本發(fā)明涉及一種藥物組合物，具體涉及一種長(zhǎng)效的藥物組合物。
背景技術(shù)：
：布舍瑞林是一種合成的下丘腦分泌的天然促性腺激素釋放激素(gnrh/lhrh)類似物，其為水溶性多肽類藥物，由10個(gè)氨基酸殘基組成，其相對(duì)分子質(zhì)量為1299.5,等電點(diǎn)為5.4,其氨基酸序列如下式所示：布舍瑞林(buserelin)于1984年發(fā)現(xiàn)，受腦垂體的影響，在使用初期促使促黃體生成激素(lh)、促卵泡生成激素(fsh)和性激素的分泌增加，且其藥理效應(yīng)為lhrh的20～170倍。長(zhǎng)期給予布舍瑞林可持續(xù)抑制絨促性素的產(chǎn)生，抑制卵巢和睪丸類固醇的生成，以及降低絨促性素和性腺類固醇的循環(huán)濃度水平。臨床主要用于性激素依賴性疾病，如子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤、乳腺癌、前列腺癌等疾病的治療。目前已上市銷售的醋酸鹽布舍瑞林均為注射液，采用注射劑的形式需要頻繁長(zhǎng)期給藥，皮下注射每1日3次，連續(xù)7天為1療程，順應(yīng)性極差。亮丙瑞林也是一種gnrh類似物。作用同布舍瑞林。亮丙瑞林注射液每天給藥1次，需長(zhǎng)期給藥。為解決多肽(gnrh類似物)頻繁給藥的問(wèn)題，目前通常將這些活性成分以緩釋組合物形式施用。而目前采用的緩釋組合物采用的技術(shù)方案通常是將其中活性成分與可生物降解聚合物或共聚物如聚丙交酯/共聚乙交酯共聚物(plga)混合或高分子包合的微粒形式。布舍瑞林是一種合成的下丘腦分泌的天然促性腺激素釋放激素(gnrh/lhrh)類似物，其為水溶性多肽類藥物，由10個(gè)氨基酸殘基組成，其相對(duì)分子質(zhì)量為1299.5,等電點(diǎn)為5.4,其氨基酸序列如下式所示：布舍瑞林(buserelin)于1984年發(fā)現(xiàn)，受腦垂體的影響，在使用初期促使促黃體生成激素(lh)、促卵泡生成激素(fsh)和性激素的分泌增加，且其藥理效應(yīng)為lhrh的20～170倍。長(zhǎng)期給予布舍瑞林可持續(xù)抑制絨促性素的產(chǎn)生，抑制卵巢和睪丸類固醇的生成，以及降低絨促性素和性腺類固醇的循環(huán)濃度水平。臨床 主要用于性激素依賴性疾病，如子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤、乳腺癌、前列腺癌等疾病的治療。目前已上市銷售的醋酸鹽布舍瑞林均為注射液，采用注射劑的形式需要頻繁長(zhǎng)期給藥，皮下注射每1日3次，連續(xù)7天為1療程，順應(yīng)性極差。亮丙瑞林也是一種gnrh類似物。作用同布舍瑞林。亮丙瑞林注射液每天給藥1次，需長(zhǎng)期給藥。為解決多肽(gnrh類似物)頻繁給藥的問(wèn)題，目前通常將這些活性成分以緩釋組合物形式施用。而目前采用的緩釋組合物采用的技術(shù)方案通常是將其中活性成分與可生物降解聚合物或共聚物如聚丙交酯/共聚乙交酯共聚物(plga)混合或高分子包合的微粒形式。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：目前采用的緩釋組合物采用的技術(shù)方案通常是將其中活性成分與可生物降解聚合物或共聚物如聚丙交酯/共聚乙交酯共聚物(plga)混合或高分子包合的微粒形式。該技術(shù)方案通常采用有機(jī)溶劑制備，且制備工藝復(fù)雜，生產(chǎn)設(shè)備昂貴，生產(chǎn)周期長(zhǎng)，該技術(shù)方案在現(xiàn)實(shí)產(chǎn)品工業(yè)過(guò)程中耗資大，成本高，較難以實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的技術(shù)方案采用簡(jiǎn)單的工藝方法和常規(guī)的生產(chǎn)條件就可以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)，可以實(shí)現(xiàn)多肽緩釋給藥。本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種長(zhǎng)效的藥用組合物及制備方法。本發(fā)明的長(zhǎng)效的藥用組合物是凍干制劑和復(fù)溶溶劑，凍干制劑其組合物包括活性成分和支撐劑，復(fù)溶溶劑為無(wú)機(jī)鹽或有機(jī)鹽溶液。本發(fā)明的長(zhǎng)效的凍干藥用組合物用復(fù)溶溶劑對(duì)其進(jìn)行復(fù)溶后，藥物形成微粒混懸溶液，其藥物粒度控制在0.10μm～50μm。本發(fā)明的形成的微粒為藥物微粒，并非通過(guò)生物降解材料或其他高分子材料將其包裹而成，而該將復(fù)溶后微粒溶液進(jìn)行皮下給藥，具有明顯的緩釋效果。本發(fā)明的復(fù)溶溶劑為鹽體系，本發(fā)明的復(fù)溶溶液ph為4-7。本發(fā)明的活性成分是gnrh類似物，優(yōu)選布舍瑞林、亮丙瑞林。本發(fā)明的活性成分布舍瑞林、亮丙瑞林是一種水溶性多肽類藥物，制備本發(fā)明的支撐劑為甘露醇，山梨醇，乳糖，蔗糖，多元糖醇。本發(fā)明的鹽體系為無(wú)機(jī)鹽或有機(jī)鹽溶液，優(yōu)選磷酸氫二鈉、磷酸鈉、磷酸二氫鈉、檸檬酸鈉、氯化鈉中的一種或兩種的組合。本發(fā)明的復(fù)溶溶液ph為4-7，本發(fā)明的ph以磷酸，硫酸，鹽酸，檸檬酸、酒石酸或氫氧化鈉等進(jìn)行調(diào)節(jié)。