàng)l件或化合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可使用聚合物材料(參見medicalapplicationsofcontrolledrelease，langer和wise(編輯)，crcpres.，bocaraton，florida(1974)；controlleddrugbioavailability，drugproductdesignandperformance，smolen和ball(編輯)，wiley，newyork(1984)；ranger和peppas，1983，j.macromol.sci.rev.macromol.chem.23：61；也參見levy等，1985，science228：190；during等，1989，ann.neurol.25：351；howard等，1989，j.neurosurg.71：105)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可將控制釋放系統(tǒng)放置在待治療的靶區(qū)域附近，因此僅需要全身劑量的一部分(參見，例如，goodson，于medicalapplicationsofcontrolledrelease，同上，第2卷，第115-138頁(yè)(1984))?？梢允褂糜蒷anger，1990，science249：1527-1533的綜述中討論的其它控制釋放系統(tǒng)。本文發(fā)明的組合物(例如所述佐劑和疫苗)的施用可以獨(dú)立地是每患者一次或可用于加強(qiáng)策略。施用可以是每日約1至約4次或每月約1至約4次，或每年約1至約6次或每?jī)赡?、三年、四年或五?次。施用可持續(xù)約1天或約1個(gè)月、約2個(gè)月、約3個(gè)月、約6個(gè)月、約1年、約2年、約3年的持續(xù)時(shí)間，甚至可以是受試者的一生?？蓪┝靠梢宰鳛閱我粍┝渴┯没蚍殖啥鄠€(gè)劑量。利用本文所述的任何鞭毛蛋白相關(guān)性組合物(和/或另外的試劑)的劑量方案可以根據(jù)多種因素進(jìn)行選擇，所述因素包括受試者的類型、物種、年齡、體重、性別和醫(yī)學(xué)狀況；待治療的病況的嚴(yán)重性；施用途徑；受試者的腎或肝功能；個(gè)體的藥物基因組學(xué)構(gòu)成；和所使用的本發(fā)明的具體化合物。本文所述的任何鞭毛蛋白相關(guān)性組合物(和/或另外的試劑)可以以單一日劑量施用，或者每日總劑量可以以每日兩次、三次或四次的分劑量施用。此外，可在整個(gè)劑量方案中連續(xù)施用而不間歇施用本文所述的任何鞭毛蛋白相關(guān)性組合物(和/或另外的試劑)。在一些實(shí)施方案中，可將本發(fā)明的組合物(例如所述佐劑和疫苗)與一種或多種另外的藥劑結(jié)合使用。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及共施用和/或共配制?？晒餐渲坪?或共同施用本文所述的組合物。在一些實(shí)施方案中，本文所述的任何組合物在與另一試劑共施用時(shí)協(xié)同作用，并且以低于當(dāng)此類藥劑用作單一療法時(shí)通常使用的劑量的劑量施用。在各種實(shí)施方案中，可將本文提及的任何試劑與本文所述的任何組合物組合使用。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本文別處描述的另外的藥劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，可將任何鞭毛蛋白相關(guān)性藥劑或包含其的組合物與刺激nod受體的藥劑(例如nod1和nod2激動(dòng)劑，諸如肽聚糖，c12-ie-dap和l18-mdp)和如infectimmun.2013年10月；81(10)：3855-3864(其內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文)中所述的藥劑一起使用。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及作為額外試劑的化療劑?；焺┑膶?shí)例包括但不限于烷化劑，諸如塞替派和cytoxan環(huán)磷酰胺；烷基磺酸鹽類諸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶類諸如苯并多巴，卡波醌、美妥替哌和烏瑞替派；乙烯亞胺類和甲基密胺，包括六甲蜜胺、三乙撐蜜胺、三乙撐磷酰胺、三乙撐硫代磷酰胺和三輕甲蜜胺；番荔枝內(nèi)酯(acetogenins)(例如，布拉他辛和布拉它辛酮)；喜樹堿(包括合成類似物拓?fù)涮婵?；苔蘚抑素；卡莉他汀類；cc-1065(包括其阿多來(lái)新、卡折來(lái)新和比澤來(lái)新合成類似物)；隱藻素類(例如，隱藻素1和隱藻素8)；多拉司他?。欢嗫仔?包括合成類似物kw-2189和cb1-tm1)；軟珊瑚醇；水鬼蕉堿(pancratistatin)；葡枝珊瑚醇；海綿抑制素；氮芥諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、膽磷酰胺、雌莫司汀、異環(huán)磷酰胺、雙氯乙基甲胺、鹽酸氧氮芥、美法侖、新氮芥、苯芥膽留醇、潑尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亞硝脲類諸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素類諸如烯二炔類抗生素(例如，加利車霉素，尤其是加利車霉素γii和加利車霉素ωii(參見，例如，agnew，chem.intl.ed.engl.，33：183-186(1994))；達(dá)內(nèi)霉素，包括達(dá)內(nèi)霉素a；雙磷酸鹽類，諸如氯膦酸鹽；埃斯波霉素；以及新制癌菌素發(fā)色團(tuán)和相關(guān)色蛋白烯二炔抗生素發(fā)色團(tuán))、阿克拉霉素、放線菌素、氨茴霉素、偶氮絲氨酸、博來(lái)霉素、放線菌素c、卡柔比星、洋紅霉素、嗜癌霉素、色霉素、放線菌素d、柔紅霉素、地托比星、6-二氮雜-5-氧-l-正亮氨酸、亞德理亞霉素(adriamycin)、多柔比星(包括嗎啉代-多柔比星、氰基嗎啉代-多柔比星、2-吡咯啉多柔比星和脫氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊達(dá)比星、麻西羅霉素、絲裂霉素類諸如絲裂霉素c、霉酷酸、諾拉霉素、橄欖霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三鐵阿霉素、羅多比星、鏈黑菌素、鏈佐星、殺結(jié)核菌素、烏苯美司、凈司他丁、佐柔比星；抗代謝物類諸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-fu)；葉酸類似物諸如二甲葉酸、甲氨蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物諸如氟達(dá)拉濱、6-疏基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物諸如安西他濱、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷；雄激素類諸如卡魯睪酮、丙酸屈他雄酮、表硫雄醇、美雄烷、睪內(nèi)酯；抗腎上腺類諸如氨魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補(bǔ)充劑諸如亞葉酸；醋葡醛內(nèi)酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；比曲比新；比生群；依達(dá)曲沙；地磷酰胺；地美可辛；地吖醌；依洛尼塞；依利醋銨；愛波喜龍；依托格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達(dá)明；美登木素生物堿類諸如美登素和安絲菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫呢達(dá)醇；二胺硝吖啶；噴司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰胼；丙卡巴胼；psk多糖復(fù)合物(jhsnaturalproducts，eugene，oreg.)