本發(fā)明大體涉及用于治療和/或預(yù)防神經(jīng)性疾病和障礙的方法。特別地，本發(fā)明的方法在哺乳動(dòng)物的獲得性或進(jìn)行性神經(jīng)發(fā)育障礙和病況的治療和/或預(yù)防中尤其有用。更特別地，本文教導(dǎo)了用于治療和/或預(yù)防疾病和障礙如孤獨(dú)癥譜系障礙(autism spectrum disorders)的方法。

背景技術(shù)：

神經(jīng)性疾病和障礙代表潛在使人衰弱的病況并可影響所有年齡段的人。這樣的疾病可以是獲得性或先天性的。神經(jīng)發(fā)育障礙表示以腦或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生長和發(fā)育受損為特征的一部分障礙。它們與廣泛不同程度的困難相關(guān)，這些困難對(duì)于個(gè)體可能具有重大的精神、情緒、身體和經(jīng)濟(jì)后果。

獲得性神經(jīng)性疾病或障礙可能是創(chuàng)傷性的，即，其中外力導(dǎo)致對(duì)腦的損傷；或由例如感染、疾病、毒性、氧或葡萄糖剝奪導(dǎo)致的損傷。先天性神經(jīng)障礙通常在出生時(shí)或出生前便存在，并且可能是遺傳異常、宮內(nèi)環(huán)境、形態(tài)發(fā)生錯(cuò)誤、感染或染色體異常的結(jié)果。神經(jīng)發(fā)育障礙可以是獲得性或先天性的。根據(jù)本發(fā)明的神經(jīng)發(fā)育疾病或障礙可包括，例如，孤獨(dú)癥譜系障礙。

孤獨(dú)癥譜系障礙(ASD)是復(fù)雜的一組散發(fā)性和家族性發(fā)育障礙，其影響1/150的出生人數(shù)，并且以異常的社會(huì)互動(dòng)、溝通障礙、社交障礙，以及行為、興趣或活動(dòng)的限制性、重復(fù)性模式為特征。ASD包括孤獨(dú)癥、自閉性障礙、Asperger障礙、兒童期瓦解性障礙(Childhood Disintegrative Disorder)和待分類的廣泛性發(fā)育障礙(Pervasive Developmental Disorder-Not Otherwise Specified，PDD-NOS)以及Rett綜合征。對(duì)ASD的病因?qū)W了解很少，并且還沒有鑒定出單一的具體病因。然而，某些危險(xiǎn)因素被認(rèn)為有助于ASD的發(fā)展，包括遺傳學(xué)、產(chǎn)前和圍產(chǎn)期因素、神經(jīng)解剖學(xué)異常和環(huán)境因素。例如，遺傳基礎(chǔ)通過單卵(MZ)雙胞胎中大于70％的一致性和與群體相比在同胞中提高的風(fēng)險(xiǎn)得到證明。

孤獨(dú)癥譜系障礙是高度可變的神經(jīng)發(fā)育障礙；不是由單一癥狀區(qū)分，而是由通常在嬰兒期或兒童期首次出現(xiàn)的多種特有癥狀區(qū)分。相關(guān)癥狀可在六個(gè)月齡之后開始出現(xiàn)，在大約兩歲或三歲形成，并持續(xù)整個(gè)成年期。

ASD在男性中比在女性中更常見，比例為約5.5:1。令人驚訝的是，唯一的性連鎖ASD相關(guān)基因神經(jīng)配蛋白3的突變?cè)贏SD患者中是罕見的，并且迄今為止還沒有在ASD連鎖或GWAS研究中鑒定出其他性連鎖基因。然而，兩性腦表達(dá)CYP19A1(編碼芳香化酶，即合成雌激素的酶)基因遠(yuǎn)離15q23-q25 7處的提示性ASD連鎖僅19Mb。最近，據(jù)報(bào)道在ASD患者中芳香化酶的表達(dá)降低。此外，已經(jīng)報(bào)道CYP19A1是與閱讀、講話和語言有關(guān)的人類認(rèn)知功能的候選基因。

迄今為止，還沒有ASD的治愈方法，并且尚未確定單一、有效的治療。當(dāng)前針對(duì)孤獨(dú)癥譜系障礙的治療旨在提高生活質(zhì)量和功能獨(dú)立性，以及減少相關(guān)缺陷和家庭痛苦。在某些情況下，教育或行為治療可改善功能并降低癥狀嚴(yán)重程度。除行為治療之外，當(dāng)行為治療失敗時(shí)已不同程度成功地使用多種不同的藥物特定地減少了妨礙社會(huì)融合和功能的ASD癥狀。這樣的藥物包括精神藥物、抗驚厥藥、抗抑郁藥、興奮劑和抗精神病藥。然而，ASD患者經(jīng)常非典型地響應(yīng)于藥物，或處方藥物可能具有其他不良副作用。已知沒有減輕或逆轉(zhuǎn)ASD的核心癥狀如社交和溝通障礙的單一藥物。

因此，仍然需要開發(fā)治療和/或預(yù)防神經(jīng)發(fā)育障礙如ASD的新的治療劑或方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本申請(qǐng)的申請(qǐng)人驚訝地發(fā)現(xiàn)，10-HAD、包含10-羥基-2-癸烯酸(10-HDA)的組合物及其藥學(xué)上可接受的鹽提供了用于治療和/或預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病或障礙，尤其是神經(jīng)發(fā)育障礙如孤獨(dú)癥譜系障礙的有效療法。

10-HDA也被稱為蜂王酸，是一種脂肪酸，并且是蜂王漿(royal jelly)的關(guān)鍵組分；其為在幼蟲和成年蜂王營養(yǎng)中使用的蜜蜂分泌物。反式或(E)10-HDA具有以下結(jié)構(gòu)：

這與具有以下結(jié)構(gòu)的順式或(Z)10-HDA的結(jié)構(gòu)形成對(duì)比：

在整個(gè)說明書中，提及10-HDA旨在表示提及該化合物的反式或(E)異構(gòu)形式，其在本發(fā)明的語境中已被發(fā)明人確定為該化合物的活性形式。

在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了用于治療和/或預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病或障礙的方法，該方法包括向有需要的哺乳動(dòng)物施用有效量的10-羥基-2-癸烯酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病或障礙可以是神經(jīng)發(fā)育疾病或障礙，包括獲得性神經(jīng)發(fā)育疾病或障礙、先天性神經(jīng)發(fā)育疾病或障礙或相關(guān)病況。

與本發(fā)明相關(guān)的疾病或障礙的實(shí)例包括：孤獨(dú)癥譜系障礙，胎兒酒精譜系障礙，包括發(fā)育性協(xié)調(diào)障礙、刻板運(yùn)動(dòng)障礙和抽動(dòng)障礙(包括Tourette綜合征)在內(nèi)的運(yùn)動(dòng)障礙，諸如引起腦性癱瘓、溝通、講話和語言障礙的那些損傷的先天性損傷，遺傳性障礙如脆性X綜合征、唐氏綜合征，以及注意缺陷多動(dòng)障礙。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述神經(jīng)發(fā)育障礙可以是孤獨(dú)癥譜系障礙，尤其是選自自閉性障礙、Asperger障礙、兒童期瓦解性障礙和待分類的廣泛性發(fā)育障礙以及Rett綜合征的孤獨(dú)癥譜系障礙。

在其他方面，根據(jù)本發(fā)明的10-羥基-2-癸烯酸或其藥學(xué)上可接受的鹽可作為組合物施用。例如，所述組合物可包含蜂王漿、蜂王漿提取物，或來源于蜂王漿的組合物。

在其他方面，本發(fā)明提供了10-羥基-2-癸烯酸或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療和/或預(yù)防包括ASD在內(nèi)的神經(jīng)發(fā)育疾病或障礙的藥物中的用途。

除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語均具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解的含義相同的含義。

在本說明書中對(duì)任何現(xiàn)有技術(shù)的引用都不是并且不應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是承認(rèn)或以任何形式暗示該先前技術(shù)構(gòu)成公知常識(shí)的一部分。

