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一種克服停滯期、恒速釋放疏水性藥物的微球及制備方法與流程

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一種克服停滯期、恒速釋放疏水性藥物的微球及制備方法與流程

本發(fā)明屬于疏水性藥物控釋制劑領(lǐng)域,具體涉及一種克服停滯期、恒速釋放疏水性藥物的微球的制備方法。



背景技術(shù):

緩釋制劑的突出特點(diǎn)是能夠在1次用藥后在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)持續(xù)釋放有效劑量的活性成分,基于此特點(diǎn),該類制劑特別適用于需要長(zhǎng)期服藥的慢性疾病,如糖尿病、精神分裂癥等,尤其對(duì)半衰期短,采用常規(guī)劑型需頻繁給藥的藥物,可明顯提高患者順應(yīng)性;另外,該類制劑體內(nèi)血藥濃度變化小,可避免超過(guò)治療范圍的毒副作用,又能保持在治療窗之內(nèi)以維持療效。口服緩釋制劑因胃腸蠕動(dòng)等生理?xiàng)l件的限制,通常只能持續(xù)1日至數(shù)日,而皮下或肌內(nèi)注射給藥的無(wú)菌微球(microspheres)可持續(xù)釋放藥物達(dá)數(shù)周,甚至數(shù)月。

然而,在現(xiàn)有技術(shù)中,利用微球包載疏水性藥物實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)效還存在兩個(gè)重要的難題尚未得到很好的解決:(1)現(xiàn)有包載有疏水性藥物的微球往往存在長(zhǎng)時(shí)間(數(shù)天,甚至數(shù)周)的停滯期,在此期間,藥物釋放量遠(yuǎn)未達(dá)到有效治療濃度水平,因此需要患者配合加服常規(guī)藥物,依從性差;(2)在微球制備過(guò)程中,為溶解藥物和高分子材料會(huì)不可避免的使用有機(jī)溶劑,考慮到微球中殘留的有機(jī)溶劑將會(huì)對(duì)人體造成不可預(yù)期的嚴(yán)重影響,因此如何最大限度的降低有機(jī)溶劑殘留水平仍是本領(lǐng)域研究人員的重大攻關(guān)難題。

為了克服停滯期,中國(guó)專利CN103338752采用兩種具有不同降解速率的高分子材料按照一定比例混合后包裹活性成分;美國(guó)專利US4897268則先采用單一高分子材料包裹活性成分,再用另一高分子材料包裹活性成分,其中兩種高分子材料具有不同的降解速率,分別成球后再按照一定比例混合;上述兩種方法均能克服停滯期,但是降解較快的高分子材料降解后的產(chǎn)物-乳酸和乙醇酸,會(huì)加速降解較慢的高分子材料降解,因此實(shí)際活性成分的釋放行為,往往并不能通過(guò)參考兩種高分子材料分別成球后的釋放行為獲得,使得處方篩選更加困難;此外,從藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)角度,為一種制劑選用兩種高分子材料,或制備兩種微球也不具有優(yōu)勢(shì)。中國(guó)專利CN102188384中,通過(guò)加入堿性添加劑,在釋放初期加速水分子滲入微球內(nèi)部,隨著釋放進(jìn)行還可以中和微球降解過(guò)程中產(chǎn)生的酸性物質(zhì),從而間接調(diào)節(jié)活性成分的釋放行為。但是增加一味輔料,往往需要相應(yīng)增加大量質(zhì)控研究工作,并且國(guó)家食品藥品管理總局藥品審評(píng)中心頒布的《化學(xué)藥品注射劑基本技術(shù)要求(試行)》中輔料選用的基本原則中規(guī)定:在滿足需要的前提下,注射劑所用輔料的種類及用量應(yīng)盡可能少。

