本發(fā)明涉及奎寧類(lèi)化合物在治療腫瘤中的應(yīng)用和方法，以及包含奎寧類(lèi)化合物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
：很多奎寧類(lèi)化合物是抗寄生蟲(chóng)劑、尤其是抗瘧劑?？鼘庮?lèi)化合物在抗瘧之外的應(yīng)用，很多是以組合物形式進(jìn)行的。這類(lèi)組合物曾被應(yīng)用于治療多種疾病，例如痔瘡、鼻炎、血管瘤、面癱等。一般認(rèn)為，組合物中的其它組分(例如烏拉坦)不僅可以助溶，也在治療中起到某些藥效。因而，針對(duì)特定疾病的包含奎寧類(lèi)化合物的藥物組合物一直在研究之中。例如，中國(guó)專(zhuān)利87104056公開(kāi)了一種含一鹽酸奎寧和二鹽酸奎寧的六組分組合物“痔全脫注射液”，用于脫除痔瘡及與痔瘡關(guān)聯(lián)的肛門(mén)裂、直腸息肉及乳頭纖維組織瘤。然而在該組合物中，奎寧類(lèi)化合物總濃度大于0.47M，且含有烏拉坦。中國(guó)專(zhuān)利200910103187.7提供了一種九組分組合物用以治療痔瘡和腫瘤。該組合物中奎寧的濃度很小(小于0.01M)，而且也含有烏拉坦。由于烏拉坦的副作用較強(qiáng)，中國(guó)政府已限制甚至禁止這類(lèi)應(yīng)用。中國(guó)專(zhuān)利96110932披露了一種包含一鹽酸奎寧和安替匹林的組合物，其用于甲亢治療。然而，安替匹林副作用很強(qiáng)，在發(fā)達(dá)國(guó)家己被淘汰。奎寧類(lèi)化合物在抗瘤方面的可能應(yīng)用曾經(jīng)受到過(guò)非常多關(guān)注。實(shí)際上，在以腫瘤細(xì)胞為模型的體外試驗(yàn)中，若干奎寧類(lèi)化合物與常規(guī)抗瘤藥物(例如5-氟嘧啶、阿霉素、紫衫醇等)的細(xì)胞半抑制濃度(IC50)都在微摩爾每升(μMol/L)的水平上。按照通常的認(rèn)識(shí)，一個(gè)藥物的抗瘤效應(yīng)的濃度依賴(lài)性在IC50之后隨濃度增加而減小。常規(guī)抗瘤藥物通常以比IC50高出數(shù)倍的濃度(仍在微摩爾每升范圍內(nèi))注射于瘤體時(shí)，就顯示出抗瘤有效性。然而，即使我們把奎寧類(lèi)化合物(例如二鹽酸奎寧)的注射濃度提高約500倍(0.025M)，也沒(méi)有觀察到有效的抗瘤效果(抑瘤率小于40％)，未顯示出比現(xiàn)有抗瘤藥物明顯更高的藥效。現(xiàn)有技術(shù)中，其它奎寧類(lèi)藥物的抑瘤率也不高。近些年來(lái)，人們便不再把它們看作一種有競(jìng)爭(zhēng)力的抗瘤藥物，而是當(dāng)作抗瘤增活劑進(jìn)行研究。例如，第201310459568.5號(hào)中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)就是將奎寧與抗瘤藥物(長(zhǎng)春新堿類(lèi)藥物)聯(lián)用用以降低細(xì)胞的多藥耐藥性從而使抗瘤藥物達(dá)到較好藥效。目前腫瘤的治療，主要是手術(shù)、放射線(xiàn)治療和其它藥物的化療。手術(shù)對(duì)身 體造成傷害,對(duì)某些影響美觀的分泌腺(例如乳腺和甲狀腺)的傷害讓人沮喪，也使其變成一種痛苦的選擇。放射線(xiàn)治療的副作用也非常明顯?，F(xiàn)有化療基本上是全身用藥，有很高的全身性副作用風(fēng)險(xiǎn)。例如，現(xiàn)有抗瘤藥物在大范圍內(nèi)殺傷癌細(xì)胞的同時(shí)，也殺傷了大量正常細(xì)胞，免疫系統(tǒng)遭到嚴(yán)重破壞，而且療效也并不令人滿(mǎn)意。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的發(fā)明目的是提供一種與現(xiàn)有技術(shù)相比更為有效地冶療腫瘤的藥物組合物以及治療方法。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，其提供一種用于治療腫瘤的藥物組合物，其包含奎寧類(lèi)化合物和藥物學(xué)上可接受的賦形劑，且為適合于經(jīng)瘤區(qū)給藥的劑型，其中在經(jīng)瘤區(qū)給藥時(shí)所述藥物組合物中奎寧類(lèi)化合物的濃度為0.05-0.5M，優(yōu)選為0.15-0.4M，更優(yōu)選為0.2-0.3M。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，其提供奎寧類(lèi)化合物在治療腫瘤中的應(yīng)用，其中所述奎寧類(lèi)化合物包含在藥物組合物中，所述藥物組合物包含藥物學(xué)可接受的賦形劑且為適合于經(jīng)瘤區(qū)給藥的劑型，其中在瘤區(qū)給藥時(shí)，所述藥物組合物中奎寧類(lèi)化合物的濃度為0.05-0.5M，優(yōu)選為0.15-0.4M，更優(yōu)選為0.2-0.3M。根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)方面，其提供一種治療腫瘤的方法，其包括向有此需要的個(gè)體瘤區(qū)給藥包含奎寧類(lèi)化合物和藥物學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物，其中所述藥物組合物為適合于經(jīng)瘤區(qū)給藥的劑型，且在所述瘤區(qū)給藥時(shí)，所述藥物組合物中奎寧類(lèi)化合物的濃度為0.05-0.5M，優(yōu)選為0.15-0.4M，更優(yōu)選為0.2-0.3M。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，在瘤區(qū)給藥時(shí)，所述藥物組合物的給藥體積不小于欲處理之瘤塊體積的70％、優(yōu)選為不小于110％。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所述藥物學(xué)上可接受的賦形劑包括水、水可混溶性有機(jī)溶劑或它們的混合物，其中所述水可混溶性有機(jī)溶劑包括以下之一種或多種：乙醇、丙二醇、PEG、異丙醇。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物不包含諸如烏拉坦和安替比林等因副作用較強(qiáng)而被禁止或者限制使用的藥物成分。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，除奎寧類(lèi)化合物和藥物學(xué)上可接受的賦形劑外，所述組合物還可以進(jìn)一步包含止痛劑、其他抗腫瘤藥物和/或增效劑。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所述腫瘤包括惡性腫瘤和良性腫瘤，所述惡性腫瘤例如是乳腺癌、肝癌、胰腺癌、甲狀腺癌、前列腺癌、肺癌、頭頸癌、結(jié)腸癌、鼻咽癌等各種惡性實(shí)體腫瘤，而所述良性腫瘤包括各種良性實(shí)體腫瘤，例如乳腺瘤、肝瘤、甲狀腺瘤、前列腺瘤等。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：與現(xiàn)有的手術(shù)和放射線(xiàn)治療相比，顯示出同樣髙效卻更加友好的“治療-患者身體”關(guān)系(對(duì)身體擾動(dòng)更小)；與現(xiàn)有的全身用藥治療相比，可以在最小化的毒副作用下，顯著性地提高療效；與現(xiàn)有的局部用藥、尤其是硬化劑(例如無(wú)水乙醇)治療相比，與病變周?chē)M織間的相容性更高，且療效更好。以下將參考附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更為詳細(xì)的說(shuō)明。附圖說(shuō)明圖1是二鹽酸奎寧注射劑的注射濃度-抑瘤率關(guān)系曲線(xiàn)，其中橫坐標(biāo)X為瘤區(qū)注射濃度(4×10XμM)的指數(shù)(X)，而縱坐標(biāo)Y為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中測(cè)出的抑瘤率(Y％)。具體實(shí)施方式在本發(fā)明的范圍中，術(shù)語(yǔ)“奎寧類(lèi)化合物”是指奎寧(Quinine)、奎寧異構(gòu)體及它們的衍生物。奎寧異構(gòu)體例如可以是奎尼丁、辛可寧及辛可尼丁。所述衍生物包括酸加成鹽，例如無(wú)機(jī)酸加成鹽和有機(jī)酸加成鹽。無(wú)機(jī)酸加成鹽例如可以是奎寧或奎寧異構(gòu)體的氫鹵酸鹽(如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、二鹽酸鹽、二氫溴酸鹽、二氫碘酸鹽)、硫酸氫鹽、硫酸鹽、磷酸鹽。