本發(fā)明的制備方法如下：將支撐劑用水溶解，將活性成分用水溶解，再將活性成分溶液加入支撐劑溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重。除菌過(guò)濾，以0.5ml-2ml/瓶分裝至西林瓶中，將已 分裝的小瓶放入凍干機(jī)中，開(kāi)啟制冷對(duì)其預(yù)凍，預(yù)凍溫度小于-45℃，預(yù)凍時(shí)間不小于2小時(shí)；再對(duì)其抽真空，升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-25-0℃，一次干燥時(shí)間不小于8小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為10-38℃，二次干燥時(shí)間不小于5小時(shí)。使用前用復(fù)溶溶劑進(jìn)行復(fù)溶，并皮下給藥。具體而言,本發(fā)明一個(gè)方面提供了一種長(zhǎng)效多肽藥物組合物，藥物組合物中包含凍干粉針以及緩沖鹽，其特征在于，凍干粉針由作為活性成分的多肽藥物和支撐劑制成，其中活性成分選自水溶性gnrh類似物，優(yōu)選為布舍瑞林、亮丙瑞林；所述藥物組合物中不包含生物降解材料或高分子材料，所述長(zhǎng)效多肽藥物組合物中的凍干粉針和緩沖鹽分開(kāi)放置。進(jìn)一步地，所述支撐劑選自甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、多元糖醇中的一種或多種的組合，優(yōu)選地，活性成分與支撐劑的重量比為1：0.1-100，更優(yōu)選為1：0.3-20，或?yàn)?：0.75，或1：1，或1：1.5，或1：2，或1：3，或1：5，或1：8，或1：9，或1：10。進(jìn)一步地，其中所述凍干粉針是由以下方法制成的：將支撐劑用水溶解，將活性成分用水溶解，再將活性成分溶液加入支撐劑溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重，分裝后凍干。進(jìn)一步地，所述凍干步驟為：首先進(jìn)行預(yù)凍，預(yù)凍溫度小于-45℃，預(yù)凍時(shí)間不小于2小時(shí)；再進(jìn)行抽真空，升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-25-0℃，一次干燥時(shí)間不小于8小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為10-38℃，二次干燥時(shí)間不小于5小時(shí)。進(jìn)一步地，其中所述緩沖鹽為無(wú)機(jī)鹽或有機(jī)鹽，優(yōu)選選自磷酸氫二鈉、磷酸鈉、磷酸二氫鈉、檸檬酸鈉、氯化鈉中的一種或多種的組合，更優(yōu)選為磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉的組合。進(jìn)一步地，其中緩沖鹽的濃度為0.001-0.15mol/l，或緩沖鹽的濃度是與注射劑滲透壓相適應(yīng)的緩沖鹽溶液。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了一種長(zhǎng)效多肽藥物組合物，所述其由長(zhǎng)效多肽藥物組合物中的凍干粉針和緩沖鹽分開(kāi)放置溶液制成；或者所述長(zhǎng)效多肽藥物組合物為液體形式，凍干粉針由作為活性成分的多肽藥物和支撐劑制成，其中活性成分選自水溶性gnrh類似物，優(yōu)選為布舍瑞林、亮丙瑞林；所述長(zhǎng)效多肽藥物組合物中不包含生物降解材料或高分子材料，長(zhǎng)效多肽藥物組合物的其制備方法為將緩沖鹽溶解后所得緩沖鹽溶液調(diào)至ph4-7，優(yōu)選為5-6(5.5)，本發(fā)明的ph可以用磷酸，硫酸，鹽酸，檸檬酸、酒石酸或氫氧化鈉等進(jìn)行調(diào)節(jié)。然后以緩沖鹽溶液將凍干粉針復(fù)溶，獲得液體形式的微粒溶液，其微粒的粒度為0.1μm～50μm(優(yōu)選為1μm～15μm)。進(jìn)一步地，所述支撐劑選自甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、多元糖醇中的一 種或多種的組合，優(yōu)選地，活性成分與支撐劑的重量比為1：0.1-100，更優(yōu)選為1：0.3-20。進(jìn)一步地，其中所述凍干粉針是由以下方法制成的：將支撐劑用水溶解，將活性成分用水溶解，再將活性成分溶液加入支撐劑溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重，分裝后凍干。進(jìn)一步地，所述凍干步驟為：首先進(jìn)行預(yù)凍，預(yù)凍溫度小于-45℃，預(yù)凍時(shí)間不小于2小時(shí)；再進(jìn)行抽真空，升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-25-0℃，一次干燥時(shí)間不小于8小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為10-38℃，二次干燥時(shí)間不小于5小時(shí)。進(jìn)一步地，其中所述緩沖鹽為無(wú)機(jī)鹽或有機(jī)鹽，優(yōu)選選自磷酸氫二鈉、磷酸鈉、磷酸二氫鈉、檸檬酸鈉、氯化鈉中的一種或多種的組合，更優(yōu)選為磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉的組合。