本發(fā)明涉及一種低分子生物活性透明質(zhì)酸的應(yīng)用及其制劑，所述低分子生物活性透明質(zhì)酸可作為人皮膚粘膜抗炎即取代皮質(zhì)激素抗炎和誘導(dǎo)人皮膚粘膜、促進(jìn)TLR4受體陽(yáng)性細(xì)胞分泌抗菌肽防衛(wèi)素2和皮膚控油的生物活性物質(zhì)應(yīng)用于日用品、衛(wèi)生用品、化妝品、個(gè)人護(hù)膚品、醫(yī)療器械、醫(yī)藥等多個(gè)領(lǐng)域并制成相關(guān)制劑。
背景技術(shù)：
：透明質(zhì)酸，又稱玻璃酸、糖醛酸、玻尿酸，英文名hyaluronicacid(簡(jiǎn)稱HA)，是由D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺組成的高級(jí)多糖，雙糖單位可達(dá)25000道爾。人體皮下組織、表皮、角質(zhì)層、皮脂腺、毛囊和粘膜含有大量的細(xì)胞外基質(zhì)大分子透明質(zhì)酸。普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)是自然界中發(fā)現(xiàn)的保濕性能最好的物質(zhì)，在皮膚粘膜表面形成一個(gè)透氣的膜，主要是保護(hù)和濕化皮膚，沒(méi)有抗炎即取代皮質(zhì)激素抗炎和誘導(dǎo)抗菌肽分泌的生物活性，如何利用普通大分子透明質(zhì)酸，開(kāi)發(fā)其多種擴(kuò)大市場(chǎng)的新用途，實(shí)屬當(dāng)前重要研發(fā)方向。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種低分子生物活性透明質(zhì)酸的應(yīng)用及其制劑，所述低分子生物活性透明質(zhì)酸可作為人皮膚粘膜抗炎即取代皮質(zhì)激素抗炎 和誘導(dǎo)人皮膚粘膜、促進(jìn)TLR4受體陽(yáng)性細(xì)胞分泌抗菌肽防衛(wèi)素2和皮膚控油的生物活性物質(zhì)應(yīng)用于日用品、衛(wèi)生用品、化妝品、個(gè)人護(hù)膚品、醫(yī)療器械、醫(yī)藥等多個(gè)領(lǐng)域并制成相關(guān)制劑。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種低分子生物活性透明質(zhì)酸原料和產(chǎn)品的應(yīng)用，所述低分子生物活性透明質(zhì)酸是由透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得的低分子透明質(zhì)酸，所述低分子透明質(zhì)酸的分子量為5KD-250KD；所述透明質(zhì)酸酶為以下酶中的一種或幾種：酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、植物生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、細(xì)菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、動(dòng)物提取的透明質(zhì)酸酶；所述低分子生物活性透明質(zhì)酸的應(yīng)用是作為人皮膚粘膜抗炎即取代皮質(zhì)激素抗炎的生物活性物質(zhì)，和/或促進(jìn)人皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌抗菌肽防衛(wèi)素2的生物活性物質(zhì)，和/或控制皮膚油脂分泌的生物活性物質(zhì)的應(yīng)用。進(jìn)一步地，酵母菌、植物、細(xì)菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶均為重組人透明質(zhì)酸酶。進(jìn)一步地，所述低分子透明質(zhì)酸原料和產(chǎn)品不能有細(xì)菌內(nèi)毒素的污染和分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段或透明質(zhì)酸碎片的污染。進(jìn)一步地，所述低分子生物活性透明質(zhì)酸是由所述酶切獲得的分子量為5-10KD透明質(zhì)酸片段、10-100KD的透明質(zhì)酸片段及10-250KD的透明質(zhì)酸片段混合獲得的低分子透明質(zhì)酸。進(jìn)一步地，所述5-10KD、10-100KD和10-250KD的透明質(zhì)酸片段均分別由酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得，且按1:1:1比例混合。進(jìn)一步地，所述低分子生物活性透明質(zhì)酸是由所述酶切獲得的分子量為5-10KD透明質(zhì)酸片段及10-100KD的透明質(zhì)酸片段混合獲得的分子量為5-100KD的低分子透明質(zhì)酸。進(jìn)一步地，所述5-10KD及10-100KD的透明質(zhì)酸片段均分別由酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得，且按1:1比例混合。進(jìn)一步地，所述低分子生物活性透明質(zhì)酸是由酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得的分子量為5-10KD的低分子透明質(zhì)酸。進(jìn)一步地，所述低分子生物活性透明質(zhì)酸用于制備日用品、衛(wèi)生用品、化妝品、護(hù)膚品、醫(yī)療器械、藥品。進(jìn)一步地，所述日用品、衛(wèi)生用品、化妝品、護(hù)膚品、醫(yī)療器械、藥品可以是噴劑、滴劑、貼劑、栓劑、吸入劑、漱口口服劑、干粉口服劑。進(jìn)一步地，所述低分子生物活性透明質(zhì)酸用于制備眼部護(hù)理液、眼部美容液、爽膚水、尿布性皮炎噴劑、嬰兒皮膚護(hù)理液、創(chuàng)口貼、口腔牙齦鼻咽噴劑、面膜、頭皮護(hù)理液、陰道護(hù)理液、避孕套潤(rùn)滑液、滴或潤(rùn)眼液、飲品或乳品添加劑、食品補(bǔ)充膠囊。一種低分子生物活性透明質(zhì)酸制劑，所述制劑為凝膠制劑，所述凝膠制劑中含有與所述低分子生物活性透明質(zhì)酸有增效協(xié)同作用的卡波姆；所述低分子生物活性透明質(zhì)酸是由透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得的分子量為5-10KD的透明質(zhì)酸片段、10-100KD的透明質(zhì)酸片段及10-250KD的透明質(zhì)酸片段的混合物；所述透明質(zhì)酸酶為以下酶中的一種或幾種：酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、植物生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、細(xì)菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、動(dòng)物提取的透明質(zhì)酸酶。進(jìn)一步地，所述5-10KD、10-100KD和10-250KD的透明質(zhì)酸片段均分別由酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得，且按1:1:1比例混合。進(jìn)一步地，所述凝膠制劑還包括：水、甘油、氯化鈉、香精、苯氧乙醇、羥苯甲酯、羥苯乙酯、乙基己基甘油。進(jìn)一步地，所述凝膠制劑中所述低分子生物活性透明質(zhì)酸的重量百分 含量為0.6-3％的，所述卡波姆的重量百分含量為1.5-3.0％。進(jìn)一步地，所述制劑為牙膏，所述牙膏中含有與所述低分子生物活性透明質(zhì)酸有增效協(xié)同作用的山梨糖醇；所述低分子生物活性透明質(zhì)酸是由透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得的分子量為5-10KD透明質(zhì)酸片段及10-100KD的透明質(zhì)酸片段的混合物；所述透明質(zhì)酸酶為以下酶中的一種或幾種：酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、植物生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、細(xì)菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、動(dòng)物提取的透明質(zhì)酸酶。