有機(jī)酸加成鹽例如可以是奎寧或奎寧異構(gòu)體的碳酸氫鹽或碳酸鹽、乙基碳酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、枸緣酸鹽或單寧酸鹽。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的奎寧類(lèi)化合物例如是奎寧、一鹽酸奎寧和二鹽酸奎寧。在本發(fā)明的范圍中，藥物學(xué)上可接受的賦形劑(或者溶媒)可以是水、水可混溶性有機(jī)溶劑、或者包含水和水可混溶性有機(jī)溶劑的溶媒系統(tǒng)。水可混溶性有機(jī)溶劑包括以下之一種或多種：乙醇、丙二醇、聚乙二醇(PEG)、異丙醇。其中PEG可任選使用分子量小于600的PEG，例如PEG200、PEG300和PEG400等。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，除奎寧類(lèi)化合物和藥物學(xué)上可接受的賦形劑外，所述組合物還可以進(jìn)一步包含止痛劑、其他抗腫瘤藥物和/或增效劑。所述止痛劑可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任意合適者，以減輕患者的疼痛感，例如苯甲醇、鹽酸普魯卡因、三氯叔丁醇、鹽酸利多卡等。所述其他抗腫瘤藥物可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任意合適者，以進(jìn)一步增強(qiáng)抗腫瘤活性，例如包括阿霉素、5-氟嘧啶、吉西他濱、順鉑、氯喹、伯氨喹、青蒿素及其衍生物等。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，除奎寧類(lèi)化合物和藥物學(xué)上可接受的賦形劑外，所述組合物還可以進(jìn)一步包含增效劑。所述增效劑可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任意合 適者，以進(jìn)一步增強(qiáng)治療腫瘤效果，例如包括硬化劑和增活劑。所述硬化劑可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任意合適者，加入它以促進(jìn)腫瘤的壞死、縮小和纖維化，其例如可以是聚桂醇、魚(yú)肝油酸鈉、乙醇胺油酸酯、聚多卡醇和平陽(yáng)霉素等。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“增活劑”是指活性相比較小甚至基本上沒(méi)有(例如在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的抑瘤率小于40％)但可以用以增加其它藥物抗瘤活性的物質(zhì)，包括免疫佐劑。所述免疫佐劑可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任意合適者，加入它以促進(jìn)患病區(qū)內(nèi)相關(guān)的有益于治療腫瘤的抗原的活動(dòng)，其例如可以是無(wú)機(jī)佐劑，如氫氧化鋁、明礬等；微生物及其產(chǎn)物如分枝桿菌(結(jié)核桿菌、卡介苗)、短小桿菌、百日咳桿菌、內(nèi)毒素、細(xì)菌提取物(胞壁酰二肽)等；合成佐劑，如人工合成的雙鏈多聚核苷酸(雙鏈多聚腺苷酸、尿苷酸)、左旋咪唑、異丙肌苷等；油劑，如費(fèi)氏佐劑、花生油乳化佐劑、礦物油、植物油等；免疫刺激劑(卡介苗、棒狀桿菌、內(nèi)毒素、海藻糖、胸腺肽、OK432等)；細(xì)胞因子，如干擾素、白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、集落刺激因子、趨化因子、胸腺素等；異種抗原，如滅活鏈球菌、人紅細(xì)胞膜抗原、腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞、腫瘤疫苗等。術(shù)語(yǔ)“瘤區(qū)給藥”是指將藥物直接給藥至包括瘤體及瘤周的瘤區(qū)。瘤區(qū)給藥操作可以通過(guò)諸多方法實(shí)現(xiàn)，例如注射、導(dǎo)管引入、動(dòng)脈灌注等。在瘤區(qū)給藥時(shí)，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物為適合于瘤區(qū)給藥的劑型，例如可以是注射劑等，且奎寧類(lèi)化合物在該瘤區(qū)給藥的藥物組合物中的濃度為0.05-0.5M(Mol/L)，優(yōu)選為0.15-0.4M，更優(yōu)選為0.2-0.3M。另外，在瘤區(qū)給藥時(shí)，所述藥物組合物的給藥體積不小于欲處理之瘤塊體積的70％、優(yōu)選為不小于110％，以使包含奎寧類(lèi)化合物的藥物組合物能夠浸潤(rùn)瘤體及其周?chē)鷧^(qū)域，實(shí)現(xiàn)更高的抗腫瘤作用。如果待處理腫瘤的體積足夠小，則其體積即為上述之欲處理之體積。在腫瘤體積較大時(shí)，則需分作多個(gè)部份分批用藥，則該部份體積即為上述之欲處理之體積。用于本發(fā)明之應(yīng)用和方法中的經(jīng)瘤區(qū)給藥的藥物組合物，以注射劑為例，可按照以下方法來(lái)制備。方法一：對(duì)于所需濃度在水溶濃度范圍內(nèi)的固相奎寧類(lèi)化合物，例如濃度小于0.35M的二鹽酸奎寧，以及任選存在的水溶性強(qiáng)的止痛劑、其他抗腫瘤藥物和/或抗瘤增效劑，將他們直接加入注射用水即可獲得相應(yīng)的注射劑。方法二：對(duì)于所需濃度在水溶濃度范圍之外的固相奎寧類(lèi)化合物，例如濃度大于0.15M的一鹽酸奎寧，以及任選存在的水溶性差的止痛劑、其他抗腫瘤藥物和/或抗瘤增效劑，則先配制所需的溶媒系統(tǒng)(例如9％的乙醇溶液)，再將上述固體物質(zhì)加入該溶媒系統(tǒng)中，即可獲包含所需濃度的奎寧類(lèi)化合物的注射劑。方法三：當(dāng)需加入難溶于水的止痛劑、其他抗腫瘤藥物和/或抗瘤增效劑時(shí)， 則例如可按以下方法來(lái)制備：a.配制奎寧類(lèi)化合物水溶液，或配制所需溶媒系統(tǒng)與奎寧類(lèi)化合物的溶液；b.配制所需溶媒系統(tǒng)與難溶于水的止痛劑、其他抗腫瘤藥物和/或抗瘤增效劑的溶液；c.將a和b配制的溶液進(jìn)行混合。按上述這些方法，可制備各種包含奎寧類(lèi)化合物的注射劑。例如，不同注射劑中的變化包括：含不同的奎寧類(lèi)化合物，含不同濃度的奎寧類(lèi)化合物，含不同的水可混溶性有機(jī)溶劑，含不同濃度的水可混溶性有機(jī)溶劑，含不同種類(lèi)和濃度的止痛劑、其他抗腫瘤藥物和/或增效劑，等等。但無(wú)論如何變化，奎寧類(lèi)化合物在瘤區(qū)給藥的藥物組合物中的總濃度應(yīng)保持為0.05-0.5M(Mol/L)，優(yōu)選為0.15-0.4M，更優(yōu)選為0.2-0.3M。如果存在，止痛劑的濃度為0-3％(重量)；其他腫瘤藥物的濃度為0-0.15M；增效劑的濃度為0-3％(重量)。當(dāng)然，本發(fā)明中所需的包含奎寧類(lèi)化合物(例如二鹽酸奎寧)的注射濃度也可通過(guò)稀釋高濃度奎寧類(lèi)化合物注射液(例如含25W/V％二鹽酸奎寧的注射液)來(lái)獲得。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，包含奎寧類(lèi)化合物的藥物組合物在瘤區(qū)給藥之前也可以是固體粉末的形式，在給藥之前用相應(yīng)的溶媒復(fù)原即可。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，為增加奎寧類(lèi)化合物在給藥處的有效作用時(shí)間、提高其生物利用度，其例如可以摻入作為緩釋載體或基質(zhì)的微米粒子、納米粒子、膠束和原位凝膠基質(zhì)中。實(shí)施例通過(guò)以下具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制。在以下實(shí)施例中，除非另有說(shuō)明，皮下移植瘤動(dòng)物試驗(yàn)按如下方式進(jìn)行。動(dòng)物：SPF級(jí)裸鼠(BALB/C-Nude)，性別全部為雌性，分組時(shí)動(dòng)物約6～8周齡，體重為17.5-20.5g。動(dòng)物接種和分組：體外培養(yǎng)受試腫瘤細(xì)胞，收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞，將所需數(shù)目的腫瘤細(xì)胞接種于裸鼠的皮下。