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了一種長(zhǎng)效多肽藥物組合物的制備方法，其包括如下步驟：1)將支撐劑用水溶解，將活性成分用水溶解，再將活性成分溶液加入支撐劑溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重，分裝后凍干；優(yōu)選地，還包括如下步驟：2)將緩沖鹽溶解后所得緩沖鹽溶液調(diào)至ph4-7，優(yōu)選為ph5-6(5.5)，ph可以用磷酸，硫酸，鹽酸，檸檬酸、酒石酸或氫氧化鈉等進(jìn)行調(diào)節(jié)。然后以緩沖鹽溶液將凍干粉針復(fù)溶，獲得液體形式的微粒溶液，其微粒的粒度為0.1μm～50μm(優(yōu)選為1μm～15μm)。進(jìn)一步地，其中所述凍干步驟為：首先進(jìn)行預(yù)凍，預(yù)凍溫度小于-45℃，預(yù)凍時(shí)間不小于2小時(shí)；再進(jìn)行抽真空，升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-25-0℃，一次干燥時(shí)間不小于8小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為10-38℃，二次干燥時(shí)間不小于5小時(shí)。附圖說(shuō)明附圖1為本發(fā)明復(fù)溶后終溶液藥品微粒顯微圖。附圖2為實(shí)施例1-5中的藥物組合物用本發(fā)明的復(fù)溶溶劑復(fù)溶后的釋放曲線。附圖3為實(shí)施例6中藥物組合物用本發(fā)明的復(fù)溶溶劑復(fù)溶后的釋放曲線。附圖4為實(shí)施例7中的藥物組合物用水復(fù)溶后的釋放曲線。附圖5為實(shí)施例8中的藥物組合物用水復(fù)溶后的釋放曲線具體實(shí)施方式實(shí)施例1布舍瑞林凍干粉針及布舍瑞林注射溶液的制備處方：將蔗糖用水溶解，將布舍瑞林用水溶解，再將布舍瑞林溶液加入蔗糖溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重。除菌過(guò)濾，以0.5ml/瓶分裝至西林瓶中，將已分裝的小瓶放入凍干機(jī)中，開(kāi)啟制冷對(duì)其預(yù)凍，預(yù)凍溫度-45℃，預(yù)凍時(shí)間2小時(shí)；再對(duì)其抽真空，對(duì)其升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-25℃，一次干燥時(shí)間10小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為38℃，二次干燥時(shí)間5小時(shí)，得到布舍瑞林粉針。使用時(shí)用本發(fā)明的復(fù)溶溶劑0.15mol/l磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉ph4.0的緩沖體系對(duì)其復(fù)溶，得到布舍瑞林注射溶液。實(shí)施例2布舍瑞林凍干粉針及布舍瑞林注射溶液的制備處方：將乳糖用水溶解，將布舍瑞林用水溶解，再將布舍瑞林溶液加入乳糖溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重。除菌過(guò)濾，以1.0ml/瓶分裝至西林瓶中，將已分裝的小瓶放入凍干機(jī)中，開(kāi)啟制冷對(duì)其預(yù)凍，預(yù)凍溫度-50℃，預(yù)凍時(shí)間2.5小時(shí)；再對(duì)其抽真空，對(duì)其升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-20℃，一次干燥時(shí)間12小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為36℃，二次干燥時(shí)間6小時(shí)，得到布舍瑞林粉針。使用時(shí)用本發(fā)明的復(fù)溶溶劑0.10mol/l磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉ph5.0的緩沖體系對(duì)其復(fù)溶，得到布舍瑞林注射溶液。實(shí)施例3布舍瑞林凍干粉針及布舍瑞林注射溶液的制備處方：將甘露醇用水溶解，將布舍瑞林用水溶解，再將布舍瑞林溶液加入甘露醇溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重。除菌過(guò)濾，以1.0ml/瓶分裝至西林瓶中，將已分裝的小瓶放入凍干機(jī)中，開(kāi)啟制冷對(duì)其預(yù)凍，預(yù)凍溫度-50℃，預(yù)凍時(shí)間3小時(shí)；再對(duì)其抽真空，對(duì)其升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-10℃，一次干燥時(shí)間8小 時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為30℃，二次干燥時(shí)間8小時(shí)，得到布舍瑞林粉針。使用時(shí)用本發(fā)明的復(fù)溶溶劑0.02mmmol/l磷酸二氫鈉ph5.5(氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph5.5)的緩沖體系對(duì)其復(fù)溶，得到布舍瑞林注射溶液實(shí)施例4布舍瑞林凍干粉針及布舍瑞林注射溶液的制備處方：將山梨醇用水溶解，將布舍瑞林用水溶解，再將布舍瑞林溶液加入山梨醇溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重。