進(jìn)一步地，所述5-10KD及10-100KD的透明質(zhì)酸片段均分別由酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得，且按1:1比例混合。進(jìn)一步地，所述牙膏中所述低分子生物活性透明質(zhì)酸的重量百分含量為0.4-4％，所述山梨糖醇的重量百分含量為30-70％。進(jìn)一步地，所述牙膏中還包括重量百分比的以下物質(zhì)：聚乙二醇4001-5％、糖精鈉0.02-0.2％、海藻酸鈉0.03-0.3％、月桂醇硫酸酯鈉0.2-2％、水合硅石DS1000.5-16.2％、水合硅石DS2000.2-4％、苯甲酸鈉0.03-0.3％、香精0.5-1.1％，余量為水。進(jìn)一步地，所述牙膏中包括重量百分比的以下物質(zhì)：低分子透明質(zhì)酸2％、山梨糖醇60％、聚乙二醇4005％、糖精鈉0.2％、海藻酸鈉0.3％、月桂醇硫酸酯鈉2％、水合硅石DS10016.2％、水合硅石DS2004％、苯甲酸鈉0.3％、香精1.1％，余量為水。進(jìn)一步地，所述制劑為糖漿制劑或皮膚噴劑；所述低分子生物活性透明質(zhì)酸是由酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得的分子量為5-10KD的低分子透明質(zhì)酸。進(jìn)一步地，所述糖漿制劑為低糖糖漿制劑，包括重量百分比的以下組分：低分子透明質(zhì)酸6-12％、山梨糖醇30-50％、白砂糖0.1-1％、紅糖0.5-2％、麥芽糖醇0.5-6.7％、蜂蜜0.1-1％、苯甲酸鈉0.1-0.3％、薄荷香精 0.001-0.01％，余量為水。進(jìn)一步地，所述低糖糖漿制劑包括重量百分比的以下組分：低分子透明質(zhì)酸10％、山梨糖醇40％、白砂糖1％、紅糖2％、麥芽糖醇6.7％、蜂蜜1％、苯甲酸鈉0.3％、薄荷香精0.01％，余量為水。由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明至少具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)本申請(qǐng)發(fā)現(xiàn)普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)通過(guò)以下酶中的一種或幾種進(jìn)行酶切：酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、植物生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、細(xì)菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、動(dòng)物提取的透明質(zhì)酸酶；獲得5-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸也有明顯的的皮膚粘膜抗炎(即取代皮質(zhì)激素抗炎)生物活性、促進(jìn)皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和皮膚控油的生物活性。其中防衛(wèi)素2具有殺菌消炎的作用，可以進(jìn)一步抑制炎癥。(2)本申請(qǐng)還新發(fā)現(xiàn)所述的生物活性透明質(zhì)酸的人皮膚粘膜抗炎(即取代皮質(zhì)激素抗炎)生物活性可以被細(xì)菌內(nèi)毒素污染和分子量小于5KD的超低分子量(寡聚)透明質(zhì)酸片段或透明質(zhì)酸碎片減低和抑制。(3)以上有明顯皮膚粘膜抗炎(即取代皮質(zhì)激素抗炎)生物活性、促進(jìn)皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌抗菌肽防衛(wèi)素2和皮膚控油的生物活性的5-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸可以用來(lái)生產(chǎn)日用品、衛(wèi)生用品、化妝品、個(gè)人護(hù)膚品、醫(yī)療器械、醫(yī)藥。附圖說(shuō)明上述僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，以下結(jié)合附圖與具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。圖1是大分子透明質(zhì)酸采用不同酶進(jìn)行酶切的效果圖，其中泳道1-6為動(dòng)物細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶的酶切效果，泳 道9-14為微生物(酵母菌)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶的酶切效果。圖2是大分子透明透明質(zhì)酸采用不同酶進(jìn)行酶切的效果圖，其中泳道1-6為動(dòng)物細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶的酶切效果，泳道9-14為微生物(細(xì)菌)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶的酶切效果。圖3是采用不同物理化學(xué)方法切割大分子透明質(zhì)酸生產(chǎn)的低分子透明質(zhì)酸的電泳圖。圖4是不同來(lái)源及分子量大小的樣品電泳圖。圖5是山東福瑞達(dá)低分子透明質(zhì)酸產(chǎn)品電泳圖。圖6是山東銀河生物技術(shù)有限公司寡聚透明質(zhì)酸樣品電泳圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明公開(kāi)了一種低分子生物活性透明質(zhì)酸的新應(yīng)用及其新制劑，所述低分子生物活性透明質(zhì)酸是由透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得的低分子透明質(zhì)酸，所述低分子透明質(zhì)酸的分子量為5KD-250KD；所述透明質(zhì)酸酶為以下酶中的一種或幾種：酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、植物生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、細(xì)菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、動(dòng)物提取的透明質(zhì)酸酶；所述低分子生物活性透明質(zhì)酸的應(yīng)用是作為人皮膚粘膜抗炎生物活性物質(zhì)，和/或促進(jìn)人皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌防衛(wèi)素2的生物活性物質(zhì)，和/或控制皮膚油脂分泌的生物活性物質(zhì)的應(yīng)用。需要說(shuō)明的是，本發(fā)明是在前期工作的基礎(chǔ)上層層遞進(jìn)和深入大規(guī)模人體研究獲得的。根據(jù)我們前期的研究成果，包括：[1]MizhouHui，雞β肌動(dòng)蛋白基因內(nèi)含子1的用途，專利申請(qǐng)?zhí)?00780052196.7。[2]MizhouHui等，一種長(zhǎng)效透明質(zhì)酸酶的基因順序、生產(chǎn)方法和應(yīng)用，專利申請(qǐng)?zhí)? 201310325056.X。[3]MizhouHui等，一種重組人透明質(zhì)酸酶、其生產(chǎn)純化方法、制劑及使用方法與應(yīng)用，專利申請(qǐng)?zhí)?01310454955.X。