受試腫瘤細(xì)胞包括：人肝癌細(xì)胞(HepG2)、人乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB231)、人肺癌細(xì)胞(A549)、人甲狀腺癌細(xì)胞(SW579)、人前列腺癌細(xì)胞(LNCaP/AR)、人胰腺癌細(xì)胞(PANC-1)、人結(jié)腸癌細(xì)胞(COLO205)、人頭頸癌細(xì)胞(Fuda)、人鼻咽癌細(xì)胞(CNE1)、人胃癌(BGC823)、卵巢癌(PA1)等。本發(fā)明的實(shí)施例中的研究方法和結(jié)果也適用于奎寧類(lèi)化合物對(duì)其有抗瘤活性的其它腫瘤細(xì)胞。待腫瘤長(zhǎng)至50-100mm3時(shí)，采用 PEMS3.2軟件(四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院編制)對(duì)受試動(dòng)物進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組，分別為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和若干個(gè)藥物研究組，每組8只。給藥：分組當(dāng)日開(kāi)始給藥，注射量由劑量和濃度確定。給藥次數(shù)為6次，給藥頻率為每?jī)商煲淮?。陰性?duì)照組的注射物為相應(yīng)的溶媒。陽(yáng)性對(duì)照組注射的陽(yáng)性對(duì)照物選自上述現(xiàn)有抗瘤藥物，給藥方式和劑量均按所選藥物的慣例進(jìn)行(例如尾靜脈注射)。藥物研究組根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要注射不同種類(lèi)和濃度的研究藥物，除另有說(shuō)明均為瘤區(qū)注射。觀察、測(cè)量和分析：1)一般狀態(tài)：每天觀察1次，自給藥開(kāi)始至試驗(yàn)第28天，觀察指標(biāo)或內(nèi)容包括但不限于動(dòng)物給藥局部、外觀體征、一般行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、死亡等情況及其它異常表現(xiàn)。2)體重：檢疫期測(cè)定1次，給藥前測(cè)定1次和給藥期每周測(cè)定2次。3)攝食量：給藥期每周測(cè)定1次。4)相對(duì)腫瘤生長(zhǎng)抑制率：于給藥后第1、3、5、7、11、16、21、27天測(cè)量移植瘤大小。腫瘤體積計(jì)算公式如下：TV＝l/2×a×b2，式中a表示腫瘤長(zhǎng)度，b表示腫瘤寬度。相對(duì)腫瘤體積計(jì)算公式如下：RTV＝Vt/V0，式中V0為分組給藥當(dāng)天(即第一天)測(cè)量所得的腫瘤體積，Vt為每一次測(cè)量時(shí)的腫瘤體積。相對(duì)腫瘤增殖率計(jì)算公式如下：T/C(％)＝TRTV/CRTV×100，式中TRTV為陽(yáng)性對(duì)照組或藥物研究組的RTV，CRTV為陰性對(duì)照組的RTV。藥物研究組的藥效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為：T/C(％)>40為無(wú)活性，T/C(％)≤40(但是>15％)并經(jīng)方差分析與陰性對(duì)照組相比P<0.05為有活性(無(wú)優(yōu)選藥物學(xué)活性)，T/C(％)≤15并經(jīng)方差分析與陰性對(duì)照組相比P<0.05為有優(yōu)選藥物學(xué)活性。5)腫瘤生長(zhǎng)抑制率(抑瘤率)測(cè)定：于第一次給藥后第28天進(jìn)行系統(tǒng)尸解，進(jìn)行瘤體稱(chēng)重。抑瘤率計(jì)算公式如下：抑瘤率％＝(TW-CW)/CW×100％，其中TW為陽(yáng)性對(duì)照組或藥物研究組的平均瘤重；CW為陰性對(duì)照組的平均瘤重。藥物研究組的藥效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為：抑瘤率<40％為無(wú)活性，抑瘤率≥40％(但是<85％)并經(jīng)方差分析與陰性對(duì)照組相比P<0.05為有活性，抑瘤率≥85％并經(jīng)方差分析與陰性對(duì)照組相比P<0.05為有優(yōu)選藥物學(xué)活性。在以下實(shí)施例中，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均采用重復(fù)測(cè)量方差分析(RepeatedMeasuresANOVA)分別對(duì)指標(biāo)均數(shù)的組別差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。組別差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)(P≤0.05)，采用最小顯著差異法對(duì)各組與陰性對(duì)照組間差異進(jìn)行比較。定量指標(biāo)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(X±SEM)描述。當(dāng)LEVENE方差齊性檢驗(yàn)提示方差不 齊時(shí)(P≤0.05)，采用Mann-WhitneyU秩和檢驗(yàn)(M-W法)比較組間差異。所有的統(tǒng)計(jì)分析，均在SPSSforWindows13.0軟件下完成。實(shí)施例1：奎寧類(lèi)化合物注射劑的制備表1備注:+指的是除表中的組成外其余全是注射用水-指的是不含。表1中，A2的制備方法如下：在室溫下，將0.2ml苯甲醇加入8.5ml注射用水中溶解，然后將758mg二鹽酸奎寧干粉加入該溶液中溶解，再加入注射用水使總體積達(dá)到10ml，混合均勻后分裝為2ml/瓶備用，便制得注射劑A2。A3的制備方法如下：在室溫下，將0.2ml苯甲醇加入8.0ml注射用水中溶解，然后將758mg二鹽酸奎寧干粉加入該溶液中溶解，再加入1000mg聚多卡醇 溶解，最后加入注射用水使總體積達(dá)到10ml，混合均勻后分裝為2ml/瓶備用，便制得注射劑A3。A4的制備方法如下：在室溫下，將0.2ml苯甲醇加入8.0ml注射用水中溶解，然后將379mg二鹽酸奎寧干粉加入該溶液中溶解，再加入516mg磷酸氯喹溶解，最后加入注射用水使總體積達(dá)到10ml，混合均勻后分裝為2ml/瓶備用，便制得注射劑A4。B2的制備方法如下：在室溫下，將0.9ml無(wú)水乙醇加入7.5ml注射用水中混勻，再將0.2ml苯甲醇加入其中溶解，然后將595mg一鹽酸奎寧干粉加入該溶液中溶解，再加入注射用水使總體積達(dá)到10ml，混合均勻后分裝為2ml/瓶備用，便制得注射劑B2。B3的制備方法如下：在室溫下，將0.9ml無(wú)水乙醇加入7.5ml注射用水中混勻，再將0.2ml苯甲醇加入其中溶解，然后將595mg一鹽酸奎寧干粉加入該溶液中溶解，再加入1g聚多卡醇溶解，最后加入注射用水使總體積達(dá)到10ml，混合均勻后分裝為2ml/瓶備用，便制得注射劑B3。未提及的A1、A5、A6和B1、B4和C1都是按照與上述類(lèi)似的方法制備而得的。本發(fā)明中的所需的奎寧類(lèi)化合物(例如二鹽酸奎寧)的注射濃度，也可通過(guò)稀釋高濃度奎寧類(lèi)化合物(例如W/V百分比25％的二鹽酸奎寧)注射液來(lái)獲得。實(shí)施例2：應(yīng)用的優(yōu)選條件研究在抗瘤實(shí)驗(yàn)中，陽(yáng)性對(duì)照物通常為現(xiàn)有臨床藥物(例如順鉑、阿霉素、絲裂霉素、吉西他濱、5-氟嘧啶等)。它們的臨床意義在于低毒性高活性，例如在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示出低毒性和可達(dá)75％的抑瘤率。術(shù)語(yǔ)“抗瘤活性”，有時(shí)又簡(jiǎn)稱(chēng)活性，是指與現(xiàn)有臨床藥物相比具有一定抗瘤類(lèi)似性的性質(zhì)。一種物質(zhì)如在體外實(shí)驗(yàn)中具有較低的半抑制濃度(簡(jiǎn)記為IC50，通常在72小時(shí)抑制反應(yīng)中小于50μM)、或在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示出較高的腫瘤生長(zhǎng)抑制率(簡(jiǎn)稱(chēng)抑瘤率，通常大于40％但小于75％)，便被認(rèn)為與現(xiàn)有臨床藥物有了類(lèi)似性，從而顯示出了抗瘤活性，該物質(zhì)也就被稱(chēng)作活性物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“活性條件”是指研究者提供的使某物質(zhì)顯示出其抗瘤活性的條件。