本發(fā)明通常指用于藥物傳送的膠球奈米復(fù)合物，及其制備方法。本發(fā)明也跟聚合物與類黃酮B環(huán)組成的類黃酮多聚體接合物有關(guān)，及其制備方法。

背景技術(shù)：

化療，最常見的一種癌癥治療手段，通過口服或注射給予細(xì)胞毒殺藥物。傳統(tǒng)抗癌藥物投藥的挑戰(zhàn)在于體內(nèi)非特異性的分布，導(dǎo)致嚴(yán)重副作用的毒性。此外，口服藥物的治療效果受限于其生物體可用率低，因?yàn)檫@些藥物一定要通過消化道。這幾十年來，研究人員聚焦于發(fā)展藥物運(yùn)輸系統(tǒng)，克服傳統(tǒng)藥物的投藥限制，藉此改進(jìn)藥物的藥動(dòng)和生體分布。

近幾年，綠茶兒茶素已被廣泛研究，因?yàn)樗麄冇卸喾N健康益處，包括預(yù)防心血管疾病和癌癥。在兒茶素中，表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯(EGCG)是含量最多，且被認(rèn)為是綠茶好處的重要角成分。多項(xiàng)研究指出EGCG有抗氧化、抗糖尿病、抗菌、抗發(fā)炎和降膽固醇效果。再者，研究指出它可透過瞄準(zhǔn)癌細(xì)胞生存所必須的多種訊息傳導(dǎo)路徑，有效抑制癌癥生長和轉(zhuǎn)移。

雖然有這些有效活性，EGCG的臨床應(yīng)用受限于其安定性差，以及口服生體可用率低。舉例，EGCG不穩(wěn)定，在生理環(huán)境下很容易被分解。報(bào)告指出，EGCG在37℃，pH7.4的0.05M磷酸鹽緩沖生理食鹽水(PBS)下，半衰期小于30分鐘。此外，攝入的EGCG會(huì)很容易被胃酸水解，并在腸胃道被代謝分解。導(dǎo)致口服EGCG后的血漿濃度，無法達(dá)到治療效果所要的濃度。

因此需要提供一個(gè)藥物傳送系統(tǒng)，克服或至少改善一個(gè)或多個(gè)上述缺點(diǎn)。也有需要提供一個(gè)制備該藥物傳送系統(tǒng)的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

根據(jù)本發(fā)明第一點(diǎn)，提供一個(gè)膠球奈米復(fù)合物，包括一膠球和一試劑包覆于膠球，所述膠球包含一聚合物-類黃酮接合體，其所述聚合物會(huì)與所述類黃酮的B環(huán)鍵結(jié)。

有利的是本發(fā)明提供一種膠球奈米復(fù)合物，可用作藥物傳送系統(tǒng)。膠球奈米復(fù)合物擁有小尺寸和高藥物承載量，有利癌癥標(biāo)靶的藥物傳送。另外有利的是包括可在生理?xiàng)l件利用膠球奈米復(fù)合物達(dá)到試劑的緩釋效果。更有利的是還包括此奈米結(jié)構(gòu)可作為各種非水溶性抗癌試劑的有效運(yùn)送載體。另外有利的是膠球奈米復(fù)合物可有效抑制癌癥生長，并降低投與試劑的相關(guān)毒性。另外有利的是膠球奈米復(fù)合物可作為一獨(dú)特且有效的藥物傳送系統(tǒng)，擁有加成治療效果，來自藥物傳送系統(tǒng)或膠球載體和試劑。

該試劑可以是阿霉素。有利的是膠球奈米復(fù)合物包覆阿霉素，可具藥物緩釋。該緩釋藥物可能來自EGCG和阿霉素在膠球奈米復(fù)合物內(nèi)的強(qiáng)烈交互作用。另外有利的是在某些實(shí)施例，只會(huì)在初始階段觀察到邊際爆發(fā)釋放，代表阿霉素分子在膠球奈米復(fù)合物內(nèi)穩(wěn)定地被包覆著。如此低的藥物漏出是確保達(dá)到最大治療效果和最小副作用所必需的，因該藥物分子包覆在奈米結(jié)構(gòu)內(nèi)不會(huì)在血液循環(huán)時(shí)提早滲漏。甚至另外有利的是，此膠球奈米復(fù)合物可應(yīng)用于癌癥治療的阿霉素的全身用藥。

該試劑可為舒尼替尼(SU)，而類黃酮可為表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯(EGCG)。有用的是此膠球奈米復(fù)合物可使SU持續(xù)的緩釋。另外有利的是，在某些實(shí)施例，幾乎不會(huì)觀察到爆發(fā)釋放，表示SU分子在膠球奈米復(fù)合物內(nèi)穩(wěn)定地被包覆著。

在一實(shí)施例，類黃酮可為單體類黃酮。另一實(shí)施例，類黃酮可為雙體類黃酮。有利的是，單體類黃酮組成的膠球奈米復(fù)合物，跟雙體類黃酮組成的膠球奈米復(fù)合物相比，SU釋放比較快比較多。另外有利的是SU跟雙體類黃酮的交互作用比較強(qiáng)。

有利的是膠球奈米復(fù)合物可使試劑不良副作用降到最低，因SU穩(wěn)定地被包覆在里面，運(yùn)送到標(biāo)靶處。膠球奈米復(fù)合物可進(jìn)一步提供SU和EGCG間的加成效果。

另外有利的是，這個(gè)含SU的膠球結(jié)構(gòu)，跟SU游離態(tài)相比，可在體內(nèi)加強(qiáng)癌癥效果。更甚者，這個(gè)含SU的膠球結(jié)構(gòu)跟SU游離態(tài)相比，體內(nèi)副作用比較少。再者，跟SU游離態(tài)相比，用比較少劑量含SU的膠球奈米復(fù)合物就可以達(dá)到相同效果。而且，含SU的膠球奈米復(fù)合物的抑制效果，可維持一段時(shí)間，甚至在治療暫停時(shí)。

另外有利的是，含SU的膠球奈米復(fù)合物會(huì)使血漿中SU游離態(tài)降低，使SU的不良反應(yīng)減少。再者，血漿濃度的降低可能來自于類黃酮和SU的交互作用，也可能是膠球奈米粒子所致的高滲透長滯留效應(yīng)。

根據(jù)本發(fā)明第二點(diǎn)，提供一種制備膠球奈米復(fù)合物的方法，膠球和試劑包覆于所述膠球內(nèi)，這方法包括步驟：(a)加入所述試劑于合適溶液形成聚合物-類黃酮接合物，這里所述聚合物與所述類黃酮B環(huán)鍵結(jié)；和(b)使膠球自組裝，組成所述的聚合物-類黃酮接合物，將所述試劑包覆于所述膠球內(nèi)，因而形成所述的膠球奈米復(fù)合物。

有利的是，在聚合物-類黃酮接合和試劑存在下，奈米復(fù)合物會(huì)自組裝。再者，利用類黃酮和試劑的鍵結(jié)特性就可以形成此奈米結(jié)構(gòu)。

根據(jù)本發(fā)明第三點(diǎn)，提供一聚合物-類黃酮接合體，由聚合物和類黃酮B環(huán)鍵結(jié)組成。

有利的是，類黃酮和聚合物接合。在一實(shí)施例，該聚合物可為聚乙二醇(PEG)，有利的是聚合物基質(zhì)的奈米粒子通過網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)避免腎臟清除和滯留，使之具EPR效應(yīng)，可于癌癥組織堆積。再者，PEG穩(wěn)固膠球展現(xiàn)較未修飾膠球還長的血漿半衰期，因?yàn)镻EG表面預(yù)防體內(nèi)RES的辨識(shí)和清除。另外有利的是，PEG可用來修飾聚合物膠球和奈米粒子表面，產(chǎn)生一防污表面。

根據(jù)本發(fā)明的第四點(diǎn)，提供一種制備如上述定義的聚合物-類黃酮接合體的方法，包括在堿性環(huán)境下通過親核加成作用，接合所述類黃酮和所述聚合物的步驟其中，該所述聚合物有一親核性的自由官能基。

有利的是，聚合物-類黃酮接合體可在堿性pH通過親核性作用合成。有利的是，此接和可通過親核性官能基的作用達(dá)成，例如聚合物的硫醇基，如在恰當(dāng)酸堿環(huán)境下，生物類黃酮B環(huán)C2’位置的PEG。

在一實(shí)施例，聚合物為聚乙二醇(PEG)，而親核性自由基為硫醇基。有用的是，像EGCG類黃酮缺電子的鄰苯醌可與像硫醇基的親核性官能基作用。硫醇基存在于多種生物分子，包括半胱氨酸、谷胱甘肽和蛋白質(zhì)。EGCG可和人體紅血球細(xì)胞膜的半胱氨酸和甘油醛-3-磷酸去氫酶(GAPDH)共價(jià)鍵結(jié)。此外，當(dāng)半胱氨酸和谷胱甘肽存在的時(shí)候，EGCG的共價(jià)結(jié)合物會(huì)形成。另外有利的是，所形成的EGCG半胱氨酸接合可展現(xiàn)較EGCG高的前氧化活性，并保持有其抑制生長和抗發(fā)炎的活性。再者，N-乙酰半胱氨酸接合的EGCG會(huì)加強(qiáng)EGCG于老鼠和人類肺癌細(xì)胞的生長抑制和凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)。