；雷佐生；根霉素；西索菲蘭；螺旋鍺；替奴佐酸；三亞胺醌；2，2′，2″-三氯三乙胺；單端孢霉烯類(例如，t-2毒素、疣孢菌素a、桿孢菌素a和蛇行菌素)；烏拉坦；長(zhǎng)春地辛；達(dá)卡巴嗪；甘露莫司?。欢甯事洞?；二漠衛(wèi)矛醇；哌泊溴烷；加西托星(gacytosine)；阿糖胞苷(“ara-c″)；環(huán)磷酰胺；塞替派；紫杉烷類，例如泰素(taxol)紫杉醇(bristol-myerssquibboncology，princeton，n.j.)、abraxanecremophor-free，白蛋白工程化的紫杉醇納米顆粒制劑(americanpharmaceuticalpartners，schaumberg，111.)和泰素帝(taxotere)多西他賽(rhone-poulencrorer，antony，france)；苯丁酸氮芥；健擇(gemzar)吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲氨蝶呤；鉑類似物諸如順鉑、奧沙利鉑和卡鉑；長(zhǎng)春堿；鉑；依托泊苷(vp-16)；異環(huán)磷酰胺；米托蒽醌；長(zhǎng)春新堿；諾維本(navelbine)、長(zhǎng)春瑞濱；諾肖林(novantrone)；替尼泊苷；依達(dá)曲沙；道諾霉素；氨基蝶呤；希羅達(dá)；伊班膦酸鹽；伊立替康(camptosar，cpt-11)(包括伊立替康與5-fu和甲酰四氫葉酸的治療方案)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑rfs2000；二氟甲基鳥氨酸(dmfo)；維a酸類諸如視黃酸；卡培他濱；考布他?。患柞Ｋ臍淙~酸(lv)；奧沙利鉑，包括奧沙利鉑治療方案(folfox)；拉帕替尼(tykerb)；減少細(xì)胞增殖的pkc-α、raf、h-ras、egfr(例如，埃羅替尼(特羅凱(tarceva))和vegf-a的抑制劑，以及任何上述試劑的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。另外，治療方法還可包括使用放射。另外，治療方法還可包括使用光動(dòng)力療法。在一些實(shí)施方案中，本文所述的基于鞭毛蛋白的劑(和/或另外的藥劑)包括被修飾(即通過(guò)將任何類型的分子共價(jià)附接于組合物，以使得共價(jià)附接不阻止組合物的活性)的衍生物。例如，如但不限于，衍生物包括已通過(guò)，除其它以外，糖基化、脂化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通過(guò)已知的保護(hù)基團(tuán)/封閉基團(tuán)的衍生化、蛋白水解切割、與細(xì)胞配體或其它蛋白質(zhì)的鍵接等修飾的組合物?？赏ㄟ^(guò)已知技術(shù)進(jìn)行任何大量化學(xué)修飾，包括但不限于特異性化學(xué)裂解、乙?；?、甲酰化、衣霉素的代謝合成等。另外，所述衍生物可含有一個(gè)或多個(gè)非經(jīng)典氨基酸。在其它實(shí)施方案中，本文所述的基于鞭毛蛋白的劑(和/或另外的試劑)還包含細(xì)胞毒性劑，其在說(shuō)明性實(shí)施方案中包含毒素、化療劑、放射性同位素、引起細(xì)胞凋亡或細(xì)胞死亡的試劑。可將此類試劑與本文所述的組合物綴合。因此，可翻譯后修飾本文所述的基于鞭毛蛋白的劑(和/或另外的試劑)，以添加效應(yīng)子部分諸如化學(xué)接頭、可檢測(cè)部分諸如熒光染料、酶、底物、生物發(fā)光材料、放射性材料和化學(xué)發(fā)光部分，或功能部分諸如例如鏈霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素、細(xì)胞毒素、細(xì)胞毒性劑和放射性材料。說(shuō)明性細(xì)胞毒性劑包括但不限于甲氨蝶呤、氨基喋呤、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺；烷化劑諸如氮芥、苯丁酸氮芥、美法侖、卡莫司汀(bsnu)、絲裂霉素c、洛莫司汀(ccnu)、1-甲基亞硝脲、環(huán)磷酰胺、氮芥、白消安、二溴甘露醇、鏈脲佐菌素、絲裂霉素c、順-二氯二胺鉑(ii)(ddp)順鉑和卡鉑(帕拉帕汀)；蒽環(huán)霉素包括柔紅霉素(以前稱為道諾霉素)、多柔比星(亞德利亞霉素)、地托比星、洋紅霉素、伊達(dá)比星、表柔比星、米托蒽醌和比生群；抗生素類包括更生霉素(放線菌素d)、博來(lái)霉素、加利車霉素、光輝霉素和安曲霉素(amc)；和抗有絲分裂劑諸如長(zhǎng)春花生物堿、長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春堿。其它細(xì)胞毒性劑包括紫杉醇(泰素)、蓖麻毒素、假單胞菌外毒素、吉西他濱、細(xì)胞松弛素b、短桿菌肽d、溴化乙錠、依米丁、依托泊苷、替尼泊苷、秋水仙堿、二羥基炭疽菌素二酮、1-脫氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾、嘌呤霉素、丙卡巴肼、羥基脲、天冬酰胺酶、皮質(zhì)類固醇、米托坦(mytotane)(o，p′-(ddd))、干擾素和這些細(xì)胞毒性劑的混合物。其它細(xì)胞毒性劑包括但不限于化療劑如卡鉑、順鉑、紫杉醇、吉西他濱、加利車霉素、多柔比星、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素c、放線菌素d、環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春新堿、博來(lái)霉素、vegf拮抗劑、egfr拮抗劑、鉑、泰素、伊立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、甲酰四氫葉酸、甾類、環(huán)磷酰胺、美法侖、長(zhǎng)春花生物堿(例如，長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛和長(zhǎng)春瑞濱)、鹽酸氮芥、酪氨酸激酶抑制劑、放射療法、性激素拮抗劑、選擇性雄激素受體調(diào)節(jié)劑、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑、pdgf拮抗劑、tnf拮抗劑、il-1拮抗劑、白細(xì)胞介素(例如il-12或il-2)、il-12r拮抗劑、偶聯(lián)有毒素的單克隆抗體、腫瘤抗原特異性單克隆抗體、愛必妥、阿瓦斯丁、培妥珠單抗、抗-cd20抗體、利妥昔單抗(rituxan)、奧瑞珠單抗、奧法木單抗、dxl625、或其任何組合?？蓪?lái)自植物和細(xì)菌的毒性酶諸如蓖麻毒素、白喉毒素和假單胞菌毒素綴合于治療劑(例如抗體)以產(chǎn)生細(xì)胞類型特異性殺傷試劑(youle等，proc.nat′lacad.sci.usa77：5483(1980)；gilliland等，proc.nat′lacad.sci.usa77：4539(1980)；krolick等，proc.nat′lacad.sci.usa77：5419(1980))。其它細(xì)胞毒性劑包括如由goldenberg在美國(guó)專利第6,653,104號(hào)中描述的細(xì)胞毒性核糖核酸酶。本發(fā)明的實(shí)施方案還涉及放射免疫綴合物，其中在使用或不使用復(fù)合物形成劑的情況下將發(fā)射α或β粒子的放射性核素穩(wěn)定偶聯(lián)至抗體或其結(jié)合片段。