除菌過(guò)濾，以1.0ml/瓶分裝至西林瓶中，將已分裝的小瓶放入凍干機(jī)中，開(kāi)啟制冷對(duì)其預(yù)凍，預(yù)凍溫度-50℃，預(yù)凍時(shí)間3小時(shí)；再對(duì)其抽真空，對(duì)其升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-5℃，一次干燥時(shí)間7小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為30℃，二次干燥時(shí)間9小時(shí)，得到布舍瑞林粉針。使用時(shí)用本發(fā)明的ph值為6.5的復(fù)溶溶劑0.9％nacl溶液對(duì)其復(fù)溶，得到布舍瑞林注射溶液。實(shí)施例5布舍瑞林凍干粉針及布舍瑞林注射溶液的制備處方：將甘露醇用水溶解，將布舍瑞林用水溶解，再將布舍瑞林溶液加入甘露醇溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重。除菌過(guò)濾，以2.0ml/瓶分裝至西林瓶中，將已分裝的小瓶放入凍干機(jī)中，開(kāi)啟制冷對(duì)其預(yù)凍，預(yù)凍溫度-50℃，預(yù)凍時(shí)間3小時(shí)；再對(duì)其抽真空，對(duì)其升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-5℃，一次干燥時(shí)間15小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為25℃，二次干燥時(shí)間10小時(shí)，得到布舍瑞林粉針。使用時(shí)用本發(fā)明的復(fù)溶溶劑0.10mol/l檸檬酸鈉和檸檬酸的ph5.5的緩沖體系溶液對(duì)其復(fù)溶，得到布舍瑞林注射溶液。實(shí)施例6亮丙瑞林凍干粉針及亮丙瑞林注射溶液的制備處方：將甘露醇用水溶解，將亮丙瑞林用水溶解，再將亮丙瑞林溶液加入甘露醇溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重。除菌過(guò)濾，以2.0ml/瓶分裝至西林瓶中，將已分裝的小瓶放入凍干機(jī)中，開(kāi)啟制冷對(duì)其預(yù)凍，預(yù)凍溫度-50℃，預(yù)凍時(shí)間3小時(shí)；再對(duì)其抽真空，對(duì)其升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-5℃，一次干燥時(shí)間15小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為25℃，二次干燥時(shí)間10小時(shí)，得到亮丙瑞林粉針。使用時(shí)用本發(fā)明的復(fù)溶溶劑0.001mol/l磷酸鈉和磷酸二氫鈉ph7.0的緩沖體系的緩沖體系溶液對(duì)其復(fù)溶，得到亮丙瑞林注射溶液。實(shí)施例7布舍瑞林凍干粉針及布舍瑞林注射溶液的制備(對(duì)比例1)處方：將山梨醇用水溶解，將布舍瑞林用水溶解，再將布舍瑞林溶液加入山梨醇溶液中，繼續(xù)加注射用水至總重。除菌過(guò)濾，以1.0ml/瓶分裝至西林瓶中，將已分裝的小瓶放入凍干機(jī)中，開(kāi)啟制冷對(duì)其預(yù)凍，預(yù)凍溫度-50℃，預(yù)凍時(shí)間3小時(shí)；再對(duì)其抽真空，對(duì)其升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-5℃，一次干燥時(shí)間7小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為30℃，二次干燥時(shí)間9小時(shí)，得到布舍瑞林粉針。使用時(shí)用注射用水對(duì)其復(fù)溶，得到布舍瑞林注射溶液。實(shí)施例8布舍瑞林凍干粉針及布舍瑞林注射溶液的制備(對(duì)比例2)處方：將乳糖用水溶解，將布舍瑞林用水溶解，再將布舍瑞林溶液加入乳糖溶液中， 繼續(xù)加注射用水和緩沖溶液至總重。除菌過(guò)濾，以1.0ml/瓶分裝至西林瓶中，將已分裝的小瓶放入凍干機(jī)中，開(kāi)啟制冷對(duì)其預(yù)凍，預(yù)凍溫度-50℃，預(yù)凍時(shí)間3小時(shí)；再對(duì)其抽真空，對(duì)其升溫進(jìn)行一次干燥，一次干燥溫度為-5℃，一次干燥時(shí)間7小時(shí)，再進(jìn)入二次干燥，二次干燥溫度為30℃，二次干燥時(shí)間9小時(shí)，得到布舍瑞林粉針。使用時(shí)用注射用水對(duì)其復(fù)溶得到布舍瑞林注射溶液。實(shí)施例9布舍瑞林凍干粉針和亮丙瑞林凍干粉針復(fù)溶后溶液粒徑微粒分布(激光衍射法)表1實(shí)施例1-6復(fù)溶后溶液微粒分布結(jié)果實(shí)施例1d10:1μm；d30:10μmd50:11μm；d90:13μm實(shí)施例2d10:10μm；d30:8μmd50:12μm；d90:10μm實(shí)施例3d10:2μm；d30:7μmd50:9μm；d90:10μm實(shí)施例4d10:6μm；d30:12μmd50:9μm；d90:11μm實(shí)施例5d10:5μm；d30:9μmd50:13μm；d90:11μm實(shí)施例6d10:5μm；d30:9μmd50:13μm；d90:12μm本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)了，以本發(fā)明的鹽類溶劑進(jìn)行復(fù)溶時(shí)，實(shí)施例1至實(shí)施例6可以使凍干制劑在沒(méi)有高分子輔料加入的情況下，形成一定粒徑的微粒溶液，通過(guò)后續(xù)試驗(yàn)可知，這種微粒形式的溶液能夠使活性成分的釋放穩(wěn)定而長(zhǎng)效；而實(shí)施例7和實(shí)施例8以注射用水復(fù)溶或者在凍干前將緩沖鹽加入到凍干溶液中都無(wú)法形成微粒的溶液。