根據(jù)本發(fā)明的第五點(diǎn)，提供由膠球和試劑包覆于所述膠球的膠球奈米復(fù)合物應(yīng)用，作為藥物傳送載體，該所述膠球由聚合物-生物類黃酮接合體組成，該所述聚合物與所述類黃酮B環(huán)鍵結(jié)。

根據(jù)本發(fā)明的第六點(diǎn)，提供一治療癌癥的方法，包括給予如前所定義的奈米膠球于癌癥制劑。

有利的是，膠球奈米復(fù)合物跟游離態(tài)試劑相比，有較高的抗癌效果。再者，膠球奈米復(fù)合物可使試劑，如舒尼替尼(SU)的不良副作用降到最低，透過穩(wěn)定地被包覆于內(nèi)部并傳送到標(biāo)靶處。這樣的傳送系統(tǒng)也獲可提供有益的加成作用。

根據(jù)本發(fā)明的第七點(diǎn)，提供如前所定義的膠球奈米復(fù)合物，以治療癌癥。

根據(jù)本發(fā)明的第八點(diǎn)，提供如前所定義的膠球奈米復(fù)合物應(yīng)用，制造醫(yī)藥制劑以治療癌癥。

定義

本篇所用的下列文字和名詞應(yīng)為所述定的意思：

生物類黃酮的“B環(huán)”指選擇性替代的苯基與雙環(huán)結(jié)構(gòu)鍵結(jié)(由苯環(huán)(A)與六元環(huán)(C)縮合的雙環(huán)結(jié)構(gòu))。這選擇性替代的苯基與C環(huán)的位置2鍵結(jié)。因揭露之目的，環(huán)標(biāo)示如下：[結(jié)構(gòu)式1]

“表沒食子兒茶素沒食子酸酯”指表沒食子兒茶素和沒食子酸的酯類，可與“表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯”或EGCG互換

本應(yīng)用目的，PEG-EGCG接合體指PEG-mEGCG(單體EGCG)和PEG-dEGCG(雙體EGCG)接合，除非另有說明。

“大體上”并未排除“完全”，例一組成大體上不含Y，可能為完全不含Y。必要時(shí)，大體上這個(gè)詞可從本發(fā)明定義去除。

除另有說明，“包括”這個(gè)字及其相關(guān)文法變體，意指代表“開放”或“包括性”語言，使之包含所載的元素，但也允許納入未載元素。

本篇所用的“關(guān)于”，在配方組成濃度內(nèi)文，一般指所載數(shù)值的+/-5％，更可為所載數(shù)值的+/-4％，更可為所載數(shù)值的+/-3％，更可為所載數(shù)值的+/-2％，甚至更可為所載數(shù)值的+/-1％，更可為所載數(shù)值的+/-0.5％。

這份揭露，某些實(shí)施例以范圍揭露。應(yīng)認(rèn)知為配方范圍的描述主要為了方便和簡短，而不該為所揭露范圍的固定限制。據(jù)此，范圍的描述應(yīng)被認(rèn)為特別指所揭露的所有可能的次范圍和該范圍內(nèi)的個(gè)別數(shù)值。例如:范圍1-6的描述應(yīng)被認(rèn)為已特揭露的次范圍如1-3、1-4、1-5，從2-4、2-6，從3-6等，也包含范圍內(nèi)的個(gè)別數(shù)字，例如1、2、3、4、5和6，這適用于各范圍。

在此，某些實(shí)施例的描述廣泛且一般。一般性公開內(nèi)每一較窄的種類和次族群也是揭露的一部份，這包括具從屬中移移除任何主題的附帶條件或否定限制的實(shí)施例的一般描述。不論被刪去的物質(zhì)是否有無在此被記述。

實(shí)施例的詳細(xì)揭露

現(xiàn)在將公開膠球奈米復(fù)合物的示例性，非限制性實(shí)施方案。

膠球奈米復(fù)合物可以包含膠球和包封在所述膠球內(nèi)的試劑，所述膠球包含聚合物-類黃酮接合物，其中所述聚合物與所述類黃酮的B環(huán)鍵結(jié)。

至少一個(gè)類黃酮可以鍵結(jié)到所述聚合物。至少兩個(gè)類黃酮可以鍵結(jié)到所述聚合物。

聚合物可以透過連接體與所述類黃酮鍵結(jié)。連接體可為可以連接聚合物和類黃酮的任何化學(xué)基團(tuán)。連接體可以選自含硫醚，亞胺，胺，偶氮和1,2,3-三唑基團(tuán)的官能基。連接基可以是烷基。連接體可以存在于聚合物的任一部分和類黃酮任一部分之間。連接體可存在于聚合物末端和類黃酮的任一部分之間。

類黃酮可以選自單體類黃酮或雙體類黃酮的官能基。單體類黃酮可以包含一個(gè)類黃酮分子。雙體類黃酮可以包含由連接體連接在一起的兩個(gè)類黃酮分子。雙體類黃酮的其中一個(gè)類黃酮可以連接到聚合物上。雙體類黃酮的兩個(gè)類黃酮分子可以獨(dú)立地連接到聚合物上。當(dāng)一類黃酮存在于所述接合物中時(shí)，類黃酮乃通過B環(huán)與所述聚合物鍵結(jié)。當(dāng)一類黃酮鍵結(jié)到所述接合物時(shí)，類黃酮是通過D環(huán)鍵結(jié)到所述聚合物。

當(dāng)所述接合物中存在不只一個(gè)類黃酮時(shí)，至少一個(gè)類黃酮會(huì)通過B環(huán)與所述聚合物鍵結(jié)。另一個(gè)所述至少一個(gè)類黃酮通過A環(huán)與所述聚合物鍵結(jié)。當(dāng)所述接合物中存在不只一個(gè)類黃酮時(shí)，至少一個(gè)類黃酮通過B環(huán)與所述聚合物鍵結(jié)。另一個(gè)所述至少一個(gè)類黃酮通過B環(huán)與所述聚合物鍵結(jié)。當(dāng)所述接合物中存在不只一個(gè)類黃酮時(shí)，至少一個(gè)類黃酮通過B環(huán)與所述聚合物鍵結(jié)。另一個(gè)所述至少一個(gè)類黃酮通過D環(huán)與所述聚合物鍵合。

當(dāng)所述接合物中存在不只一個(gè)類黃酮時(shí)，至少一個(gè)類黃酮會(huì)通過D環(huán)與所述聚合物鍵結(jié),另一個(gè)所述至少一個(gè)類黃酮通過A環(huán)與所述聚合物鍵結(jié)。當(dāng)所述接合物中存在不只一個(gè)類黃酮時(shí)，至少一個(gè)類黃酮通過D環(huán)與所述聚合物鍵結(jié)。另一個(gè)所述至少一個(gè)類黃酮通過B環(huán)與所述聚合物鍵結(jié)。當(dāng)所述接合物中存在不只一個(gè)類黃酮時(shí)，至少一個(gè)類黃酮通過D環(huán)與所述聚合物鍵結(jié)。另一個(gè)所述至少一個(gè)類黃酮通過D環(huán)與所述聚合物鍵合。

聚合物可以是親水性聚合物。親水性聚合物可以包含選自丙烯酰胺，烷基，惡唑啉，烯基，亞胺，丙烯酸，甲基丙烯酸酯，二醇，環(huán)氧乙烷，醇，胺，酸酐，酯，內(nèi)酯，碳酸酯，羧酸，丙烯酸酯，羥基，磷酸鹽，對苯二甲酸，酰胺和醚的組中的單體。

親水性聚合物可以選自含聚丙烯酰胺，聚(N-異丙基丙烯酰胺)，聚(惡唑啉)，聚乙烯亞胺，聚(丙烯酸)，聚甲基丙烯酸酯，聚(乙二醇)，聚(環(huán)氧乙烷)，聚(乙烯醇)，聚(乙烯基吡咯烷酮)，聚醚，聚(烯丙基胺)，聚酐，聚(β-氨基酯)，聚(丁二酸丁二醇酯)，聚己內(nèi)酯，聚碳酸酯，聚二氧雜環(huán)己酮，聚(丙三醇)，聚乙醇酸，聚(3-羥基丙酸)，聚(甲基丙烯酸乙酯)，聚(N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺聚合物)，聚乳酸，聚(乳酸-共-乙醇酸)，聚(原酸酯)，聚(2-惡唑啉)，聚(癸二酸)，聚(對苯二甲酸酯-共-磷酸酯)中的基團(tuán)及其共聚物。

親水性聚合物可以是多糖體。聚合物可以是選自透明質(zhì)酸，葡聚醣，支鏈淀粉，殼聚醣，纖維素，直鏈淀粉，淀粉，明膠，角叉菜膠，環(huán)糊精，硫酸葡聚醣，蔗糖多聚體(Ficoll)，膠凝糖，瓜爾膠，果膠，聚蔗糖，支鏈淀粉，硬葡聚糖，黃原膠，木葡聚糖和藻酸鹽的多糖體。