[4]MizhouHui，一種生物活性透明質(zhì)酸片段的生產(chǎn)方法、制劑和應(yīng)用，專利申請(qǐng)?zhí)?014101553593.5。[5]MizhouHui,一種生物活性透明質(zhì)酸凝膠制劑，專利申請(qǐng)?zhí)?01510065499.9。[6]MizhouHui,一種生物活性透明質(zhì)酸糖漿制劑，專利申請(qǐng)?zhí)?01510065498.4。[7]MizhouHui,一種生物活性透明質(zhì)酸牙膏，專利申請(qǐng)?zhí)?01510067326.0。[8]MizhouHui,一種外用復(fù)方制劑，專利申請(qǐng)?zhí)?01510333526.6，我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶切割成10-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸(生物活性透明質(zhì)酸)有強(qiáng)大的皮膚粘膜抗炎生物活性(類似氫化可的松的抗炎作用)和促進(jìn)皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和進(jìn)一步抑制炎癥的作用。這種生物活性透明質(zhì)酸可以生產(chǎn)抗炎殺菌活性的各種日用品、衛(wèi)生用品、化妝品、個(gè)人護(hù)膚品、醫(yī)療器械、醫(yī)藥產(chǎn)品，也可能取代常規(guī)的皮質(zhì)激素氫化可的松皮膚粘膜制劑和25-50倍減少?gòu)?qiáng)效皮質(zhì)激素曲安奈德皮膚粘膜制劑。炎癥是萬(wàn)病之源，也是衰老的主要原因。這個(gè)發(fā)明第一次將普通大分子透明質(zhì)酸(即人體建筑材料)改造成有強(qiáng)大皮膚粘膜抗炎(即取代皮質(zhì)激素抗炎)生物活性的生物材料，第一次找到了人抗菌肽防衛(wèi)素2安全的誘導(dǎo)劑，第一次為低分子透明質(zhì)酸的應(yīng)用、市場(chǎng)和生產(chǎn)方法找到了皮膚粘膜抗炎生物活性(類似氫化可的松的抗炎作用)和促進(jìn)皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和進(jìn)一步抑制炎癥的新方向。我們目前可以確定以上強(qiáng)大皮膚粘膜抗炎生物活性和促進(jìn)皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和進(jìn)一步抑制炎癥的生物活性與普通大分子透明質(zhì)酸被重組人透明質(zhì)酸酶切割的末端數(shù)多少有關(guān)，末端數(shù)越多，抗炎和誘導(dǎo)抗菌肽防衛(wèi)素2分泌越好[1、2、 3、4、5、6、7、8]；分子量越小，皮膚粘膜吸收越好，抗炎和誘導(dǎo)抗菌肽防衛(wèi)素2分泌的效果也越好，但保護(hù)和濕化皮膚的效果越差。鑒于為什么動(dòng)物細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶切割普通大分子透明質(zhì)酸有強(qiáng)大的皮膚粘膜抗炎生物活性和促進(jìn)皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和進(jìn)一步抑制炎癥[1、2、3、4、5、6、7、8]的機(jī)理還不清楚，我們只能通過(guò)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究解決。以上問(wèn)題不能排除殘留的動(dòng)物細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶和被切割的透明質(zhì)酸片段與皮膚粘膜組織的共同作用和有兩條信號(hào)傳導(dǎo)路，也不能排除動(dòng)物細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶切割普通大分子透明質(zhì)酸有區(qū)別于其它切割方法，還不能排除我們的生產(chǎn)工藝有區(qū)別于其它低分子透明質(zhì)酸生產(chǎn)工藝或者其它低分子透明質(zhì)酸生產(chǎn)工藝含有的不同雜質(zhì)(包括未知因素如內(nèi)毒素、小于5KD的透明質(zhì)酸碎片、Mg離子、Ca離子、Na離子等)是否影響低分子透明質(zhì)酸的抗炎活性。將普通無(wú)明顯生物活性的大分子透明質(zhì)酸(或不同方法生產(chǎn)的低分子透明質(zhì)酸原料)制造和人體驗(yàn)證成可作為人皮膚粘膜抗炎(即取代皮質(zhì)激素抗炎)和誘導(dǎo)人皮膚粘膜、促進(jìn)TLR4受體陽(yáng)性細(xì)胞分泌抗菌肽防衛(wèi)素2和皮膚控油的生物活性原料和產(chǎn)品是一個(gè)很難預(yù)知的過(guò)程。由于生產(chǎn)日用品、衛(wèi)生用品、化妝品、個(gè)人護(hù)膚品可能不需要生產(chǎn)高純度的生物活性透明質(zhì)酸原料，我們需要研發(fā)價(jià)格更低廉的能活化或使普通透明質(zhì)酸獲得的皮膚粘膜抗炎(即取代皮質(zhì)激素抗炎)生物活性和促進(jìn)皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2的生物活性透明質(zhì)酸原料。因此，我們的研究實(shí)驗(yàn)關(guān)注植物和微生物(包括細(xì)菌和酵母)生產(chǎn)的重組人和重組非人透明質(zhì)酸酶切割成10-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸或更低分子量的低分子量的透明質(zhì)酸是否有明顯的的皮膚粘膜抗炎生物活性和促進(jìn)皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和進(jìn)一步抑制炎癥的生物活性；以及采用物 理化學(xué)方法(高溫、臭氧、高堿和強(qiáng)酸)切割普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)形成的10-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸或更低分子量的低分子量的透明質(zhì)酸是否有明顯的的皮膚粘膜抗炎生物活性和促進(jìn)皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和進(jìn)一步抑制炎癥的生物活性。解決以上這些問(wèn)題有重大的科研、產(chǎn)品開(kāi)發(fā)、產(chǎn)品專利、商業(yè)和工業(yè)價(jià)值。國(guó)外動(dòng)物實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)([9]HARRYONOJUDODIHARDJO1andPETERDYKES,Smallhyaluronanoligosaccharidesinduceinflammationbyengagingbothtoll-like-4andCD44receptorsinhumanchondrocytes,Articlefirstpublishedonline:2JUN2008,DOI:10.1111/j.1524-4725.2008.34252.x[10]McKee，C.M.，M.B.Penno，M.Cowman，M.D.Burdick，R.M.Strieter，C.Bao,P.W.Noble.1996.Hyaluronan(HA)fragmentsinducechemokinegeneexpressioninalveolarmacrophages:theroleofHAsizeandCD44.J.Clin.Invest.98:2403–2413.[11]Noble，P.W.，C.M.McKee，M.Cowman，H.S.Shin.1996.HyaluronanfragmentsactivateanNF-κB/I-κBαautoregulatoryloopinmurinemacrophages.J.Exp.Med.183:2373–2378.