例如，使奎寧類(lèi)化合物的抑瘤率從35％左右提高到75％左右的條件(用藥方式、劑量等)。術(shù)語(yǔ)“優(yōu)選抗瘤活性”，有時(shí)又簡(jiǎn)稱(chēng)優(yōu)選活性，是指與現(xiàn)有臨床藥物相比具有更低毒性而明顯更高抗瘤活性的性質(zhì)。例如，優(yōu)選活性可以是指動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中以較小的副反應(yīng)代價(jià)(無(wú)毒性?xún)H輕微副作用)顯示出明顯較大的抑瘤率(例如85％以上)。術(shù)語(yǔ)“優(yōu)選條件”是指研究者提供的可以使某物質(zhì)顯示出其優(yōu)選抗瘤活 性的條件。術(shù)語(yǔ)“優(yōu)選物質(zhì)”是指不僅給出了抗瘤活性條件而且給出了優(yōu)選條件的物質(zhì)。本發(fā)明的奎寧類(lèi)化合物在腫瘤治療中的應(yīng)用的優(yōu)選條件，首先在體外抗瘤活性試驗(yàn)和移植瘤動(dòng)物模型上進(jìn)行了研究。1).抗瘤活性本發(fā)明中，半數(shù)有效濃度(簡(jiǎn)記為IC50)即體外實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞存活率減少50％時(shí)的藥物濃度。本實(shí)驗(yàn)選用11株人癌細(xì)胞株，使用四氮唑鹽MTT還原法測(cè)定藥物的抗腫瘤作用。試驗(yàn)設(shè)陽(yáng)性及陰性對(duì)照組和研究組。陰性對(duì)照組加等體積的生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組為不同濃度(在μMol/l水平上)的常規(guī)化療藥物5-氟嘧啶。研究組(B、C、D)組分別為以較高濃度母液稀釋而成的不同濃度的奎寧類(lèi)化合物溶液(在μMol/l水平上)。這些母液分別為實(shí)施例1制備的含0.25M一鹽酸奎寧、0.25M二鹽酸奎寧、和0.15M奎寧的注射劑，其中均含有2％的止痛劑苯甲醇。實(shí)驗(yàn)中，選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的貼壁腫瘤細(xì)胞，用胰酶消化后，用含10％小牛血清的RPMIl640培養(yǎng)基配成所需細(xì)胞濃度的懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔接種200μl，然后在37℃和5％CO2中培養(yǎng)24h。研究組和陽(yáng)性對(duì)照組換新的含不同濃度被測(cè)樣品的培養(yǎng)基，陰性對(duì)照組則換含等體積生理鹽水的培養(yǎng)基，每組設(shè)5個(gè)平行孔，使終體積為200ul/孔，培養(yǎng)48小時(shí)。然后棄去上清液，每孔加入200μl新鮮配制的含0.2mg/mlMTT的無(wú)血清培養(yǎng)基，在37℃下繼續(xù)培養(yǎng)4h。小心棄上清，并加入200μlDMSO，用微型超聲振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀上以試驗(yàn)波長(zhǎng)為570nm，參比波長(zhǎng)為450nm測(cè)定光密度值。按下式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率：腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率％＝(1-OD實(shí)驗(yàn)/OD對(duì)照)×100％以同一樣品不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制率作圖可得到劑量-效應(yīng)曲線(xiàn)，然后采用Logit法計(jì)算半數(shù)有效濃度(IC50值)。通常IC50的濃度小于100μM時(shí)，則判斷樣品在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用。表2為受試組合物對(duì)試驗(yàn)?zāi)[瘤細(xì)胞的IC50,濃度值以組合物中的奎寧類(lèi)化合物濃度計(jì)?？偟膩?lái)說(shuō),它們都在μM的濃度水平,統(tǒng)計(jì)學(xué)上看不出明顯差別。而陽(yáng)性對(duì)照物的IC50則在0.01-0.5μM之間。表2受試腫瘤細(xì)胞B組IC50(μM)C組IC50(μM)D組IC50(μM)人乳腺癌MDA-MB23162.256.573.5人肺腺癌A54948.951.462.8卵巢癌PA118.713.429.2胃癌BGC82372.866.849.5大腸癌LOVO-103-人肝癌HepG231.932.642.1人結(jié)腸癌LS174T78.462.972.9人前列腺癌LNCaP/AR32.928.936.4人頭頸癌Fuda62.151.645.8人甲狀腺癌細(xì)胞SW57935.646.872.3人胰腺癌細(xì)胞PANC-145.731.742.9進(jìn)一步的試驗(yàn)還證實(shí)，本發(fā)明組合物中引入的濃度范圍內(nèi)的有機(jī)溶劑和止痛劑對(duì)二鹽酸奎寧的抗瘤活性并無(wú)負(fù)面作用。2)用藥方式試驗(yàn)動(dòng)物為荷肝癌細(xì)胞裸鼠，分為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和藥物研究組。陰性對(duì)照組注射生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組注射常規(guī)抗瘤藥物5-氟嘧啶，藥物研究組注射二鹽酸奎寧溶液。當(dāng)尾靜脈注射小、中、大劑量的濃度為0.025M的二鹽酸奎寧水溶液時(shí)，雖然我們也作了一些技術(shù)上的改進(jìn)，所獲結(jié)果仍和現(xiàn)有技術(shù)的結(jié)果一致，抑瘤率小于30％。而作為陽(yáng)性對(duì)照的5-氟嘧啶的抑瘤率卻達(dá)到75％。當(dāng)我們把一種配制來(lái)稀釋備用的0.25M二鹽酸奎寧(含2％止痛劑)直接注射到動(dòng)物瘤體上時(shí)，卻出現(xiàn)了出人意料的結(jié)果。盡管大家都知道靶區(qū)給藥可能改善全身用藥的效率(例如使抑瘤率有所提高，通常提高10-30％)，而我們的研究成果卻把藥效提高到了不可思議的高度(可以提高90％以上)。相反，該組合物通過(guò)尾靜脈注射時(shí)，抑瘤率還是低于30％。瘤區(qū)給藥不僅取決于藥效，也取決于其安全性。為此，我們比較了0.25M二鹽酸奎寧注射劑的動(dòng)物尾靜脈注射和瘤體注射的最大耐受劑量(Maximumtolerateddose,MTO)，方法如下：試驗(yàn)動(dòng)物為荷肝癌細(xì)胞裸鼠，隨機(jī)分組為尾靜脈注射不同劑量組(四個(gè)組)和瘤體注射不同劑量組(四組)，每個(gè)劑量組5只裸鼠，注射劑量均分別為250mg/kg、300mg/kg、350mg/kg和400mg/kg。隔天給藥、連續(xù)五次。試驗(yàn)中觀察祼鼠體重變化和生存情況，同時(shí)記錄具有明顯生理意義的毒性，如糠粃性皮屑、脫水、嗜睡、共濟(jì)失調(diào)和呼吸急促等。若出現(xiàn)小鼠體重下降>30％持續(xù)3天以上或因毒性死亡則停止試驗(yàn)藥物劑量增加，確定前一組劑量為最大耐受劑量，21天為試驗(yàn)觀察周期，第22天處死動(dòng)物，尸體解剖，肉眼觀察有無(wú)病變。尾靜脈注射中的MTO小于250mg/kg，而瘤體注射中的MTO可高達(dá)300mg/kg。使用同樣的劑量，瘤區(qū)注射看上去比靜脈注射的毒性還略小。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，在一些其它腫瘤的動(dòng)物試驗(yàn)中也有類(lèi)似的表現(xiàn)。實(shí)施例1制備的一些其它奎寧類(lèi)物質(zhì)注射劑也有類(lèi)似的表現(xiàn)。因此，本發(fā)明的應(yīng)用選擇靶區(qū)給藥為主要應(yīng)用方式。3).給藥濃度范圍試驗(yàn)動(dòng)物為荷肝癌細(xì)胞裸鼠，分為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和藥物研究組。陽(yáng)性對(duì)照組注射常規(guī)抗瘤藥物5-氟嘧啶，藥物研究組注射二鹽酸奎寧水溶液。