因此,如何方便、經(jīng)濟(jì)、有效的克服疏水性藥物微球存在的停滯期,仍是一個(gè)值得深入研究的方向。

為了解決有機(jī)溶劑殘留的問(wèn)題,初大豐等(用于治療老年癡呆癥的石杉?jí)A甲長(zhǎng)效緩釋微球制劑研究,吉林大學(xué)博士論文,2007年)在凍干過(guò)程中采用甘露醇作為保護(hù)劑,最終升溫至60℃真空干燥,解決了溫度升高后微球粘連問(wèn)題,但所用甘露醇用量高達(dá)50%,這與《化學(xué)藥品注射劑基本技術(shù)要求(試行)》中輔料選用的基本原則中規(guī)定:在滿足需要的前提下,注射劑所用輔料的種類及用量應(yīng)盡可能少是相矛盾的,此外該方法不適用于熱敏感的藥物。中國(guó)專利CN103462901在微球固化后,再采用乙醇作為橋梁溶劑清洗處理,可將終產(chǎn)品中的二氯甲烷含量降至600ppm;但在無(wú)菌操作生產(chǎn)環(huán)境下增加乙醇清洗步驟,無(wú)疑增加了染菌風(fēng)險(xiǎn)和操作的復(fù)雜性,并且橋梁溶劑乙醇?xì)埩粢残柙诮K產(chǎn)品中嚴(yán)格控制。而單純依靠提高解析干燥階段的最終溫度和延長(zhǎng)凍干時(shí)間使得有機(jī)溶劑至600ppm以下,有時(shí)并不奏效,并且這兩種手段不僅浪費(fèi)電力能源,對(duì)于溫度敏感的樣品還可能影響活性成分的穩(wěn)定性,當(dāng)解析干燥溫度高于高分子材料Tg時(shí),也容易造成微球粘連現(xiàn)象。

因此,尋求一種簡(jiǎn)易、高效的去除有機(jī)溶劑殘留的方法仍是本領(lǐng)域人員亟待獲取的。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn),本發(fā)明的目的在于提供一種克服停滯期、恒速釋放疏水性藥物的微球的制備方法,該方法包括如下步驟:

1)將疏水性藥物和高分子材料溶解于有機(jī)溶劑中得到溶液A;

2)將步驟1)所得物和內(nèi)水相混合,乳化處理得到初乳,內(nèi)水相用量與步驟1)中溶液A的體積比為1:5-66.7,優(yōu)選為1:6.5-30,更優(yōu)選的為1:8-20;

3)將步驟2)所得物加入到濃度為0.005-0.05 g/ml的表面活性劑水溶液中,乳化處理得復(fù)乳,經(jīng)攪拌至乳滴固化或有機(jī)溶劑揮發(fā)完全;

4)對(duì)步驟3)所得顆粒進(jìn)行干燥得到微球;

所述疏水性藥物包括利培酮、帕潘立酮、石杉?jí)A甲、羅替戈汀中的至少一種;

所述高分子材料包括聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚乳酸、聚己內(nèi)酯中的至少一種;

所述有機(jī)溶劑包括二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、二甲基甲酰胺、四氫呋喃、六氟異丙醇中的至少一種;

所述內(nèi)水相為純水或水溶液。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案創(chuàng)造性的采用w/o/w復(fù)乳法包裹疏水性藥物,所得微球在體外以近似零級(jí)恒速釋放利培酮,并且有機(jī)溶劑殘留可控制在600ppm以下。w/o/w復(fù)乳法包裹疏水性藥物過(guò)程中,內(nèi)水相的引入,特別是純水的內(nèi)水相的引入,致使更多水性通道在微球固化、干燥過(guò)程中形成,這對(duì)于有機(jī)溶劑在固化、干燥過(guò)程中自微球顆粒中泄露是有利的,正基于此,干燥后的微球中有機(jī)溶劑含量可更容易的控制在600 ppm下。水性通道在體外溶出過(guò)程中亦至關(guān)重要,水性通道分布較多的微球主要基于擴(kuò)散釋放活性成分,溶蝕對(duì)釋放行為的貢獻(xiàn)變少,并且合理的內(nèi)水相加入量,可將突釋行為降至最底,最終實(shí)現(xiàn)疏水性藥物的恒速釋放。