[12]Li，Z.，E.N.Potts，C.A.Piantadosi，W.M.Foster，J.W.Hollingsworth.2010.Hyaluronanfragmentscontributetotheozone-primedimmuneresponsetolipopolysaccharide.J.Immunol.185:6891–6898.[13]Nakamura，K.，S.Yokohama，M.Yoneda，S.Okamoto，Y.Tamaki，T.Ito,M.Okada，K.Aso，I.Makino.2004.High，butnotlow，molecularweighthyaluronanpreventsT-cell-mediatedliverinjurybyreducingproinflammatorycytokinesinmice.J.Gastroenterol.39:346–354.[14]Jiang，D.，J.Liang，J.Fan，S.Yu，S.Chen，Y.Luo，G.D.Prestwich,M.M.Mascarenhas，H.G.Garg， D.A.Quinn，etal.2005.RegulationoflunginjuryandrepairbyToll-likereceptorsandhyaluronan.Nat.Med.11:1173–1179.[15]Scheibner，K.A.，M.A.Lutz，S.Boodoo，M.J.Fenton，J.D.Powell,M.R.Horton.2006.HyaluronanfragmentsactasanendogenousdangersignalbyengagingTLR2.J.Immunol.177:1272–1281)表明低分子量的透明質(zhì)酸在動(dòng)物和細(xì)胞水平有促進(jìn)炎癥的作用，但我們認(rèn)為，低分子量的透明質(zhì)酸的人體功能可能需人體實(shí)驗(yàn)才能獲得驗(yàn)證，我們未發(fā)表的合作動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也支持低分子量的透明質(zhì)酸在動(dòng)物和人體的實(shí)驗(yàn)效果不同。目前，中國(guó)透明質(zhì)酸的生產(chǎn)廠家很多，主要使用微生物發(fā)酵方法，多選用鏈球菌或乳酸球菌做菌種，以葡萄糖作為碳源發(fā)酵液，發(fā)酵結(jié)束后，過(guò)濾除去菌絲體和雜質(zhì)，然后乙醇沉淀得到高純度的透明質(zhì)酸產(chǎn)物；其次，部分生產(chǎn)廠家采用雞冠、魚(yú)眼和動(dòng)物眼提取方法生產(chǎn)透明質(zhì)酸。但這些透明質(zhì)酸的主要用途是作為保濕護(hù)膚品或化妝品使用。本發(fā)明公開(kāi)了一種低分子生物活性透明質(zhì)酸的新應(yīng)用及新制劑。這種低分子生物活性透明質(zhì)酸不是以前報(bào)道的使用CHO細(xì)胞生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶PH20切割大分子透明質(zhì)酸制成的分子量為10KD-100KD透明質(zhì)酸片段，不是使用物理化學(xué)方法(包括高溫、臭氧、高堿和強(qiáng)酸)切割普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)制成的低分子量的透明質(zhì)酸，而是普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)通過(guò)以下酶中的一種或幾種進(jìn)行酶切：酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、植物生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、細(xì)菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、動(dòng)物提取的透明質(zhì)酸酶，獲得的5-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸。我們的研究發(fā)現(xiàn)人皮膚粘膜抗炎生物活性可以被細(xì)菌內(nèi)毒素污染和分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段或透明質(zhì)酸碎片減低和抑制，因此，所述低分子生物活性透明質(zhì)酸不能有過(guò)量細(xì)菌內(nèi)毒素污染和分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段或透明質(zhì)酸碎片的污染，所述的低分子 生物活性透明質(zhì)酸有明顯的人皮膚粘膜抗炎(即取代皮質(zhì)激素抗炎)生物活性、促進(jìn)人皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2(可進(jìn)一步抑制人皮膚粘膜炎癥)和控制皮膚油脂分泌的生物活性，可用于生產(chǎn)日用品、衛(wèi)生用品、化妝品、個(gè)人護(hù)膚品、醫(yī)療器械、醫(yī)藥等多個(gè)領(lǐng)域。所述的低分子生物活性透明質(zhì)酸可用于生產(chǎn)日用品、衛(wèi)生用品、化妝品、個(gè)人護(hù)膚品、醫(yī)療器械、醫(yī)藥，所述的日用品、衛(wèi)生用品、化妝品、個(gè)人護(hù)膚品、醫(yī)療器械、醫(yī)藥包括眼部護(hù)理液或滴或潤(rùn)眼液或眼部美容液、皮膚噴劑或爽膚水、尿布性皮炎噴劑或嬰兒皮膚護(hù)理液、液體創(chuàng)口貼或創(chuàng)口貼、口腔牙齦鼻咽噴劑、面膜、頭皮護(hù)理液、陰道護(hù)理液、低或潤(rùn)眼液、避孕套潤(rùn)滑液、飲品或乳品添加劑或食品補(bǔ)充膠囊。所述的低分子生物活性透明質(zhì)酸的制劑可以是噴劑、滴劑、護(hù)理劑、貼劑、漱口口服劑、飲品添加劑、肺吸入劑、干粉口服劑等。以下通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的實(shí)施例僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。實(shí)施例1目的：微生物(酵母菌)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶的酶切和動(dòng)物細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶的酶切效果；方法：比較2％的普通大分子透明質(zhì)酸(HA)在相同時(shí)間下加入不同酶的酶切效果；取HA粉100g加生理鹽水+Mg離子+Ca離子溶解，分裝成30ml/管，加入1000-14000u/g(HA)濃度的不同酶，37℃酶切4hr。結(jié)果：如圖1所示，泳道1-6為動(dòng)物細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶的酶切效果，泳道9-14為微生物(酵母菌)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶的酶切效果，泳道7-8為150KD和50KD標(biāo)準(zhǔn)品；結(jié)論：微生物(酵母菌)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶的酶切分子量大小與動(dòng)物 細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶的酶切的分子量大小無(wú)明顯差別，批量生產(chǎn)可用于人皮膚粘膜抗炎生物活性和促進(jìn)人皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和進(jìn)一步抑制炎癥的生物活性研究。