親水性聚合物可以是聚乙二醇(PEG)。PEG是已經(jīng)用于生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用的合成聚合物，因其具親水性，柔性和生物相容性。具體地，PEG已被用于修飾聚合物膠球和奈米粒子表面以產(chǎn)生防污表面。

有利地，選擇聚乙二醇(PEG)作為待與類黃酮接合的聚合物。在控制的pH條件下，在類黃酮B環(huán)C2'位置的親核作用，加上PEG的硫醇基團(tuán)，完成接合。

類黃酮可以選自黃酮，異黃酮，黃烷，原花色素和花青素組成的基團(tuán)。

所述黃酮可以選自芹菜素，木犀草素，桔皮晶，白楊素，6-羥基黃酮，黃芩苷，燈盞花乙素，漢黃芩素，地奧司明，黃酮哌酯和7,8-二羥基黃酮組成的基團(tuán)。

異黃酮可以選自包含金雀異黃酮，大豆素，黃豆黃素，染料木苷，豆苷，黃豆黃苷，乙酰基染料木苷，乙酰基豆苷，乙酰基黃豆黃苷，丙二?；玖夏拒?，丙二?；管蘸捅；S豆黃苷組成的組中。

所述黃烷可以選自包含(-)-表兒茶素，(+)-表兒茶素，(-)-兒茶素，(+)-兒茶素，表兒茶素沒食子酸酯，表沒食子兒茶素，表沒食子兒茶素沒食子酸酯，非瑟酮醇，沒食子兒茶素，沒食子兒茶素沒食子酸酯，牧豆樹醇和雙洋槐兒茶素，鞣花鞣劑，沒食子單寧，烏龍茶酮，根皮單寧，單寧，茶檸檬素，茶二苯駢卓酚酮，茶黃素，茶多醌，茶紅素，聚酯型兒茶素和其混合物的組。

花青素可以選自橙花色素，辣椒素，矢車菊素，花翠素，歐林甙，多菌素，錦葵花素，天竺葵色素，甲基花青素，矮牽牛，美麗夫人色素和薔薇素組成的組。

試劑可以是治療試劑。治療試劑可以是選自烷化劑，蒽環(huán)霉素，細(xì)胞骨架破壞劑，埃博霉素，組蛋白脫乙酰酶抑制劑，拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，激酶抑制劑，單株抗體，抗體-藥物接合物，核苷酸類似物，前驅(qū)物類似物，勝肽抗生素，鉑基劑，類視黃醇，長春花生物堿，細(xì)胞激素，抗代謝物和長春花生物堿衍生物，以及其它細(xì)胞毒素組成的化療試劑。

化療試劑可以選自放線菌素，阿法替尼，全反式視黃酸，阿西替尼，阿扎胞苷，硫唑嘌呤，貝伐單抗，博來霉素，博素替尼，硼替佐米，卡鉑，卡培他濱，西妥昔單抗，順鉑，苯丁酸氮芥，克里唑蒂尼，環(huán)磷酰胺，阿糖胞苷，達(dá)沙替尼，柔紅霉素，多西他賽，去氧氟尿苷，阿霉素，表柔比星，埃博霉素A(C₂₆H₃₉NO₆S)，埃博霉素B(C₂₇H₄₁NO₆S)，埃博霉素C(C₂₆H₃₉NO₅S)，埃博霉素D(C₂₇H4₁NO₅S)，埃博霉素E(C₂₆H₃₉NO₇S)，埃博霉素F(C₂₇H₄₁NO₇S)，埃羅替尼，依托泊苷，氟尿嘧啶，福莫替尼，吉非替尼，吉西他濱，羥基脲，伊達(dá)比星，伊馬替尼，伊立替康，拉帕替尼，樂伐替尼，氮芥，巰嘌呤，氨甲蝶呤，米托蒽醌，尼羅替尼，奧沙利鉑，太平洋紫杉醇，帕尼單抗，帕唑帕尼，哌加他尼，培美曲塞，雷珠單抗，瑞格菲尼，魯索替尼，索拉非尼，舒尼替尼，曲妥珠單抗，替尼泊苷，硫鳥嘌呤，托法替尼，托泊替康，戊柔比星，威羅菲尼，長春質(zhì)堿，長春新堿，硫酸長春地辛，長春瑞濱組成的組。

化療試劑可以是阿霉素。

化療試劑可以是舒尼替尼(SU)。SU是多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑和用于透明細(xì)胞性腎細(xì)胞癌(ccRCC)的一線治療。具體來說，SU瞄準(zhǔn)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和血小板衍生生長因子(PDGF)受體，其在腫瘤血管生成和增殖中扮演重要角色，導(dǎo)致腫瘤血管形成減少以及癌細(xì)胞死亡。它已被核準(zhǔn)用于晚期RCC，胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)和胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(pNET)。它還顯示具有治愈轉(zhuǎn)移性乳癌，晚期非小細(xì)胞肺癌，晚期肝細(xì)胞癌，神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤和白血病的潛力。然而，它可引起嚴(yán)重的副作用，例如肝臟，心臟和胃腸道毒性，高血壓，皮膚問題和手足綜合征。

膠球奈米復(fù)合物可以有30至300nm，50至300nm，100至300nm，30至50nm，30至100nm，30至150nm，150至300nm，200至300nm，250至300nm，100至150nm，100至200nm，100至250nm，130至180nm或130至250nm范圍內(nèi)的尺寸。

膠球奈米復(fù)合物于所述膠球內(nèi)，其所述試劑的負(fù)載效率可為大于30％，大于35％，大于40％，大于45％，大于50％，大于55％，大于60％，大于65％，大于70％，大于75％或80％。

所述膠球奈米復(fù)合物，所述試劑于所述膠球內(nèi)的加載量，其范圍可為1至10w/w％，5至25w/w％，20至45w/w％，30至50w/w％，35至50w/w％，40至50w/w％，45至50w/w％，30至35w/w％，30至40w/w％或30至45w/w％。

制備膠球奈米復(fù)合物的方法可以包括膠球和包覆于所述膠球內(nèi)的試劑，該方法包括以下步驟：

a.將在合適的溶劑中的所述試劑加入聚合物-類黃酮接合物中，其中所述聚合物與所述類黃酮的B環(huán)鍵結(jié)；和

b.使包含所述聚合物-類黃酮接合物的膠球自行組裝，并將所述試劑包覆在所述膠球內(nèi)，從而形成所述膠球奈米復(fù)合物。

步驟(a)可進(jìn)一步包括以下步驟：

a.除去所述溶劑以形成所述試劑和所述聚合物-類黃酮接合物的干膜；和

b.用水性溶劑水合所述干膜。

該方法還可進(jìn)一步包括在合適的溶劑中通過過濾或透析分離所形成的膠球奈米復(fù)合物的步驟。

聚合物-類黃酮接合物可以包含結(jié)合到類黃酮B環(huán)的聚合物。

聚合物-類黃酮接合物的聚合物可以選自多糖，聚丙烯酰胺，聚(N-異丙基丙烯酰胺)，聚(惡唑啉)，聚乙烯亞胺，聚(丙烯酸)，聚甲基丙烯酸酯，聚(乙二醇)聚(環(huán)氧乙烷)，聚(乙烯醇)，聚(乙烯吡咯烷酮)，聚醚，聚(烯丙胺)，聚酐，聚(β-氨基酯)，聚(丁二酸丁二酯)，聚己內(nèi)酯，聚碳酸酯，聚對二氧雜環(huán)己酮，聚(丙三醇)，聚(乙醇酸)，聚(3-羥基丙酸)，聚(甲基丙烯酸2-羥乙酯)，聚(N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺)，聚乳酸，聚(乳酸-乙醇酸共聚物)，聚(原酸酯)聚(2-惡唑啉)，聚(癸二酸)，聚(對苯二甲酸酯-共-磷酸酯)及其共聚物的基團(tuán)。

聚合物-類黃酮接合物的類黃酮可以選自(-)-表兒茶素，(+)-表兒茶素，(-)-兒茶素，(+)-兒茶素，表兒茶素沒食子酸酯，表沒食子兒茶素，表沒食子兒茶素沒食子酸酯，非瑟酮醇，沒食子兒茶素，沒食子兒茶素沒食子酸酯，牧豆樹醇和雙洋槐兒茶素，鞣花鞣劑，沒食子單寧，烏龍茶酮，根皮單寧，單寧，茶檸檬素，茶二苯駢卓酚酮，茶黃素，茶多醌，茶紅素，聚酯型兒茶素和其混合物組成的基團(tuán)。

聚合物可以通過選自硫醚，亞胺，胺，偶氮和1,2,3-三唑基團(tuán)的連接體與聚合物-類黃酮接合物中的類黃酮接合。連接體可以是烷基。連接體可以存在于聚合物任一部分和類黃酮任一部分之間。連接體可存在于聚合物末端和類黃酮的任一部分之間。

聚合物-類黃酮接合物的聚合物可以是聚(乙二醇)，所述聚合物-類黃酮接合物的類黃酮可以是表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯，并且所述聚合物-類黃酮綴合物的所述連接體可以是硫醚。