此類放射性核素包括β發(fā)射體諸如磷-32、鈧-47、銅-67、鎵-67、釔-88、釔-90、碘-125、碘-131、釤-153、镥-177、錸-186或錸-188、以及α-發(fā)射體諸如砹-211、鉛-212、鉍-212、鉍-213或錒-225。說(shuō)明性可檢測(cè)部分還包括但不限于辣根過(guò)氧化物酶、乙酰膽堿酯酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和熒光素酶。其它說(shuō)明性熒光材料包括但不限于羅丹明、熒光素、異硫氰酸熒光素、傘形酮、二氯三嗪基胺、藻紅蛋白和丹磺酰氯。其它說(shuō)明性化學(xué)發(fā)光部分包括但不限于魯米諾。其它說(shuō)明性生物發(fā)光材料包括但不限于熒光素和水母發(fā)光蛋白。其它說(shuō)明性放射性材料包括但不限于碘-125、碳-14、硫-35、氚和磷-32。在一些實(shí)施方案中，受試者和/或動(dòng)物是哺乳動(dòng)物，例如人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、貓、馬、牛、豬、兔、綿羊或非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物諸如猴、黑猩猩或狒狒。在其它實(shí)施方案中，受試者和/或動(dòng)物是非哺乳動(dòng)物，諸如，例如斑馬魚。在一些實(shí)施方案中，受試者和/或動(dòng)物可包包含熒光標(biāo)記的細(xì)胞(利用例如gfp)。在一些實(shí)施方案中，受試者和/或動(dòng)物是包含熒光細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，受試者和/或動(dòng)物是人。在一些實(shí)施方案中，所述人是兒科的人。在其它實(shí)施方案中，所述人是成人。在其它實(shí)施方案中，所述人是老年人。在其它實(shí)施方案中，可將人稱為患者。在某些實(shí)施方案中，所述人的年齡范圍為約0個(gè)月至約6個(gè)月大、約6至約12個(gè)月大、約6至約18個(gè)月大、約18至約36個(gè)月齡大、約1至約5歲、約5至約10歲、約10至約15歲、約15至約20歲、約20至約25歲、約25至約30歲、約30至約35歲、約35至約40歲、約40至約45歲、約45至約50歲、約50至約55歲、約55至約60歲、約60至約65歲、約65至約70歲、約70至約75歲、約75至約80歲、約80至約85歲、約85至約90歲、約90至約95歲或約95至約100歲。在其它實(shí)施方案中，受試者是非人動(dòng)物，因此本發(fā)明涉及獸醫(yī)用途。在具體實(shí)施方案中，非人動(dòng)物是家庭寵物。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，非人動(dòng)物是家畜。本發(fā)明提供了可簡(jiǎn)化本文所述的任何試劑的施用的試劑盒。本發(fā)明的說(shuō)明性試劑盒包括本文所述的以單位劑型存在的任何組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，單位劑型是容器，諸如預(yù)填充的注射器，其可以是無(wú)菌的，含有本文所述的任何試劑和藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或媒介物。試劑盒還可包含指導(dǎo)本文所述的任何試劑的使用的標(biāo)簽或印刷說(shuō)明書。試劑盒還可包括開瞼器、局部麻醉劑和用于施用位置的清潔劑。試劑盒還可包含本文所述的一種或多種另外的試劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒包含含有有效量的本發(fā)明的組合物和有效量的另一種組合物(如本文所述的那些組合物)的容器。將以下定義與本文公開的本發(fā)明結(jié)合使用。除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的相同的含義。如本文所使用的，“一個(gè)/一種(a)”、“一個(gè)/一種(an)”或“該(the)”可以表示一個(gè)或超過(guò)一個(gè)。另外，當(dāng)結(jié)合所引用的數(shù)字指示使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“約”意指所引用的數(shù)字指示加上或減去高達(dá)所引用的數(shù)字指示的10％。例如，語(yǔ)言“約50”覆蓋45至55的范圍。當(dāng)與醫(yī)學(xué)用途結(jié)合使用時(shí)，“有效量”是對(duì)于提供目標(biāo)疾病的可測(cè)量的治療、預(yù)防或發(fā)病率的降低是有效的量。如本文中所使用的，如果在試劑或刺激存在的情況下相對(duì)于此類調(diào)節(jié)的不存在，活性和/或作用的讀出減少顯著的量，例如減少至少約10％、至少約20％、至少約30％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、至少約95％、至少約97％、至少約98％或更多、高達(dá)且包括至少約100％，則某物“減少”。如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解的，在一些實(shí)施方案中，活性降低，并且一些下游讀出將減小，但其它讀出可增加。相反，如果在試劑或刺激存在的情況下相對(duì)于此類試劑或刺激的不存在，活性和/或作用的讀出例如增加顯著的量，例如增加至少約10％、至少約20％、至少約30％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、至少約95％、至少約97％、至少約98％或更高、高達(dá)并包括至少約100％或更高、至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、至少約10倍、至少約50倍、至少約100倍，則活性“增加”。如本文中所述，除非另有說(shuō)明，否則所有組成百分比均按總組合物的重量計(jì)。如本文中所用，詞語(yǔ)“包括”及其變體旨在是非限制性的，以使得列表中的項(xiàng)目的引述不排除也可在該技術(shù)的組合物和方法中使用的其它類似項(xiàng)目。類似地，術(shù)語(yǔ)“能夠”和“可以”及其變體旨在是非限制性的，以使得實(shí)施方案能夠包含或可以包含某些元素或特征的引述不排除本技術(shù)的不包含那些元素或特征的其它實(shí)施方案。雖然在本文中使用開放性術(shù)語(yǔ)“包含”作為術(shù)語(yǔ)諸如包括、含有或具有的同義詞來(lái)描述和要求保護(hù)本發(fā)明，但是本發(fā)明或其實(shí)施方案可以可替代的地使用替代術(shù)語(yǔ)諸如“由...組成”或“基本上由...組成”來(lái)描述。如本文所使用的，詞語(yǔ)“優(yōu)選的”和“優(yōu)選地”是指在某些情況下提供某些益處的技術(shù)的實(shí)施方案。然而，在相同或其他情況下，其它實(shí)施方案也可以是優(yōu)選的。此外，一個(gè)或多個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案的引述并不意味著其它實(shí)施方案是無(wú)用的，并且不旨在將其它實(shí)施方案排除在本技術(shù)的范圍之外。本文所述的實(shí)現(xiàn)治療作用所需的組合物的量可根據(jù)用于特定目的的常規(guī)方法憑經(jīng)驗(yàn)確定。通常，為了施用治療劑(例如基于鞭毛蛋白的劑、本文所述的基于鞭毛蛋白的劑(和/或另外的劑))以用于治療目的，以藥理學(xué)有效劑量給予治療劑。