實(shí)施例2目的：微生物(細(xì)菌)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶的酶切和動(dòng)物細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶的酶的酶切效果；方法：比較2％的普通大分子透明質(zhì)酸(HA)在相同時(shí)間下加入不同酶的酶切效果；取HA粉100g加生理鹽水+Mg離子+Ca離子溶解，分裝成30ml/管，加入1000-14000u/g(HA)濃度的不同酶，37℃酶切4hr。結(jié)果：如圖2所示，泳道1-6為動(dòng)物細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的有糖化的重組人透明質(zhì)酸酶的酶切效果，泳道9-14為微生物(細(xì)菌)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶的酶切效果，泳道7-8為150KD和50KD標(biāo)準(zhǔn)品；結(jié)論：微生物(細(xì)菌)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶的酶切分子量大小無(wú)明顯差別，批量生產(chǎn)可用于人皮膚粘膜抗炎生物活性和促進(jìn)人皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和控制皮膚油脂分泌的生物活性研究。實(shí)施例3目的：準(zhǔn)備普通大分子透明質(zhì)酸和高溫降解、臭氧降解、酸堿降解方法制造低分子透明質(zhì)酸，用于人皮膚粘膜抗炎生物活性和促進(jìn)人皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和控制皮膚油脂分泌的生物活性研究。方法：使用普通大分子透明質(zhì)酸和1#高溫降解2#高溫降解3#臭氧降解4#臭氧降解5#酸堿降解7酸堿降解等方法制造低分子透明質(zhì)酸，用于人皮膚粘膜抗炎生物活性和促進(jìn)人皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺 菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和進(jìn)一步抑制炎癥的生物活性研究。結(jié)果：如圖3所示。結(jié)論：物理化學(xué)方法(高溫、臭氧、高堿和強(qiáng)酸)切割普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)生產(chǎn)制造的低分子透明質(zhì)酸分子量5-25KD，批量生產(chǎn)可用于人皮膚粘膜抗炎生物活性和促進(jìn)人皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和控制皮膚油脂分泌的生物活性研究。實(shí)施例4目的：1、測(cè)定山東銀河生物技術(shù)有限公司采用物理化學(xué)方法(高溫、臭氧、高堿和強(qiáng)酸)切割普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)生產(chǎn)的制造40-50KD低分子透明質(zhì)酸和150-250KD低分子透明質(zhì)酸樣品；2、測(cè)定山東福瑞達(dá)采用物理化學(xué)方法切割結(jié)合微生物(酵母菌)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶酶切普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)生產(chǎn)的制造的5-10KD低分子透明質(zhì)酸產(chǎn)品(商品名納諾)；方法：采用TBE電泳法，采用的膠濃度為2.5％(增加低分子量樣品的分辨率)，在90V電壓、4℃條件下電泳80min，0.5％阿爾新藍(lán)8GX搖床晃動(dòng)染色2h，0.2％冰醋酸脫色過(guò)夜，掃描記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果；將噴樣品分別稀釋或復(fù)溶至濃度2％，經(jīng)TBE上樣緩沖液處理的樣品、50KD標(biāo)準(zhǔn)品、150KD標(biāo)準(zhǔn)品分別20ul上樣；結(jié)果：一、如圖4所示，泳道1為150KD透明質(zhì)酸標(biāo)準(zhǔn)品，泳道2為150-250KD透明質(zhì)酸標(biāo)準(zhǔn)品(山東銀河生物技術(shù)有限公司)，泳道7為40-50KD低分子透明質(zhì)酸產(chǎn)品(山東銀河生物技術(shù)有限公司)，泳道8為50KD透明質(zhì)酸標(biāo)準(zhǔn)品。二、如圖5所示，泳道1的10KD為山東福瑞達(dá)低分子透明質(zhì)酸產(chǎn)品(納 諾)，測(cè)定分子量為5-10KD。三、如圖6所示，泳道1的10KD為山東銀河生物技術(shù)有限公司寡聚透明質(zhì)酸樣品，測(cè)定分子量為5-10KD。結(jié)論：采用物理化學(xué)方法和微生物(酵母菌)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶酶切普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)生產(chǎn)制造的5-250KD低分子或寡聚透明質(zhì)酸產(chǎn)品可以用于人皮膚粘膜抗炎生物活性和促進(jìn)人皮膚粘膜組織和TLR4陽(yáng)性細(xì)胞分泌殺菌、殺真菌、抗病毒的抗菌肽防衛(wèi)素2和控制皮膚油脂分泌的生物活性研究。實(shí)施例5目的：使用HT-29上皮細(xì)胞系測(cè)定受試低分子透明質(zhì)酸誘導(dǎo)人防衛(wèi)素2分泌的生物活性；方法：人類腸道腫瘤的HT-29上皮細(xì)胞系(生物活性透明質(zhì)酸片段受體TLR4和CD44陽(yáng)性)在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)用RPMI培養(yǎng)液中培養(yǎng)，補(bǔ)充10％的小牛血清(FBS)。RPMI培養(yǎng)液含有受試低分子透明質(zhì)酸，用來(lái)刺激HT-29上皮細(xì)胞系生產(chǎn)人防衛(wèi)素2(HβD2)，人防衛(wèi)素2使用酶聯(lián)免疫試劑盒(PhoenixPharmaceuticals)定量測(cè)定(樣本數(shù)＝3)。HT-29上皮細(xì)胞系的RPMI培養(yǎng)液基礎(chǔ)人防衛(wèi)素2分泌水平為7±4pg/ml，在HT-29上皮細(xì)胞系的RPMI培養(yǎng)液加入0.2％有活性的受試低分子透明質(zhì)酸，HT-29上皮細(xì)胞系的培養(yǎng)液中人防衛(wèi)素2在24小時(shí)內(nèi)最高增加8倍。結(jié)果：見(jiàn)表1。表1HT-29上皮細(xì)胞系測(cè)定受試低分子透明質(zhì)酸誘導(dǎo)人防衛(wèi)素2分泌的結(jié)果結(jié)論：1、動(dòng)物細(xì)胞、植物、微生物(包括細(xì)菌和酵母)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶和動(dòng)物提取的透明質(zhì)酸酶切割成5-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸有促進(jìn)HT-29上皮細(xì)胞分泌防衛(wèi)素2的生物活性；2、采用物理化學(xué)方法(高溫、臭氧、高堿和強(qiáng)酸)切割普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)形成的5-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸也有一定的可探測(cè)的促進(jìn)HT-29上皮細(xì)胞分泌防衛(wèi)素2的生物活性。