本發(fā)明屬于一種醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及到一種注射用硫酸軟骨素的制備方法。
背景技術(shù)：
硫酸軟骨素（CS）是共價連接在蛋白質(zhì)上形成蛋白聚糖的一類糖胺聚糖。硫酸軟骨素廣泛分布于動物組織的細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞表面，糖鏈由交替的葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺（又稱N-乙酰氨基半乳糖）二糖單位組成，通過一個似糖鏈接區(qū)連接到核心蛋白的絲氨酸殘基上。
硫酸軟骨素存在于從線蟲到人除植物外的所有生物中，發(fā)揮著許多重要的生理功能。雖然多糖的主鏈結(jié)構(gòu)并不復(fù)雜，但就硫酸化程度、硫酸基和兩種差異向異構(gòu)糖醛酸再鏈內(nèi)的分布來說，呈現(xiàn)高度的不均一性。
注射用硫酸軟骨素的要求很高，制造也比較困難，成本高，中國專利申請?zhí)枮?01410807849.X的專利申請公開了一種注射級硫酸軟骨素的制備方法，包括以下步驟：
（1）酶解
將口服硫酸軟骨素用純化水溶解成8-10%溶液，用20%的氫氧化鈉調(diào)pH8.0加入0.1%的胰酶，55±2℃酶解3小時；
（2）除蛋白
將以上溶液加入2%氯化鈉，加溫至85±2℃，保溫1小時，離心過濾（4000rpm）；
（3）碳處理
過濾液加入經(jīng)干烤除熱原的活性炭0.5%，用6N HCl調(diào)pH6.5，加溫至80±2℃，保溫1小時；
（4）過濾
炭處理液用帆布過濾2-3次，使濾液澄清，再精濾（0.45μm）一次；
（5）沉淀
濾液加入4倍量藥用95％乙醇攪勻后，室溫靜置沉淀15小時；
（6）收集、干燥、磨粉
收集沉淀物，脫水，裝盤（厚≤5cm）真空干燥(60℃±2)24小時。
上述方法雖然能除去一部分雜質(zhì)，但是產(chǎn)品的品質(zhì)還有待提高。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種雜質(zhì)含量低、穩(wěn)定性好的注射用硫酸軟骨素的制備方法。
本發(fā)明是一種注射用硫酸軟骨素的制備方法，步驟為：
（1）、將硫酸軟骨素加入到50-60℃注射用水中，攪拌，得到硫酸軟骨素溶液；
（2）、向上述硫酸軟骨素溶液中加入甘露醇，攪拌使溶解，然后加入藥用炭，攪拌均勻；
（3）、用微孔膜筒式濾芯過濾器粗濾，得到粗濾液；
（4）、將上述粗濾液調(diào)pH至5.5-6.5，補(bǔ)加注射用水，攪拌均勻，用0.2μm微孔膜筒式濾芯過濾器除菌過濾，凍干，得到注射用硫酸軟骨素。
優(yōu)選的，所述步驟3中用到的微孔膜筒式濾芯過濾器為0.65μm-0.45μm微孔膜筒式濾芯過濾器。
所述100ml注射用硫酸軟骨素的原料中，各組分的含量為：硫酸軟骨素1.5-2.5mg、甘露醇0.2-0.4mg、藥用炭0.1-0.2mg。
所述凍干步驟為，將過濾后的產(chǎn)品在-45℃—-35℃之間預(yù)凍1-4小時，然后降溫至-60℃保持1-3小時，抽真空，控制真空度到20MPa以下，緩慢升溫至-15℃維持1-2h，繼續(xù)緩慢升溫至10℃，升溫時間為5-7h；繼續(xù)升溫至10℃，升溫時間為5-7h，在35℃保溫干燥1-3h，得到注射用硫酸軟骨素。
本發(fā)明的有益效果是，本發(fā)明注射用硫酸軟骨素的穩(wěn)定性好，雜質(zhì)含量低，細(xì)菌內(nèi)毒素低至3EU/ml，極大了提高了產(chǎn)品的效能，保證了藥液的純度，提高了用藥安全。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
本發(fā)明注射用硫酸軟骨素的制備方法的步驟為：
（1）、將硫酸軟骨素加入到50-60℃注射用水中，攪拌，得到硫酸軟骨素溶液；
（2）、向上述硫酸軟骨素溶液中加入甘露醇，攪拌使溶解，然后加入藥用炭，攪拌均勻；
（3）、用0.65μm和0.45μm微孔膜筒式濾芯過濾器分別粗濾，得到粗濾液；
（4）、將上述粗濾液調(diào)pH至6.5，補(bǔ)加注射用水，攪拌均勻，用0.2μm微孔膜筒式濾芯過濾器除菌過濾，凍干，得到注射用硫酸軟骨素。
所述100ml注射用硫酸軟骨素的原料中，各組分的含量為：硫酸軟骨素1.5mg、甘露醇0.4mg、藥用炭0.2mg。
所述凍干步驟為，將過濾后的產(chǎn)品在-40℃之間預(yù)凍1小時，然后降溫至-60℃保持3小時，抽真空，控制真空度到20MPa以下，緩慢升溫至-15℃維持2h，繼續(xù)緩慢升溫至10℃，升溫時間為5h；繼續(xù)升溫至10℃，升溫時間為7h，在35℃保溫干燥1h，得到注射用硫酸軟骨素。
將實(shí)施例1制備得到的注射用硫酸軟骨素進(jìn)行檢測，其小分子雜質(zhì)含量低于常規(guī)產(chǎn)品，細(xì)菌內(nèi)毒素含量低于3EU/ml。
實(shí)施例2
本發(fā)明注射用硫酸軟骨素的制備方法的步驟為：
（1）、將硫酸軟骨素加入到50-60℃注射用水中，攪拌，得到硫酸軟骨素溶液；
（2）、向上述硫酸軟骨素溶液中加入甘露醇，攪拌使溶解，然后加入藥用炭，攪拌均勻；
（3）、用0.65μm和0.45μm微孔膜筒式濾芯過濾器分別粗濾，得到粗濾液；
（4）、將上述粗濾液調(diào)pH至5.5，補(bǔ)加注射用水，攪拌均勻，用0.2μm微孔膜筒式濾芯過濾器除菌過濾，凍干，得到注射用硫酸軟骨素。
所述100ml注射用硫酸軟骨素的原料中，各組分的含量為：硫酸軟骨素2.5mg、甘露醇0.2mg、藥用炭0.1mg。
所述凍干步驟為，將過濾后的產(chǎn)品在-45℃之間預(yù)凍1小時，然后降溫至-60℃保持1小時，抽真空，控制真空度到20MPa以下，緩慢升溫至-15℃維持1h，繼續(xù)緩慢升溫至10℃，升溫時間為7h；繼續(xù)升溫至10℃，升溫時間為5h，在35℃保溫干燥2h，得到注射用硫酸軟骨素。
將實(shí)施例1制備得到的注射用硫酸軟骨素進(jìn)行檢測，其小分子雜質(zhì)含量低于常規(guī)產(chǎn)品，細(xì)菌內(nèi)毒素含量低于4EU/ml。