表2實(shí)施例1-8復(fù)溶后的結(jié)果實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4實(shí)施例5實(shí)施例6實(shí)施例7實(shí)施例8混懸溶液混懸溶液混懸溶液混懸溶液混懸溶液混懸溶液澄清溶液澄清溶液實(shí)施例10體外釋放曲線將凍干制劑復(fù)溶后，在透析膜模型給藥，計(jì)算通過(guò)膜到達(dá)流通池的活性成分的含量。結(jié)果參見(jiàn)附圖2和圖3。通過(guò)附圖2和圖3的結(jié)果可知，以本發(fā)明實(shí)施例1至實(shí)施例6的復(fù)溶溶劑對(duì)凍干制劑進(jìn)行復(fù)溶以后，所得的微粒溶液能夠緩慢恒定釋放，釋放周期顯著增加。通過(guò)圖4、圖5可知實(shí)施例7、實(shí)施例8采用水對(duì)凍干制劑復(fù)溶后并沒(méi)有到達(dá)緩釋效果，在5小時(shí)藥物已釋放完全，沒(méi)有達(dá)到緩慢釋放的效果。實(shí)施例11本發(fā)明的布舍瑞林和亮丙瑞林的長(zhǎng)效藥用組合物的動(dòng)物安全性試驗(yàn)(1)血管刺激性試驗(yàn)受試對(duì)象：選取雙耳無(wú)損傷的健康家兔(來(lái)源于第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心) 36只，隨機(jī)分為6組，每組6只，標(biāo)記為試驗(yàn)組1至試驗(yàn)組6。受試藥物：實(shí)施例1至實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林長(zhǎng)效組合物，實(shí)施例6制備獲得亮丙瑞林長(zhǎng)效藥用組合物。試驗(yàn)方法：取實(shí)施例1至實(shí)施5制備獲得復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液，實(shí)施例6制備獲得復(fù)溶后的亮丙瑞林注射溶液。所有受試對(duì)象的左側(cè)耳緣靜脈注射本發(fā)明注射溶液1ml，右耳注射1ml的5％葡萄糖注射液，每天1次，連續(xù)注射7天，其中試驗(yàn)組1的受試對(duì)象注射實(shí)施例1制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組2的受試對(duì)象注射實(shí)施例2制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組3的受試對(duì)象注射實(shí)施例3制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組4的受試對(duì)象注射實(shí)施例4制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組5的受試對(duì)象注射實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組6的受試對(duì)象注射實(shí)施例6制備獲得的亮丙瑞林凍干粉針復(fù)溶后的亮丙瑞林注射溶液。檢測(cè)方法和試驗(yàn)結(jié)果：注射期間，每天定時(shí)觀察耳緣靜脈的刺激性反應(yīng)。第8天處死家兔，取雙側(cè)耳緣靜脈及周圍組織，用甲醛固定，在距注射部位分別為110cm、215cm、315cm的近心端作常規(guī)組織切片，光鏡下觀察有無(wú)病理變化。血管刺激性的觀察指標(biāo)、評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)及判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表3，各個(gè)組別受試對(duì)象的左耳血管刺激性檢測(cè)結(jié)果表4，各個(gè)組別受試對(duì)象的右耳血管刺激性檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。表3血管刺激性觀察指標(biāo)、評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)及判斷標(biāo)準(zhǔn)表4各個(gè)組別受試對(duì)象的血管刺激性檢測(cè)結(jié)果從表4檢測(cè)結(jié)果可知，所有組別的左耳和右耳的評(píng)價(jià)結(jié)果類似，肉眼觀察，均未見(jiàn)血管充血，周圍組織水腫等炎癥反應(yīng)；組織切片檢查，也未見(jiàn)血管結(jié)構(gòu)異常，內(nèi)皮損傷，血栓形成及其他病理變化。