附圖說明

圖1：BPA和10-HDA對(duì)人類成神經(jīng)細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞中的芳香化酶表達(dá)的影響。在正常情況下，SH-SY5Y細(xì)胞表達(dá)芳香化酶，芳香化酶是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的膜結(jié)合蛋白，并且通過免疫組織化學(xué)而表現(xiàn)為最終分布于細(xì)胞內(nèi)的綠色點(diǎn)狀染色。在25μg/L雙酚A的存在下，芳香化酶變?yōu)榫奂w。雙酚A的影響可通過添加10HDA來改善。(a)+0μg/L BPA(媒介物)——芳香化酶的清晰染色(綠色)在細(xì)胞質(zhì)中且沿著神經(jīng)突均勻分布，呈微小的“點(diǎn)”。許多健康細(xì)胞均勻地分布在蓋玻片的表面區(qū)域上。B-微管蛋白(紅色)在整個(gè)細(xì)胞質(zhì)和神經(jīng)突中高度表達(dá)。(b)+25μg/L BPA——一些細(xì)胞群體開始失去它們的神經(jīng)突(黃色箭頭)。在大多數(shù)失去了它們的神經(jīng)突的細(xì)胞中還觀察到了β-微管蛋白表達(dá)的降低。芳香化酶聚集體開始在這些失去了它們的神經(jīng)突(asterix)的細(xì)胞中形成。(c)+25μg/L BPA+1mM 10HDA——觀察到良好的神經(jīng)突生長和在整個(gè)細(xì)胞質(zhì)中均勻的芳香化酶分布。10HDA的添加改善了BPA對(duì)芳香化酶的表達(dá)模式和神經(jīng)突的影響。

圖2：暴露于BPA的雄性ArKO小鼠的孤獨(dú)癥樣行為。A.社會(huì)互動(dòng)研究；B.超聲波發(fā)聲；C.雄性理毛(grooming)頻率；D.雄性理毛持續(xù)時(shí)間；E.進(jìn)行轉(zhuǎn)輪活動(dòng)；和F.對(duì)暴露于BPA的后代的社會(huì)互動(dòng)研究。

圖3：BPA暴露對(duì)子宮內(nèi)芳香化酶-GFP陽性神經(jīng)元的影響，通過標(biāo)準(zhǔn)體視學(xué)方法計(jì)數(shù)。

圖4：10-HDA對(duì)暴露于BPA的小鼠的影響的社會(huì)互動(dòng)和電生理學(xué)/樹突長度研究。A.向斷奶后的暴露于BPA的雄性小鼠每日注射10-HDA；B.撤銷10-HDA處理后3個(gè)月；C.在最初撤銷之后，隨后再施用10-HDA；D.在3周10-HDA處理之后，在暴露于BPA的雄性后代中觀察到過度理毛；E.在對(duì)照、BPA和BPE+10-HDA處理的小鼠的內(nèi)側(cè)杏仁核中神經(jīng)元的電阻；以及F.在對(duì)照、BPA和BPE+10-HDA處理的小鼠中神經(jīng)元的基底樹突長度。

圖5-圖9：BPA和10-HDA對(duì)雄性小鼠胚胎的原代皮層細(xì)胞培養(yǎng)的影響的體外分析。

圖10：條形圖顯示了順式和反式10-HDA在保護(hù)NSC-34細(xì)胞免受毒性BPA暴露方面的活性的比較，其中DMSO表示僅暴露于DMSO媒介物的細(xì)胞，而-ve表示在不存在10-HDA時(shí)暴露于BPA的陰性對(duì)照細(xì)胞。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明涉及治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病或障礙的方法，該方法包括向有需要的哺乳動(dòng)物施用有效量的10-HDA。

本發(fā)明的方法有利地減輕神經(jīng)性障礙的核心癥狀，尤其是與神經(jīng)發(fā)育障礙如ASD相關(guān)的癥狀。在一些方面，本發(fā)明的方法有利地減輕孤獨(dú)癥癥狀，例如，社會(huì)互動(dòng)缺陷的嚴(yán)重程度。

盡管可以在預(yù)防意義上施用所述化合物，但優(yōu)選所述人需要這樣的治療。

提及的“神經(jīng)發(fā)育病況”、“神經(jīng)發(fā)育障礙”或“神經(jīng)發(fā)育疾病”可互換使用，并且應(yīng)被理解為提及以基于神經(jīng)學(xué)的認(rèn)知、情緒和行為障礙為特征的病況。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述神經(jīng)發(fā)育病況是以包括孤獨(dú)癥在內(nèi)的ASD的一種或多種癥狀為特征的病況。

如本文所用的術(shù)語孤獨(dú)癥譜系障礙(ASD)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是清楚的，并且其包括自閉性障礙、Asperger障礙、兒童期瓦解性障礙和待分類的廣泛性發(fā)育障礙(PDD-NOS)以及Rett綜合征，如2013年5月出版的精神病診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)5(DSM-5)中所定義的。精神病診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)5通過三個(gè)關(guān)鍵診斷標(biāo)準(zhǔn)的存在概括了ASD的診斷：

a)社會(huì)功能受損：從社會(huì)群體中退出或逃避；

b)交流缺陷：包括無法進(jìn)行講話，使用刻板的或延遲的模仿言語，和難以維持談話；以及

c)重復(fù)刻板的行為：過度且多余的活動(dòng)。

提及“ASD特有的癥狀”應(yīng)理解為提及可在患有ASD的個(gè)體中發(fā)生的任何一種或多種癥狀。這些癥狀可能在整個(gè)病程中是明顯的，或它們可能僅短暫或周期性地明顯。例如，個(gè)體可響應(yīng)于特定環(huán)境誘因或應(yīng)激源而表現(xiàn)出嚴(yán)重的社會(huì)功能受損。還應(yīng)當(dāng)理解，所有患有ASD的個(gè)體可能不一定都表現(xiàn)出主題癥狀。例如，一些個(gè)體可能具有溝通缺陷，諸如無法進(jìn)行講話。然而，針對(duì)本發(fā)明的目的，任何這樣的癥狀(不論有多少ASD患者曾經(jīng)實(shí)際上表現(xiàn)出給定的癥狀)均被該定義所涵蓋。本發(fā)明不限于任何一種理論或作用方式，最常與ASD相關(guān)的癥狀包括社會(huì)功能受損和交流缺陷。

ASD特有的社會(huì)功能受損的實(shí)例包括但不限于：

·12月齡時(shí)對(duì)叫名字沒有回應(yīng)；

·回避目光接觸；

·更喜歡獨(dú)自玩耍；

·不與他人分享興趣；

·只為了達(dá)到期望目標(biāo)而互動(dòng)；

·具有單調(diào)或不適當(dāng)?shù)拿娌勘砬椋?/p>

·不理解個(gè)人空間界限；

·回避或抗拒身體接觸；

·在痛苦時(shí)不能被他人安慰；或

·難以理解他人的感受或談?wù)撟约旱母惺堋?/p>

ASD特有的溝通缺陷的實(shí)例包括但不限于：

·延遲的講話和語言技能；

·反復(fù)重復(fù)詞或短語(模仿言語)；

·顛倒代詞(例如，說“你”而不是“我”)；

·給出與問題無關(guān)的回答；

·不指示或?qū)χ甘緵]有反應(yīng)；

·很少或不使用手勢(shì)(例如，不揮手再見)；

·以單調(diào)、機(jī)器人般的或唱歌的聲音講話；

·不玩假扮(例如，不假裝“喂”玩偶)；或

·不理解笑話、諷刺或戲弄。

關(guān)于重復(fù)的動(dòng)作，其包括可反復(fù)重復(fù)的活動(dòng)。它們可包括身體的一部分或整個(gè)身體或甚至物體或玩具。例如，患有ASD的人可能花大量時(shí)間重復(fù)拍打他們的手臂或從一邊搖擺到另一邊。他們可能重復(fù)地開燈和關(guān)燈或旋轉(zhuǎn)玩具汽車的車輪。這些類型的活動(dòng)被描述為自我刺激(或稱為“stimming”)。

