本發(fā)明涉及蠶砂葉綠素鉻鈉鹽的制藥新用途，尤其是在制備治療慢性炎癥性貧血藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：慢性病引起的貧血是僅次于缺鐵性貧血的第二大多發(fā)性貧血，它是繼發(fā)于慢性感染、炎癥和惡性腫瘤的一種輕、中度貧血，又稱之為慢性炎癥性貧血。慢性炎癥性貧血發(fā)病特征為持續(xù)1-2個(gè)月以上的感染，常伴有血液指標(biāo)中單核-巨噬細(xì)胞鐵沉著，血清鐵和總鐵結(jié)合力均顯著降低以及血清鐵蛋白含量增加。研究發(fā)現(xiàn)慢性炎癥性貧血的致病機(jī)理是炎癥引起肝臟鐵調(diào)素(hepcidin)表達(dá)增高，進(jìn)而鐵調(diào)素與小腸粘膜細(xì)胞上的受體fpni相結(jié)合，引起其內(nèi)吞降解，使之分布減少，造成小腸細(xì)胞內(nèi)的鐵不能釋放到血液中，引起機(jī)體鐵缺乏和貧血。慢性炎癥性貧血已經(jīng)成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療的難題，目前還沒有能快速起效的治療手段，而是主要針對原發(fā)病進(jìn)行治療，現(xiàn)有的抗缺鐵性貧血的藥物對慢性炎癥性貧血都無效。蠶砂葉綠素鉻鈉鹽是將從蠶的糞便中提取出的葉綠素與鉻鹽反應(yīng)，葉綠素基本結(jié)構(gòu)中的鎂離子置換成三價(jià)鉻離子后形成的鉻鈉鹽，目前尚沒有治療慢性炎癥性貧血的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種蠶砂葉綠素鉻鈉鹽的制藥新用途，尤其是在制備治療慢性炎癥性貧血的藥物中的新用途。藥效試驗(yàn)表明：1)蠶砂葉綠素鉻鈉鹽對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(cfa)引起的慢性炎癥性貧血模型大鼠有良好的治療效果，能改善血常規(guī)水平，增加體重，提高血清鐵和總鐵結(jié)合力；2)蠶砂葉綠素鉻鈉鹽能顯著抑制cfa模型大鼠il-6和tnf-α的表達(dá)，表明蠶砂葉綠素鉻鈉鹽可以顯著減輕大鼠炎癥狀態(tài)，從根本上抑制炎癥性貧血的誘因；3)用蠶砂葉綠素鉻鈉鹽治療后，各劑量組均能顯著降低鐵調(diào)素的含量，與模型組相比抑制率分別為16.08％、21.44％、31.11％，且治療效果呈現(xiàn)劑量依賴性。臨床試驗(yàn)結(jié)果表明：蠶砂葉綠素鉻鈉鹽能有效抑制鐵調(diào)素和炎癥因子的表達(dá)，使血常規(guī)、鐵代謝、炎癥因子水平恢復(fù)到正常水平，從根本上抑制慢性炎癥性貧血的誘因，明顯改善臨床癥狀，且副作用小、安全性高。本發(fā)明優(yōu)選的蠶砂葉綠素鉻鈉鹽是按以下方法制備的：1)粗提：將蠶砂粉粹，然后向粉末中加入2～5倍重量的丙酮，浸潤1～3小時(shí)后進(jìn)行滲漏提取，控制滲漏速度為2～5ml/min，收集滲漏液，回收丙酮得墨綠色糊狀粗提取物；2)精制：將上述粗提取物用汽油溶解后上大孔吸附樹脂柱，依次用30～50％的乙醇和乙酸乙酯洗脫，棄去乙醇洗脫液，收集乙酸乙酯洗脫液，用鹽酸調(diào)節(jié)乙酸乙酯洗脫液的ph值至2～4，靜置分層，過濾，棄去上層濾液，收集濾渣；3)皂化：將濾渣用汽油溶解，然后加入25～35％的naoh溶液，攪拌，使其完全皂化，靜置分層，分取下層皂化液，用汽油洗滌至汽油層色淡；4)成鹽：將洗滌后的皂化液用酸調(diào)節(jié)ph值至2～4，析出沉淀用丙酮溶解，再按沉淀重量的0.13～0.16倍向丙酮溶液中加入硫酸鉻，在40～70℃攪拌回流反應(yīng)0.5～3h，過濾，將濾渣干燥后即為蠶砂葉綠素鉻鈉鹽。采用上述方法制備的蠶砂葉綠素鉻鈉鹽的活性成分含量更高，對慢性炎癥性貧血的治療效果比現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的方法更好。附圖說明圖1是蠶砂葉綠素鉻鈉鹽對cfa關(guān)節(jié)炎大鼠il-6和tnf-α的影響。圖2是蠶砂葉綠素鉻鈉鹽對cfa關(guān)節(jié)炎大鼠鐵調(diào)素表達(dá)的影響。