如本發(fā)明的一個(gè)實(shí)驗(yàn)例所示,內(nèi)水相加入量對(duì)本發(fā)明的技術(shù)效果有著較為重要的影響,當(dāng)內(nèi)水相體積增加,微球表面孔道數(shù)量(通常稱為水性通道)有明顯增加,水性通道的直徑也有增加趨勢(shì),且這一表面形態(tài)的改變最終影響了微球的釋藥行為,隨孔徑數(shù)量增加和直徑增大,釋藥加速,并且通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)水相體積,可以有效控制微球以接近于零級(jí)恒速釋放藥物。

然而,發(fā)明人也發(fā)現(xiàn)制備過(guò)程中的其它因素也是不可忽略的,甚至是至關(guān)重要的。如制備穩(wěn)定的初乳,優(yōu)選的制備方法為高剪切分散,且優(yōu)選無(wú)需額外加入表面活性劑,這是由于高分子材料的有機(jī)溶劑溶液具有一定的粘度可維系體系的穩(wěn)定。在實(shí)施例中,優(yōu)選的初乳平均粒徑<0.2μm(分散介質(zhì)為溶解有高分子材料有機(jī)溶劑溶液,采用測(cè)定馬爾文Zetasizer Nano型激光粒徑測(cè)定儀測(cè)定),當(dāng)初乳粒徑>1.0μm情況下,形成的初乳不夠穩(wěn)定(短時(shí)間(>5min)靜置出現(xiàn)分層現(xiàn)象),影響復(fù)乳化效果。同時(shí),發(fā)明人在研究過(guò)程中還發(fā)現(xiàn),中等尺寸(如直徑在0.5μm-0.8μm范圍)的初乳會(huì)致使載藥量下降、突釋量增加等現(xiàn)象,但余下的藥物仍能以接近恒速釋放。

多數(shù)研究者均注意到微球的粒徑分布也是至關(guān)重要的,最為常用的粒徑控制方式有兩種:1)在成球過(guò)程中,通過(guò)特殊控制手段獲得粒徑均一的微球,如中國(guó)專利CN200910153521.x中所描述的銳孔裝置,以及文獻(xiàn)中有較多報(bào)道的SPG膜乳化技術(shù)等;2)更為常用的是在微球固化后,將其通過(guò)雙層篩去除偏大/偏小的微粒,獲得分布均勻的中等粒徑的微粒。相對(duì)比而言,該法更適合產(chǎn)業(yè)化,如中國(guó)專利CN200580019229中報(bào)道的注射用艾塞那肽微球(商品名:Bydureon,原研公司:安米林和Alkermes公司)的無(wú)菌干燥篩分處理。若采用后者方案,雙層篩篩網(wǎng)尺寸的選擇至關(guān)重要,考慮到患者的依從性,應(yīng)盡量避免使用的注射針頭外徑尺寸過(guò)大,故需要截留去除粒徑過(guò)大的微粒,且大粒徑的微粒往往載藥量要高于中等粒徑和小粒徑的微粒,對(duì)體外溶出(受載藥量影響)、載藥量等關(guān)鍵指標(biāo)的評(píng)價(jià)具有干擾;之所以要除掉小粒徑的微粒,主要是小粒徑的微粒對(duì)突釋有較大貢獻(xiàn),通常將<25μm的微粒過(guò)濾去除。同時(shí),雙層篩尺寸的選擇除上述原因外,也需要兼顧產(chǎn)品的收率,在不影響產(chǎn)品質(zhì)量的情況下,應(yīng)盡少量的去除偏大/偏小的微粒。