聚合物-類黃酮可有下列結(jié)構(gòu)式

[結(jié)構(gòu)式2]

其中，n的范圍在20-910。

聚合物-類黃酮接合物的制備方法可以包括在堿性條件下，透過親核性加成使所述類黃酮與所述聚合物接合的步驟，其中所述聚合物具有游離的親核基團(tuán)。

親核基團(tuán)可以選自巰基，胺，羰基，羧酸，迭氮化物，鹵素，炔烴和烯烴組成的基團(tuán)。親核基團(tuán)可以選自硫醇，胺，重氮烷烴和迭氮化物的基團(tuán)。

親核基團(tuán)可以是硫醇。EGCG可在氧存在下，通過涉及半醌自由基和活性的途徑，經(jīng)氧化形成鄰醌。EGCG的缺電子鄰醌可與存在于不同生物分子(包括半胱氨酸，谷胱甘肽和蛋白質(zhì))中的親核巰基反應(yīng)。EGCG可以共價(jià)結(jié)合到人紅血球細(xì)胞膜蛋白和甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)中的半胱氨酸殘基。當(dāng)在半胱氨酸和谷胱甘肽的存在下氧化時(shí)，可以形成EGCG的共價(jià)加合物。所形成的EGCG的半胱氨酸接合物可以表現(xiàn)出比EGCG更高的促氧化活性，同時(shí)保持其生長抑制和抗發(fā)炎活性。此外，N-乙酰半胱氨酸接合的EGCG可以增強(qiáng)EGCG于鼠和人肺癌細(xì)胞的生長抑制和細(xì)胞雕亡誘導(dǎo)作用。

接合步驟的反應(yīng)時(shí)間可以在約1小時(shí)至24小時(shí)，約1小時(shí)至2小時(shí)，約1小時(shí)至4小時(shí)，約1小時(shí)至8小時(shí)，約1小時(shí)至12小時(shí)，約2小時(shí)約4小時(shí)，約2小時(shí)至8小時(shí)，約2小時(shí)至12小時(shí)，約2小時(shí)至24小時(shí)，約4小時(shí)至8小時(shí)，約4小時(shí)至12小時(shí)，約4小時(shí)至24小時(shí)，約8小時(shí)至12小時(shí)，約8小時(shí)至24小時(shí)或約12小時(shí)至24小時(shí)。

該方法可進(jìn)一步包括，在可實(shí)質(zhì)地預(yù)防所述類黃酮聚集的溶液中進(jìn)行接合步驟。

該方法可以進(jìn)一步包括添加清除劑以防止H₂O₂媒介使所述親核基團(tuán)氧化，從而提高所述接合步驟的效率。

堿性條件可以在大于7至10，大于8至10，大于9至10，大于7至11，大于8至11，大于9至11，大于10至11，大于7，大于8，大于9，大于10或大于11的pH范圍內(nèi)。

膠球奈米復(fù)合物的使用可以包含膠球和包覆在所述膠球內(nèi)作為藥物傳送載體的試劑，其中所述膠球包含聚合物-類黃酮接合物，并且其中所述聚合物與所述類黃酮的B環(huán)鍵結(jié)。

膠球奈米復(fù)合物可以將包覆的藥劑遞送至體內(nèi)腫瘤標(biāo)靶部位。

治療癌癥的方法可以包括向癌癥患者施用膠球奈米復(fù)合物的步驟。治療腫瘤的方法可以包括向癌癥患者施用膠球奈米復(fù)合物的步驟。

膠球奈米復(fù)合物可以腸胃外給藥，可通過吸入噴霧，局部，直腸，鼻，頰，陰道，通過植入藥池，注射，皮下，腹膜內(nèi)，經(jīng)粘膜，口服或在眼科制劑中。

腸胃外給藥可大體包括皮下，皮內(nèi)，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，關(guān)節(jié)內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，滑膜內(nèi)，胸骨內(nèi)，鞘內(nèi)，病灶內(nèi)和通過顱內(nèi)注射或輸注。

存在于所述膠球奈米復(fù)合物中的試劑投與劑量可為約1至約80mg/kg/天，約1至約2mg/kg/天，約1至約5mg/kg/天，約1至約10mg/kg/天，約1至約20mg/kg/天，約1至約50mg/kg/天，約2至約5mg/kg/天，約2至約10mg/天，約2至約20mg/kg/天，約2至約50mg/kg/天，約2至約80mg/kg/天，約5至約10mg/kg/天，約5至約20mg/kg/天，約5至約50mg/kg/天，約5至約80mg/kg/天，約10至約20mg/kg/天，約10至約50mg/kg/天，約10至約80mg/kg/天，約20至約50mg/kg/天，約20至約80mg/kg/天或約50至約80mg/kg/天。

癌癥患者可能患有選自以下的癌癥：腎上腺皮質(zhì)癌，AIDS相關(guān)淋巴瘤，肛門癌，闌尾癌，I級(jí)(間變性)星形細(xì)胞瘤，II級(jí)星形細(xì)胞瘤，III級(jí)星形細(xì)胞瘤，IV級(jí)星形細(xì)胞瘤，非典型畸形/中樞神經(jīng)系統(tǒng)的橫紋肌瘤，基底細(xì)胞癌，膀胱癌，支氣管癌，支氣管肺泡癌，伯基特淋巴瘤，宮頸癌，結(jié)腸癌，結(jié)腸直腸癌，顱咽管瘤，皮膚T-細(xì)胞淋巴瘤，子宮內(nèi)膜癌，子宮內(nèi)膜子宮癌，室管膜母細(xì)胞瘤，室管膜瘤，食道癌，嗅神經(jīng)母細(xì)胞瘤，尤因氏肉瘤，顱外生殖細(xì)胞腫瘤，性腺外生殖細(xì)胞腫瘤，肝外膽管癌，纖維組織細(xì)胞瘤，膽囊癌，胃癌，胃腸癌腫瘤，胃腸道間質(zhì)瘤，妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤，膠質(zhì)瘤，頭頸癌，心臟癌，肝細(xì)胞癌，肝門膽管癌，霍奇金淋巴瘤，下咽癌，眼內(nèi)黑素瘤，胰島細(xì)胞瘤，卡波西肉瘤，朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥，喉癌，唇癌，淋巴瘤，巨球蛋白血癥，惡性纖維組織細(xì)胞瘤，髓母細(xì)胞瘤，髓上皮瘤，黑色素瘤，梅克爾細(xì)胞癌，間皮瘤，內(nèi)分泌腫瘤，多發(fā)性骨髓瘤，蕈樣肉芽腫，骨髓增生異常，骨髓增生異常/骨髓增生性腫瘤，骨髓增生性疾病，鼻腔癌，鼻咽癌，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，非霍奇金淋巴瘤，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤，卵巢透明細(xì)胞癌，卵巢上皮癌，卵巢生殖細(xì)胞瘤，乳頭狀瘤，鼻旁竇癌，甲狀旁腺癌，陰莖癌，咽癌，松果體實(shí)質(zhì)瘤，松果體瘤，垂體瘤，漿細(xì)胞瘤，漿細(xì)胞瘤，胸膜肺母細(xì)胞瘤，原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤，前列腺癌，直腸癌，腎細(xì)胞癌，具有染色體15變化的呼吸道癌，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤，唾液腺癌，塞澤里綜合征，小腸癌，軟組織肉瘤，鱗狀細(xì)胞癌，鱗狀上頸癌，幕上原始神經(jīng)外胚層腫瘤，幕上原始神經(jīng)外胚層腫瘤，睪丸癌，喉癌，胸腺癌，胸腺瘤，甲狀腺癌，腎盂癌，尿道癌，子宮肉瘤，陰道癌，外陰癌，華氏巨球蛋白血癥，和維爾姆斯腫瘤。

腫瘤患者可能患有選自以下的癌癥：腎上腺皮質(zhì)癌，肛門癌，闌尾癌，I級(jí)(間變性)星形細(xì)胞瘤，II級(jí)星形細(xì)胞瘤，III級(jí)星形細(xì)胞瘤，IV級(jí)星形細(xì)胞瘤，非典型畸形/中樞神經(jīng)系統(tǒng)，基底細(xì)胞癌，膀胱癌，支氣管癌，支氣管肺泡癌，子宮頸癌，結(jié)腸癌，結(jié)腸直腸癌，顱咽管瘤，子宮內(nèi)膜癌，子宮內(nèi)膜子宮癌，室管膜母細(xì)胞瘤，室管膜瘤，食道癌，胚胎母細(xì)胞瘤，尤因氏肉瘤，顱外生殖細(xì)胞腫瘤，性腺外生殖細(xì)胞瘤，肝外膽管癌，纖維組織細(xì)胞瘤，膽囊癌，胃癌，胃腸道類癌瘤，胃腸道間質(zhì)瘤，妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞瘤，膠質(zhì)瘤，頭頸癌，心臟癌，肝細(xì)胞癌，肝門膽管癌，下咽癌，眼內(nèi)黑素瘤，胰島細(xì)胞瘤，卡波西肉瘤，朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥，喉癌，唇癌，巨球蛋白血癥，惡性纖維組織細(xì)胞瘤，髓母細(xì)胞瘤，髓上皮瘤，黑色素瘤，梅克爾細(xì)胞癌，間皮瘤，內(nèi)分泌腫瘤，多發(fā)性骨髓瘤，蕈樣內(nèi)芽腫，脊髓發(fā)育不良，脊髓增生異常/骨髓增生性腫瘤，骨髓增殖性疾病，鼻腔癌，鼻咽癌，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤，卵巢透明細(xì)胞癌，卵巢上皮癌，卵巢生殖細(xì)胞腫瘤，乳頭狀瘤病，鼻旁竇癌，甲狀旁腺癌，陰莖癌，咽癌，松果體實(shí)質(zhì)瘤，松質(zhì)瘤，垂體瘤，漿細(xì)胞瘤，漿細(xì)胞瘤，胸膜肺母細(xì)胞瘤，前列腺癌，直腸癌，腎細(xì)胞癌，具有染色體15變化的呼吸道癌，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤，唾液腺癌，塞澤里綜合征，小腸癌，軟組織肉瘤，鱗狀細(xì)胞癌，鱗狀上頸癌，幕上原始神經(jīng)外胚層腫瘤，幕上原始神經(jīng)外胚層腫瘤，睪丸癌，咽喉癌，胸腺癌，胸腺瘤，甲狀腺癌，腎盂，尿道癌，子宮肉瘤，陰道癌，外陰癌，華氏巨球蛋白血癥和維爾姆斯腫瘤。