“藥理學(xué)有效量”、“藥理學(xué)有效劑量”、“治療有效量”或“有效量”是指足以產(chǎn)生所需的生理作用的量或能夠?qū)崿F(xiàn)所需的結(jié)果(特別是用于治療病癥或疾病)的量。本文使用的有效量將包括足以例如延遲病癥或疾病的癥狀的發(fā)展，改變病癥或疾病的癥狀的進(jìn)程(例如，減緩病癥或疾病的癥狀進(jìn)展)，減少或消除病癥或疾病的一個(gè)或多個(gè)癥狀或性能，以及逆轉(zhuǎn)病癥或疾病的癥狀。例如，向患有癌癥的患者施用治療劑不僅在基礎(chǔ)病況被根除或改善時(shí)，而且還在患者報(bào)告與疾病相關(guān)的癥狀的嚴(yán)重性或持續(xù)時(shí)間減少時(shí)提供治療益處，例如，腫瘤負(fù)荷的減輕，循環(huán)腫瘤細(xì)胞的減少，無(wú)進(jìn)展存活的增加。治療益處還包括終止或減緩基礎(chǔ)疾病或病癥的進(jìn)展，而不管是否實(shí)現(xiàn)改善。有效量、毒性和治療效率可通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)制藥程序來(lái)確定，所述程序例如用于測(cè)定ld50(對(duì)約50％的群體致死的劑量)和ed50(在約50％的人口中治療上有效的劑量)。劑量可根據(jù)所使用的劑型和所使用的施用途徑而變化。毒性與治療作用之間的劑量比是治療指數(shù)，并且可以表示為比率ld50/ed50。在一些實(shí)施方案中，表現(xiàn)出大的治療指數(shù)的組合物和方法是優(yōu)選的。最初可從體外測(cè)定法，包括例如細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定法估計(jì)治療有效劑量。此外，還可在動(dòng)物模型中配制劑量以獲得包括在細(xì)胞培養(yǎng)物中或在合適的動(dòng)物模型中測(cè)定的ic50的循環(huán)血漿濃度范圍。所述組合物在血漿中的水平可以例如通過(guò)高效液相色譜測(cè)量?？赏ㄟ^(guò)合適的生物測(cè)定法監(jiān)測(cè)任何特定劑量的作用。劑量可由醫(yī)生確定并且根據(jù)需要調(diào)整以適合觀察到的治療作用。在某些實(shí)施方案中，所述作用將導(dǎo)致至少約10％、至少約20％、至少約30％、至少約50％、至少約70％或至少約90％的可定量的變化。在一些實(shí)施方案中，所述作用將導(dǎo)致約10％、約20％、約30％、約50％、約70％或甚至約90％或更多的可定量的變化。治療益處還包括終止或減緩基礎(chǔ)疾病或病癥的進(jìn)展，而不管是否實(shí)現(xiàn)改善。在某些實(shí)施方案中，將治療癌癥的藥理學(xué)有效量通常將調(diào)節(jié)癥狀至少約10％、至少約20％、至少約30％、至少約40％或至少約50％。在說(shuō)明性實(shí)施方案中，此類調(diào)節(jié)將導(dǎo)致例如癌細(xì)胞數(shù)量的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的和可量化的變化。本發(fā)明通過(guò)以下非限制性實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例實(shí)施例1：模型疫苗的制備將明礬佐劑(imjectalum，thermo)與cblb502組合使用以用模型抗原卵清蛋白(ova)攻擊小鼠。疫苗由表a所示的以下組分組成：組分量(每小鼠)卵清蛋白10mgcblb5021ug/10ug明礬佐劑500ug為了實(shí)現(xiàn)優(yōu)異的吸收，在室溫下以300rpm將cblb502(1ug或10ug)與10mgova和500μg明礬佐劑混合30分鐘。實(shí)施例2：小鼠免疫研究將c57b1/6雄性小鼠(10周齡，每個(gè)實(shí)驗(yàn)n＝6)用于注射。將小鼠分成五組，每組6只動(dòng)物(n＝6)。如表b中所示，在每只后腿中給小鼠注射100μl上述疫苗(每只小鼠總共200μl)。卵清蛋白cblb502明礬佐劑組1組210mg組310mg500ug組410mg1ug500ug組510mg10ug500ug在初次免疫后兩周，按照與原始注射相同的設(shè)置用另外的加強(qiáng)劑攻擊小鼠。在加強(qiáng)后1周、2周和4周經(jīng)由下頜靜脈收集血漿。使用基于elisa的測(cè)定，測(cè)量總igg、igg1、igg2a、igg2b和igg3。結(jié)果示于圖2-3中。在圖中，組1也稱為“未處理的”；組2也稱為“ova”，組3也稱為“ova+明礬”，組4也稱為“sa1μg”，且組5也稱為“sa10μg”。圖2顯示在加強(qiáng)后1周的時(shí)間點(diǎn)上5個(gè)上述小鼠處理組的平均應(yīng)答的elisa數(shù)據(jù)。圖3顯示在加強(qiáng)后2周的時(shí)間點(diǎn)上5個(gè)上述小鼠處理組的平均應(yīng)答的elisa數(shù)據(jù)。圖4顯示在加強(qiáng)后4周的時(shí)間點(diǎn)上5個(gè)上述小鼠處理組的平均應(yīng)答的elisa數(shù)據(jù)。實(shí)施例3：cblb502與鋁膠的結(jié)合的評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)了鋁膠對(duì)cblb502的結(jié)合能力。將鋁膠佐劑2％、氫氧化鋁濕凝膠(膠體)懸浮液(invivigen目錄號(hào)vac-alu-250)與cblb502以不同的體積比混合，在反應(yīng)中得到10％至52％的鋁膠懸浮液。cblb502濃度保持在10μg/ml，對(duì)應(yīng)于1μg/100μl接種劑量(100μl接種體積是用于小鼠每個(gè)注射部位的抗原/佐劑混合物的皮下注射的推薦最大體積)。在4℃下孵育過(guò)夜后，將試管離心以沉淀鋁膠，并通過(guò)elisa測(cè)量保留在溶液中的未結(jié)合的cblb502。將吸附的cblb502的量計(jì)算為加入至混合物中的總蛋白與未結(jié)合的cblb502之間的差(表c)。當(dāng)用40至52μl鋁膠/100μl配制反應(yīng)物時(shí)，觀察到cblb502的最大吸附(超過(guò)99.9％的結(jié)合)；在較低的比率下，在10μl/100μl鋁膠懸浮液下，結(jié)合效率逐漸降低至約83％。表c：不同鋁膠2％體積比下的cblb502吸附。結(jié)合反應(yīng)物由cblb502、pbs和指定體積的鋁膠佐劑2％組成。還在不同的cblb502劑量下評(píng)估了cblb502與鋁膠的結(jié)合。在約0.02μg/100μl至20μg/100μl的范圍內(nèi)變化的cblb502劑量下測(cè)定cblb502至鋁膠(52μl/100μl鋁膠佐劑2％)的吸附。如上所述孵育反應(yīng)物，并通過(guò)elisa測(cè)量未結(jié)合的cblb502。結(jié)果(表d)表明在所有測(cè)試的cblb502濃度下實(shí)現(xiàn)藥物與鋁膠的幾乎完全結(jié)合(99.82至99.99％的結(jié)合)。表d：cblb502與pbs中的鋁膠的結(jié)合的效率。用在pbs中的指定劑量的cblb502和52μl/100μl鋁膠佐劑2％進(jìn)行孵育。評(píng)價(jià)在tt-sma疫苗存在的情況下cblb502與鋁膠的結(jié)合。在疫苗候選物tt-sma(綴合至破傷風(fēng)類毒素的琥珀酰甲基苯丙胺(sma)半抗原)存在的情況下測(cè)試cblb502與鋁膠的結(jié)合效率。在如下所示的單獨(dú)研究中，將該疫苗以32μg/100μl劑量向小鼠施用，以比較在cblb502的情況下與無(wú)cblb502的情況下的功效。