所述高分子材料的重量為疏水性藥物重量的0.4倍以上;有機(jī)溶劑的用量為2-25 g/g?疏水性藥物。

優(yōu)選的,將所述步驟(3)所得的顆粒篩分處理后再干燥得到微球。

優(yōu)選的,所述高分子材料為PLGA,更優(yōu)選的,采用粘度為0.35-0.8 dL/g的PLGA(如型號(hào)為7525DLG7E的PLGA)。PLGA作為制備微球常用的高分子,具有良好的生物相容性和生物降解性,且具有穩(wěn)定的市場(chǎng)來(lái)源等優(yōu)點(diǎn)。值得指出的是,本發(fā)明可以采用任何可用于制備W/0和W/O/W體系微球的高分子材料。本發(fā)明對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的貢獻(xiàn)是通過(guò)控制微球制備過(guò)程中的內(nèi)水相以及制乳條件等參數(shù),解決了現(xiàn)有技術(shù)長(zhǎng)期未能解決的問(wèn)題。因此,本領(lǐng)域人員不難理解,任何可用于制備W/O和W/O/W體系微球的高分子材料(包括單一材料和混合材料),均可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。

優(yōu)選的,所述有機(jī)溶劑為二氯甲烷。二氯甲烷具有低水溶性、沸點(diǎn)低于100℃、與水相比有較高的蒸汽壓和介電常數(shù)低于10的特點(diǎn);常作為乳化-液中干燥法制備微球最為常用的有機(jī)溶媒。本領(lǐng)域人員也不難理解,凡是可以用于制備W/0、W/O/W體系微球的有機(jī)溶劑(包括單一溶劑和混合溶劑),也均可以用于本發(fā)明。

上述表面活性劑可以為離子表面活性劑或者非離子表面活性劑,優(yōu)選為聚乙烯醇、羥丙甲纖維素、羧甲基纖維素、明膠、吐溫類、海藻酸鈉、甲基纖維素、十二烷基硫酸鈉、油酸鈉、普朗尼克F-68中的至少一種,進(jìn)一步優(yōu)選為聚乙烯醇。

步驟2)和步驟3)所述的乳化處理方式包括高剪切分散、高壓均質(zhì)、超聲處理、靜態(tài)混合、機(jī)械攪拌中的至少一種。

優(yōu)選的,所述乳化處理方式為高剪切分散。更優(yōu)選的,步驟2)中的乳化處理為高剪切分散處理,利用IKA T25型高剪切分散機(jī)在5000rpm-20000rpm下處理0.5min-5min,使得形成穩(wěn)定的初乳,優(yōu)選的初乳平均粒徑<0.2μm;步驟3)中的乳化處理為高剪切分散處理,利用Silverson L5M-A型高剪切分散機(jī)在500rpm-3000 rpm下處理0.5min -10 min,目的是將絕大部分乳滴的粒徑控制在25-150μm,該范圍內(nèi)的每個(gè)梯度區(qū)間內(nèi)的微粒載藥量相近、釋放行為相似,考慮到<25μm和>150μm的微粒由于對(duì)突釋、載藥量等有較大貢獻(xiàn)在后續(xù)操作中將被去除,為兼顧收率,剪切處理的時(shí)間可在一定范圍內(nèi)調(diào)整。值得指出的是,采用與IKAT25型高剪切分散機(jī)在5000rpm-20000rpm和Silverson L5M-A型高剪切分散機(jī)在500rpm-3000rpm下具有同等效力的其它高剪切分散機(jī)均應(yīng)視為與本發(fā)明相同。

優(yōu)選的,進(jìn)行步驟2)乳化處理時(shí),溫度為室溫以下,更優(yōu)選的在10℃以下,這主要是考慮到二氯甲烷沸點(diǎn)低(39.8℃),在乳化過(guò)程中定轉(zhuǎn)子與液體之間摩擦,導(dǎo)致產(chǎn)熱嚴(yán)重,易致使二氯甲烷大量揮發(fā),對(duì)人體和環(huán)境存在安全隱患;同時(shí),在稍高溫度下,分散相高分子材料溶液粘度下降,形成的w/o乳滴不夠穩(wěn)定,易發(fā)生融合現(xiàn)象。進(jìn)行步驟3)乳化處理時(shí),溫度不宜超過(guò)二氯甲烷的沸點(diǎn),優(yōu)選的溫度為25℃以下,更優(yōu)選的為15℃及以下,該溫度下二氯甲烷具有適宜的水中溶解度,二氯甲烷由乳滴中萃取至外水相中的效率適宜,形成的微球較為光滑、圓整;若步驟3)溫度過(guò)高,形成的微球會(huì)表面粗糙、異型,甚至不能成球。由于低溫下,體系的粘度增加,甚至水結(jié)冰,故過(guò)低的溫度也是不適宜的。此外,步驟3)的溫度對(duì)最終微球的質(zhì)量指標(biāo),如體外溶出、有機(jī)溶劑殘留等均具有影響。