實(shí)施例6目的：測(cè)定受試低分子透明質(zhì)酸誘導(dǎo)人皮膚粘膜防衛(wèi)素2分泌的生物活性；方法：2.0％受試低分子透明質(zhì)酸噴涂擦皮膚、牙齦粘膜、人咽部粘膜、人陰道粘膜、人眼結(jié)膜(樣本數(shù)＝3)采集體液使用人防衛(wèi)素2使用酶聯(lián)免疫試劑盒(PhoenixPharmaceuticals)測(cè)定。注：防衛(wèi)素2<10pg/ml為陰性；防衛(wèi)素2>20pg/ml為陽(yáng)性+；防衛(wèi)素2>30pg/ml為陽(yáng)性++；防衛(wèi)素2>40pg/ml為陽(yáng)性+++；防衛(wèi)素2>50pg/ml為陽(yáng)性++++；防衛(wèi)素2>60pg/ml為陽(yáng)性+++++；防衛(wèi)素2>70pg/ml為陽(yáng)性++++++；防衛(wèi)素2>80pg/ml為陽(yáng)性+++++++；防衛(wèi)素2在10-20pg/ml之間為±。結(jié)果：見(jiàn)下表2。表2受試低分子透明質(zhì)酸誘導(dǎo)人皮膚粘膜防衛(wèi)素2分泌的測(cè)定結(jié)果結(jié)論：1、動(dòng)物細(xì)胞、植物、微生物(包括細(xì)菌和酵母)生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶和動(dòng)物提取的透明質(zhì)酸酶切割成5-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸有誘導(dǎo)人皮膚粘膜防衛(wèi)素2分泌的生物活性；2、采用物理化學(xué)方法(高溫、臭氧、高堿和強(qiáng)酸)切割普通透明質(zhì)酸(即大分子透明質(zhì)酸)形成的5-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸基本沒(méi)有促進(jìn)誘導(dǎo)人皮膚粘膜防衛(wèi)素2分泌的生物活性；3、分子量小于5KD透明質(zhì)酸碎片沒(méi)有促進(jìn)誘導(dǎo)人皮膚粘膜防衛(wèi)素2分泌的生物活性。實(shí)施例7目的：研究不同凝膠劑輔料對(duì)低分子量5-250KD的生物活性透明質(zhì)酸的人體皮膚抗炎生物活性的影響。方法：研究使用微生物(酵母菌)生產(chǎn)的重組人和非人透明質(zhì)酸酶切割成5-10KD、10-100KD和10-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸1:1:1混合物(即分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸)的人體皮膚抗炎生物活性。本實(shí)驗(yàn)研究不同凝膠劑輔料對(duì)分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸治療皮膚炎癥性疾病效果的影響。本實(shí)驗(yàn)的小動(dòng)物預(yù)實(shí)驗(yàn)已發(fā)現(xiàn)凝膠劑輔料羥丙甲纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、殼聚糖、聚乙二醇、海藻酸鈉均降低或不增加分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸的人體生物活性。本實(shí)驗(yàn)所有病例均為皮膚炎癥性疾病患者，實(shí)驗(yàn)組1(卡波姆)采用2％卡波姆+3％低分子量的透明質(zhì)酸凝膠每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組2(羧甲基纖維素鈉)采用2％羧甲基纖維素鈉+3％分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸膠(膏)每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組3(海藻酸鈉)采用2％海藻酸鈉+3％分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸膠(膏)每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組4(酵母蛋白水解物)采用2％酵母蛋白水解物+3％分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸膠(膏)每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組5(內(nèi)毒素LPS抑制)采用2％卡波姆+3％低分子量的透明質(zhì)酸+LPS內(nèi)毒素10微克/毫升凝膠每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組6(分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段污染，即無(wú)效透明質(zhì)酸抑制)采用2％卡波姆+3％低分子量的透明質(zhì)酸+3％分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段凝膠每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；陽(yáng)性對(duì)照采用已知有效的3％分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸噴劑每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；陰性對(duì)照采用2％卡波姆凝膠每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；比較五組治療5天后癥狀和體征改善情況。瘙癢不適癥狀療效評(píng)價(jià)：顯效：癥狀顯著改善或消失，患者滿意；有效：癥狀有改善或減輕，患者仍有不適，要求繼續(xù)治療；無(wú)效：癥狀無(wú)明顯減輕，患者不滿意。體征療效評(píng)價(jià)：顯效：紅色明顯變淺，破損明顯減輕；有效：紅色開(kāi)始變淺，破損減輕；無(wú)效：紅色沒(méi)有變淺，破損沒(méi)有減輕。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量和計(jì)數(shù)資料組間比較采用t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)，以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。結(jié)果：如表3所示，第5天癥狀改善情況：實(shí)驗(yàn)組1顯效8例，有效2例，總有效率100％；實(shí)驗(yàn)組2有效8例，無(wú)效2例，總有效率80％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；實(shí)驗(yàn)組3有效7例，無(wú)效3例，總有效率70％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；實(shí)驗(yàn)組4有效6例，無(wú)效4例，總有效率60％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01。表3第5天兩組患者癥狀改善情況比較如表4所示，第5天臨床體征改善情況：實(shí)驗(yàn)組1顯效9例，有效，1例，總有效率100％；實(shí)驗(yàn)組2有效8例，無(wú)效2例，總有效率80％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；實(shí)驗(yàn)組3有效7例，無(wú)效3例，總有效率70％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；實(shí)驗(yàn)組4有效6例，無(wú)效4例，總有效率60％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01。