陽(yáng)性對(duì)照組用藥方式仍為尾靜脈注射，陰性對(duì)照組和藥物研究組為瘤體注射。陽(yáng)性對(duì)照組用藥方式仍為尾靜脈注射，陰性對(duì)照組和藥物研究組為瘤體注射。各藥物研究組(B、C、D、E、F、G組)的注射劑的制備方法與表1中A2的制備方法相同，內(nèi)含2％苯甲醇、但含有所需的不同濃度的二鹽酸奎寧。二鹽酸奎寧用藥濃度設(shè)計(jì)不按常規(guī)梯度設(shè)計(jì)，而采用對(duì)數(shù)梯度設(shè)計(jì)，即參考其IC50設(shè)置無(wú)活性濃度(5μM)的陰性對(duì)照組(A組)，以其102、103、5×103、104、8×104、105倍設(shè)置試驗(yàn)濃度，二鹽酸奎寧的注射濃度分別為0.0005M、0.005M、0.025M、0.05M、0.4M、0.5M。藥物研究組瘤區(qū)注射劑量小于300mg二鹽酸奎寧/kg，注射體積由注射劑量和濃度確定，給藥次數(shù)為5次,給藥頻率為每?jī)商煲淮?。圖1顯示了二鹽酸奎寧注射劑的注射濃度-抑瘤率關(guān)系曲線(xiàn)。在圖1中，橫坐標(biāo)X為瘤區(qū)注射濃度(4×10XμM)的指數(shù)(X)，縱坐標(biāo)Y為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中測(cè)出的抑瘤率(Y％)。在很大的濃度范圍內(nèi)(X之差大于3)，即在常識(shí)可預(yù)見(jiàn)的大于IC50幾十倍、甚至上千倍的用藥濃度范圍內(nèi)，觀察不到與此濃度變化相應(yīng)的藥效變化，抑瘤率一直小于25％。與陰性對(duì)照組相比，抑瘤率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而在50mM(X＝4)處,抑瘤率突變上升到55％，然后在一個(gè)相對(duì)較窄的用藥濃度范圍內(nèi)(X之差等于1)迅速達(dá)到92％，出現(xiàn)了突破。在0.5M處，抑瘤率又出現(xiàn)下降。在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，陰性對(duì)照組腫瘤體積呈增長(zhǎng)趨勢(shì)。在0.05M-0.5M二鹽酸奎寧的注射濃度范圍內(nèi)的藥物研究組與陰性對(duì)照組相比，抑瘤率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。陽(yáng)性對(duì)照物的抑瘤率為75％，與陰性對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?？偠灾?，唯有其瘤體注射濃度超過(guò)某一臨界值時(shí)，二鹽酸奎寧注射劑才顯示出藥效對(duì)濃度的高度敏感，然后又重新變得不那么敏感，甚至于抑瘤率可能出現(xiàn)下降。我們還觀測(cè)了受試動(dòng)物瘤區(qū)注射后的一般狀況、體重變化、死亡率及局部變性。在實(shí)驗(yàn)期間，二鹽酸奎寧注射劑的各研究組未見(jiàn)裸鼠死亡，平均體重與陰性對(duì)照組體重變化接近(下降小于10％)，表示藥物在實(shí)驗(yàn)條件下無(wú)明顯的毒性反應(yīng)。研究組與陽(yáng)性對(duì)照組相比較，一般狀況類(lèi)似。但陽(yáng)性對(duì)照組平均體重下降更大(大于20％)，提示一個(gè)較強(qiáng)的毒性反應(yīng)。在瘤區(qū)用藥期間，與陰性對(duì)照組相比較，研究組中、尤其是高濃度(>0.4M)組中大部分注射部位均有明顯的色澤變化，甚至伴有肌肉變性，范圍多在10mm以?xún)?nèi)。這提示該應(yīng)用條件確實(shí)引起了肌細(xì)胞的部分損傷，注射部位有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，但不影響正常功能。在給藥停止后，研究組裸鼠注射部位的肌肉組織外觀逐步實(shí)現(xiàn)正?；?。對(duì)給藥停止后30天剖殺的裸鼠的注射部位進(jìn)行了病理切片檢查，結(jié)果顯示研究組與陰性對(duì)照組的差別明顯縮小，趨于正常。此外，我們還利用相同的方法研究了二鹽酸奎寧注射劑對(duì)于接種時(shí)間不同、因而癌細(xì)胞的發(fā)育有所區(qū)別的瘤體的作用。藥物研究組為B組和C組。B組比C組晚10天接種人肝癌細(xì)胞的動(dòng)物。在最后一組接種后10天,各組分別選擇瘤體平均體積分別約為28mm3(B組)和126mm3(C組)的8只荷瘤裸鼠注射。瘤體注射0.25M二鹽酸奎寧，注射劑量均為300mg/kg，注射體積由注射劑量和濃度確定。隔天給藥、連續(xù)6次。從試驗(yàn)第5天起，各藥物研究組荷瘤小鼠腫瘤相對(duì)腫瘤體積明顯降低；17天時(shí)腫瘤相對(duì)體積達(dá)到最低值；32天起，C組相對(duì)腫瘤體積出現(xiàn)上升，有復(fù)發(fā)的趨勢(shì)；B組則效果一直非常明顯，暫無(wú)復(fù)發(fā)的趨勢(shì)。38天時(shí)，C組比B組的瘤重明顯較大，B組的平均瘤重接近于0。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，在本發(fā)明提供的抗瘤應(yīng)用中的優(yōu)選條件下，二鹽酸奎寧注射劑可應(yīng)用于惡性腫瘤治療，甚至于可用于完全去除有一定致癌風(fēng)險(xiǎn)的腫瘤，以防止其發(fā)展為惡性腫瘤。在一些文獻(xiàn)中，二鹽酸奎寧也被視作硬化劑。我們選擇了通常認(rèn)為更有效的一種硬化劑(聚多卡醇)進(jìn)行了對(duì)照研究。在相同的條件下，聚多卡醇的濃度為自1.5w/v％直到6w/v％(該濃度引起瘤區(qū)明顯水泡及出現(xiàn)中毒癥狀)，其抑瘤率一直在30％左右，未發(fā)現(xiàn)有類(lèi)似的濃度-抑瘤率關(guān)系趨勢(shì)。這個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)的結(jié)果說(shuō)明，本發(fā)明的組合物明顯地區(qū)別于基于硬化劑機(jī)理的應(yīng)用。用其它奎寧類(lèi)化合物(例如奎寧、一鹽酸奎寧)注射劑也獲得類(lèi)似結(jié)果。根據(jù)這些藥效學(xué)結(jié)果及局部副反應(yīng)結(jié)果，本發(fā)明提供的奎寧類(lèi)化合物在腫瘤 治療應(yīng)用中的優(yōu)選條件如下：瘤區(qū)給藥，二鹽酸奎寧注射濃度為0.05-0.50M、優(yōu)選0.15-0.4M、更優(yōu)選0.2-0.3M。此外，另一組試驗(yàn)顯示，本發(fā)明的藥物組合物在同樣濃度下，一個(gè)較大的注射量顯示出更好的藥物學(xué)效果。如果瘤區(qū)體積太大，為控制給藥劑量,可以對(duì)瘤區(qū)進(jìn)行分部處理。注射劑的每次給藥體積必須為欲處理部份體積的70％以上、優(yōu)選110％以上。當(dāng)腫瘤個(gè)體足夠小時(shí)，欲處理部份體積即為單個(gè)瘤體體積。實(shí)施例3：在乳腺癌治療中的應(yīng)用試驗(yàn)動(dòng)物為荷乳腺癌細(xì)胞裸鼠，分為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和藥物研究組。陽(yáng)性對(duì)照組尾靜脈注射常規(guī)抗瘤藥物阿霉素(7mg/kg)，陰性對(duì)照組瘤體注射生理鹽水。對(duì)奎寧類(lèi)化合物的研究首先使用二鹽酸奎寧進(jìn)行。各藥物研究組(B、C、D、E、F組)的注射劑的制備方法與表1中A2的制備方法相同，內(nèi)含2％苯甲醇、但含有所需的不同濃度的二鹽酸奎寧，注射濃度分別為0.025M、0.05M、0.15M、0.25M、0.4M。藥物研究組瘤區(qū)注射劑量小于300mg二鹽酸奎寧/kg，注射體積由注射劑量和濃度確定，給藥次數(shù)為5次，給藥頻率為每?jī)商煲淮?。在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，陰性對(duì)照組腫瘤體積呈增長(zhǎng)趨勢(shì)；從試驗(yàn)第5天起，陽(yáng)性對(duì)照組和各藥物研究組荷瘤小鼠腫瘤體積與陰性對(duì)照組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從試驗(yàn)第7天起直到第17天，各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增殖率(T/C)均小于40％；試驗(yàn)第17天起，B組相對(duì)腫瘤增殖率上升，有復(fù)發(fā)的趨勢(shì)；C、D、E、F、G組的相對(duì)腫瘤增殖率(T/C)仍在減小，說(shuō)明這四組在停藥后仍有有明顯的腫瘤生長(zhǎng)抑制效果。