膠球奈米復(fù)合物可用于治療癌癥。膠球奈米復(fù)合物可用于治療腫瘤。

膠球奈米復(fù)合物的使用可用于制備治療癌癥的藥物。膠球奈米復(fù)合物的使用可用于制備治療腫瘤的藥物。

附圖說明

附圖示出了所公開的實(shí)施例并且用于解釋所公開的實(shí)施例原理。然而，應(yīng)當(dāng)理解，附圖僅被設(shè)計(jì)用于說明目的，而不是作為本發(fā)明的限制定義。

圖1

[圖1]為PEG-mEGCG接合物(108)的合成方案。在DMSO和水1:3(v/v)混合的堿性pH(106)下，將巰基官能化的PEG(PEG-SH)(102)與EGCG接合(104)。

圖2

[圖2]為PEG-EGCG接合物(202)和PEG(204)以0.5mg/mL的濃度溶解于去離子水中的可見紫外光吸收光譜。

圖3

[圖3]為EGCG(302)和PEG-mEGCG接合物(304)的HPLC圖譜。箭頭表示在280nm監(jiān)測的樣品峰。

圖4

[圖4]為PEG-mEGCG接合物的接合度與反應(yīng)時(shí)間的函數(shù)。

圖5

[圖5]為PEG-mEGCG接合物溶解在D₂O中的¹H NMR光譜。

圖6

[圖6]為阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物制備的示意圖。

圖7

[圖7]為不同的阿霉素/PEG-mEGCG重量比，制備阿霉素/PEG-mEGCG膠球納米復(fù)合物的(A)尺寸和(B)ζ電位的圖。將制備的奈米復(fù)合物(黑色柱狀，702)的尺寸和ζ電位與重構(gòu)的奈米復(fù)合物(交叉柱狀，704)的尺寸和ζ電位進(jìn)行比較。

圖8

[圖8]為不同阿霉素/PEG-mEGCG重量比制備的阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的(A)藥物裝載效率和(B)裝載含量。

圖9

[圖9]為在37℃，PEG-mEGCG：阿霉素重量比＝1:1下，阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物在PBS(pH7.3)的體外藥物釋放曲線。

圖10

[圖10]為SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物制備的示意圖。

圖11

[圖11]為不同PEG-EGCG：SU重量比，SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物的(A)尺寸，(B)PDI和(C)ζ電位。

圖12

[圖12]為不同PEG-EGCG：SU重量比制備的SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物的(A)藥物裝載效率和(B)藥物裝載含量。

圖13

[圖13]為在37℃，PBS(pH7.3)中不同PEG-EGCG：SU重量比的(A)SU/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物和(B)SU/PEG-dEGCG膠球奈米復(fù)合物的體外藥物釋放曲線37℃。

圖14

[圖14]為接受每日口服SU治療(60mg/kg)與接受SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物(具有指定的PEG-EGCG：SU重量比)的小鼠和對照組相比的每周體重測量。

圖15

[圖15]為經(jīng)SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物(具有指定的PEG-EGCG：SU重量比)、SU治療或無治療小鼠的(A)腫瘤大小(通過發(fā)光信號(hào)定量)和(B)熒光圖。

圖16

[圖16]為接受每日口服SU治療(40和15mg/kg)與接受SU/PEG-Megcg8：1膠球奈米復(fù)合物的小鼠和對照組小鼠體重測量。圖17

[圖17]為口服SU/PEG-mEGCG 8:1膠球奈米復(fù)合物、口服SU治療和無治療的老鼠的腫瘤大小。

具體實(shí)施方式

通過參考具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明和比較實(shí)施例的非限制性實(shí)施例，這些實(shí)施例不應(yīng)被解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1:材料和細(xì)胞培養(yǎng)

材料

具硫醇末端的甲氧基-聚乙二醇(PEG-SH，Mw＝5000Da)取自鍵凱科技(中國)。具醛末端的甲氧基-聚乙二醇(PEG-CHO，Mw＝5000Da)取自日本日油株式會(huì)社。(-)-表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯(EGCG，純度>95％)取自栗田工業(yè)股份(日本東京)。丙酮酸鈉溶液(100mM)取自英杰(新加坡)。不含Ca²⁺和Mg²⁺的PBS鹽水(150mM，pH 7.3)于新加坡啟奧的培養(yǎng)基制備設(shè)施制備。DMSO和三乙胺(TEA)購自西格瑪奧瑞奇(新加坡)。阿霉素(DOX·HCl)購自保寧制藥(韓國)。SU(游離堿形式)購自BioVision(US)。所有其他化學(xué)品均為分析等級(jí)。

細(xì)胞培養(yǎng)

人腎癌細(xì)胞A498取自美國典藏培養(yǎng)物保藏中心(ATCC，Manassas，VA，USA)，培養(yǎng)于10％胎牛血清，1％青霉素-鏈霉素，2mM谷胱甘肽和0.1mM非必需氨基酸的DMEM培養(yǎng)基。如所述產(chǎn)生穩(wěn)定表現(xiàn)熒光酵素基因(A498-luc)的A498細(xì)胞株。簡言之，將A498細(xì)胞以5×10⁵個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種在6孔板中，并使用脂質(zhì)體(Lipofectamine)2000(英杰，Carlsbad，CA，USA)用pRC-CMV2-luc質(zhì)體轉(zhuǎn)殖。1天后，將轉(zhuǎn)殖的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到100-mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，于培養(yǎng)基中加入1mg ml^-1遺傳霉素以選擇抗性細(xì)胞。篩選1周后，將抗性細(xì)胞以1個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種在96孔板中以形成聚落。共選擇和擴(kuò)增10個(gè)菌落，并在單管發(fā)光計(jì)(Berthold Lumat LB 9507，Bad Wildbad，Germany)中用Promega Kit(Madison，WI，USA)測量熒光酵素活性。選擇具最高熒光酵素活性的細(xì)胞株，并用500mg m1-1遺傳霉素持續(xù)培養(yǎng)。

實(shí)施例2:PEG-EGCG接合物

在這研究中，兩種類型的PEG-EGCG接合物用于制備膠球奈米復(fù)合物，PEG-mEGCG和PEG-dEGCG，其分別在PEG的一端具有一個(gè)和兩個(gè)EGCG。

合成PEG-mEGCG接合物

PEG-mEGCG接合物透過將EGCG接合到含巰基末端的PEG合成。通常，將EGCG(18.3mg，40μmol)溶解在20mL的PBS和DMSO的1:1(v/v)混合物中。將PEG-SH(Mw＝5000Da，JenKem Technology，China)(100mg，20μmol)獨(dú)自溶于20mL PBS。將PEG-SH溶液滴加到攪拌的EGCG溶液。將未修飾的PEG溶液加入到相同濃度的EGCG攪拌溶液，作為對照組。所得混合物的pH為8.4。將混合物在25℃下攪拌7小時(shí)。于該溶液中加入1.6mL 10％乙酸以將pH調(diào)為4，停止反應(yīng)。將所得溶液轉(zhuǎn)移至截流分子量(MWCO)為1,000Da的透析管中。將管對去離子水透析。將純化的溶液凍干，得到PEG-mEGCG接合物。用¹H NMR光譜證實(shí)PEG-mEGCG接合物的結(jié)構(gòu)。將干燥的PEG-mEGCG接合物以20mg/mL的濃度溶于D₂O，然后用400MHz的Bruker AV-400NMR光譜儀分析。產(chǎn)率：89％。¹H NMR(D2O)：δ2.9(t，PEG的H-α)，3.4(s，PEG的H-γ)，3.5-3.8(m，PEG的質(zhì)子)，5.5(s，C環(huán)的H-2)，5.85(s,C環(huán)的H-3)，6.15(d,A環(huán)的H-6和H-8)，6.9(s，B環(huán)的H-6')，7.05(s,D環(huán)的H-2”和H-6”)。