在標(biāo)準(zhǔn)條件下將該tt-sma劑量與cblb502(0.02至20μg/100μl)和鋁膠(52μl/100μl)共孵育，并通過(guò)elisa測(cè)量未結(jié)合的cblb502。在所有測(cè)試的cblb502濃度下，結(jié)合效率為99.7至99.9％，表明cblb502至鋁膠的吸附不受向反應(yīng)混合物中加入tt-sma的影響表e.在tt-sma存在的情況下cblb502與鋁膠的結(jié)合。使用pbs中的指定劑量的cblb502、52μl/100μl鋁膠佐劑2％和32μg/100μltt-sma綴合物進(jìn)行孵育。實(shí)施例4：吸附至鋁膠上后體外cblb502活性的分析使用293-htlr5-lacz報(bào)告細(xì)胞進(jìn)行cblb502/鋁膠的活性測(cè)定。使用測(cè)量hek293-htlr5::nf-κb-lacz(293-htlr5-lacz)細(xì)胞中的nf-κb控制的報(bào)告酶即β-半乳糖苷酶的激活的體外測(cè)定來(lái)測(cè)試cblb502在吸附至鋁膠后的生物活性。因?yàn)?93-htlr5-lacz細(xì)胞僅表達(dá)一種細(xì)胞膜結(jié)合的toll樣受體即人tlr5，所以可測(cè)定cblb502的活性而不受來(lái)自其它toll樣受體配體諸如lps(內(nèi)毒素)的干擾。在細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中以2000倍稀釋開始并且導(dǎo)致從25至0.004ng/ml的鋁膠吸附的cblb502的濃度范圍后，用連續(xù)稀釋的cblb502/鋁膠制劑(5μg/100μl)孵育細(xì)胞(圖5)，證明cblb502/鋁膠對(duì)β-半乳糖苷酶報(bào)告子的特異性誘導(dǎo)。在0.93ng/ml鋁膠吸附的cblb502處觀察到最大β-半乳糖苷酶活性；該值與使用可溶性cblb502物的測(cè)定的典型結(jié)果(其中報(bào)告酶活性通常在1ng/ml左右達(dá)到峰值)一致。以相同稀釋度單獨(dú)測(cè)試的鋁膠不誘導(dǎo)報(bào)告子。因此，可以得出，除其它以外，cblb502在吸附到鋁膠之后保持其生物活性，并且在常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)條件下變得可容易用于與其靶受體(tlr5)相互作用。隨后，以范圍為2.5至0.00015μg/100μl的cblb502接種劑量制備cblb502/鋁膠懸浮液，并以200倍稀釋添加至293-htlr5-lacz細(xì)胞中(圖6)。nf-κb誘導(dǎo)活性遵循典型的劑量-應(yīng)答模式，并在亞納克劑量的cblb502/鋁膠(小于0.001μg/100μl)下測(cè)量到所述活性，表明在此類低劑量下，cblb502并非不可逆地結(jié)合至明礬佐劑并保持活性。在不同的cblb502劑量下進(jìn)行cblb502/鋁膠的活性滴定。在細(xì)胞培養(yǎng)基中滴定cblb502/鋁膠懸浮液，并與293-htlr5-lacz細(xì)胞進(jìn)行孵育。將cblb502標(biāo)準(zhǔn)包括在測(cè)定中以比較回收的活性。將所得報(bào)告酶活性針對(duì)鋁膠結(jié)合的cblb502的理論濃度繪圖，假設(shè)蛋白是完全可利用的(圖7)。滴定測(cè)定的結(jié)果表明，在20μg/100μl的制劑劑量下，cblb502的活性遵循預(yù)期濃度，基本上匹配可溶性標(biāo)準(zhǔn)物的活性。然而，分別達(dá)到約0.31μg/100μl和0.078μg/100μl的64倍和256倍的劑量減少導(dǎo)致至約15-30％的nf-κb誘導(dǎo)活性的較低的相對(duì)回收。cblb502活性的該明顯損失可能歸因于特定量的蛋白質(zhì)相對(duì)于制劑中的所述量的明礬的更強(qiáng)的結(jié)合。這些固定量可代表較高劑量(諸如20μg/100μl)下的總cblb502的一小部分，并且不會(huì)顯著影響測(cè)量的活性。然而，在較低劑量下，該緊密吸附的部分相較于總蛋白質(zhì)可變得顯著，這導(dǎo)致cblb502的較低的可測(cè)量活性實(shí)施例5：在4℃下評(píng)估cblb502/鋁膠短期儲(chǔ)存穩(wěn)定性制備1μg/100μlcblb502(52μl/100μl鋁膠2％)的制劑，并在4℃下儲(chǔ)存2和6天后測(cè)試活性。使用293-htlr5-lacz報(bào)告細(xì)胞的cblb502活性測(cè)定的結(jié)果示于圖8中。基于與可溶性cblb502標(biāo)準(zhǔn)物的比較，可以得出鋁膠吸附的cblb502的nf-κb誘導(dǎo)活性在所述儲(chǔ)存條件下6天后保持不變。實(shí)施例6：在pbs和細(xì)胞培養(yǎng)基中評(píng)價(jià)來(lái)自鋁膠的cblb502解離將cblb502/鋁膠(1μg/100μl劑量；52μl/100μl鋁膠2％)的等分重懸于pbs或細(xì)胞培養(yǎng)基(補(bǔ)充有10％fbs的dmem)中，并在22℃和37℃下孵育3小時(shí)。在離心除去鋁膠后，通過(guò)elisa測(cè)定上清液中解離的cblb502。在孵育過(guò)程中回收的cblb502量的計(jì)算表明蛋白質(zhì)保持與pbs中的鋁膠穩(wěn)定締合；然而，在細(xì)胞培養(yǎng)基中，在22℃和37℃下從復(fù)合物中分別釋放了28％和53％的cblb502(表f)。此類在培養(yǎng)基中從鋁膠的快速解離可以通過(guò)血清蛋白促進(jìn)，所述血清蛋白可用明礬從復(fù)合物置換cblb502，解釋了蛋白質(zhì)在基于細(xì)胞的活性測(cè)定中如何變得可容易獲得。表f：在pbs和細(xì)胞培養(yǎng)基中孵育后從鋁膠中回收cblb502實(shí)施例7：皮下施用cblb502/鋁膠后小鼠血清中cblb502和細(xì)胞因子水平的定量進(jìn)行動(dòng)物研究以評(píng)價(jià)在施用cblb502/鋁膠制劑后測(cè)定血清中的cblb502和細(xì)胞因子水平的方法的可行性。研究設(shè)計(jì)呈現(xiàn)在表g中。在該研究中，向小鼠皮下注射1μg劑量的吸附至52μl/100μl鋁膠2％的cblb502，并在接種后0.5與24小時(shí)之間收集血清樣品。表g.研究設(shè)計(jì).通過(guò)elisa測(cè)定cblb502的血清濃度，并在用cblb502/鋁膠接種的所有動(dòng)物組中發(fā)現(xiàn)可測(cè)量水平的cblb502的血清濃度。表示每組平均血清cblb502濃度的藥代動(dòng)力學(xué)特征譜顯示在圖9中。在第一血液收集時(shí)間點(diǎn)(施用后0.5小時(shí))觀察到最大平均cblb502濃度(0.516ng/ml)；最小濃度為24小時(shí)時(shí)的0.012ng/ml。在2.4小時(shí)計(jì)算cblb502的半衰期消除。如上所討論，在含有10％胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中孵育后，cblb502從與鋁膠的復(fù)合物中快速解離。因此，應(yīng)當(dāng)預(yù)期在接種后不久可看到從明礬釋放至動(dòng)物血流中的蛋白。通過(guò)elisa在收集的小鼠血清樣品中測(cè)量三種細(xì)胞因子kc、g-csf和il-6的濃度(圖10)。在cblb502/鋁膠施用后1小時(shí)檢測(cè)到kc和il-6的快速誘導(dǎo)；在2小時(shí)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定到最大每組平均濃度，分別為29624pg/ml和479pg/ml。