即實(shí)施例1至實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的注射溶液和實(shí)施例6獲得的亮丙瑞林凍粉針復(fù)溶后的注射溶液的刺激性與5％葡萄糖注射液相比，差異不顯著(p＞0.05)，均沒(méi)有產(chǎn)生刺激性，說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例1至實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林長(zhǎng)效藥用組合物和實(shí)施例6制備獲得的亮丙瑞林長(zhǎng)效藥用組合物對(duì)血管無(wú)刺激性。(2)肌肉刺激性試驗(yàn)受試對(duì)象：取健康家兔(來(lái)源于第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)36只，隨機(jī)分為6組，每組6只，標(biāo)記為試驗(yàn)組1至試驗(yàn)組6。受試藥物：實(shí)施例1至實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林長(zhǎng)效藥用組合物和實(shí)施 例6制備獲得的亮丙瑞林長(zhǎng)效藥用組合物；試驗(yàn)方法：取實(shí)施例1至實(shí)施例6制備獲得復(fù)溶后的注射溶液備用。所有受試對(duì)象的左側(cè)股四頭肌注射布本發(fā)明的注射溶液1ml，右側(cè)股四頭肌注射1ml的生理鹽水，其中試驗(yàn)組1的受試對(duì)象注射實(shí)施例1制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組2的受試對(duì)象注射實(shí)施例2制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組3的受試對(duì)象注射實(shí)施例3制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組4的受試對(duì)象注射實(shí)施例4制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組5的受試對(duì)象注射實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液，試驗(yàn)組6的受試對(duì)象注射實(shí)施例6制備獲得的亮丙瑞林凍干粉針復(fù)溶后的亮丙瑞林注射溶液。檢測(cè)方法和試驗(yàn)結(jié)果：注射后，觀察注射部位肌肉有無(wú)充血，水腫等反應(yīng)，半數(shù)動(dòng)物48h后(第3天)放血處死，縱向切開(kāi)皮膚，肉眼觀察兩側(cè)注射部位有無(wú)充血，水腫等反應(yīng)，并取其組織做病理檢查。余下動(dòng)物繼續(xù)觀察14天，于第18天放血處死后重復(fù)上述操作。本發(fā)明的注射溶液對(duì)肌肉刺激性反應(yīng)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5，第3天檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表6，第18天的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表7。表5肌肉刺激性反應(yīng)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別刺激反應(yīng)現(xiàn)象0級(jí)給藥部位無(wú)明顯反應(yīng)。1級(jí)給藥部位輕度充血，直徑小于0.15cm。2級(jí)給藥部位中度充血，直徑0.15～1.0cm。3級(jí)給藥部位重度充血，紅腫，肌肉有變性。4級(jí)出現(xiàn)肌肉褐色變性，壞死。5級(jí)肌肉嚴(yán)重變性，出現(xiàn)大面積壞死。表6第3天各個(gè)組別受試對(duì)象肌肉刺激性反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果表7第18天各個(gè)組別受試對(duì)象肌肉刺激性反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果從表6、表7中檢測(cè)結(jié)果可知，家兔左側(cè)股四頭肌內(nèi)注射本發(fā)明實(shí)施例1至5制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的注射溶液和實(shí)施例6制備獲得的亮丙瑞林凍干粉針復(fù)溶后的注射溶液后，肉眼觀察注射部位肌肉無(wú)充血，水腫等反應(yīng)，病理組織檢查亦未見(jiàn)組織變性或壞死等明顯性刺激反應(yīng)，與生理鹽水相比無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例1至實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林長(zhǎng)效藥用組合物和實(shí)施例6亮丙瑞林長(zhǎng)效藥用組合物對(duì)肌肉沒(méi)有刺激性，使用安全。(3)對(duì)豚鼠的致敏試驗(yàn)受試對(duì)象：選取健康豚鼠(來(lái)源于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)48只，隨機(jī)分為8組，每組6只，分別標(biāo)記為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、試驗(yàn)組1至試驗(yàn)組6。