患有ASD的人通常在例常中茁壯成長。在一天的正常模式中的變化可能令患有ASD的個(gè)體非常心煩意亂。他們可能“失去控制”和“崩潰”或發(fā)怒，尤其是在環(huán)境不熟悉的情況下。

患有ASD的個(gè)體可開展可能被認(rèn)為是不尋常或不必要的日?；顒?dòng)。例如，患有ASD的個(gè)體可能試圖向他或她走過的建筑物的每扇窗戶內(nèi)察看，或可能總想要從頭到尾觀看視頻，包括預(yù)告片和片尾字幕。偏離這些類型的日常活動(dòng)可能引起嚴(yán)重的挫折和發(fā)怒。

除了在ASD患者之間關(guān)于他們表現(xiàn)出哪些癥狀可以有顯著變化的事實(shí)之外，還應(yīng)理解存在也以這些癥狀中的一種或多種為特征的其他神經(jīng)發(fā)育病況和障礙。例如，ASD患者表現(xiàn)的社交缺陷和溝通困難通常也在患有胎兒酒精譜系障礙或唐氏綜合征的患者中觀察到。因此，提及以ASD特有的一種或多種癥狀為特征的病況應(yīng)理解為提及以存在這些癥狀中的一種或多種為特征的任何神經(jīng)發(fā)育病況。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述病況為以ASD的一種或多種癥狀為特征的病況。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述病況為孤獨(dú)癥。

本發(fā)明部分地基于芳香化酶表達(dá)在ASD患者中降低的最近報(bào)道。鑒于此，并且不希望受理論約束，假定芳香化酶敲除小鼠(ArKO)模型可表現(xiàn)出反映ASD的一些關(guān)鍵診斷行為和癥狀(包括例如ASD樣行為障礙)的行為表型。本發(fā)明人已經(jīng)證明，正常功能的芳香化酶的缺少將促成雄性芳香化酶敲除小鼠(ArKO)中的ASD樣行為障礙，這與在人類群體中觀察到的ASD在男性中比在女性中更常見是一致的。

使用雄性ArKO小鼠表現(xiàn)出的行為表型作為進(jìn)一步比較研究的基礎(chǔ)。特別地，本發(fā)明人還調(diào)查了環(huán)境暴露于在聚碳酸酯塑料和環(huán)氧樹脂的制備中使用的雙酚A(BPA)在隨后的孤獨(dú)癥樣行為發(fā)展中的作用。為此，表現(xiàn)出ASD樣特征的ArKO小鼠提供了調(diào)查暴露于BPA的影響的比較手段。

如本文所用的術(shù)語“哺乳動(dòng)物”包括人類、靈長類、家畜動(dòng)物(例如，馬、牛、羊、豬、驢)、實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠)、玩賞動(dòng)物(例如，狗、貓)和圈養(yǎng)野生動(dòng)物(例如，袋鼠、鹿、狐貍)。優(yōu)選地，該哺乳動(dòng)物是人類。

對(duì)于上述病況中的某些病況，很顯然本發(fā)明的方法可以預(yù)防性使用以及用于緩解急性癥狀。因此，本文提及的“治療”等應(yīng)被理解為包括這樣的預(yù)防性處理，以及急性病況的處理。

如本文所用的術(shù)語“指示”表示受試者與呈現(xiàn)出或可能呈現(xiàn)出相同的或相似的臨床表現(xiàn)或?qū)χ委煹捻憫?yīng)的一組或一群受試者的緊密關(guān)聯(lián)或聯(lián)系。例如，ASD的臨床表現(xiàn)被ASD的癥狀所涵蓋。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將熟悉施用傳統(tǒng)抗精神病和抗抑郁藥物的困難，包括在觀察到抗抑郁作用之前的停滯期和在治療初期的高度的焦慮。因此，在某些實(shí)施方案中，可以設(shè)想本文所述的10-HDA、藥學(xué)上可接受的鹽或包含10-HDA的組合物可作為傳統(tǒng)藥物的替代品或替代物施用于有需要的人。在其他實(shí)施方案中，可以設(shè)想10-HDA、藥學(xué)上可接受的鹽或包含10-HDA的組合物可作為傳統(tǒng)藥物的補(bǔ)充物或輔助物施用于有需要的受試者。在其他實(shí)施方案中，可以設(shè)想10-HDA或包含10-HDA的組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可在沒有輔助治療的情況下施用于有需要的人。在其他實(shí)施方案中，可以設(shè)想10-HDA、包含10-HDA的組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可與行為或認(rèn)知治療聯(lián)合或作為行為或認(rèn)知治療的輔助施用于有需要的人。

用10-HDA、包含10-HDA的組合物或藥學(xué)上可接受的鹽替代傳統(tǒng)藥物可能是有利的，特別是在傳統(tǒng)藥物與一種或多種不良反應(yīng)(例如，嗜睡、震顫、焦慮、自殺意念等)相關(guān)的情況下。藥物的實(shí)例是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且包括但不限于，選擇性5-羥色胺再吸收抑制劑(SSRI)、抗精神病藥、抗抑郁藥、鋰(lithium)和其他情緒穩(wěn)定劑。

在其他實(shí)施方案中，將本發(fā)明化合物連同傳統(tǒng)藥物一起施用于有需要的受試者持續(xù)離散的一段時(shí)間，以解決諸如精神異常、抑郁或焦慮等癥狀，其中選擇中斷采用本發(fā)明提取物和分離的化合物的治療，同時(shí)繼續(xù)進(jìn)行傳統(tǒng)治療。在其他實(shí)施方案中，有需要的人可在治療期期間采用本文所述的化合物和一種或多種傳統(tǒng)藥物進(jìn)行治療(依次或聯(lián)合施用)。這樣的聯(lián)合治療在例如需要附加的或協(xié)同的治療效果的情況下可能特別有用。

關(guān)于障礙或疾病的“治療”或“處理”是指減輕或消除該障礙或疾病的病因和/或影響。如本文所用的術(shù)語“治療”和“處理”是指由施用一種或多種治療(例如，一種或多種治療劑，如本發(fā)明的化合物或組合物)而產(chǎn)生的病況的進(jìn)展、嚴(yán)重性和/或持續(xù)時(shí)間的減少或改善，或所述病況的一種或多種癥狀(例如，一種或多種可辨別的癥狀)的改善(即，“處理”而非“治愈”該病況)。在特定的實(shí)施方案中，術(shù)語“治療”和“處理”是指改善本文所述病況的至少一個(gè)可測(cè)量的物理參數(shù)。在其他實(shí)施方案中，術(shù)語“治療”和“處理”是指通過例如穩(wěn)定可辨別的癥狀在身體上，或通過例如穩(wěn)定物理參數(shù)在生理上，或通過這兩者抑制本文所述病況的進(jìn)展。

所需的治療活性或效果通常將取決于被治療的病況。例如，在受試者正在治療精神分裂癥的情況下，該治療效果可以是精神分裂癥的至少一種臨床癥狀的減少，該臨床癥狀包括但不限于焦慮、自殺想法、認(rèn)知障礙、食欲不振、情緒不好和/或不活動(dòng)。在受試者正在治療ASD的情況下，治療效果可以是ASD的至少一種臨床癥狀的減輕，包括但不限于社會(huì)功能受損、刻板癥、重復(fù)行為和溝通缺陷的減輕。

如本文所用的術(shù)語“防止”和“預(yù)防”指預(yù)先施用藥物以避免或預(yù)先阻止疾病或障礙的一種或多種癥狀的出現(xiàn)。醫(yī)學(xué)領(lǐng)域普通技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到術(shù)語“預(yù)防”不是絕對(duì)性術(shù)語。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域它被理解為指藥物的預(yù)防性施用，以大幅減少病況的可能性或嚴(yán)重性或該病況的癥狀，并且這是本公開內(nèi)容中預(yù)期的意義。如本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)文本Physician’s Desk Reference中所用的，關(guān)于障礙或疾病的術(shù)語“防止”、“預(yù)防”和“阻止”是指在疾病或障礙完全顯現(xiàn)之前避免該疾病或障礙的病因、影響、癥狀或進(jìn)展。