達(dá)到最大值后，這些細(xì)胞因子的血液水平在注射后4至8小時(shí)降至基線。相較于kc和il-6，血清g-csf濃度在約1小時(shí)后增加，并且在cblb502/鋁膠施用后2與4小時(shí)之間最大(在2小時(shí)和4小時(shí)時(shí)分別為7141pg/ml和7169pg/ml的每組平均濃度)。然而，cblb502誘導(dǎo)的g-csf水平以較慢的速率下降，在24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)保持高于基線。通常，cblb502/鋁膠施用后的細(xì)胞因子誘導(dǎo)的動(dòng)力學(xué)與在注射可溶性cblb502制劑后觀察到的動(dòng)力學(xué)相似，表明該藥物制劑的一致性作用。實(shí)施例8：具有甲基苯丙胺疫苗的cblb502佐劑該研究評(píng)價(jià)了在32μg劑量的人甲基苯丙胺疫苗(sma-tt)下的cblb502佐劑在小鼠中實(shí)現(xiàn)高水平和長(zhǎng)期水平的抗ma抗體。研究了具有tt-sma和明礬的范圍從0.03μg變化至20μg的低至高劑量的cblb502。將10組(n＝5)balb/c雌性小鼠用于相較于未接種的對(duì)照和僅利用502的tt-sma，測(cè)試與32μg的tt-sma和1.5mg明礬組合的0μg、0.03μg、0.1μg、0.3μg、1μg、3μg、10μg、20μg的502。在初次接種后3和6周，向所有接種的組施用兩次加強(qiáng)劑。通過(guò)elisa評(píng)估初次接種后2、4和6周收集的匯集的血清樣品中的抗-maigg水平。與較高劑量(1至20μg)的502相比，抗體水平在0.03μg至0.3μg的502處較高。在該實(shí)驗(yàn)中，在具有0.1μg的502與tt-sma和明礬組合的組(組4)中，抗體水平為僅具有tt-sma和明礬的比較組(組1)中的2倍，且當(dāng)與僅具有tt-sma和502的組(組2)相比較時(shí)為其4倍，如圖11(圖a)中顯示的。還評(píng)價(jià)了相同血清樣品中的抗-502抗體。如圖11(圖b)所示，抗-502抗體的水平在502的低劑量范圍處最低，且在502的較高劑量下增加。實(shí)施例9：具有各種抗原的疫苗的產(chǎn)生在本實(shí)施例中，用于佐劑增強(qiáng)疫苗的佐劑組分的組成通過(guò)測(cè)試任選地與抗原(諸如，通過(guò)非限制性方式，nod1激動(dòng)劑c12-ie-dap)組合的一系列劑量的cblb502和cblb502來(lái)建立。此外，進(jìn)行這些試劑對(duì)針對(duì)模型抗原(卵清蛋白)的體液免疫應(yīng)答的作用的表征。如上所示，氫氧化鋁和cblb502形成復(fù)合物，不希望受理論束縛，其在水性介質(zhì)中作為具有相反電荷的物質(zhì)而被靜電力穩(wěn)定。為了測(cè)試疫苗的佐劑組分的不同組成的相對(duì)效力，使用負(fù)載有一定范圍劑量的cblb502(高達(dá)30μg，且包括10μg、3μg、1μg、0.3μg和0.1μg)的標(biāo)準(zhǔn)劑量的鋁(每次注射1.5μg)。將于水溶液中的cblb502添加至pbs中的明礬懸浮液中并在室溫下攪拌10分鐘。然后通過(guò)離心使氫氧化鋁離心沉淀，并使用兩種定量分析測(cè)定測(cè)定上清液中的痕量cblb502：(i)基于elisa的和(ii)基于報(bào)告細(xì)胞的(攜帶nf-κb響應(yīng)報(bào)告子的tlr5-陽(yáng)性293細(xì)胞，并校準(zhǔn)培養(yǎng)基中的cblb502的檢測(cè))。除其它以外，根據(jù)上述實(shí)施例，預(yù)期在這些條件下和在所選擇的tlr5激動(dòng)劑的劑量范圍內(nèi)，大部分cblb502將穩(wěn)定結(jié)合至明礬。為了確定該佐劑是否在疫苗注射部位保持定位，將使用在它們的種系中攜帶在nf-κb響應(yīng)啟動(dòng)子的控制下的螢火蟲熒光素酶cdna的成年balb/c雌性小鼠(n＝10)。這些“nf-κb報(bào)告小鼠”是通過(guò)監(jiān)測(cè)tlr5陽(yáng)性組織諸如肝臟或小腸中的熒光素酶活性來(lái)檢測(cè)cblb502從注射部位的釋放的靈敏工具。將僅使用一個(gè)劑量的含cblb502的佐劑制劑，所述劑量對(duì)應(yīng)于在體外顯示作為具有明礬的組合物的穩(wěn)定性的最高劑量(推測(cè)為30μg)。兩個(gè)劑量的游離cblb502(1和3μg，于水溶液中，皮下注射)將用于比較以作為全身性分布的tlr5激動(dòng)劑的陽(yáng)性對(duì)照。在佐劑注射后2、4、6和18小時(shí)，在熒光素注射后，使用發(fā)光成像器在體內(nèi)進(jìn)行熒光素酶檢測(cè)。對(duì)于更準(zhǔn)確和靈敏的檢測(cè)，在佐劑制劑注射后6小時(shí)處死來(lái)自每組的3只動(dòng)物，并從注射部位、最接近注射部位的淋巴結(jié)和肝臟收集組織。在組織裂解后，在這些組織樣品中定量指示cblb502存在的熒光素酶活性的水平。除了基于其預(yù)期的nf-κb誘導(dǎo)活性的cblb502的功能檢測(cè)以外，還使用用于直接檢測(cè)組織提取物中的cblb502的已建立的靈敏elisa測(cè)定的可替代的分析方法。將含有上述劑量范圍的cblb502的佐劑制劑與10mg卵清蛋白混合，并如本文所述進(jìn)行接種，然后通過(guò)elisa測(cè)定不同類別的抗-白蛋白igg(igg1、igg2a、igg2b和igg3)抗體的滴度。將結(jié)果與“僅有明礬”的對(duì)照進(jìn)行比較。對(duì)不同igg類型的作用的確定提供了佐劑對(duì)不同免疫途徑(例如th1-對(duì)比th2-介導(dǎo)的途徑)的銜接程度的定義。在確定佐劑的組成(根據(jù)抗卵清蛋白抗體誘導(dǎo)效力)后，通過(guò)在制劑中添加nod1激動(dòng)劑c12-ie-dap來(lái)測(cè)試免疫的額外增強(qiáng)。此外，還在小鼠中進(jìn)行在不同cblb502劑量下產(chǎn)生針對(duì)抗原的抗體的疫苗效力的測(cè)定。選擇雌性小鼠，因?yàn)樗鼈兙哂斜刃坌孕∈蟾鼜?qiáng)的免疫應(yīng)答，并且balb/c小鼠由于其強(qiáng)大的免疫應(yīng)答而為免疫學(xué)研究中常用的品系。在研究開始時(shí)，小鼠體重為約25g，并且將其分組安置(每籠5只)在具有玉米芯墊層聚碳酸酯和頂部的標(biāo)準(zhǔn)丙烯酸籠(7”x11”x5”)中。小鼠可隨意獲得食物(harlan)和水。將該動(dòng)物房保持在22±1℃和12∶12光/暗周期(在上午6點(diǎn)亮燈)。所有實(shí)驗(yàn)流程由機(jī)構(gòu)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)(institutionalanimalcareandusecommittee，iacuc)批準(zhǔn)并且在“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南(guideforthecareanduseoflaboratoryanimals)”中描述的指導(dǎo)方針內(nèi)。在臀肌中給小鼠肌內(nèi)注射疫苗。在初次免疫后3和6周，每組任選地用具有相同疫苗制劑的加強(qiáng)劑量免疫。如果持續(xù)抗體水平不維持至少4周，則在第10周給予另外的免疫。在最初免疫后14天、28天、42天、56天和84天抽取血液，并使其在室溫下凝固2小時(shí)。在以4000rpm離心15分鐘后收集血清。將樣品儲(chǔ)存在-80度，直至準(zhǔn)備進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)。