圖1說明PEG-mEGCG接合物(108)的合成方案。硫醇官能化的PEG(PEG-SH)(102)在堿性pH(106)，DMSO和水1:3(v/v)中，與超過2倍摩爾的EGCG共同培養(yǎng)(PEG-SH：EGCG＝1:2)(104)。報(bào)告指出，pH嚴(yán)重影響EGCG的自氧化過程。在7-9.5的堿性pH范圍內(nèi)，B環(huán)上的沒食子部分比D環(huán)上的沒食子酸酯部分更易于自氧化。結(jié)果，只有B環(huán)上的沒食子部分形成鄰醌。在強(qiáng)堿性條件(pH>10)下，D環(huán)上的沒食子酸酯部分也可以被自動(dòng)氧化以形成鄰醌。在本研究中，反應(yīng)在pH8.4下進(jìn)行，以允許僅在EGCG的B環(huán)上形成鄰醌。隨后PEG-SH與鄰醌的親核加合反應(yīng)，產(chǎn)生通過共價(jià)硫醚鍵結(jié)的PEG-mEGCG接合物。

值得注意的是，接合反應(yīng)在二甲基亞砜(DMSO)的存在下進(jìn)行。因EGCG在與水溶液中的PEG接觸時(shí)會(huì)聚集，應(yīng)避免EGCG與PEG-SH于接合時(shí)發(fā)生聚集。發(fā)現(xiàn)DMSO可有效地防止聚集。基于此一發(fā)現(xiàn)，接合反應(yīng)在DMSO和水的混合物中進(jìn)行。此外，丙酮酸鈉用以清除EGCG自動(dòng)氧化期間產(chǎn)生的H₂O₂。丙酮酸鈉用以保護(hù)游離巰基免受H₂O₂介導(dǎo)的氧化，其可增加用于與EGCG行接合的PEG-SH分子數(shù)目。將所得的PEG-mEGCG接合物在氮?dú)庵型肝黾兓?，然后凍干，得到白色粉末?/p>

PEG-mEGCG接合物的UV-Vis特征

使用可見紫外光(UV-Vis)光譜(圖2)分析PEG-mEGCG接合物。

用Hitachi U-2810分光光度計(jì)(日本)測量PEG-mEGCG接合物的UV-Vis光譜。利用UV-Vis光譜，將干燥的PEG-mEGCG接合物和PEG以0.5mg mL^-1的濃度溶解于去離子水中。與未修飾的PEG(204)不同，PEG-mEGCG接合物(202)在280nm具有強(qiáng)烈的UV吸收峰，表明EGCG成功接合。此外，未觀察到對應(yīng)于EGCG二聚體和其它氧化產(chǎn)物的425nm UV吸收帶。

PEG-mEGCG接合物的HPLC特征

PEG-mEGCG接合物也用反相高效液相色譜(HPLC)評(píng)估。使用裝備有Spirit^TMC18層析柱(5μm，4.6×250mm i.d.，AAPPTec)的Waters 2695分離模組進(jìn)行反相HPLC。EGCG，PEG/EGCG混合物和PEG-mEGCG接合物以1mg mL^-1的濃度溶于去離子水。樣品用1％乙酸的乙腈溶液和1％乙酸的水溶液混合物在25℃下以1mL/分鐘的流速洗脫。關(guān)于流動(dòng)相，乙腈：水的體積比從0分鐘的3:7逐漸增加到10分鐘的4:6。在280nm監(jiān)測洗脫的樣品。通過積分峰面積與從一系列不同濃度的EGCG標(biāo)準(zhǔn)溶液獲得的峰面積進(jìn)行比較來確定EGCG接合的程度。如圖3所示，在4.8分鐘的滯留時(shí)間洗脫EGCG(302)，而在8分鐘時(shí)洗脫P(yáng)EG-mEGCG接合物(304)。滯留時(shí)間的顯著變化可以解釋為親水性PEG鏈結(jié)到EGCG。此外，在PEG-mEGCG接合物的HPLC色譜圖中沒有觀察到EGCG峰，表明未反應(yīng)的EGCG分子通過透析被完全去除。隨著反應(yīng)時(shí)間從6小時(shí)增加到7小時(shí)，EGCG接合的程度從約63％增加到98％(圖4)。然而，當(dāng)反應(yīng)時(shí)間為8小時(shí)時(shí)，接合程度略微降低，可能是因?yàn)镋GCG二聚體和其它氧化產(chǎn)物開始產(chǎn)生。因此，最佳反應(yīng)時(shí)間為7小時(shí)。

PEG-mEGCG接合物的¹H NMR特征

利用¹H核磁共振(NMR)光譜測定PEG-mEGCG接合物的結(jié)構(gòu)。如圖5所示，PEG-mEGCG接合物顯示A環(huán)(δ＝6.15處的H-6和H-8)，C環(huán)(δ＝5.5處的H-2和δ＝5.85處的H-3)和D環(huán)(H-2”和H-6”，在δ＝7.1)。由A，C和D環(huán)產(chǎn)生的質(zhì)子信號(hào)與未修飾的EGCG相似，表明這些部分在接合反應(yīng)期間保持不變。相反，接合反應(yīng)后，B環(huán)的質(zhì)子信號(hào)從6.5ppm移動(dòng)到6.9ppm。質(zhì)子信號(hào)的這種顯著變化可能歸因于PEG-SH與B環(huán)的C2'位置的連接。此外，B環(huán)的NMR峰顯示具有D環(huán)的峰下面積的一半，表明B環(huán)上的一個(gè)質(zhì)子在接合反應(yīng)后消失。觀察到的現(xiàn)象與先前的報(bào)告一致，其中2'-半胱氨酰EGCG的形成導(dǎo)致H-2'原子從B環(huán)消失。上述結(jié)果顯示，只有一個(gè)PEG分子可以特異性地與EGCG的B環(huán)C2'位置接合。

PEG-dEGCG接合物的合成

將EGCG與具有醛端基(PEG-CHO)的PEG接合，以合成PEG-dEGCG接合物。將PEG-CHO(Mw＝5000Da，NOF Co.，Japan)(1.75g)和EGCG(3.25g，7.09mmol)分別溶于乙酸，水和DMSO的混合物中。滴加PEG-CHO溶液開始反應(yīng)，并在20℃下進(jìn)行72小時(shí)。將所得溶液對去離子水透析(MWCO＝3500Da)。將純化的溶液凍干以獲得PEG-dEGCG接合物。

實(shí)施例3：阿霉素/PEG-mEGCG接合物

對于癌癥治療應(yīng)用，PEG-mEGCG接合物被設(shè)計(jì)成能夠在內(nèi)部攜帶大量抗癌藥物的膠球奈米復(fù)合物。在本實(shí)驗(yàn)，PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物作為阿霉素的遞送載體。阿霉素是最廣泛使用的化療試劑之一，并且對各種類型的癌癥如白血病，乳腺癌，卵巢癌和肺癌表現(xiàn)出強(qiáng)的細(xì)胞毒活性。然而，它可引起嚴(yán)重的心臟毒性，并增加充血性心力衰竭，心律失常，低血壓和其他副作用的風(fēng)險(xiǎn)。設(shè)想PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物可以透過在其內(nèi)部穩(wěn)定地包覆藥物分子并以持續(xù)的方式釋放它們而使這種不利的副作用最小化。

阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的制備

使用透析法制備阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物。簡言之，將5mg DOX·HCl溶解在4.5mL二甲基甲酰胺。于該溶液中，以TEA：DOX·HCl摩爾比為5：1加入TEA。將該混合物渦旋攪拌30分鐘以形成去質(zhì)子化的阿霉素(DOX)。將所得DOX溶液與溶解在0.5mL二甲基甲酰胺中的PEG-mEGCG接合物以不同的PEG-mEGCG/DOX重量比混合。將該混合物渦旋攪拌90分鐘，然后轉(zhuǎn)移至截流分子量為2,000Da的透析管中。將試管以去離子水透析24小時(shí)，以獲得阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物。

阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的特征

利用動(dòng)態(tài)光散射(Zetasizer Nano ZS，Malvern，UK)評(píng)估阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的流體動(dòng)力學(xué)直徑，多分散指數(shù)和ζ電位。25℃，在水中進(jìn)行三重復(fù)測量。為了測量阿霉素的負(fù)載量，將20μL分散在水中的奈米復(fù)合物與980μL二甲基甲酰胺混合，以提取阿霉素。使用Hitachi U-2810分光光度計(jì)(日本)測量阿霉素在480nm的吸光度。利用吸光度值與從不同濃度獲得的一系列阿霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液數(shù)值進(jìn)行比較，來確定藥物裝載效率和裝載含量。