表4第5天兩組患者體征改善情況比較。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)組1(卡波姆)明顯比實(shí)驗(yàn)組2(羧甲基纖維素鈉)、實(shí)驗(yàn)組3(海藻酸鈉)、實(shí)驗(yàn)組4(酵母蛋白水解物)有效，用人體實(shí)驗(yàn)表明(1)卡波姆對(duì)分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸治療皮膚炎癥體征紅、破損和瘙癢癥狀的療效有明顯協(xié)同作用；(2)羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉、酵母蛋白水解物對(duì)分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸治療皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的療效沒(méi)有促進(jìn)作用；(3)內(nèi)毒素和分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段污染都對(duì)分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸治療皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的療效有抑制作用。實(shí)施例8目的：研究不同濃度卡波姆凝膠輔料對(duì)低分子量5-250KD的透明質(zhì)酸的人體皮膚抗炎生物活性的影響。方法：制造使用微生物(酵母菌)生產(chǎn)的重組人和非人透明質(zhì)酸酶切割成5-10KD、10-100KD和10-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸1:1:1混合物(即分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸)0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％和卡波姆1.5％、2.0％、2.5％、3.0％凝膠，其余輔料為甘油、氯化鈉、香精、尼泊金甲酯鈉、尼泊金丙酯鈉，且不調(diào)整甘油、氯化鈉、香精、尼泊金甲酯鈉、尼泊金丙酯鈉的％含量。本實(shí)驗(yàn)所有病例均為皮膚炎癥性疾病患者，實(shí)驗(yàn)組1-5分別采用卡波姆1.5％+分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％凝膠，每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組6-10分別采用卡波姆2.0％+分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％凝膠，每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組11-15分別采用卡波姆2.5％+分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％凝膠，每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組16-20分別采用卡波姆3.0％+分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％凝膠，每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；陽(yáng)性對(duì)照1-5分別采用0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；陰性對(duì)照使用卡波姆3.0％(無(wú)分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸)凝膠，每天涂抹6次，觀察治療后皮膚炎癥體癥紅、破損和瘙癢癥狀的情況；每組5個(gè)病人，比較20組治療3天后癥狀和體征改善情況。瘙癢不適癥狀療效評(píng)價(jià)：顯效：癥狀顯著改善或消失，患者滿意；有效：癥狀有改善或減輕，患者仍有不適，要求繼續(xù)治療；無(wú)效：癥狀無(wú)明顯減輕，患者不滿意。。體征療效評(píng)價(jià)：顯效：紅色明顯變淺，破損明顯減輕；有效：紅色開(kāi)始變淺，破損減輕；無(wú)效：紅色沒(méi)有開(kāi)始變淺，破損沒(méi)有減輕。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量和計(jì)數(shù)資料組間比較采用t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)，以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。結(jié)果：表5第4天各組患者癥狀改善情況比較如表5中所示，第4天各實(shí)驗(yàn)組組患者癥狀改善情況比較，P>0.05，各組無(wú)差別。表6第4天各組患者體征改善情況比較如表6中所示，第4天各實(shí)驗(yàn)組組患者體征改善情況比較，P>0.05，各組無(wú)差別。結(jié)論：經(jīng)人體使用實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明使用0.6％、1.5、2.0、2.5、3.0％ 分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸和1.5、2.0、2.5、3.0％卡波姆制造的凝膠對(duì)皮膚炎癥均有治療效果。使用小于1.5％和大于3.0％卡波姆制造凝膠生產(chǎn)和使用開(kāi)始不現(xiàn)實(shí)(即太少不能實(shí)現(xiàn)膏狀，太多缺乏可流動(dòng)性)，不在本實(shí)驗(yàn)認(rèn)證范圍。實(shí)施例9本發(fā)明的分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸凝膠制劑包括：水、低分子生物活性透明質(zhì)酸、卡波姆、甘油、氯化鈉、香精、苯氧乙醇、羥苯甲酯、羥苯乙酯、乙基己基甘油。本發(fā)明分子量5-250KD低分子透明質(zhì)酸凝膠可制成日用護(hù)膚品和化妝品、醫(yī)療器械凝膠、處方藥凝膠。實(shí)施例10目的：研究不同牙膏輔料對(duì)分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸的人體牙齦抗炎生物活性的影響。方法：制造使用微生物(酵母菌)生產(chǎn)的重組人和非人透明質(zhì)酸酶切割成5-10KD和10-100KD的低分子量的透明質(zhì)酸1:1混合物(即分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸)。首先進(jìn)行了小動(dòng)物和細(xì)胞學(xué)預(yù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)有機(jī)合成膠類牙膏增稠劑羧甲基纖維素鈉、羥乙基纖維素、卡波樹(shù)脂和天然植物膠牙膏增稠劑黃原膠、改性瓜爾膠、卡拉膠、無(wú)機(jī)膠牙膏增稠劑增稠型二氧化硅、膠性硅酸鎂鋁均降低或不增加分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸的人體生物活性。現(xiàn)采用人體實(shí)驗(yàn)的方法檢測(cè)分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸的人體生物活性，即不同牙膏增稠劑對(duì)分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸治療牙齦炎效果的影響。