所述內(nèi)水相的水溶液為還包括藥學(xué)意義上的釋放調(diào)節(jié)劑、保護(hù)劑、穩(wěn)定劑、增稠劑中的至少一種;所述釋放調(diào)節(jié)劑包括各類緩沖鹽、NaCl、KCl等親水性添加劑、脂肪酸酯等疏水性添加劑中的至少一種;所述保護(hù)劑包括蔗糖、甘露醇、海藻糖、CMC、明膠、NH4HCO3中的至少一種;所述穩(wěn)定劑包括泊洛沙姆、聚乙烯醇、聚山梨酯中的至少一種;所述增稠劑包括明膠等。

釋放調(diào)節(jié)劑、保護(hù)劑、穩(wěn)定劑等其它試劑的加入,可以在實(shí)現(xiàn)本發(fā)明技術(shù)效果的基礎(chǔ)上,實(shí)現(xiàn)其它額外的功能。

所述內(nèi)水相還包括水溶性藥物。在內(nèi)水相中加入水溶性藥物,可以實(shí)現(xiàn)多種治療效果、或治療效果疊加、或減輕毒副作用等。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供由上述方法制備得到的微球,該微球疏水性藥物可以實(shí)現(xiàn)無(wú)停滯期的恒速釋放,該微球中的有機(jī)溶劑殘留低于600 ppm。

本發(fā)明的另一目的在于還提供一種微球,微球包括高分子材料、表面活性劑、藥物;該微球能恒速釋放藥物,微球中的有機(jī)溶劑殘留低于600ppm,微球具有合理的水性通道使得藥物可以實(shí)現(xiàn)無(wú)停滯期的恒速釋放并控制有機(jī)溶劑殘留。

理論上,上述微球中的高分子材料為任何可以用于制備載藥微球的材料,上述微球中的藥物為任何可用微球包裹的藥物。

優(yōu)選的,上述克服停滯期、恒速釋放疏水性藥物的微球包括疏水性藥物、表面活性劑和高分子材料,疏水性藥物包括利培酮、帕潘立酮、石杉?jí)A甲、羅替戈汀中的至少一種;高分子材料包括聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚乳酸、聚己內(nèi)酯中的至少一種。

優(yōu)選的,上述有機(jī)溶劑包括二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、二甲基甲酰胺、四氫呋喃、六氟異丙醇中的至少一種,進(jìn)一步優(yōu)選為二氯甲烷。

優(yōu)選的,上述表面活性劑為聚乙烯醇、羥丙甲纖維素、羧甲基纖維素、明膠、吐溫類、海藻酸鈉、甲基纖維素、十二烷基硫酸鈉、油酸鈉、普朗尼克F-68中的至少一種,進(jìn)一步優(yōu)選為聚乙烯醇。

換言之,本發(fā)明經(jīng)過(guò)大量研究,創(chuàng)造性的利用w/o/w復(fù)乳法包裹疏水性藥物后,發(fā)現(xiàn)了對(duì)水性通道的控制可以有效的控制有機(jī)溶劑殘留,同時(shí)對(duì)恒速釋放也是至關(guān)重要。

因此,本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,在本發(fā)明的基礎(chǔ)上,經(jīng)過(guò)理論推導(dǎo)或有限次數(shù)的實(shí)驗(yàn)是可以制備其它類型的與本發(fā)明技術(shù)效果相仿的微球。也即是說(shuō),采取任何可用于制備微球的高分子材料、表面活性劑以及可預(yù)見(jiàn)的常規(guī)藥物制備得到具備合理水性通道的微球,均是可以預(yù)料的。

本發(fā)明的有益效果:

1、克服停滯期,獲得恒速釋放疏水藥物的微球,快速起效;

2、微球中的有機(jī)溶劑殘留在600 ppm以下;

3、工藝簡(jiǎn)單易于工業(yè)化,無(wú)需額外添加輔料,易于質(zhì)量控制。

附圖說(shuō)明

附圖1為對(duì)比實(shí)施例1所得微球的SEM圖;

附圖2為實(shí)施例1所得微球的SEM圖;

附圖3為實(shí)施例7所得微球的SEM圖;

附圖4為實(shí)施例9所得微球的SEM圖;

附圖5為實(shí)施例1、實(shí)施例7、實(shí)施例9和對(duì)比實(shí)施例1的釋放結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述,有必要在此指出的是以下實(shí)施例只是用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的說(shuō)明,不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制,該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員根據(jù)上述發(fā)明內(nèi)容所做出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整,仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

將1.8g的7525DLG7E和0.6g的利培酮溶解于15.0ml的二氯甲烷中,作為中油相;1500.0ml外水相中含有聚乙烯醇22.5g,并15℃保溫備用;將1.0ml純水用一次性注射器轉(zhuǎn)移到中油相中,并迅速開(kāi)啟IKA T25型高剪切分散機(jī),10000rpm下持續(xù)乳化3min形成w/o型初乳,此過(guò)程在10℃以下水浴中進(jìn)行,另外注意保持密閉以防止二氯甲烷的揮發(fā);所得w/o型初乳在3min內(nèi)加入到15℃保溫的外水相中,同時(shí)開(kāi)啟Silverson L5M-A型高剪切分散機(jī),1200rpm下持續(xù)乳化處理2min,所得w/o/w型復(fù)乳于15℃下保溫15min,再升溫至25℃下保持6h,整個(gè)過(guò)程要保持一定強(qiáng)度的攪拌;6h后,將所得懸浮液傾入25μm不銹鋼篩中,取上游顆粒用9kg純水分3此清洗,每次清洗持續(xù)10min并輔以攪拌,最后將所得固體顆粒均勻平鋪于表面皿中。采用(-40℃/2h)+(-20℃/2h)+(-5℃/24h)+(10℃/4h)+(25℃/8h)程序進(jìn)行冷凍干燥,共耗時(shí)40h。

實(shí)施例2

除利培酮的加入量為0.45 g之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例3

除利培酮的加入量為0.33 g之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例4

除利培酮的加入量為0.8 g之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例5

除利培酮的加入量為1.0 g之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例6

除利培酮的加入量為1.25 g之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例7

除內(nèi)水相的加入體積為0.5 ml之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例8

除內(nèi)水相的加入體積為1.5 ml之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例9

除內(nèi)水相的加入體積為2.0 ml之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例10

除疏水性藥物為帕潘立酮之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例11

除疏水性藥物為石杉?jí)A甲之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例12

除疏水性藥物為羅替戈汀之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例13

除疏水性藥物為羅替戈汀和石杉?jí)A甲(1:1w/w)之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例14

將1.8g的7525DLG5.5E和0.6g的利培酮溶解于15.0ml的二氯甲烷中,作為中油相;1500.0ml外水相中含有聚乙烯醇22.5g,并15℃保溫備用;將1.0ml純水用一次性注射器轉(zhuǎn)移到中油相中,并迅速開(kāi)啟IKA T25型高剪切分散機(jī),10000rpm下持續(xù)乳化3min形成w/o型初乳,此過(guò)程在0℃冰水浴中進(jìn)行,另外注意保持密閉以防止二氯甲烷的揮發(fā);后續(xù)操作與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例15

將1.8g的7525DLG4A和0.6g的利培酮溶解于15.0ml的二氯甲烷中,作為中油相;1500.0ml外水相中含有聚乙烯醇22.5g,并15℃保溫備用;將1.0ml純水用一次性注射器轉(zhuǎn)移到中油相中,并迅速開(kāi)啟IKA T25型高剪切分散機(jī),10000rpm下持續(xù)乳化3min形成w/o型初乳,此過(guò)程在0℃冰水浴中進(jìn)行,另外注意保持密閉以防止二氯甲烷的揮發(fā);后續(xù)操作與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例16