在具有抗原x的疫苗的情況下，通過(guò)elisa評(píng)估抗-抗原x特異性抗體。為了測(cè)量所述抗體，使用魚明膠(其為異源載體蛋白)作為sma的綴合物伴侶，在碳酸鹽緩沖液(0.05m；ph9.6)中包被elisa板(immulon2hb，daigger，vernonhills，il)過(guò)夜。將匯集的或單獨(dú)的血清樣品以2倍連續(xù)稀釋(始于磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)-tween(0.1％)中的1k)添加至板中，并孵育2小時(shí)。在添加綴合有辣根過(guò)氧化物酶(hrp)(southernbiotech，birmingham，al)的山羊抗-小鼠igg之前，用pbs-tween洗滌板。將板再孵育30分鐘并洗滌，隨后添加底物(四甲基聯(lián)苯胺，sigma，st.louis，mo)。將平板在黑暗中孵育45分鐘，然后用1mhcl終止反應(yīng)。將來(lái)自具有抗原x交聯(lián)的抗體的平板上所得的黑點(diǎn)的光密度(od)用于使用microplatemanager6.1版軟件在微量板讀數(shù)器(imark微量板吸光度讀數(shù)器(imarkmicroplateabsorbancereader))上測(cè)量滴度水平。使用sigmaplot(systatsoftwareinc.)分析elisa數(shù)據(jù)，并且將從每個(gè)樣品中扣除僅與載體的背景抗體結(jié)合。在每個(gè)板中用直接結(jié)合在連續(xù)稀釋的孔中的純化小鼠igg(sigma)的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較。實(shí)施例10：基于cblb502的佐劑/疫苗與基于鞭毛蛋白的佐劑/疫苗的比較使用例如實(shí)施例9的方法和研究設(shè)計(jì)(任選具有抗原)，對(duì)鞭毛蛋白/明礬佐劑頭對(duì)頭地測(cè)試上述實(shí)施例的cblb502/明礬佐劑。此外，用鞭毛蛋白/明礬佐劑重復(fù)全部在上述實(shí)施例中描述的明礬結(jié)合和解離研究以及小鼠評(píng)價(jià)研究以與cblb502/明礬佐劑比較。還測(cè)試了cblb502變體，即cblb502-s33mx的功效。在一個(gè)比較實(shí)驗(yàn)中，用與鞭毛蛋白、cblb502或cblb502-s33mx共吸附至鋁膠上的tt-sma(其為甲基苯丙胺疫苗并且被說(shuō)明性地使用)免疫一組小鼠(n＝6)。在研究的第0、14和28天進(jìn)行免疫。每個(gè)免疫劑量包括32μgtt-sma和如下佐劑：組1：0.03μg鞭毛蛋白，組2：0.1μg鞭毛蛋白，組3：0.3μg鞭毛蛋白，組4：1μg鞭毛蛋白，組5：0.03μgcblb502，組6：0.1μgcblb502，組7：0.3μgcblb502，組8：1μgcblb502，組9：0.03μgcblb502-s33mx，組10：0.1μgcblb502-s33mx，組11：0.3μgcblb502-s33mx，和12：1μgcblb502-s33mx在第-1天(免疫前血清)、第14天(初免后)、第28天(第一次加強(qiáng)后)和第35天(第二次加強(qiáng)后)收集和分析血清樣品。例如，分析血清樣品的抗-甲基苯丙胺和抗entolimod抗體的水平。分析表明cblb502/明礬和cblb502-s33mx/明礬引起比鞭毛蛋白/明礬更廣泛、更多樣、更強(qiáng)勁和更長(zhǎng)效的免疫刺激作用。另外，cblb502/明礬和cblb502-s33mx/明礬激活th1和th2介導(dǎo)的免疫應(yīng)答以及比鞭毛蛋白/明礬更大的th1介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。等同物雖然本發(fā)明已經(jīng)結(jié)合其具體實(shí)施方案進(jìn)行了描述，但是應(yīng)當(dāng)理解的是，其能夠進(jìn)一步修改，而且本申請(qǐng)意圖覆蓋本發(fā)明的任何如下變化形式、用途、或改編，其一般遵循本發(fā)明的原理，并且包括諸如在本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
內(nèi)的已知或慣例實(shí)踐范圍內(nèi)和可以應(yīng)用于前文所提出的實(shí)質(zhì)特征及如下在所附根據(jù)權(quán)利要求書的范圍內(nèi)的本公開內(nèi)容的偏離。本領(lǐng)域技術(shù)人員將僅使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)來(lái)認(rèn)識(shí)或能夠確定本文具體描述的具體實(shí)施方案的許多等同物。此類等同物旨在被包括在所附根據(jù)權(quán)利要求的范圍內(nèi)。通過(guò)引用并入本文引用的所有專利和出版物通過(guò)引用整體并入本文。本文所論述的出版物僅針對(duì)它們?cè)诒旧暾?qǐng)?zhí)峤蝗罩暗墓_內(nèi)容而提供。此處的任何信息都不應(yīng)解釋為承認(rèn)本發(fā)明不能因?yàn)槭窃谙劝l(fā)明而先于這些出版物。如本文中所用，所有標(biāo)題僅用于組織并且不旨在以任何方式限制本公開。任何單獨(dú)部分的內(nèi)容可以同樣適用于所有部分。參考文獻(xiàn)1.yoonsi，kurnasovo，natarajanv，hongm，gudkovav，ostermanal，wilsonia.，2012.structuralbasisoftlr5-flagellinrecognitionandsignaling.science335：859-864(pmid：22344444)2.smithkd，andersen-nissene，hayashif，strobek，bergmanma，barrettsl，cooksonbt，aderema.2003.toll-likereceptor5recognizesaconservedsiteonflagellinrequiredforprotofilamentformationandbacterialmotility.natimmunol.4：1247-53(pmid：14625549)3.mizel，s.b.，a.p.west，r.r.hantgan.2003.identificationofasequenceinhumantoll-likereceptor5requiredforthebindingofgram-negativeflagellin.j.biol.chem.278：23624-23629(pmid：12711596)4.murthy，k.g.，deb，a.，goonesekera，s.，szabo，c.&salzman，a.l.(2004)j.biol.chem.279：5667-5675(pmid：14634022)5.andersen-nissene.，smithk.d.，strobek.l.，barretts.l.，cooksonb.t.，logans.m.，aderema.(2005)evasionoftoll-likereceptor5byflagellatedbacteria.proc.natl.acad.sci.u.s.a.102：9247-9252(pmid：15956202)6.andersen-nissene，smithkd，bonneaur，strongrk，aderema.2007.aconservedsurfaceontoll-likereceptor5recognizesbacterialflagellin.jexpmed.204：393.403(pmid：17283206)7.burdelyalg，krivokrysenkovi，tallanttc，strome，gleibermanas，guptad，kumasovov，fortfl，ostermanal，didonatoja，feinsteine，gudkovav.