圖6說明阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的制備。將PEG-mEGCG接合物(602)和阿霉素(604)共溶于二甲基甲酰胺(606)。將該混合物以蒸餾水透析(608)。當(dāng)從透析管中除去有機(jī)溶劑時(shí)，接合物中的疏水性EGCG部分開始自組裝以形成被親水性PEG鏈殼包圍的膠球核(610)。同時(shí)，阿霉素分子也被分成疏水膠球核心。報(bào)告指出，阿霉素分子容易在水溶液中堆積在一起，因?yàn)槠矫孑飙h(huán)形環(huán)之間的π-π相互作用。由于EGCG具有能夠通過π-π堆積與阿霉素相互作用的多酚結(jié)構(gòu)，因此預(yù)期在膠球奈米復(fù)合物核心中富含的EGCG可為其中的阿霉素包覆提供有利的環(huán)境。此外，表面暴露的PEG鏈可以在膠球奈米復(fù)合物周圍形成保護(hù)殼，以避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除，從而延長血流循環(huán)時(shí)間。

利用動(dòng)態(tài)光散射(DLS)分析阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的尺寸和表面電荷特征。圖7顯示阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的(A)尺寸和(B)ζ電位。

圖7A顯示PEG-mEGCG與阿霉素在不同重量比下制備的膠球奈米復(fù)合物的流體動(dòng)力學(xué)直徑。值得注意的是，奈米復(fù)合物的尺寸范圍為130-180nm。這種小尺寸有利于通過增強(qiáng)的滲透性和保留(EPR)效應(yīng)達(dá)到延長血流循環(huán)和腫瘤靶向。以0.5:1的PEG-mEGCG:阿霉素重量比形成的膠球奈米復(fù)合物的直徑大于以1:1所形成的。截留更高量的阿霉素可能是形成更大膠球奈米復(fù)合物的原因。奈米復(fù)合物是高度單分散的，可由小的多分散指數(shù)(PDI)值明顯落在0.1-0.2的范圍內(nèi)證實(shí)。

如圖7B所示，膠球奈米復(fù)合物具有+15-25mV范圍內(nèi)的正ζ電位。這種陽離子表面電荷歸因于帶正電荷的阿霉素分子在奈米復(fù)合物內(nèi)的包覆。我們還評(píng)估了膠球奈米復(fù)合物在冷凍干燥過程中是否保持其結(jié)構(gòu)完整性。冷凍干燥是用于長期儲(chǔ)存膠體奈米顆粒最常見的一種技術(shù)。將奈米復(fù)合物凍干，然后以相同濃度再分散于去離子水。發(fā)現(xiàn)重構(gòu)的奈米復(fù)合物即使沒有任何凍干保護(hù)劑也能保留原始的粒度和表面電荷。這種高膠體穩(wěn)定性在膠球奈米復(fù)合物的臨床應(yīng)用和商業(yè)化將是有利的。

圖8顯示阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的藥物裝載效率和裝載量。藥物負(fù)載效率高于75％，表明阿霉素有效地被并入在PEG-mEGCG奈米復(fù)合物。由于PEG-mEGCG：阿霉素重量比降低，藥物裝載效率和裝載量均增加。觀察到的負(fù)載含量(35-50w/w％)顯著高于用其它聚合物膠球系統(tǒng)結(jié)果的負(fù)載量。EGCG和阿霉素之間的π-π堆積和/或疏水相互作用可能在PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的高藥物負(fù)載能力中發(fā)揮重要作用。

阿霉素釋放研究

關(guān)于釋放實(shí)驗(yàn)，將0.5mL負(fù)載阿霉素的奈米復(fù)合物(2mg mL^-1)置于截流分子量為2,000Da的透析管中。將管浸入25mL PBS的37℃振蕩培養(yǎng)箱。在給定的時(shí)間點(diǎn)，收集1mL釋放培養(yǎng)基，然后用等體積的新鮮PBS代替。使用Hitachi U-2810分光光度計(jì)(日本)測量阿霉素的480nm吸光度，測定釋放到培養(yǎng)基中的阿霉素含量。

在生理溫度和pH下研究阿霉素/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的藥物釋放曲線。如圖9所示，膠球奈米復(fù)合物顯示阿霉素在PBS中持續(xù)釋放。大約11％負(fù)載的阿霉素在7天內(nèi)釋放。觀察到的釋放速率顯著低于之前其他報(bào)告的阿霉素遞送系統(tǒng)的釋放速率。這種持續(xù)的藥物釋放可能是由膠球奈米復(fù)合物中EGCG和阿霉素之間的強(qiáng)相互作用引起的。此外，僅在初始階段觀察到邊緣爆發(fā)釋放，這表示阿霉素分子穩(wěn)定地包覆在膠球奈米復(fù)合物中。這種低藥物滲漏對于以最小的副作用確保最大治療功效是必要的，因?yàn)榘苍谀蚊讖?fù)合物中的藥物分子在血流循環(huán)期間不會(huì)過早地滲漏。總之，這些結(jié)果證明PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物可以應(yīng)用于阿霉素的全身性癌癥治療。

實(shí)施例4：SU/PEG-EGCG接合物

制備SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物

圖10說明使用固體分散方法形成SU/PEG-EGCG接合物。簡言之，將2mg的SU(1006)溶解在1mL的氯仿。然后將SU溶液以不同的PEG-EGCG：SU重量比(1008)加到玻璃小瓶中的PEG-EGCG接合物(PEG-mEGCG(1002)或PEG-dEGCG(1004))中并渦旋攪拌，然后減壓(1010)蒸發(fā)氯仿溶液，加入2mL水于所得的PEG-EGCG和SU混合物(1012)的薄膜表面(1014)，進(jìn)行水合，并在室溫反應(yīng)24小時(shí)，當(dāng)所得固體膜水合后，自水合PEG鏈中分離SU和EGCG，PEG-EGCG自組裝形成膠球奈米復(fù)合物。然后利用0.8-μm過濾器(Sartorius Stedim)過濾(1016)SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物溶液，移除剩下游離的藥物試劑，產(chǎn)生透明的SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物溶液(1018)。關(guān)于體內(nèi)研究樣品，使用0.2-μm過濾器(Sartorius Stedim Biotech GmbH，德國)進(jìn)一步過濾SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物溶液。

應(yīng)當(dāng)注意，除非另有說明，PEG-EGCG接合物是指PEG-mEGCG和PEG-dEGCG。

由于EGCG具有能透過疏水相互作用和π-π堆積與SU相互作用的多酚結(jié)構(gòu)，預(yù)期在膠球奈米復(fù)合物的核中富含的EGCG將為SU包埋提供有利的環(huán)境。此外，表面暴露的PEG鏈將在膠球奈米復(fù)合物周圍形成高度水合的殼以避免RES的清除，從而允許延長血流中的循環(huán)和副作用的減少。

SU/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的特征

利用動(dòng)態(tài)光散射(DLS)(Zetasizer Nano ZS，Malvern，UK)評(píng)估SU/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物的流體動(dòng)力學(xué)直徑，尺寸分布和表面電荷。在25℃下在水中進(jìn)行三重復(fù)測量。圖11A顯示在不同PEG-EGCG：SU重量比下制備的膠球奈米復(fù)合物的流體動(dòng)力學(xué)直徑。值得注意的是，在130-250nm的尺寸范圍內(nèi)產(chǎn)生的膠球奈米復(fù)合物。奈米尺寸將有利于通過EPR效應(yīng)延長循環(huán)和腫瘤靶向。通過改變PEG-EGCG：SU重量比控制膠球奈米復(fù)合物的特性。圖11B顯示在PEG-EGCG：SU重量比為8和16所形成的膠球奈米復(fù)合物是高度單分散的。當(dāng)PEG-EGCG：SU重量比增加時(shí)，膠球奈米復(fù)合物的正電荷降低(圖11C)。略帶正電的表面電荷歸自其包覆帶正電荷的SU分子。

為了測量藥物裝載效率和量，將10μL在水中的膠球奈米復(fù)合物溶解于990μL的DMF中，使用Hitachi U-2810可見紫外(UV-Vis)分光光度計(jì)(UV-Vis)在431nm測量SU的吸光度(日本)。用SU標(biāo)準(zhǔn)溶液獲得的校正曲線決定裝載效率和量。

圖12顯示SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物的藥物裝載效率和藥物裝載量。隨著PEG-EGCG：SU重量比從1增加到16，藥物負(fù)載效率從增加到SU/PEG-dEGCG膠球奈米復(fù)合物的負(fù)載效率高于SU/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物，表示與PEG-mEGCG相比，SU與PEG-dEGCG有更大的相互作用。還發(fā)現(xiàn)膠球奈米復(fù)合物的負(fù)載效率與過濾前未負(fù)載的SU沉淀物的量相關(guān)。當(dāng)PEG-EGCG：SU重量比增加到8時(shí)，沒有發(fā)現(xiàn)SU沉淀。如所預(yù)期的，由于PEG-EGCG：SU重量比增加，由于膠球奈米復(fù)合物中PEG-EGCG的含量較高，膠球奈米復(fù)合物的負(fù)載量降低。

SU釋放研究

在生理?xiàng)l件(磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)，pH 7.3，37℃)下進(jìn)一步研究SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物的藥物釋放曲線。SU釋放實(shí)驗(yàn)，將0.5mL的SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物(0.4mg mL^-1)置于透析管(截流分子量＝2,000Da)中。將管浸入25mL PBS，置于37℃振蕩培養(yǎng)箱。在給定的時(shí)間點(diǎn)，收集1mL釋放培養(yǎng)基，然后用等體積的新鮮PBS代替。利用Hitachi U-2810分光光度計(jì)測量431nm的吸光度來測量釋放到培養(yǎng)基中的SU含量。