將1.8g的5050DLG4A和0.6g的利培酮溶解于15.0ml的二氯甲烷中,作為中油相;1500.0ml外水相中含有聚乙烯醇22.5g,并15℃保溫備用;將1.0ml純水用一次性注射器轉(zhuǎn)移到中油相中,并迅速開(kāi)啟IKA T25型高剪切分散機(jī),10000rpm下持續(xù)乳化3min形成w/o型初乳,此過(guò)程在0℃冰水浴中進(jìn)行,另外注意保持密閉以防止二氯甲烷的揮發(fā);后續(xù)操作與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例17

將0.9g的5050DLG4A和0.9g的7525DLG5.5E,以及0.6g的利培酮溶解于15.0ml的二氯甲烷中,作為中油相;1500.0ml外水相中含有聚乙烯醇22.5g,并15℃保溫備用;將1.0ml純水用一次性注射器轉(zhuǎn)移到中油相中,并迅速開(kāi)啟IKA T25型高剪切分散機(jī),10000rpm下持續(xù)乳化3min形成w/o型初乳,此過(guò)程在10℃以下水浴中進(jìn)行,另外注意保持密閉以防止二氯甲烷的揮發(fā);后續(xù)操作與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例14

除內(nèi)水相中加入1%(w/w)NaCl之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例15

除內(nèi)水相中加入0.5%(w/w)聚山梨酯80之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例16

除有機(jī)相中加入10%(v/v)丙酮之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例17

除將PLGA改為100DL 4A PLA,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例18

除將PLGA改為PCL,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例19

除將PLGA改為PCL和PLA(1:1 w/w),其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例20

除內(nèi)水相中加入1%(w/w)NaCl和KCl(1:1 w/w)之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例21

除內(nèi)水相中加入0.5%(w/w)脂肪酸酯之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例22

除內(nèi)水相中加入0.5%(w/w)蔗糖之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例23

除內(nèi)水相中加入0.5%(w/w)蔗糖和甘露醇(1:1 w/w)之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例24

除內(nèi)水相中加入0.5%(w/w)泊洛沙姆和聚乙烯醇(1:1 w/w)之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例25

除內(nèi)水相中加入0.5%(w/w)明膠之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例26

除有機(jī)相中加入10%(v/v)二甲基甲酰胺和四氫呋喃(1:1 w/w)之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例27

除有機(jī)相中加入10%(v/v)氯仿之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例28

除內(nèi)水相的加入體積為3 ml之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)施例29

除利培酮的加入量為0.24 g之外,其余與實(shí)施例1一致。

對(duì)比實(shí)施例1

除無(wú)內(nèi)水相之外,其余與實(shí)施例1一致。

實(shí)驗(yàn)例1

形態(tài):微球的表面形態(tài)采用Hitachi S-4800高分辨電子掃描電鏡觀測(cè),觀測(cè)前樣品經(jīng)30℃真空干燥20h,以確保樣品絕對(duì)干燥,再將樣品均勻涂布在雙面導(dǎo)電膠帶正面上,雙面導(dǎo)電膠帶的反面預(yù)先粘貼在鋁制樣品臺(tái)上的,真空下濺鉑30s,用Hitachi S-4800型掃描電鏡觀測(cè),并拍照。

對(duì)比實(shí)施例1、實(shí)施例7、實(shí)施例1、實(shí)施例9的微球形貌分別見(jiàn)附圖1、附圖2、附圖3和附圖4。

從附圖1-4可以看出,采用o/w單乳法(對(duì)比實(shí)施例1)所獲得微球表面光滑,無(wú)孔道;但隨內(nèi)水相體積增加,微球表面孔道數(shù)量(通常稱為水性通道)有明顯增加(通過(guò)對(duì)比附圖2、附圖3和附圖4),水性通道的直徑也有增加趨勢(shì),且這一表面形態(tài)的改變最終影響了微球的釋藥行為,隨孔徑數(shù)量增加和直徑增大,釋藥加速,并且通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)水相體積,可以有效控制微球以接近于零級(jí)恒速釋放藥物。