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地說明。實(shí)施例1蠶砂葉綠素鉻鈉鹽的制備1)粗提：將蠶砂粉粹，然后向粉末中加入4倍重量的丙酮，浸潤2小時(shí)后進(jìn)行滲漏提取，控制滲漏速度為3ml/min，收集滲漏液，回收丙酮得墨綠色糊狀粗提取物；2)精制：將上述粗提取物用120號(hào)汽油溶解后上nka-2型大孔吸附樹脂柱，依次用50％的乙醇(指100g乙醇水溶液中含有乙醇50g)和乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，棄去乙醇洗脫液，收集乙酸乙酯洗脫液，用鹽酸調(diào)節(jié)乙酸乙酯洗脫液的ph值至3，靜置分層，過濾，棄去上層濾液，收集濾渣；3)皂化：將濾渣用120號(hào)汽油溶解，然后加入足量的25％naoh溶液(指100gnaoh水溶液中含有25gnaoh)，攪拌，使其完全皂化，靜置分層，分取下層皂化液，用汽油洗滌至汽油層色淡；4)成鹽：將洗滌后的皂化液用鹽酸調(diào)節(jié)ph值至3，析出沉淀用丙酮溶解，再按沉淀重量的0.14倍向丙酮溶液中加入硫酸鉻，在60℃攪拌回流反應(yīng)2h，過濾，將濾渣干燥后即為蠶砂葉綠素鉻鈉鹽。本發(fā)明制備的蠶砂葉綠素鉻鈉鹽經(jīng)原子吸收分光光度法檢測，含量為42.5％。實(shí)施例2蠶砂葉綠素鉻鈉鹽對慢性炎癥性貧血模型大鼠的治療作用1、實(shí)驗(yàn)方法采用足趾注射弗氏完全佐劑建立的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(cfa)大鼠模型的血常規(guī)、血清鐵代謝指標(biāo)和炎癥因子水平均符合慢性炎癥性貧血的特征，因此我們采用給大鼠注射弗氏完全佐劑建立慢性炎癥性貧血(acd)模型。雄性sprague-dawley大鼠40只，每組8只分為5組，體重160～210g。自由 攝食及飲水，飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)的聚丙烯籠里，動(dòng)物房溫度21～24℃，相對濕度58～62％以及每天12h的光照時(shí)間。實(shí)驗(yàn)大鼠給藥造模：空白對照組8只大鼠左側(cè)足趾分別注射生理鹽水100μl；模型組、蠶砂葉綠素鉻鈉鹽低、中、高劑量組32只大鼠左側(cè)足趾分別注射含10mg/ml結(jié)核分歧桿菌的費(fèi)氏完全佐劑100μl。造模第30天對大鼠眼眶內(nèi)眥取血，檢測白細(xì)胞計(jì)數(shù)(wbc)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(rbc)、血紅蛋白(hb)、血清鐵(si)、總鐵結(jié)合力(tibc)、血清中白介素-6(il-6)、腫瘤壞死因子-α(tnf-α)、鐵調(diào)素(hepcidin)含量。表1大鼠分組、給藥及結(jié)果組別例數(shù)足趾注射100ul藥物灌胃藥物灌胃劑量/天灌胃天數(shù)空白對照組8生理鹽水生理鹽水1ml/只28模型組8弗氏完全佐劑生理鹽水1ml/只28低劑量組8弗氏完全佐劑蠶砂葉綠素鉻鈉鹽225mg/kg28中劑量組8弗氏完全佐劑蠶砂葉綠素鉻鈉鹽450mg/kg28高劑量組8弗氏完全佐劑蠶砂葉綠素鉻鈉鹽1125mg/kg282、實(shí)驗(yàn)結(jié)果①蠶砂葉綠素鉻鈉鹽對關(guān)節(jié)炎大鼠血液和鐵代謝指標(biāo)的影響表2蠶砂葉綠素鉻鈉鹽對大鼠血常規(guī)和鐵代謝指標(biāo)的影響注：wbc：白細(xì)胞計(jì)數(shù)，hb：血紅蛋白含量，rbc：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，si：血清鐵，tibc：總鐵結(jié)合力；#表示與空白對照組相比p<0.05，*表示與cfa 模型組相比p<0.05。由表2實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，注射費(fèi)氏完全佐劑后，模型組大鼠出現(xiàn)炎性貧血癥狀：紅細(xì)胞、血紅蛋白、體重、血清鐵以及血清鐵結(jié)合力顯著降低，白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著升高，表明成功建立慢性炎癥貧血模型。