試驗(yàn)第22天起，C、F組相對(duì)腫瘤增殖率上升，有復(fù)發(fā)趨勢(shì)；而D、E組相對(duì)腫瘤增殖率仍接近于0％，效果一直非常明顯，暫無(wú)復(fù)發(fā)趨勢(shì)。在試驗(yàn)期間，陽(yáng)性對(duì)照組相對(duì)腫瘤增殖率的下降比D、E組在時(shí)間上晚，在數(shù)據(jù)上明顯更大(40％左右)。給藥后第28天，各藥物研究組荷瘤小鼠的瘤重與陰性對(duì)照組相比顯著降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，其中以D、E組抑瘤率最高(均在95％以上)；F組抑瘤率90.11±2.76％，其它組抑瘤率低于85％。陽(yáng)性對(duì)照組抑瘤率為53％。此外，在本發(fā)明提供的抗瘤應(yīng)用中的優(yōu)選條件下，二鹽酸奎寧注射劑對(duì)于接種時(shí)間不同、因而癌細(xì)胞的發(fā)育有所區(qū)別的瘤體的作用，也是接種時(shí)間越短的腫瘤抑瘤效果越好，其除了可應(yīng)用于癌癥治療，甚至于可用于有較大致癌風(fēng)險(xiǎn)的非惡性瘤的完全去除，以預(yù)防其發(fā)展為惡性瘤。在實(shí)驗(yàn)期間，各研究組未見(jiàn)裸鼠死亡，平均體重與陰性對(duì)照組體重變化接近(下降小于10％)，表示藥物在實(shí)驗(yàn)條件下無(wú)明顯的毒性反應(yīng)。研究組與陽(yáng)性對(duì) 照組相比較，一般狀況類(lèi)似。但陽(yáng)性對(duì)照組平均體重下降更大(大于20％)，提示一個(gè)較強(qiáng)的毒性反應(yīng)。在靶區(qū)用藥期間，與陰性對(duì)照組相比較，研究組中、尤其是F組中大部分注射部位均有明顯的色澤變化、甚至伴有肌肉變性，范圍多在10mm以?xún)?nèi)。進(jìn)一步的研究說(shuō)明，這些變性是二鹽酸奎寧作用造成的。在給藥停止后，實(shí)驗(yàn)組裸鼠注射部位的肌肉組織外觀逐步實(shí)現(xiàn)正?；?。對(duì)給藥停止后30天剖殺的裸鼠的注射部位進(jìn)行了病理切片檢查，結(jié)果顯示試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組的差別明顯縮小，趨于正常。用其它奎寧類(lèi)化合物(例如奎寧、一鹽酸奎寧)注射劑也可以獲得類(lèi)似結(jié)果。根據(jù)這些藥效學(xué)結(jié)果及局部副反應(yīng)結(jié)果，本發(fā)明提供的奎寧類(lèi)化合物在乳腺癌治療應(yīng)用中的優(yōu)選條件如下：瘤區(qū)給藥，奎寧類(lèi)化合物注射濃度為0.05-0.50M、優(yōu)選0.15-0.4M或0.2-0.3M。此外，另一組試驗(yàn)顯示，在同樣濃度下，一個(gè)較大的注射量顯示出更好藥效。如果瘤體積太大，為控制給藥劑量，可以進(jìn)行分部處理。注射劑的每次給藥體積必須為欲處理之瘤體積(在較小瘤體時(shí)為瘤體體積)的70％以上、優(yōu)選110％以上。實(shí)施例4：在肝癌防治中的應(yīng)用試驗(yàn)動(dòng)物為荷肝癌細(xì)胞裸鼠，陽(yáng)性對(duì)照組尾靜脈注射常規(guī)抗瘤藥物5-氟嘧啶。對(duì)奎寧類(lèi)化合物的研究首先使用二鹽酸奎寧進(jìn)行。各藥物研究組(B、C、D、E、F組)和其它的實(shí)驗(yàn)條件與實(shí)施例3中所述的方法相同。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。從試驗(yàn)第5天起，各藥物研究組荷瘤小鼠腫瘤體積與陰性對(duì)照組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從試驗(yàn)第7天起直到第17天，各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增殖率(T/C)均小于40％。試驗(yàn)第17天起，較高濃度(0.2M及以上)組的相對(duì)腫瘤增殖率(T/C)均小于15％，說(shuō)明它們?cè)谕Ｋ幒笕杂忻黠@的腫瘤生長(zhǎng)抑制效果。給藥后第28天，各藥物研究組荷瘤小鼠的瘤重與陰性對(duì)照組相比顯著降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。各藥物研究組荷瘤小鼠的抑瘤率均大于>40％，其中D、E組的抑瘤率可高達(dá)95％以上,其它組抑瘤率低于85％。在試驗(yàn)期間，陽(yáng)性對(duì)照組相對(duì)腫瘤增殖率的下降比D、E、E、F組在時(shí)間上晚、在數(shù)據(jù)上明顯更大(35％左右)，其抑瘤率則明顯較小(72％)。此外，與實(shí)施例2中相似的模型還說(shuō)明，在本發(fā)明提供的抗瘤應(yīng)用中的優(yōu)選條件下，二鹽酸奎寧注射劑對(duì)于接種時(shí)間不同、因而癌細(xì)胞的發(fā)育有所區(qū)別的瘤體的作用，也是接種時(shí)間越短的腫瘤抑瘤效果越好，其除了可應(yīng)用于腫瘤治療， 甚至于可用于有較大致癌風(fēng)險(xiǎn)的非惡性瘤的完全去除，以預(yù)防其發(fā)展為惡性瘤。在以上實(shí)驗(yàn)期間，各研究組未見(jiàn)動(dòng)物死亡，平均體重與陰性對(duì)照組體重變化接近(下降小于10％)，表示藥物在實(shí)驗(yàn)條件下無(wú)明顯的毒性反應(yīng)。研究組與陽(yáng)性對(duì)照組相比較，一般狀況類(lèi)似。但移植瘤試驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照組平均體重下降更大(大于20％)，提示一個(gè)較強(qiáng)的毒性反應(yīng)。在靶區(qū)用藥期間，與陰性對(duì)照組相比較，研究組中、尤其是F組中大部分注射部位均有明顯的色澤變化、甚至伴有肌肉變性，范圍多在10mm以?xún)?nèi)。進(jìn)一步的研究說(shuō)明，這些變性是二鹽酸奎寧作用造成的。在給藥停止后，實(shí)驗(yàn)組裸鼠注射部位的肌肉組織外觀逐步實(shí)現(xiàn)正常化。對(duì)給藥停止后30天剖殺的裸鼠的注射部位進(jìn)行了病理切片檢查，結(jié)果顯示試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組的差別明顯縮小，趨于正常。用其它奎寧類(lèi)化合物(例如奎寧、一鹽酸奎寧)注射劑也獲得類(lèi)似結(jié)果。根據(jù)這些藥效學(xué)結(jié)果及局部副反應(yīng)結(jié)果，本發(fā)明提供的奎寧類(lèi)化合物在肝癌治療應(yīng)用中的優(yōu)選條件如下：瘤區(qū)給藥，奎寧類(lèi)化合物注射濃度為0.05-0.50M、優(yōu)選0.15-0.4M或0.2-0.3M。此外，另一組試驗(yàn)顯示，在同樣濃度下，一個(gè)較大的注射量顯示出更好藥效。如果瘤體積太大，為控制給藥劑量，可以進(jìn)行分部處理。注射劑的每次給藥體積必須為欲處理部份瘤體積(在較小瘤體時(shí)為瘤體體積)的70％以上、優(yōu)選110％以上。實(shí)施例5：在胰腺癌防治中的應(yīng)用試驗(yàn)動(dòng)物為荷胰腺癌細(xì)胞裸鼠。陽(yáng)性對(duì)照組尾靜脈注射常規(guī)抗瘤藥物吉西他濱(100mg/kg)。對(duì)奎寧類(lèi)化合物的研究首先使用二鹽酸奎寧進(jìn)行。各藥物研究組(B、C、D、E、F組)和其它的實(shí)驗(yàn)條件與實(shí)施例3中乳腺癌治療實(shí)驗(yàn)的方法相同。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。從試驗(yàn)第5天起，各藥物研究組荷瘤小鼠腫瘤體積與陰性對(duì)照組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從試驗(yàn)第7天起直到第17天，各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增殖率(T/C)均小于40％。試驗(yàn)第17天起，C、D、E組的相對(duì)腫瘤增殖率(T/C)均小于15％，說(shuō)明它們?cè)谕Ｋ幒笕杂忻黠@的腫瘤生長(zhǎng)抑制效果。