受試藥物：試驗(yàn)組為實(shí)施例1至實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林長(zhǎng)效藥用組合物和實(shí)施例6亮丙瑞林長(zhǎng)效藥用組合物；陰性對(duì)照組為0.9％nacl；陽(yáng)性對(duì)照組給予牛血清白蛋白(已知致敏陽(yáng)性物質(zhì))。試驗(yàn)方法和檢測(cè)方法：取實(shí)施例1至實(shí)施例5制備獲得布舍瑞林注射溶液和實(shí)施例6亮丙瑞林注射溶液備用。各個(gè)組別受試對(duì)象在腹腔注射受試藥物，隔日注射1次，共注射3次，然后隨機(jī)分為2組，分別再在第1次給藥后14天，靜脈注射受試藥物，觀察豚鼠有無(wú)豎毛，噴嚏，干嘔，咳嗽，呼吸困難等過(guò)敏癥狀，如出現(xiàn)兩種或兩種以上癥狀，或有抽搐，虛脫，死亡現(xiàn)象之一者，判為陽(yáng)性。檢 測(cè)結(jié)果見(jiàn)表8。其中試驗(yàn)組1的受試對(duì)象注射實(shí)施例1制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組2的受試對(duì)象注射實(shí)施例2制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組3的受試對(duì)象注射實(shí)施例3制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組4的受試對(duì)象注射實(shí)施例4制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組5的受試對(duì)象注射實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組6的受試對(duì)象注射實(shí)施例6制備獲得的亮丙瑞林凍干粉針復(fù)溶后的亮丙瑞林注射溶液、陰性對(duì)照組注射5％的葡萄糖注射液、陽(yáng)性對(duì)照組注射牛血清白蛋白。表8致敏試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果組別檢測(cè)結(jié)果試驗(yàn)組1受試對(duì)象均為陰性試驗(yàn)組2受試對(duì)象均為陰性試驗(yàn)組3受試對(duì)象均為陰性試驗(yàn)組4受試對(duì)象均為陰性試驗(yàn)組5受試對(duì)象均為陰性試驗(yàn)組6受試對(duì)象均為陰性陰性對(duì)照組受試對(duì)象均為陰性陽(yáng)性對(duì)照組受試對(duì)象均為陽(yáng)性結(jié)果表明，陽(yáng)性試驗(yàn)組豚鼠均產(chǎn)生了過(guò)敏反應(yīng)、而陰性對(duì)照組和試驗(yàn)組1至對(duì)照試驗(yàn)組5受試對(duì)象均活動(dòng)正常，未見(jiàn)呼吸異常等反應(yīng)，即未有過(guò)敏反應(yīng)。說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例1至實(shí)施例5和實(shí)施例6制備獲得本發(fā)明的注射溶液對(duì)豚鼠沒(méi)有致敏反應(yīng)，使用安全。(4)體外溶血實(shí)驗(yàn)受試材料：取家兔血液，制備紅細(xì)胞壓積百分比為2％的紅細(xì)胞混懸液：制備方法為：取新鮮兔血15ml，放入盛有玻璃珠的三角燒瓶中振搖10分鐘，除去纖維蛋白質(zhì)，使成脫纖血液。加入生理鹽水100ml，搖勻，1500r/min離心15分鐘，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水按上述方法洗滌3次，至上清液不顯紅色為止。將所得紅細(xì)胞用生理鹽水配成2％的混懸液(紅細(xì)胞2ml，加生理鹽水至100ml)，供試驗(yàn)用。受試藥物：實(shí)施例1至實(shí)施例6制備獲得的本發(fā)明的注射溶液。試驗(yàn)方法：試驗(yàn)共分為6組，試驗(yàn)組1至試驗(yàn)組6，分別進(jìn)行各個(gè)組別的布舍瑞林注射溶液的溶血實(shí)驗(yàn)，其中試驗(yàn)組1使用實(shí)施例1制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組2使用實(shí)施例2制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組3使用實(shí)施例3制備獲得的布舍瑞林 凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組4使用實(shí)施例4制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組5使用實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組6使用實(shí)施例6制備獲得的亮丙瑞林凍干粉針復(fù)溶后的亮丙瑞林注射溶液。試驗(yàn)操作具體為：各個(gè)組別分別取試管7支，進(jìn)行編號(hào)，然后按表9加入各種液體，將各試管輕輕搖勻，置37℃恒溫水浴中孵育，觀察0.5、1、2、3小時(shí)的結(jié)果，記錄各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果。