本發(fā)明的化合物以治療有效量施用于有需要的人。在一些實(shí)施方案中，治療有效量是在治療上有效的量或在預(yù)防上有效的量。如本文所用的術(shù)語“在治療上有效的量”意指在組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人類中引起研究者、獸醫(yī)、醫(yī)師或其他臨床醫(yī)生所尋找的生物或藥物反應(yīng)的活性化合物的量。待施用的化合物的治療上有效的量將取決于這樣的考慮因素，并且是改善、治愈或治療該疾病或障礙或其一種或多種癥狀所必需的最小量。術(shù)語“在預(yù)防上有效的量”是指在預(yù)防或大幅減小獲得疾病或障礙的可能性，或在獲得疾病或障礙前減小該疾病或障礙的嚴(yán)重程度，或在癥狀發(fā)展前減小其一種或多種癥狀的嚴(yán)重程度方面有效的量。大體上，預(yù)防措施分為初級(jí)預(yù)防(預(yù)防疾病或癥狀的發(fā)展)和二級(jí)預(yù)防(據(jù)此，疾病或癥狀已經(jīng)發(fā)展，并且保護(hù)患者避免該過程的惡化)。

如本文所用的，術(shù)語“有效量”涉及當(dāng)根據(jù)所需的給藥方案施用時(shí)提供所需的治療活性的化合物的量。給藥可以以數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)、數(shù)天、數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年的間隔進(jìn)行或在這些時(shí)間段中的任意一個(gè)內(nèi)連續(xù)進(jìn)行。合適的劑量在每劑量約0.1ng/kg體重至100g/kg體重的范圍內(nèi)。該劑量可以在每劑量1μg至10g/kg體重的范圍內(nèi)，諸如在每劑量1mg至1000mg/kg體重的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該劑量可以在每劑量1mg至500mg/kg體重的范圍內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該劑量可以在每劑量1mg至250mg/kg體重的范圍內(nèi)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該劑量可以在每劑量1mg至200mg/kg體重的范圍內(nèi)，諸如高達(dá)每劑量50mg/kg體重。

關(guān)于本發(fā)明的化合物、組合物或制劑的術(shù)語“施用”或“給藥”意指將該化合物引入需要治療的動(dòng)物的系統(tǒng)中。當(dāng)本發(fā)明的化合物與一種或多種其他活性劑聯(lián)合提供時(shí)，“施用”及其變化形式分別被理解為包括同時(shí)和/或依次引入該化合物和其他活性劑。

在某些實(shí)施方案中，用于向70kg的成人每天施用一次或多次的化合物的有效量可包括每單位劑型約0.0001mg至約4000mg、約0.0001mg至約3000mg、約0.0001mg至約200mg、約0.001mg至約1500mg、約0.01mg至約1000mg、約0.1mg至約1000mg、約1mg至約1000mg、約1mg至約100mg、約10mg至約1000mg或約100mg至約1000mg化合物。

在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的提取物和/或化合物可為足以每天一次或多次遞送每天約0.001mg/kg至約100mg/kg、約0.01mg/kg至約50mg/kg、約0.1mg/kg至約40mg/kg、約0.5mg/kg至約30mg/kg、約0.01mg/kg至約10mg/kg、約0.1mg/kg至約10mg/kg和約1mg/kg至約25mg/kg受試者體重的劑量水平，以獲得期望的治療效果。

合適的劑量和給藥方案可由主治醫(yī)師確定，并可取決于被治療的具體病況、病況的嚴(yán)重程度以及受試者的大體年齡、健康和體重。應(yīng)當(dāng)理解，如本文所述的劑量范圍提供了對(duì)向成人施用提供的藥物組合物的指導(dǎo)。向例如兒童或青少年施用的量可由執(zhí)業(yè)醫(yī)師或本領(lǐng)域技術(shù)人員確定，并可低于施用于成人的量或與之相同。

本發(fā)明的化合物可以以單劑量或一系列劑量施用。雖然可單獨(dú)施用該化合物，但在一些實(shí)施方案中使其呈現(xiàn)為組合物可能是優(yōu)選的，優(yōu)選呈現(xiàn)為藥物組合物。這樣的組合物的配制是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。這樣的組合物可包含任何合適的載體、稀釋劑或賦形劑。這些包括所有的常規(guī)溶劑、分散介質(zhì)、填充劑、固體載體、包衣材料、抗真菌劑和抗細(xì)菌劑、皮膚滲透劑、表面活性劑、等滲劑和吸收劑等。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的組合物還可包含其他補(bǔ)充的生理活性劑。

本發(fā)明的化合物和相關(guān)的藥物組合物可與一種或多種附加的治療劑一起用于聯(lián)合治療。對(duì)于與多于一種活性劑的聯(lián)合治療，在該活性劑為獨(dú)立劑量制劑的情況下，這些活性劑可單獨(dú)地或聯(lián)合施用。此外，一種成分的施用可在其他藥劑施用之前、之后或與之同時(shí)進(jìn)行。

當(dāng)與其他藥劑共同施用時(shí)，例如，當(dāng)與另一種抗精神病、抗驚厥或抗抑郁藥物共同施用時(shí)，第二種藥劑的“有效量”將取決于使用的藥物的類型。批準(zhǔn)的藥劑的合適劑量是已知的，并可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)受試者的病況，被治療的病況的類型以及使用的化合物、提取物或組合物的量進(jìn)行調(diào)節(jié)。在沒有明確記錄量的情況下，應(yīng)假設(shè)有效量。例如，本文所述的化合物可以以約0.01至約10,000mg/kg體重/天、約0.01至約5000mg/kg體重/天、約0.01至約3000mg/kg體重/天、約0.01至約1000mg/kg體重/天、約0.01至約500mg/kg體重/天、約0.01至約300mg/kg體重/天、約0.01至約100mg/kg體重/天的劑量范圍施用于受試者。

如本文所用的短語“聯(lián)合治療”應(yīng)理解為指采用如本文所述的10-HDA、包含10-HDA的組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的第一量和附加的合適治療劑的第二量施用有效量。

在某些實(shí)施方案中，10-HDA或如本文所述的包含10-HDA的組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及附加的治療劑分別以有效量(即，分別以單獨(dú)施用時(shí)在治療上有效的量)施用。在其他實(shí)施方案中，10-HDA或如本文所述的包含10-HDA的組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及該附加的治療劑分別以單獨(dú)不提供治療效果的量(亞治療劑量)施用。在其他實(shí)施方案中，10-HDA或如本文所述的包含10-HDA的組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以以有效量施用，而該附加的治療劑以亞治療劑量施用。在其他實(shí)施方案中，10-HDA或如本文所述的包含10-HDA的組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以以亞治療劑量施用，而該附加的治療劑以有效量施用。

如本文所用的，術(shù)語“聯(lián)合”或“共同施用”可互換使用，以指使用多于一種治療(例如，一種或多種預(yù)防劑和/或治療劑)。該術(shù)語的使用不限制向有需要的人施用治療(例如，預(yù)防劑和/或治療劑)的順序。

共同施用包括以基本同時(shí)的方式施用第一量和第二量的治療化合物，諸如以單個(gè)藥物組合物的形式，例如，以具有第一量和第二量的固定比例的膠囊或片劑的形式，或以各自的多個(gè)、單獨(dú)的膠囊或片劑的形式。此外，這樣的共同施用還包括按順序方式以任意次序使用各種化合物。當(dāng)共同施用包括單獨(dú)施用第一量的10-HDA或如本文所述的包含10-HDA的組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和第二量的附加治療劑時(shí)，它們施用的時(shí)間足夠接近，以具有期望的治療效果。例如，可產(chǎn)生期望的治療效果的每次施用之間的時(shí)間段可在數(shù)分鐘到數(shù)小時(shí)的范圍內(nèi)，并且可通過考慮各種化合物的性質(zhì)如效力、溶解度、生物利用度、血漿半衰期和動(dòng)力學(xué)特性來確定。例如，10-HDA或如本文所述的包含10-HDA的組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與第二治療劑可以彼此在約24小時(shí)內(nèi)、彼此在約16小時(shí)內(nèi)、彼此在約8小時(shí)內(nèi)、彼此在約4小時(shí)內(nèi)、彼此在約1小時(shí)內(nèi)或彼此在約30分鐘內(nèi)以任何順序施用。