給藥后第28天，各藥物研究組荷瘤小鼠的瘤重與陰性對(duì)照組相比顯著降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。各藥物研究組荷瘤小鼠的抑瘤率均大于>40％，其中D、E組的抑瘤率可高達(dá)90％以上。其它組抑瘤率低于85％。在試驗(yàn)期間，陽(yáng)性對(duì)照組相對(duì)腫瘤增殖率的下降比D、E、E、F組在時(shí)間上晚、在數(shù)據(jù)上明顯 更大(35％左右)，其抑瘤率則明顯較小(62％)。此外，與實(shí)施例2中相似的模型還說(shuō)明，在本發(fā)明提供的抗瘤應(yīng)用中的優(yōu)選條件下，二鹽酸奎寧注射劑對(duì)于接種時(shí)間不同、因而癌細(xì)胞的發(fā)育有所區(qū)別的瘤體的作用，也是接種時(shí)間越短的腫瘤抑瘤效果越好，其除了可應(yīng)用于癌癥治療,甚至于可用于有較大致癌風(fēng)險(xiǎn)的非惡性瘤的完全去除，以預(yù)防其發(fā)展為惡性瘤。在以上實(shí)驗(yàn)期間，各研究組未見(jiàn)動(dòng)物死亡，平均體重與陰性對(duì)照組體重變化接近(下降小于10％)，表示藥物在實(shí)驗(yàn)條件下無(wú)明顯的毒性反應(yīng)。研究組與陽(yáng)性對(duì)照組相比較，一般狀況類(lèi)似。但移植瘤試驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照組平均體重下降更大(大于20％)，提示一個(gè)較強(qiáng)的毒性反應(yīng)。在靶區(qū)用藥期間，與陰性對(duì)照組相比較，研究組中、尤其是F組中大部分注射部位均有明顯的色澤變化、甚至伴有肌肉變性，范圍多在10mm以?xún)?nèi)。進(jìn)一步的研究說(shuō)明，這些變性是二鹽酸奎寧作用造成的。在給藥停止后，實(shí)驗(yàn)組裸鼠注射部位的肌肉組織外觀逐步實(shí)現(xiàn)正?；?duì)給藥停止后30天剖殺的裸鼠的注射部位進(jìn)行了病理切片檢查，結(jié)果顯示試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組的差別明顯縮小，趨于正常。利用實(shí)施例1制備的一些其它奎寧類(lèi)化合物(例如奎寧、一鹽酸奎寧)注射劑，也可以獲得類(lèi)似結(jié)果。根據(jù)這些藥效學(xué)結(jié)果及局部副反應(yīng)結(jié)果，本發(fā)明提供的奎寧類(lèi)化合物在胰腺癌治療應(yīng)用中的優(yōu)選條件如下：瘤區(qū)給藥；奎寧類(lèi)化合物注射濃度為0.05-0.50M、優(yōu)選0.15-0.4M或0.2-0.3M。此外，另一組試驗(yàn)顯示，在同樣濃度下，一個(gè)較大的注射量顯示出更好藥效。如果瘤體積太大，為控制給藥劑量，可以進(jìn)行分部處理。注射劑的每次給藥體積必須為欲處理部份瘤體積(在較小瘤體時(shí)為瘤體體積)的70％以上、優(yōu)選110％以上。實(shí)施例6：在甲狀腺癌防治中的應(yīng)用試驗(yàn)動(dòng)物為荷甲狀腺癌細(xì)胞裸鼠，陽(yáng)性對(duì)照組尾靜脈注射常規(guī)抗瘤藥物阿霉素(4mg/kg)，陰性對(duì)照組瘤體注射生理鹽水。對(duì)奎寧類(lèi)化合物的研究首先使用一鹽酸奎寧進(jìn)行。各藥物研究組(B、C、D、E、F組)的注射劑的制備方法與表1中B2的制備方法相同，內(nèi)含2％苯甲醇，但含有所需的不同濃度的一鹽酸奎寧，注射濃度分別為0.025M、0.05M、0.15M、0.25M、0.4M。其它的實(shí)驗(yàn)條件與實(shí)施例3中乳腺癌治療實(shí)驗(yàn)相同。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，陰性對(duì)照組腫瘤體積呈增長(zhǎng)趨勢(shì)；從試驗(yàn)第5天起，陽(yáng)性對(duì)照組和各藥物研究組荷瘤小鼠腫瘤體積與陰性對(duì)照組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。給藥期內(nèi)，各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增殖率下降；試驗(yàn)第17天起，B組以外的各藥物研究組相對(duì)腫瘤增殖率均在很低的水平(<35％)。試驗(yàn)第22天起，C、D、E組相對(duì)腫瘤增殖率接近于20％，效果一直非常明顯，暫無(wú)復(fù)發(fā)趨勢(shì)。在試驗(yàn)期間，陽(yáng)性對(duì)照組相對(duì)腫瘤增殖率的下降比B組以外的各藥物研究組在時(shí)間上晚，在數(shù)據(jù)上明顯更大(40％左右)。給藥后第28天，B組以外的各藥物研究組荷瘤小鼠的瘤重與陰性對(duì)照組相比顯著降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，其中以D組抑瘤率最高(85％以上)，E組抑瘤率低于80％。陽(yáng)性對(duì)照組抑瘤率為61％。此外,該注射劑對(duì)于接種時(shí)間不同、因而癌細(xì)胞的發(fā)育有所區(qū)別的瘤體的作用，也是接種時(shí)間越短的腫瘤抑瘤效果越好，其除了可應(yīng)用于癌癥治療，甚至于可用于有較大致癌風(fēng)險(xiǎn)的非惡性腫瘤的完全去除，以預(yù)防其發(fā)展為惡性瘤。利用實(shí)施例1制備的一些其它奎寧類(lèi)化合物(例如奎寧、二鹽酸奎寧)注射劑,也可以獲得類(lèi)似結(jié)果。根據(jù)這些藥效學(xué)結(jié)果及局部副反應(yīng)結(jié)果，本發(fā)明提供的奎寧類(lèi)化合物在甲狀腺癌治療應(yīng)用中的優(yōu)選條件如下：瘤區(qū)給藥；奎寧類(lèi)化合物注射濃度為0.05-0.50M、優(yōu)選0.15-0.4M或0.2-0.3M。此外,另一組試驗(yàn)顯示,在同樣濃度下,一個(gè)較大的注射量顯示出更好藥效。如果瘤體積太大，為控制給藥劑量，可以進(jìn)行分部處理。注射劑的每次給藥體積必須為欲處理部份瘤體積(在較小瘤體時(shí)為瘤體體積)的70％以上、優(yōu)選110％以上。實(shí)施例7：在前列腺癌防治中的應(yīng)用試驗(yàn)動(dòng)物為荷前列腺癌細(xì)胞裸鼠,陽(yáng)性對(duì)照組尾靜脈注射常規(guī)抗瘤藥物阿霉素(4mg/kg)，陰性對(duì)照組瘤體注射生理鹽水。對(duì)奎寧類(lèi)化合物的研究首先使用一鹽酸奎寧進(jìn)行。各藥物研究組(B、C、D、E、F組)與實(shí)施例6中甲狀腺癌治療實(shí)驗(yàn)相同，其它的實(shí)驗(yàn)條件與實(shí)施例3中乳腺癌治療實(shí)驗(yàn)相同。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，陰性對(duì)照組腫瘤體積呈增長(zhǎng)趨勢(shì)；從試驗(yàn)第5天起，陽(yáng)性對(duì)照組和B組以外的各藥物研究組荷瘤小鼠腫瘤體積與陰性對(duì)照組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。給藥期內(nèi)，各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增殖率下降；試驗(yàn)第17天起，B組以外的各藥物研究組相對(duì)腫瘤增殖率均在很低的水平(<40％)。試驗(yàn)第22天起，C、D組相對(duì)腫瘤增殖率低于15％，效果一直非常明顯，暫無(wú)復(fù)發(fā)趨勢(shì)。在試驗(yàn)期間，陽(yáng)性對(duì)照組相對(duì)腫瘤增殖率的下降比B組以外的各藥物研究組在時(shí)間上晚，在數(shù)據(jù)上明顯更大(大于35％)。給藥后第28天，B組以外的各藥物研究組荷瘤小鼠的瘤重與陰性對(duì)照組相比顯著降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，其中以C、D組抑瘤率最高(90％以 上)，其它組抑瘤率低于80％。陽(yáng)性對(duì)照組抑瘤率為63％。此外，該注射劑對(duì)于接種時(shí)間不同、因而癌細(xì)胞的發(fā)育有所區(qū)別的瘤體的作用，也是接種時(shí)間越短的腫瘤抑瘤效果越好，除了可應(yīng)用于較晚期前列腺癌和早期前列腺癌，甚至于可用于有較大致癌風(fēng)險(xiǎn)的非惡性瘤的完全去除，以預(yù)防其發(fā)展為惡性瘤。