紅細(xì)胞體外凝集與溶血的判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表10，各個(gè)組別的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表11。表9注射溶液體外溶血試驗(yàn)加樣表管號(hào)12345670.9％氯化鈉注射液(ml)2.42.32.22.12.02.50復(fù)溶后布舍瑞林注射溶液(ml)0.10.20.30.40.500復(fù)溶后亮丙瑞林注射溶液(ml)0.10.20.30.40.500蒸餾水(ml)0000002.52％紅細(xì)胞懸液(ml)2.52.52.52.52.52.52.5表10紅細(xì)胞體外凝集與溶血的判斷標(biāo)準(zhǔn)表11各個(gè)組別的檢測(cè)結(jié)果注：“--”代表該待測(cè)樣品在3h之內(nèi)沒(méi)有出現(xiàn)溶血現(xiàn)象從表11中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，所有組別蒸餾水對(duì)照管，即7號(hào)試管，在0.5小時(shí)完全溶血和發(fā)生了細(xì)胞凝集反應(yīng)；而其他試管在3小時(shí)內(nèi)均沒(méi)有發(fā)生溶血現(xiàn)象、也沒(méi)有發(fā)生細(xì)胞凝集反應(yīng)。說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例1至實(shí)施例5和實(shí)施例6制備獲得本發(fā)明注射溶液沒(méi)有產(chǎn)生溶血現(xiàn)象，使用安全。(5)急性全身毒性試驗(yàn)受試對(duì)象：取健康小鼠(來(lái)源于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)35只，將小鼠隨機(jī)分為7組，每組5只，標(biāo)記為對(duì)照組、試驗(yàn)組1至試驗(yàn)組6，分別放入固定器內(nèi)。受試藥物：實(shí)施例1至實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林凍干粉針，實(shí)施例6制備獲得亮丙瑞林凍干粉針。試驗(yàn)方法：取實(shí)施例1實(shí)施例5制備獲得布舍瑞林注射溶液，實(shí)施例6制備獲得亮丙瑞林注射溶液備用。對(duì)照組注入注射用水，注射速度均為0.1ml/s，注射劑量為50ml/kg。其中試驗(yàn)組1的受試對(duì)象注射實(shí)施例1制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組2的受試對(duì)象注射實(shí)施例2制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組3的受試對(duì)象注射實(shí)施例3制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組4的受試對(duì)象注射實(shí)施例4制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組5的受試對(duì)象注射實(shí)施例5制備獲得的布舍瑞林凍干粉針復(fù)溶后的布舍瑞林注射溶液、試驗(yàn)組6的受試對(duì)象注射實(shí)施例6制備獲得的亮丙瑞林凍干粉針復(fù)溶后的亮丙瑞林注射溶液。檢測(cè)方法和試驗(yàn)結(jié)果：注射完畢后，觀察小鼠即時(shí)反應(yīng)，并于4h、24h、48h和72h時(shí)，分別觀察和記錄試驗(yàn)組1至試驗(yàn)組6、對(duì)照組動(dòng)物的一般狀態(tài)、毒性表現(xiàn)和死亡動(dòng)物數(shù)，最后統(tǒng)計(jì)各個(gè)組別的受試對(duì)象的中毒反應(yīng)情況。判斷動(dòng)物是否發(fā)生中毒反應(yīng)的觀察指標(biāo)見(jiàn)表12。各個(gè)組別的受試對(duì)象受試72h之后的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表13。表12注射受試藥物后判斷動(dòng)物中毒反應(yīng)的觀察指標(biāo)表13各個(gè)組別的受試對(duì)象的急性全身毒性試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果從表13中數(shù)據(jù)可知，在72小時(shí)觀察期內(nèi)，與對(duì)照組相比、試驗(yàn)組1至對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組6的受試動(dòng)物均沒(méi)有發(fā)生中毒反應(yīng)，無(wú)動(dòng)物死亡，體質(zhì)量無(wú)明顯變化。說(shuō)明實(shí)施例1至實(shí)施例6制備獲得本發(fā)明的注射溶液對(duì)小鼠沒(méi)有產(chǎn)生中毒反應(yīng)，使用安全。綜上所述，注射本發(fā)明實(shí)施例1至實(shí)施例6制備獲得的布舍瑞林注射溶液和亮丙瑞林注射溶液具有良好的組織相容性，表明本發(fā)明實(shí)施例1至實(shí)施例5制備的布舍瑞林長(zhǎng)效藥用組合物和實(shí)施例6亮丙瑞林長(zhǎng)效藥用組合物質(zhì)量穩(wěn)定、組織相容性好、安全性好，可供臨床注射使用。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)12