根據(jù)本發(fā)明的10-HDA或包含10-HDA的組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以通過任何途徑施用，包括腸內(nèi)(例如，口服)、腸胃外、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、皮下、心室內(nèi)、經(jīng)皮、皮內(nèi)、直腸、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部(如通過粉末、軟膏、乳膏和/或滴劑)、粘膜、鼻、頰、舌下；通過氣管內(nèi)灌注、支氣管灌注和/或吸入；和/或作為口腔噴霧劑、鼻腔噴霧劑和/或氣霧劑。特別地，預(yù)期的途徑為口服施用，靜脈內(nèi)施用(例如，全身靜脈內(nèi)注射)，經(jīng)由血液和/或淋巴供給的局部施用和/或直接施用于感染部位。通常，最適當(dāng)?shù)氖┯猛緩綄⑷Q于多種因素，包括藥劑的性質(zhì)(例如，其在胃腸道環(huán)境中的穩(wěn)定性)和/或受試者的狀況(例如，該受試者是否能夠忍受口服施用)。在特定的實(shí)施方案中，口服施用本發(fā)明的10-HDA或包含10-HDA的組合物。

達(dá)到有效量所需的化合物的準(zhǔn)確量將根據(jù)例如受試者的物種、年齡和一般情況，副作用或病癥的嚴(yán)重程度，具體化合物的特性，施用方式等在受試者之間變化。所需的劑量可每天遞送三次、每天遞送兩次，每天遞送一次，每隔一天、每三天、每周、每?jī)芍?、每三周或每四周遞送一次。在某些實(shí)施方案中，所需的劑量可使用多種施用(例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種、十一種、十二種、十三種、十四種或更多種施用)進(jìn)行遞送。

當(dāng)使用載體時(shí)，該載體必須在與組合物的其他成分相容并對(duì)受試者無害的意義上是藥學(xué)上“可接受的”。組合物包括適合于口服、直腸、鼻、局部(包括頰和舌下)、陰道或腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和皮內(nèi))施用的那些組合物。該組合物可方便地呈現(xiàn)為單位劑型，并可通過藥學(xué)領(lǐng)域中的任何公知的方法制備。這樣的方法包括使活性成分與構(gòu)成一種或多種助劑的載體結(jié)合的步驟。通常，通過使活性成分與液體載體或細(xì)分的固體載體或這兩種載體均勻且緊密地結(jié)合并隨后在必要時(shí)將產(chǎn)物成形來制備組合物。

藥學(xué)上可接受的賦形劑包括適合于所需的特定劑型的任何和所有的溶劑、稀釋劑或其他液體媒介物、分散劑、懸浮助劑、表面活性劑、等滲劑、增稠劑或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑、潤滑劑等。藥物組合物藥劑的配制和/或制備的一般考慮因素可見于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第十六版，E.W.Martin(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1980)和Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第21版(Lippincott Williams&Wilkins,2005)。

本文所述的藥物組合物可通過藥理學(xué)領(lǐng)域中已知的任何方法來制備。通常，這樣的制備方法包括使本發(fā)明的化合物(“活性成分”)與載體和/或一種或多種其他助劑結(jié)合，并隨后在必要和/或需要時(shí)將該產(chǎn)物成形和/或包裝成需要的單劑量或多劑量單位的步驟。

藥物組合物可成批地、以單一單位劑量和/或以多個(gè)單一單位劑量的方式制備、包裝和/或銷售。如本文所用的“單位劑量”是包含活性成分的預(yù)定量的藥物組合物的離散量。該活性成分的量通常等于將施用于受試者的活性成分的劑量，和/或該劑量的適當(dāng)分?jǐn)?shù)，例如，該劑量的一半或三分之一。

本發(fā)明的藥物組合物中的活性成分、藥學(xué)上可接受的賦形劑和/或任何附加成分的相對(duì)量將根據(jù)被治療的受試者的特性、大小和/或狀況，并進(jìn)一步根據(jù)施用該組合物的途徑而變化。舉例來說，該組合物可包含0.1％至100％(w/w)的活性成分。

在一些實(shí)施方案中，當(dāng)本發(fā)明的10-HDA用于口服施用時(shí)，可將其制備成各自包含預(yù)定量的活性成分的離散單元如膠囊、小袋或片劑；制備成粉末或顆粒劑；制備成水性或非水性液體形式的溶液或懸浮液；或制備成水包油液體乳液或油包水液體乳液。該10-HDA也可以呈現(xiàn)為丸劑、藥糖劑或糊劑。

在一些實(shí)施方案中，當(dāng)10-HDA被配制成片劑時(shí)，該片劑可通過任選地與一種或多種助劑一起壓制或模制來制備。壓制的片劑可通過在合適的機(jī)器中壓制任選地與粘合劑(例如，惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如，羧基乙酸淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑混合的自由流動(dòng)形式(諸如粉末或顆粒劑)的活性成分來制備。模塑的片劑可通過在合適的機(jī)器中模塑采用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀化合物的混合物來制備。該片劑可以任選地進(jìn)行包衣或刻痕，并可使用例如不同比例的羥丙基甲基纖維素配制為提供其中活性成分的緩慢或控制釋放，以提供所需的釋放譜。片劑可以任選地設(shè)置有腸溶衣，以在除了胃以外的腸的部分中提供釋放。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的10-HDA或包含10-HDA的組合物可以是具有一種或多種賦形劑的微膠囊化形式。片劑、糖衣丸、膠囊、丸劑和顆粒劑的固體劑型可采用包衣和殼如腸溶衣、控釋包衣和藥物配制領(lǐng)域公知的其他包衣來制備。在這樣的固體劑型中，活性成分可與至少一種惰性稀釋劑如蔗糖、乳糖或淀粉混合。按照常規(guī)，這樣的劑型可包含除了惰性稀釋劑以外的附加物質(zhì)，例如，壓片潤滑劑和其他壓片助劑，諸如硬脂酸鎂和微晶纖維素。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，該劑型可包含緩沖劑。該劑型可以任選地包含乳濁劑，并可具有某種組成使得該劑型僅在或優(yōu)先在腸道的某個(gè)部分任選以延遲的方式釋放活性成分?？墒褂玫那度虢M分的實(shí)例包括聚合物質(zhì)和蠟。

在一些實(shí)施方案中，當(dāng)本發(fā)明的10-HDA將作為用于口服和腸胃外施用的液體劑型施用時(shí)，這樣的劑型可包括藥學(xué)上可接受的乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿劑和酏劑。除了活性成分之外，該液體劑型還可包含本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑，例如，水或其他溶劑、增溶劑和乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(例如，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀釋劑之外，口服組合物還可包含佐劑，諸如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑和增香劑。在針對(duì)腸胃外施用的某些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的10-HDA與增溶劑如Cremophor^TM、醇、油、改性油、二醇、聚山梨醇酯、環(huán)糊精、聚合物及其混合物混合。

在一些實(shí)施方案中，當(dāng)本發(fā)明的10-HDA或包含10-HDA的組合物將局部施用于口腔時(shí)，合適的劑型可包括在調(diào)味基質(zhì)(通常是蔗糖和阿拉伯樹膠或黃蓍膠)中包含活性成分的錠劑；在惰性基質(zhì)如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯樹膠中包含活性成分的糖果錠劑；以及在合適的液體載體中包含活性成分的漱口劑。