利用實(shí)施例1制備的一些其它奎寧類(lèi)化合物(例如奎寧、二鹽酸奎寧)注射劑，也可以獲得類(lèi)似結(jié)果。根據(jù)這些藥效學(xué)結(jié)果及局部副反應(yīng)結(jié)果，本發(fā)明提供的奎寧類(lèi)化合物在前列腺癌治療應(yīng)用中的優(yōu)選條件如下：瘤區(qū)給藥；奎寧類(lèi)化合物注射濃度為0.05-0.50M、優(yōu)選0.15-0.4M或0.2-0.3M。此外，另一組試驗(yàn)顯示，在同樣濃度下，一個(gè)較大的注射量顯示出更好藥效。如果瘤體積太大，為控制給藥劑量，可以進(jìn)行分部處理。注射劑的每次給藥體積必須為欲處理部份瘤體積(在較小瘤體時(shí)為瘤體體積)的70％以上、優(yōu)選110％以上。實(shí)施例8：在鼻咽癌治療中的應(yīng)用試驗(yàn)動(dòng)物為荷鼻咽癌細(xì)胞裸鼠，陽(yáng)性對(duì)照組尾靜脈注射常規(guī)抗瘤藥物5-氟嘧啶。對(duì)奎寧類(lèi)化合物的研究首先使用二鹽酸奎寧進(jìn)行。各藥物研究組(B、C、D、E、F組)和其它的實(shí)驗(yàn)條件與實(shí)施例3中乳腺癌治療實(shí)驗(yàn)的方法相同。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。從試驗(yàn)第5天起，各藥物研究組荷瘤小鼠腫瘤體積與陰性對(duì)照組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從試驗(yàn)第7天起直到第17天，各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增殖率(T/C)均小于40％。試驗(yàn)第17天起，較高濃度(0.2M及以上)組的相對(duì)腫瘤增殖率(T/C)均小于15％，說(shuō)明它們?cè)谕Ｋ幒笕杂忻黠@的腫瘤生長(zhǎng)抑制效果。給藥后第28天，各藥物研究組荷瘤小鼠的瘤重與陰性對(duì)照組相比顯著降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤抑瘤率均大于>40％，其中較高濃度(0.2M及以上)組的抑瘤率可高達(dá)95％以上，其它組抑瘤率低于85％。在試驗(yàn)期間，陽(yáng)性對(duì)照組相對(duì)腫瘤增殖率的下降比D、E、E、F組在時(shí)間上晚，在數(shù)據(jù)上明顯更大(30％左右)；抑瘤率平均值為68％。利用實(shí)施例1制備的一些其它奎寧類(lèi)化合物(例如奎寧、一鹽酸奎寧)注射劑,也可以獲得類(lèi)似結(jié)果。根據(jù)這些藥效學(xué)結(jié)果及局部副反應(yīng)結(jié)果,本發(fā)明提供的奎寧類(lèi)化合物在鼻咽癌治療應(yīng)用中的優(yōu)選條件如下：瘤區(qū)給藥；奎寧類(lèi)化合物注射濃度為0.05-0.50M、優(yōu)選0.15-0.4M或0.2-0.3M。此外，另一組試驗(yàn)顯示，在同樣濃度下，一個(gè)較大的注射量顯示出更好藥 效。如果瘤體積太大，為控制給藥劑量,可以進(jìn)行分部處理。注射劑的每次給藥體積必須為欲處理部份瘤體積(在較小瘤體時(shí)為瘤體體積)的70％以上、優(yōu)選110％以上。實(shí)施例9：在肺癌治療中的應(yīng)用試驗(yàn)動(dòng)物為荷肺癌細(xì)胞裸鼠,陽(yáng)性對(duì)照組尾靜脈注射常規(guī)抗瘤藥物5-氟嘧啶。對(duì)奎寧類(lèi)化合物的研究首先使用二鹽酸奎寧進(jìn)行。各藥物研究組(B、C、D、E、F組)和其它的實(shí)驗(yàn)條件與實(shí)施例3中乳腺癌治療實(shí)驗(yàn)的方法相同。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。從試驗(yàn)第5天起，各藥物研究組荷瘤小鼠腫瘤體積與陰性對(duì)照組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從試驗(yàn)第7天起直到第17天，各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增殖率明顯減小。試驗(yàn)第17天起，較高濃度(0.2M及以上)組的相對(duì)腫瘤增殖率(T/C)均小于15％，說(shuō)明它們?cè)谕Ｋ幒笕杂忻黠@的腫瘤生長(zhǎng)抑制效果。給藥后第28天，各藥物研究組荷瘤小鼠的瘤重與陰性對(duì)照組相比顯著降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤抑瘤率均大于>40％，其中較高濃度(0.2M及以上)組的抑瘤率可高達(dá)95％以上，其它組抑瘤率低于85％。在試驗(yàn)期間，陽(yáng)性對(duì)照組相對(duì)腫瘤增殖率的下降比D、E、E、F組在時(shí)間上晚，在數(shù)據(jù)上明顯更大(30％左右)；陽(yáng)性對(duì)照組抑瘤率為54％。利用實(shí)施例1制備的一些其它奎寧類(lèi)化合物(例如奎寧、一鹽酸奎寧)注射劑，也可以獲得類(lèi)似結(jié)果。根據(jù)這些藥效學(xué)結(jié)果及局部副反應(yīng)結(jié)果，本發(fā)明提供的奎寧類(lèi)化合物在肺癌治療應(yīng)用中的優(yōu)選條件如下：瘤區(qū)給藥；奎寧類(lèi)化合物注射濃度為0.05-0.50M、優(yōu)選0.15-0.4M或0.2-0.3M。此外，另一組試驗(yàn)顯示，在同樣濃度下，一個(gè)較大的注射量顯示出更好藥效。如果瘤體積太大，為控制給藥劑量，可以進(jìn)行分部處理。注射劑的每次給藥體積必須為欲處理部份瘤體積(在較小瘤體時(shí)為瘤體體積)的70％以上、優(yōu)選110％以上。實(shí)施例10：在結(jié)腸癌治療中的應(yīng)用試驗(yàn)動(dòng)物為荷結(jié)腸癌細(xì)胞裸鼠。陽(yáng)性對(duì)照組尾靜脈注射常規(guī)抗瘤藥物順鉑。對(duì)奎寧類(lèi)化合物的研究首先使用二鹽酸奎寧進(jìn)行。各藥物研究組(B、C、D、E、F組)和其它的實(shí)驗(yàn)條件與實(shí)施例3中乳腺癌治療實(shí)驗(yàn)的方法相同。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。從試驗(yàn)第5天起，各藥物研究組荷瘤小鼠腫瘤體積與陰性對(duì)照組相比降低， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從試驗(yàn)第7天起直到第17天，各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增殖率明顯減小。試驗(yàn)第17天起，較高濃度(0.2M及以上)組的相對(duì)腫瘤增殖率(T/C)均小于15％，說(shuō)明它們?cè)谕Ｋ幒笕杂忻黠@的腫瘤生長(zhǎng)抑制效果。給藥后第28天，各藥物研究組荷瘤小鼠的瘤重與陰性對(duì)照組相比顯著降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。各藥物研究組荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤抑瘤率均大于>40％，其中較高濃度(0.2M及以上)組的抑瘤率可高達(dá)95％以上，其它組抑瘤率低于85％。在試驗(yàn)期間，陽(yáng)性對(duì)照組相對(duì)腫瘤增殖率的下降比D、E、E、F組在時(shí)間上晚，在數(shù)據(jù)上明顯更大(30％左右)；抑瘤率平均值為75％。利用實(shí)施例1制備的一些其它奎寧類(lèi)化合物(例如奎寧、一鹽酸奎寧)注射劑，也可以獲得類(lèi)似結(jié)果。根據(jù)這些藥效學(xué)結(jié)果及局部副反應(yīng)結(jié)果，本發(fā)明提供的奎寧類(lèi)化合物在結(jié)腸癌治療應(yīng)用中的優(yōu)選條件如下：瘤區(qū)給藥；奎寧類(lèi)化合物注射濃度為0.05-0.50M、優(yōu)選0.15-0.4M或0.2-0.3M。此外，另一組試驗(yàn)顯示，在同樣濃度下，一個(gè)較大的注射量顯示出更好藥效。如果瘤體積太大，為控制給藥劑量，可以進(jìn)行分部處理。注射劑的每次給藥體積必須為欲處理部份瘤體積(在較小瘤體時(shí)為瘤體體積)的70％以上、優(yōu)選110％以上。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3