，2008.anagonistoftoll-likereceptor5hasradioprotectiveactivityinmouseandprimatemodels.science320：226-230(pmid：18403709).8.huleattjw，nakaarv，desaip，huangy，hewittd，jacobsa，tangj，mcdonaldw，songl，evansrketal.2008.potentimmunogenicityandefficacyofauniversalinfluenzavaccinecandidatecomprisingarecombinantfusionproteinlinkinginfluenzam2etothetrl5ligandflagellin.vaccine.26：201-214.序列表<110>clevelandbiolabs,inc.gudkov,andreiv.,mett,vadim,krivokrysenko,vadim<120>基于鞭毛蛋白的劑及包括有效接種的用途<130>cle-019pc<150>us62/031,116<151>2014-07-30<150>us62/110,744<151>2015-02-02<150>us62/117,366<151>2015-02-17<160>252<170>patentin3.5版<210>1<211>505<212>prt<213>都柏林沙門氏菌<400>1metalaglnvalileasnthrasnserleuserleuleuthrglnasn151015asnleuasnlysserglnserserleuserseralailegluargleu202530serserglyleuargileasnseralalysaspaspalaalaglygln354045alailealaasnargphethrserasnilelysglyleuthrglnala505560serargasnalaasnaspglyileserilealaglnthrthrglugly65707580alaleuasngluileasnasnasnleuglnargvalarggluleuser859095valglnalathrasnglythrasnseraspseraspleulysserile100105110glnaspgluileglnglnargleuglugluileaspargvalserasn115120125glnthrglnpheasnglyvallysvalleuserglnaspasnglnmet130135140lysileglnvalglyalaasnaspglygluthrilethrileaspleu145150155160glnlysileaspvallysserleuglyleuaspglypheasnvalasn165170175glyprolysglualathrvalglyaspleulysserserphelysasn180185190valthrglytyraspthrtyralaalaglyalaasplystyrargval195200205aspileasnserglyalavalvalthraspalaalaalaproasplys210215220valtyrvalasnalaalaasnglyglnleuthrthraspaspalaglu225230235240asnasnthralavalaspleuphelysthrthrlysserthralagly245250255thralaglualalysalailealaglyalailelysglyglylysglu260265270glyaspthrpheasptyrlysglyvalthrphethrileaspthrlys275280285thrglyaspaspglyasnglylysvalserthrthrileasnglyglu290295300lysvalthrleuthrvalalaaspilealathrglyalaalaaspval305310315320asnalaalathrleuglnserserlysasnvaltyrthrservalval325330335asnglyglnphethrpheaspasplysthrlysasngluseralalys340345350leuseraspleuglualaasnasnalavallysglygluserlysile355360365thrvalasnglyalaglutyrthralaasnalathrglyasplysile370375380thrleualaglylysthrmetpheileasplysthralaserglyval385390395400serthrleuileasngluaspalaalaalaalalyslysserthrala405410415asnproleualaserileaspseralaleuserlysvalaspalaval420425430argserserleuglyalaileglnasnargpheaspseralailethr435440445asnleuglyasnthrvalthrasnleuasnseralaargserargile450455460gluaspalaasptyralathrgluvalserasnmetserlysalagln465470475480ileleuglnglnalaglythrservalleualaglnalaasnglnval485490495proglnasnvalleuserleuleuarg500505<210>2<211>329<212>prt<213>人工序列<220><223>合成序列<400>2metargglyserhishishishishishisglymetalasermetthr151015glyglyglnglnmetglyargaspleutyraspaspaspasplysasp202530prometalaglnvalileasnthrasnserleuserleuleuthrgln354045asnasnleuasnlysserglnserserleuserseralailegluarg505560leuserserglyleuargileasnseralalysaspaspalaalagly65707580glnalailealaasnargphethrserasnilelysglyleuthrgln859095alaserargasnalaasnaspglyileserilealaglnthrthrglu100105110glyalaleuasngluileasnasnasnleuglnargvalarggluleu115120125servalglnalathrasnglythrasnseraspseraspleulysser130135140ileglnaspgluileglnglnargleuglugluileaspargvalser145150155160asnglnthrglnpheasnglyvallysvalleuserglnaspasngln165170175metlysileglnvalglyalaasnaspglygluthrilethrileasp180185190leuglnlysileaspvallysserleuglyleuaspglypheasnval195200205asnserproglyileserglyglyglyglyglyileleuaspsermet210215220glythrleuileasngluaspalaalaalaalalyslysserthrala225230235240asnproleualaserileaspseralaleuserlysvalaspalaval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