在一些實(shí)施方案中，當(dāng)本發(fā)明的10-HDA或包含10-HDA的組合物將局部施用于皮膚時(shí)，合適的劑型可包括將提取物或組分化合物溶解或懸浮于任何合適的載體或基質(zhì)中，并且可以為洗劑、凝膠、乳膏、糊劑、軟膏等形式。合適的載體包括礦物油、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯、乳化蠟、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蠟、鯨蠟硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。經(jīng)皮貼劑也可用于施用本發(fā)明的提取物或組分化合物。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的10-HDA或包含10-HDA的組合物用于直腸施用，合適的劑型可包括具有包含例如可可脂、甘油、明膠或聚乙二醇的合適基質(zhì)的栓劑。

在一些實(shí)施方案中，當(dāng)本發(fā)明的10-HDA或包含10-HDA的組合物用于陰道施用時(shí)，合適的劑型可包括陰道栓、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧制劑，其除了活性成分之外還包含此類本領(lǐng)域已知的合適的載體。

在一些實(shí)施方案中，當(dāng)本發(fā)明的10-HDA或包含10-HDA的組合物用于腸胃外施用時(shí)，合適的劑型可包括水性和非水性的等滲無菌注射溶液，其可包含抗氧化劑、緩沖劑、殺菌劑和使該組合物與預(yù)期受體的血液等滲的溶質(zhì)；以及水性和非水性的無菌懸浮液，其可包含懸浮劑和增稠劑。該化合物可呈現(xiàn)在單劑量或多劑量的密封容器，例如，安瓿和小瓶中，并可儲(chǔ)存于冷凍干燥(凍干)的條件下，只需要在即將使用前添加無菌液體載體，例如注射用水。臨時(shí)的注射溶液和懸浮液可由先前所述類型的無菌粉末、顆粒劑和片劑來制備。可注射的制劑可以是在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液、懸浮液或乳液，例如，如在1,3-丁二醇中的溶液?？墒褂玫目山邮艿拿浇槲锖腿軇樗⒘指袢芤?Ringer’s solution)，U.S.P.和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌的固定油通常用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可使用任何溫和的固定油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸用于注射劑的制備?？勺⑸涞闹苿┛衫缤ㄟ^經(jīng)細(xì)菌截留過濾器的過濾，或通過并入可在使用前溶解或分散在無菌水或其他無菌可注射介質(zhì)中的無菌固體組合物形式的滅菌劑進(jìn)行滅菌。

在某些實(shí)施方案中，單位劑量組合物為包含活性成分的如上文所述的每日劑量或單位、每日亞劑量，或其適當(dāng)分?jǐn)?shù)劑量的那些組合物。

應(yīng)當(dāng)理解，除了活性劑10-HDA之外，本發(fā)明的包含10-HDA的組合物還可包含與討論的組合物類型有關(guān)的本領(lǐng)域常規(guī)的其他試劑，例如，適合于口服施用的那些組合物可包含其他試劑如粘合劑、甜味劑、增稠劑、調(diào)味劑、崩解劑、包衣劑、防腐劑、潤滑劑和/或延時(shí)劑。合適的甜味劑包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿斯巴甜或糖精。合適的崩解劑包括玉米淀粉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、黃原膠、膨潤土、海藻酸或瓊脂。合適的調(diào)味劑包括薄荷油、冬青油、櫻桃、橘子或覆盆子調(diào)味劑。合適的包衣劑包括丙烯酸和/或甲基丙烯酸的聚合物或共聚物和/或它們的酯、蠟、脂肪醇、玉米醇溶蛋白、蟲膠或谷蛋白。合適的防腐劑包括苯甲酸鈉、維生素E、α-生育酚、抗壞血酸、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯或亞硫酸氫鈉。合適的潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸、油酸鈉、氯化鈉或滑石。合適的延時(shí)劑包括單硬脂酸甘油酯或雙硬脂酸甘油酯。

如本文使用的短語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指提供的化合物的藥學(xué)上可接受的有機(jī)或無機(jī)鹽。對(duì)于在藥物中的使用，所提供的化合物的鹽將為藥學(xué)上可接受的鹽。然而，其他的鹽也可用于制備提供的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽是本領(lǐng)域公知的。例如，Berge等人在J.Pharm.Sci.(1977)66:1–19中詳細(xì)描述了藥學(xué)上可接受的鹽，該文獻(xiàn)通過引用而全文并入本文。藥學(xué)上可接受的鹽涉及包含另一種分子如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他反荷離子。該反荷離子可以是穩(wěn)定母體化合物上的電荷的任何有機(jī)或無機(jī)部分。此外，藥學(xué)上可接受的鹽可在其結(jié)構(gòu)中具有多于一個(gè)帶電荷原子。當(dāng)母體藥物中存在多個(gè)帶電荷原子時(shí)，其藥學(xué)上可接受的鹽將具有多個(gè)反荷離子，并且這些可以是相同反荷離子或不同反荷離子的若干實(shí)例。因此，藥學(xué)上可接受的鹽可具有在母體化合物中的一個(gè)或多個(gè)帶電荷原子和/或一個(gè)或多個(gè)反荷離子。

本文所述的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括來源于合適的無機(jī)酸和有機(jī)酸和堿的那些鹽。在一些實(shí)施方案中，該鹽可在該化合物的最終分離和純化過程中原位制備。在其他實(shí)施方案中，該鹽可在單獨(dú)的合成步驟中由該化合物的游離形式制備。

當(dāng)提供的化合物是酸性的或包含足夠酸性的生物電子等排體時(shí)，合適的“藥學(xué)上可接受的鹽”是指由藥學(xué)上可接受的無毒堿(包括無機(jī)堿和有機(jī)堿)制備的鹽。來源于無機(jī)堿的鹽包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳鹽、亞錳、鉀、鈉、鋅鹽等。特定的實(shí)施方案包括銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。來源于藥學(xué)上可接受的有機(jī)無毒堿的鹽包括以下物質(zhì)的鹽：伯、仲和叔胺，取代胺(包括天然存在的取代胺)、環(huán)胺和堿性離子交換樹脂，諸如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N,N'-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、還原葡萄糖胺、葡糖胺、組氨酸、海巴明(hydrabamine)、異丙胺、賴氨酸、甲基還原葡萄糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。也包括季銨鹽如N⁺(C_1-4烷基)₄。

Berge等人,"Pharmaceutical Salts,"J.Pharm.Sci.,1977:66:1-19更充分地描述了上述藥學(xué)上可接受的鹽和其他典型的藥學(xué)上可接受的鹽的制備。

本文所述的10-HDA或包含10-HDA的組合物的制劑可包含在試劑盒中。該試劑盒可包含單或多劑量的兩種或更多種藥劑(每種藥劑均單獨(dú)包裝或配制)，或者單或多劑量的兩種或更多種藥劑(組合包裝或配制)。因此，一種或多種藥劑可存在于第一容器中，并且該試劑盒可以任選地在第二容器中包含一種或多種藥劑。將一個(gè)或多個(gè)容器放入包裝內(nèi)，并且該包裝可以任選地包含施用或劑量說明。試劑盒可包含附加的組分，諸如注射器或用于施用藥劑的其他工具，以及稀釋劑或用于配制的其他工具。因此，該試劑盒可包含：a)包含本文所述的化合物和藥學(xué)上可接受的載體、媒介物或稀釋劑的藥物組合物；和b)容器或包裝。該試劑盒可任選地包含描述在本文所述的一種或多種方法中使用該藥物組合物(例如，預(yù)防或治療本文所述的一種或多種疾病和障礙)的方法的說明。該試劑盒可任選地包含第二藥物組合物，該第二藥物組合物包含本文所述的用于共同治療用途的一種或多種附加的藥劑、藥學(xué)上可接受的載體、媒介物或稀釋劑。該試劑盒中包含的含有10-HDA的藥物組合物和第二藥物組合物可任選地組合在同一藥物組合物中。

試劑盒包含用于容納該藥物組合物的容器或包裝，并且還可包含分開的容器，諸如分開的瓶或分開的箔包。該容器可以是例如紙盒或紙板盒、玻璃或塑料瓶或罐、可再密封袋(例如，容納片劑的“補(bǔ)充物”以放入不同容器中)，或具有根據(jù)治療方案從包裝擠出的單獨(dú)劑量的泡罩包裝。多于一個(gè)容器可共同使用單個(gè)包裝以銷售單一劑型是可行的。例如，片劑可包含在瓶?jī)?nèi)，該瓶繼而包含在盒內(nèi)。