實(shí)驗(yàn)例2

粒徑尺寸及其分布測(cè)定:采用Malvern 3000型激光粒度儀測(cè)定微球的粒徑尺寸及其分布。不同內(nèi)水相加入量對(duì)利培酮微球粒徑的影響見(jiàn)表1。

從表1的結(jié)果可以看出,在確定的利培酮投藥量的條件下(0.6g),內(nèi)水相加入量體積從0增加至2.0ml時(shí)對(duì)微球的粒徑影響不大。

實(shí)驗(yàn)例3

載藥量測(cè)定:采用有機(jī)溶媒破壞微球骨架結(jié)構(gòu)后, 加入0.1N HCl溶液萃取,采用HPLC法測(cè)定藥物含量,計(jì)算方法如下:

不同利培酮理論投藥量、內(nèi)水相加入量對(duì)利培酮微球載藥量的影響見(jiàn)表2。

從表2可以看出,當(dāng)確定的內(nèi)水相體積條件下(如1.0ml),隨著利培酮投藥量的增加(0.33g至1.25g),微球的載藥量也增加(12.9%至32.8%);當(dāng)確定的利培酮投藥量條件下(0.6g),隨著內(nèi)水相體積的加入量的增加(0-2.0ml),微球的載藥量減少(21.6%-19.2%)。

實(shí)驗(yàn)例4

體外釋藥測(cè)定:精密稱取適量干燥微球20mg,均勻分散于盛有200ml釋放液的高壓聚乙烯瓶中,用蓋子密封后,中等強(qiáng)度振搖20s,平行制備3份;將瓶子置于37℃水浴鍋中靜置,放樣后每天取樣,取樣間隔24±1小時(shí)內(nèi);取樣前輕微振搖,待微球沉降后,用移液槍精密吸取5ml液體(同時(shí)補(bǔ)加5ml等溫釋放液),取續(xù)濾液,采用HPLC測(cè)定含量,計(jì)算釋放度和累計(jì)釋放度,并根據(jù)需要繪制累積釋放曲線。

累計(jì)釋放度為本次取樣點(diǎn)的釋放度與前面所有取樣點(diǎn)的釋放度之和,上式中,C1和C2分別為本次和上次取樣的續(xù)濾液溶液濃度(mg/ml)。

四個(gè)實(shí)施例的累計(jì)釋放度結(jié)果請(qǐng)見(jiàn)表3及附圖5。

由表3和附圖5可知:從現(xiàn)象上看,引入內(nèi)水相后(實(shí)施例1、實(shí)施例7和實(shí)施例9),藥物溶出均較單乳法o/w所獲得的微球樣品(對(duì)比實(shí)施例1)更快,并且隨內(nèi)水相體積增加,釋放呈加速趨勢(shì),結(jié)合考慮到SEM結(jié)果,這一規(guī)律與水性通道數(shù)量的變化是一致的,即引入更多的內(nèi)水相,微球表面的水性通道數(shù)量增加,體外溶出加速。調(diào)節(jié)內(nèi)水相的加入量,可獲得近似恒速釋藥的樣品。

實(shí)驗(yàn)例5:

溶劑殘留測(cè)定:參照2010版中國(guó)藥典附錄Ⅷ P殘留溶劑測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果詳見(jiàn)表3。引入內(nèi)水相后,二氯甲烷可降至600ppm以下(0.06%)。

從表4可以看出,在確定的利培酮投藥量條件下(0.6g),隨著內(nèi)水相加入量從0ml至0.5ml的增加,有機(jī)溶劑殘留迅速減少(從2.18%下降至0.06%),隨著內(nèi)水相加入量的繼續(xù)增加(0.5ml至2.0ml),有機(jī)溶劑殘留繼續(xù)減少,但是減少的幅度變緩慢(從0.06%下降至0.04%)。

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