如圖13所示，膠球奈米復(fù)合物在PBS中表現(xiàn)出SU的持續(xù)釋放，這可歸因于EGCG和SU間在膠球奈米復(fù)合物中的強(qiáng)相互作用。此外，幾乎沒有觀察到任何爆發(fā)釋放，這表明SU分子穩(wěn)定地包覆在膠球奈米復(fù)合物中。由于SU和mEGCG之間相互作用較弱，SU/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物顯示出比SU/PEG-dEGCG膠球納奈米復(fù)合物更快和更多的SU釋放。釋放速率和量也取決于PEG-EGCG：SU重量比。對于SU/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物而言，釋放速率和量隨著PEG-EGCG：SU重量比增加而降低。除了較慢和較低的釋放與PEG-EGCG：SU重量比為8相關(guān)之外，PEG-EGCG：SU重量比不顯著影響SU/PEG-dEGCG在膠球奈米復(fù)合物中的釋放速率和量。

體內(nèi)治療研究

為了研究毒性和治療效果，用膠球奈米復(fù)合物進(jìn)行體內(nèi)研究。建立皮下腎細(xì)胞癌模型。使用成年雌性Balb/c無胸腺無免疫功能的裸鼠(平均體重＝19g，年齡＝6-8周)

為了研究靜脈內(nèi)注射SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物的治療效果，將6×10⁶個(gè)A498-luc細(xì)胞皮下接種到小鼠左大腿的根部，建立異種移植腫瘤模型。腫瘤接種后第6天，將動(dòng)物分為四組，每周兩次于尾靜脈注射各種溶液(每組數(shù)量＝8)，持續(xù)5周，而一組接受每日60mg/kg的SU。尾靜脈注射，使用200μl樣品溶液體積。

為了監(jiān)測A498-luc細(xì)胞的生物發(fā)光信號(hào)，將異氟醚氣體麻醉的動(dòng)物腹膜內(nèi)注射200μl溶于PBS的D-熒光素(5mg ml^-1，Promega)，并置于相機(jī)箱內(nèi)的溫?zé)犭A段(30℃)的IVIS成像系統(tǒng)(Xenogen，Alameda，CA，USA)。在熒光素注射20分鐘后獲取發(fā)光圖像，采集30秒。A498-luc細(xì)胞發(fā)射的光被數(shù)字化并作為偽彩色覆蓋物以電子顯示在動(dòng)物的灰度圖像上。獲取發(fā)光信號(hào)的圖像和測量，并用Xenogen成像軟件v3.2進(jìn)行分析并定量為光子/s。每周測量腫瘤大小和體重。動(dòng)物的所有處理和護(hù)理根據(jù)遵照新加坡國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究咨詢委員會(huì)發(fā)布的用于科學(xué)目的的動(dòng)物的護(hù)理和使用指南進(jìn)行。

所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(SEM)表示。利用Student's t-統(tǒng)計(jì)檢定平均值之間差異的顯著性。利用SigmaStat 3.5的Bonferroni's和ANOVA進(jìn)行多重比較檢定。P值<0.05被認(rèn)為是具統(tǒng)計(jì)顯著意義。

根據(jù)膠球奈米復(fù)合物尺寸、尺寸分布和表面電荷，選擇SU/PEG-mECGC膠球奈米復(fù)合物(PEG-EGCG:SU重量比為8和16)和SU/PEG-dEGCG膠球奈米復(fù)合物(PEG-EGCG:SU重量比為8)做體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。每周靜脈內(nèi)注射兩次SU/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物，持續(xù)5周，一組每天灌食SU60mg/kg?；谙惹皥?bào)告選擇60mg/kg/天的口服藥物劑量，其證明了在小鼠中最佳臨床前抗腫瘤功效的SU劑量為40-80mg/kg/天。關(guān)于我們的研究，以每天60mg/kg代表有效的抗腫瘤劑量，因?yàn)槠渌芯勘砻髅刻?lt;40mg/kg的劑量是低效的，且每天120mg/kg的劑量將測試進(jìn)一步提高藥物施用的效果。

圖14顯示在開始治療后一周，接受口服游離SU組別的體重顯著減輕。這在接受SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物的其他組中沒有觀察到。與每日口服SU治療相比，當(dāng)每周施用兩次SU/PEG-EGCG膠球納奈米復(fù)合物時(shí)，抗腫瘤效應(yīng)增強(qiáng)(圖15)。使用SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物的這種抗腫瘤作用約為口服劑量近十分之一的濃度。即使治療在5周后停止，SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物的抑制作用也維持相當(dāng)長的時(shí)間。與接受膠球奈米復(fù)合物治療的組別相比，接受口服治療組的腫瘤再生長的速度明顯快得多。

為了研究口服SU/PEG-mEGCG MNC的治療效果，將懸浮在100μlPBS和100μl基質(zhì)膠(Matrigel)(BD Bioscience)的4×10⁶個(gè)ACHN細(xì)胞經(jīng)皮下接種到右大腿根部，建立老鼠異種移植腫瘤模型。一旦腫瘤體積達(dá)到200mm³，將動(dòng)物分成四組，每天口服灌胃各種溶液(每組數(shù)量＝8)，持續(xù)5周：對照組(pH＝5的檸檬酸鹽緩沖液)，SU/PEG-mEGCG 8:1(SU為15mg/kg)，15和40mg/kg的SU。使用數(shù)字卡尺每周測量腫瘤兩次，并由下式計(jì)算腫瘤體積(mm³)：體積＝(長度×寬度²)/2(圖16和17)。

由于每日60mg/kg的口服SU劑量已顯示太毒，在本公開中，每日口服SU劑量減少至40mg/kg。根據(jù)之前的報(bào)告，每天40mg/kg的口服劑量是小鼠抗腫瘤功效的最佳臨床前劑量(40-80mg/kg/天)。圖16顯示在治療期間接受40mg/kg SU的組別體重顯著減輕。這在接受SU/PEG-mEGCG MNC 8：1和SU以15mg/kg治療的其他組中沒有觀察到。在與15mg/kg相同的SU劑量下，與單獨(dú)的SU相比，SU/PEG-mEGCG MNC顯著顯示更高的治療效果(圖17)。使用SU/PEG-mEGCG MNC的抗腫瘤效果約為小于最佳口服劑量40mg/kg的一半濃度。即使治療在5周后停止，SU/PEG-mEGCG MNC的抑制作用也維持了相當(dāng)長的時(shí)間。

考量腫瘤血管的解剖生理性質(zhì)的EPR效應(yīng)，有利大于40kDa的大分子選擇性地從腫瘤血管中滲出并在腫瘤組織中積累的傳送。大多數(shù)固態(tài)瘤具有血管結(jié)構(gòu)缺陷，這通常導(dǎo)致大量的血管通透性。這在正常組織中不會(huì)發(fā)生。本發(fā)明公開了通過靜脈內(nèi)和口服給藥的SU/PEG-mEGCG膠球奈米復(fù)合物作為第一次用于ccRCC可能療法的用途。已經(jīng)觀察到EGCG與SU相互作用，并且在大鼠中的藥代動(dòng)力學(xué)研究顯示施用EGCG顯著降低SU的血漿濃度。被報(bào)告過的綠茶與SU的相互作用，和膠球奈米顆粒在各種腫瘤中的EPR效應(yīng)，表明使用PEG-EGCG作為遞送SU的奈米顆粒載體的可能性。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，高度血管生成的腫瘤中，抗血管生成治療已顯示顯著但短暫的功效。這種腫瘤主要通過由VEGF驅(qū)動(dòng)的過程刺激新血管的形成，但所得血管在結(jié)構(gòu)和功能上異常。在這種情況下使用SU/PEG-EGCG膠球奈米復(fù)合物具增強(qiáng)抗血管生成活性的潛力。

產(chǎn)業(yè)應(yīng)用

膠球奈米復(fù)合物可以應(yīng)用于全身施用阿霉素的癌癥治療。膠球奈米復(fù)合物可作為傳送SU的奈米顆粒載體。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，高度血管生成的腫瘤，抗血管生成治療已顯示有用但短暫的功效。這種腫瘤主要通過由VEGF驅(qū)動(dòng)的過程刺激新血管生成，但新生血管的結(jié)構(gòu)和功能異常。利用包覆SU的膠球奈米復(fù)合物，可潛在地增強(qiáng)抗血管生成活性。膠球奈米復(fù)合物可作為全身施用治療劑時(shí)的持續(xù)釋放，或當(dāng)作傳送治療劑到靶位的運(yùn)送系統(tǒng)。膠球奈米復(fù)合物可用于包覆治療不同種類癌癥的各種試劑。膠球奈米復(fù)合物也可用于包覆非癌性治療的各種試劑。這可包括用于抗生素和其他醫(yī)療應(yīng)用的小分子。顯而易見的，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況，在閱讀前述公開內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員就本發(fā)明的各項(xiàng)修改和調(diào)整將是容易的，且修改和調(diào)整的意圖應(yīng)屬專利申請范圍。