試劑盒的一個(gè)實(shí)例是所謂的泡罩包裝。泡罩包裝是在包裝工業(yè)中公知的，并廣泛用于藥物單位劑型(片劑、膠囊等)的包裝。泡罩包裝通常由覆蓋有優(yōu)選透明塑料材料的箔的相對(duì)剛性材料的薄片構(gòu)成。在包裝過程中，在塑料箔中形成凹部。該凹部具有待包裝的單獨(dú)片劑或膠囊的大小和形狀，或可具有容納待包裝的多個(gè)片劑和/或膠囊的大小和形狀。然后，將該片劑或膠囊相應(yīng)地放入凹部，并將相對(duì)剛性材料的薄片抵靠塑料箔在該箔與凹部形成的方向相對(duì)的面上密封。由此，該片劑或膠囊根據(jù)需要單獨(dú)密封或共同密封在塑料箔與薄片之間的凹部。薄片的強(qiáng)度優(yōu)選使得可通過在凹部上手動(dòng)施加壓力，由此在該凹部位置的薄片中形成開口而從泡罩包裝中取出片劑或膠囊。隨后可將該片劑或膠囊經(jīng)由所述開口取出。

可能需要提供包含醫(yī)生、藥劑師或受試者關(guān)于該藥物將何時(shí)服用的信息和/或說明的書面記憶輔助工具?！懊咳談┝俊笨梢允菍⒃诮o定日使用的單個(gè)片劑或膠囊或若干個(gè)片劑或膠囊。當(dāng)試劑盒包含單獨(dú)的組合物時(shí)，該試劑盒的一種或多種組合物的每日劑量可由一個(gè)片劑或膠囊組成，而該試劑盒的另一種或多種組合物的每日劑量可由若干個(gè)片劑或膠囊組成。試劑盒可采取分配器的形式，該分配器被設(shè)計(jì)為將每日劑量按照其預(yù)期使用的順序一次一個(gè)地分配。該分配器可配備有記憶輔助裝置，以便進(jìn)一步促進(jìn)對(duì)方案的依從性。這樣的記憶輔助裝置的一個(gè)實(shí)例是機(jī)械計(jì)數(shù)器，其指示已經(jīng)分配的每日劑量的數(shù)目。這樣的記憶輔助裝置的另一個(gè)實(shí)例是與液晶讀出器或例如讀出上一次使用每日劑量的日期和/或提醒受試者何時(shí)使用下一劑量的可聽到的提示信號(hào)耦合的、電池供電的微芯片存儲(chǔ)器。

應(yīng)當(dāng)理解，作為10-HDA的前藥的任何化合物也在本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)。術(shù)語“前藥”以其最廣泛的含義使用，并且包括在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的化合物的那些衍生物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易想到這樣的衍生物。

此外，認(rèn)識(shí)到10-HDA可以為游離化合物或溶劑化物(例如，水合物)的晶體形式，并且這兩種形式均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。溶劑化的方法是本領(lǐng)域內(nèi)普遍所知的。

進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到，根據(jù)其結(jié)構(gòu)，根據(jù)本發(fā)明的10-HDA能夠經(jīng)歷互變異構(gòu)。因此，本發(fā)明的10-HDA的所有可能的互變異構(gòu)體都落在本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)。

如本文所用的術(shù)語“來源于”應(yīng)被用來指示特定的整體或一組整體源自指定種類，但不一定直接從該指定來源獲得。例如，應(yīng)當(dāng)理解10-HDA可源自蜂王漿，但不一定直接從該指定來源獲得。此外，除非上下文另有明確說明，否則如本文所使用的單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”以及“該”包括復(fù)數(shù)指代物。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識(shí)到，本文所述的發(fā)明除了具體描述的那些以外還可以發(fā)生變化和修改。應(yīng)當(dāng)理解，本文所述的發(fā)明包含所有這樣的變化和修改。本發(fā)明還包含本說明書中單獨(dú)或共同提及或指示的所有這樣的步驟、特征、方法、組合物和化合物，以及所述步驟或特征中的任何兩個(gè)或更多個(gè)的任何和所有組合。

在整篇說明書和隨附的權(quán)利要求書中，除非上下文另有要求，否則詞語“包含”及其變化形式如“包含”和“包括”將被理解為暗示包含所述整體或步驟或一組整體或步驟，但不排除任何其他整體或步驟或一組整體或步驟。

現(xiàn)將參考以下實(shí)施例描述本發(fā)明的某些實(shí)施方案，其目的僅在于說明而非旨在限制上文所述的一般性的范圍。

實(shí)施例

實(shí)施例1：BPA和10-HDA對(duì)人類神經(jīng)元細(xì)胞上芳香化酶表達(dá)的影響

在95％空氣和5％CO₂的加濕氣氛中，將人類成神經(jīng)細(xì)胞瘤SHY-SY-5Y細(xì)胞于37℃下在補(bǔ)充有10％熱滅活的胎牛血清、1％青霉素和1％L-谷氨酰胺的Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基中培養(yǎng)?？墒褂脤?duì)芳香化酶具有特異性的抗體，通過免疫組織化學(xué)來檢測(cè)芳香化酶在這些細(xì)胞中的定位。在正常情況下，芳香化酶由于是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的膜結(jié)合蛋白而表現(xiàn)為在整個(gè)細(xì)胞中的點(diǎn)狀染色。在25μg/L雙酚A(BPA)的存在下，芳香化酶形成聚集體并將失去其功能。10-HDA的添加可避免雙酚A對(duì)芳香化酶的變性作用。這些結(jié)果證明了芳香化酶在細(xì)胞中的不良作用和10-HDA對(duì)芳香化酶的保護(hù)作用。

實(shí)施例2：體內(nèi)小鼠模型

芳香化酶在小鼠內(nèi)側(cè)杏仁核中以高水平表達(dá)，并且通過與陌生小鼠的互動(dòng)激活相同區(qū)域。在人類中，芳香化酶也在杏仁核中高度表達(dá)，并且fMRI研究表明與對(duì)照相比，杏仁核在患有ASD的人中較少被激活。假定芳香化酶敲除小鼠(ArKO)模型可表現(xiàn)出反映ASD的一些關(guān)鍵診斷行為和癥狀(包括例如ASD樣行為障礙)的行為表型。

因此，開發(fā)了芳香化酶缺乏的小鼠模型(ArKO)，其顯示出核心的孤獨(dú)癥樣特征，包括發(fā)聲缺陷、強(qiáng)迫性理毛和社會(huì)互動(dòng)缺陷(圖2；A至E)。當(dāng)敲除芳香化酶時(shí)，睪酮在ArKO小鼠的血清中積累，并且不能通過雌激素受體激動(dòng)劑降低。

特別地，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，正常功能的芳香化酶的缺少將促成在雄性ArKO(芳香化酶敲除)小鼠中發(fā)生而在雌性ArKO小鼠中不發(fā)生的以下ASD樣行為障礙：

i)異常的社會(huì)互動(dòng)(圖2A)：發(fā)現(xiàn)幼年(4周齡)雄性ArKO小鼠比野生型雄性小鼠(WT)花費(fèi)顯著較少的時(shí)間來探究陌生小鼠。相反，發(fā)現(xiàn)雌性ArKO和WT小鼠花費(fèi)相似的時(shí)間長度與陌生小鼠相處。

ii)超聲波發(fā)聲缺陷(圖2B)：發(fā)現(xiàn)當(dāng)與它們的仔鼠分開時(shí)，雄性ArKO 9天大幼鼠的發(fā)聲顯著小于雄性WT同窩仔鼠。

iii)重復(fù)行為：如在施用水噴霧后20分鐘時(shí)間段內(nèi)測(cè)得的，發(fā)現(xiàn)與WT和雌性ArKO小鼠相比，雄性ArKO小鼠理毛更頻繁(圖2C)并且持續(xù)更長的時(shí)間段(圖2D)。還發(fā)現(xiàn)與WT和雌性ArKO小鼠相比，雄性ArKO小鼠在轉(zhuǎn)輪上花費(fèi)顯著更多的時(shí)間(圖2E)。