用蠶砂葉綠素鉻鈉鹽治療后，各劑量組對cfa模型大鼠有良好的治療效果，hb、rbc、si、tibc、體重均有不同程度的升高，wbc有下降趨勢，特別是各劑量組的si、tibc與模型組比較表現(xiàn)出顯著差異(p<0.05)，均已接近正常大鼠的測定值。②蠶砂葉綠素鉻鈉鹽抑制cfa關(guān)節(jié)炎大鼠il-6和tnf-α的表達(dá)圖1表明蠶砂葉綠素鉻鈉鹽能抑制cfa關(guān)節(jié)炎大鼠il-6和tnf-α的表達(dá)，圖中：##表示與空白對照組相比p<0.01，*表示與cfa模型組相比p<0.05，**表示與cfa模型組相比p<0.01。從圖1可以看出，與空白對照組相比，cfa模型組的炎性因子il-6、tnf-α含量分別升高了76.79％和73.67％(p<0.01)，說明成功建立慢性炎癥性貧血模型。蠶砂葉綠素鉻鈉鹽中、高劑量組均可以顯著抑制cfa模型大鼠il-6和tnf-α的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)表明蠶砂葉綠素鉻鈉鹽可以顯著減輕大鼠炎癥狀態(tài)，從根本上抑制炎癥性貧血的誘因。③蠶砂葉綠素鉻鈉鹽抑制cfa關(guān)節(jié)炎大鼠hepcidin的表達(dá)圖2表明蠶砂葉綠素鉻鈉鹽能抑制cfa關(guān)節(jié)炎大鼠鐵調(diào)素的表達(dá)，圖中，##表示與空白對照組相比p<0.01，*表示與cfa模型組相比p<0.05，**表示與cfa模型組相比p<0.01。從圖2可以看出，與空白對照組相比，模型組血清鐵調(diào)素明顯降低(p<0.01)，說明成功建立慢性炎癥性貧血模型。用蠶砂葉綠素鉻鈉鹽治療后，各劑量組均能顯著降低鐵調(diào)素的含量，與模型組相比抑制率分別為16.08％、21.44％、31.11％，治療效果呈現(xiàn)劑量依賴性。實(shí)施例3蠶砂葉綠素鉻鈉鹽對慢性炎癥性貧血的臨床治療效果為證明本藥物的治療效果，選例各類慢性炎癥性貧血病例服用本發(fā)明藥物進(jìn)行觀察，以30天為一個(gè)療程，治療2個(gè)療程，分別進(jìn)行系統(tǒng)檢查。1、藥物對血液透析炎癥性貧血患者的臨床治療效果⑴一般資料選取血液透析炎癥性貧血患者73例，其中男39例，女34例，平均年齡(53.2±10.5)歲。以上病歷均經(jīng)過血常規(guī)、c-反應(yīng)蛋白、鐵調(diào)素、血清鐵蛋白、總鐵結(jié)合力等檢查確診。⑵治療方法每次服用蠶砂葉綠素鉻鈉鹽片劑4片，3次/天；餐后1h服藥，忌茶，觀察時(shí)間為8周。⑶觀察指標(biāo)觀察患者用藥前和用藥后4、8周時(shí)血紅蛋白(hb)、白細(xì)胞(wbc)、紅細(xì)胞(rbc)、c-反應(yīng)蛋白(hs-crp)、鐵調(diào)素(hepcidin)、血清鐵蛋白(sf)、總鐵結(jié)合力(tibc)指標(biāo)。⑷統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)分析使用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑸治療結(jié)果患者治療后血液各項(xiàng)指標(biāo)均有明顯改善，鐵調(diào)素、c-反應(yīng)蛋白、血清鐵蛋白、總鐵結(jié)合力差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示取得較為顯著的臨床治療效果，均未見任何不良反應(yīng)。表3患者治療前后指標(biāo)注：wbc：白細(xì)胞計(jì)數(shù)，hb：血紅蛋白含量，rbc：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，hepcidin：鐵調(diào)素，hs-crp：c-反應(yīng)蛋白，sf：血清鐵蛋白，tibc：總鐵結(jié)合力；*表示與治療前相比p<0.05，**表示與治療前相比p<0.01。當(dāng)前第1頁12