本發(fā)明人已經(jīng)證明雙酚A(BPA)(在聚碳酸酯塑料和環(huán)氧樹脂的制備中使用的)可在體外使芳香化酶變性(圖1)。因此，進(jìn)行進(jìn)一步的研究以調(diào)查環(huán)境暴露于雙酚A(BPA)在隨后的孤獨(dú)癥樣行為發(fā)展中的作用。在調(diào)查暴露于BPA的作用的進(jìn)一步研究中，使用顯示出核心ASD樣特征的ArKO小鼠作為對(duì)比。

因此，將BPA(50μg/kg)施用于妊娠中期(即，胎齡10.5至14.5天)的妊娠小鼠。發(fā)現(xiàn)所得WT雄性后代表現(xiàn)出ASD樣行為，與雄性ArKO小鼠的那些行為相似(圖2F)。特別地，雄性后代比對(duì)照雄性后代(暴露于媒介物的)或暴露于BPA的雌性后代花費(fèi)顯著較少的時(shí)間與陌生小鼠相處。此外，如通過死后體視學(xué)所檢測(cè)到的，發(fā)現(xiàn)暴露于BPA的雄性后代在內(nèi)側(cè)杏仁核中神經(jīng)元減少13.5％，這與在青少年和成年孤獨(dú)癥患者大腦的杏仁核中觀察到的神經(jīng)元數(shù)目減少約15％是一致的。進(jìn)行進(jìn)一步的研究以調(diào)查BPA暴露對(duì)子宮內(nèi)芳香化酶-GFP陽性神經(jīng)元數(shù)目的影響(圖3)。內(nèi)側(cè)杏仁核參與社會(huì)互動(dòng)和高度表達(dá)的芳香化酶。如通過標(biāo)準(zhǔn)體視學(xué)方法所計(jì)數(shù)的，在暴露于BPA之后，發(fā)現(xiàn)芳香化酶-GFP陽性神經(jīng)元的數(shù)目顯著減少。

實(shí)施例4：用10-HDA處理的體內(nèi)小鼠模型

如實(shí)施例2所述，通過使雌性野生型FVBN小鼠與雄性CYP19-GFP小鼠交配，隨后在第10.5-14.5妊娠日皮下注射50μg/kg/天的BPA，來產(chǎn)生具有孤獨(dú)癥樣行為的小鼠。

在斷奶后，通過腹膜內(nèi)注射向?qū)φ蘸捅┞队贐PA的幼鼠每日施用10-HDA(0和500μg/kg/天；溶解于鹽水)，持續(xù)最長6周的時(shí)間段。在3周的每日處理后，首先研究6只仔鼠的焦慮、記憶、社會(huì)互動(dòng)(圖4A)和無意識(shí)的理毛。

由對(duì)任何給定動(dòng)物的各自的基因型或處理不知情的研究人員進(jìn)行數(shù)據(jù)收集。評(píng)估兩種標(biāo)準(zhǔn)作為行為研究、社會(huì)互動(dòng)和無意識(shí)理毛活動(dòng)的基礎(chǔ)。

針對(duì)社會(huì)互動(dòng)研究，將測(cè)試小鼠放入社交測(cè)試盒內(nèi)，該社交測(cè)試盒為具有三個(gè)隔室的透明塑料盒，且在隔墻中有門以允許進(jìn)入每個(gè)隔室。每一側(cè)隔室都包含金屬絲籠。經(jīng)三個(gè)階段評(píng)估測(cè)試小鼠。在第1階段中，將測(cè)試小鼠放入中間的隔室并允許其探索全部3個(gè)隔室10min。在第2階段中，從中心隔室的任一側(cè)在金屬絲籠內(nèi)關(guān)入相同性別和年齡的陌生小鼠(陌生小鼠1)，并允許該測(cè)試小鼠探索整個(gè)社交測(cè)試盒10min的時(shí)間段。在第3階段中，將新的陌生小鼠放入先前空的金屬絲籠中，使得該測(cè)試小鼠在第一只已經(jīng)探究過的、現(xiàn)在熟悉的小鼠(陌生小鼠1)和新的陌生小鼠(陌生小鼠2)之間作出選擇。使用TopScan視頻追蹤系統(tǒng)記錄并追蹤小鼠的移動(dòng)。分析在每個(gè)隔室內(nèi)的持續(xù)時(shí)間、嗅探每個(gè)金屬絲籠花費(fèi)的時(shí)間和在隔室之間轉(zhuǎn)移的次數(shù)。

使用無意識(shí)的理毛活動(dòng)作為重復(fù)活動(dòng)的度量。在上述的第1階段或第3隔室研究過程中，通過TopScan視頻追蹤系統(tǒng)記錄小鼠的無意識(shí)理毛。理毛的持續(xù)時(shí)間和頻率是測(cè)量的參數(shù)，并且進(jìn)行盲分析。

在行為測(cè)試后，所有處理撤銷三個(gè)月，并再次測(cè)試動(dòng)物的行為(圖4B)，顯示10HDA處理撤銷導(dǎo)致在暴露于BPA的雄性動(dòng)物中呈現(xiàn)社會(huì)互動(dòng)缺陷。隨后向該雄性動(dòng)物再施用如上所述的媒介物或10-HDA 3周，并且再次進(jìn)行行為研究(圖4C)。在暴露于50μg/kg/天的BPA的雄性后代中觀察到的過度理毛通過10-HDA處理得到改善(圖4D)。結(jié)果證明，10-HDA可改善暴露于BPA的動(dòng)物的社會(huì)互動(dòng)缺陷和孤獨(dú)癥樣行為。

在行為研究之后，將動(dòng)物處死，并且通過杏仁核中芳香化酶細(xì)胞的膜片鉗從腦切片收集電生理學(xué)數(shù)據(jù)。證明BPA暴露降低了神經(jīng)元的電阻，并且10-HDA處理將電阻修復(fù)至正常值(圖4E)。10-HDA處理還將軀體感覺皮質(zhì)中神經(jīng)元的樹突長度恢復(fù)至正常長度(圖4F)。

實(shí)施例5：BPA和10-HDA在雄性小鼠胚胎的原代皮層細(xì)胞培養(yǎng)中的作用的體外分析

由胎齡15.5天的雄性小鼠胎兒制備原代皮層培養(yǎng)物。特別地，評(píng)估BPA和10-HDA對(duì)樹突長度和樹突棘密度的影響。評(píng)估了四個(gè)測(cè)試組：用BPA處理的小鼠，用10-HDA處理的小鼠，用BPA和10-HDA處理的小鼠，以及媒介物對(duì)照。測(cè)量了十個(gè)神經(jīng)元并重復(fù)該實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，BPA降低了神經(jīng)元的樹突棘密度和樹突長度。發(fā)現(xiàn)10-HDA逆轉(zhuǎn)或保護(hù)不受BPA的影響。結(jié)果呈現(xiàn)于圖5至圖9中。結(jié)果證明，10-HDA具有刺激神經(jīng)突和樹突棘形成的能力。考慮到與孤獨(dú)癥關(guān)聯(lián)的大多數(shù)基因參與神經(jīng)突生長的調(diào)節(jié)，因此這種能力是很重要的(“A noise-reduction GWAS analysis implicates altered regulation of neurite outgrowth and guidance in autism”,Hussman JP等人,Mol Autism.2011年1月19日；2(1):1)。

實(shí)施例6：反式10-HDA和順式10-HDA活性的比較

為了比較反式和順式10-HDA各自的活性，在500ng/ml BPA(毒性水平)的存在下將各1mM的順式或反式10-HDA添加至已分化的小鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元NSC-34細(xì)胞中。在72小時(shí)后通過MTT試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞存活率。結(jié)果證明，順式10-HDA沒有提供針對(duì)BP毒性的保護(hù)，而反式10-HDA顯示出神經(jīng)保護(hù)作用。