本實(shí)驗(yàn)所有病例均為牙齦炎患者，實(shí)驗(yàn)組1采用山梨糖醇60％+分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸2％牙膏每天刷牙2次；實(shí)驗(yàn)組2采用黃原膠60％+分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸2％牙膏每天刷牙2次；實(shí)驗(yàn)組3采用羧甲 基纖維素鈉60％+分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸2％牙膏每天刷牙2次；實(shí)驗(yàn)組4(內(nèi)毒素LPS抑制)采用山梨糖醇60％+分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸2％牙膏+LPS內(nèi)毒素10微克/毫升每天刷牙2次；實(shí)驗(yàn)組5(分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段污染，即無(wú)效透明質(zhì)酸抑制)采用山梨糖醇60％+分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸2％+2％分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段牙膏每天刷牙2次；陽(yáng)性對(duì)照采用2％分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸每天刷牙2次；陰性對(duì)照采用普通牙膏每天刷牙2次；比較五組治療3天后癥狀和體征改善情況。牙齦癢、不適、脹痛、口臭癥狀療效評(píng)價(jià)：顯效：癥狀顯著改善或消失，患者滿意；有效：癥狀有改善或減輕，患者仍有不適，要求繼續(xù)治療；無(wú)效：癥狀無(wú)明顯減輕，患者不滿意。體征療效評(píng)價(jià)：顯效：牙齦出血、牙齦顏色改變、探診出血3個(gè)體征全部改善；有效：牙齦出血、牙齦顏色2個(gè)體征有改善，探診出血不改善；無(wú)效：牙齦出血、牙齦顏色、探診出血3個(gè)體征均無(wú)改善。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量和計(jì)數(shù)資料組間比較采用t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)，以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。結(jié)果：如表7所示，第4天癥狀改善情況：實(shí)驗(yàn)組1顯效10例，總有效率100％；實(shí)驗(yàn)組2顯效0例，有效6例，無(wú)效4例，總有效率60％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；實(shí)驗(yàn)組3顯效0例，有效10例，總有效率100％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；陽(yáng)性對(duì)照顯效5例，有效5例，總有效率100％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.05。表7第4天各組患者癥狀改善情況比較如表8所示，第4天臨床體征改善情況：實(shí)驗(yàn)組1顯效10例，總有效率100％；實(shí)驗(yàn)組2顯效0例，有效5例，無(wú)效5例，總有效率50％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；實(shí)驗(yàn)組3顯效0例，有效8例，無(wú)效2例，總有效率80％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；陽(yáng)性對(duì)照顯效4例，有效6例，總有效率100％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01。表8第4天各組患者體征改善情況比較結(jié)論：實(shí)驗(yàn)組1(山梨糖醇)明顯比實(shí)驗(yàn)組2(黃原膠)、實(shí)驗(yàn)組3(羧甲基纖維素鈉)、陽(yáng)性對(duì)照有效。本發(fā)明用人體實(shí)驗(yàn)表明(1)山梨糖醇對(duì)分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸治療牙齦炎的療效有明顯協(xié)同作用；(2)黃原膠對(duì)分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸治療牙齦炎的療效有抑制作用；(3)羧甲基纖維素鈉與陽(yáng)性對(duì)照相比，療效沒(méi)有顯著差異；(4)內(nèi)毒素和分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段污染對(duì)分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸治療牙齦炎的療效有抑制作用。實(shí)施例11目的：研究不同濃度山梨糖醇輔料對(duì)分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸的人體牙齦抗炎生物活性的影響。方法：制造使用微生物(酵母菌)生產(chǎn)的重組人和非人透明質(zhì)酸酶切割成5-10KD和10-100KD的低分子量的透明質(zhì)酸1:1混合物(即分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸)。制造0.4％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸和30％、40％、50％、60％、70％山梨糖醇牙膏，適當(dāng)調(diào)整聚乙二醇400、糖精鈉、海藻酸鈉、月桂醇硫酸酯鈉、水合硅石DS100、水合硅石DS200、苯甲酸鈉、香精、水的百分含量。本實(shí)驗(yàn)所有病例均為牙齦炎患者，實(shí)驗(yàn)組1-5分別采用山梨糖醇30％+分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸0.4％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％牙膏每天刷牙2次，觀察牙齦炎治療后的情況；實(shí)驗(yàn)組6-10分別采用山梨糖醇40％+分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸0.4％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％牙膏每天刷牙2次，觀察牙齦炎治療后的情況；實(shí)驗(yàn)組11-15分別采用山梨糖醇50％+分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸0.4％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％牙膏每天刷牙2次，觀察牙齦炎治療后的情況；實(shí)驗(yàn)組16-20分別采用山梨糖醇60％+分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸0.4％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％牙膏每天刷牙2次，觀察牙齦炎治療后的情況；實(shí)驗(yàn)組21-25分別采用山梨糖醇70％+分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸0.4％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％牙膏每天刷牙2次，觀察牙齦 炎治療后的情況；陰性對(duì)照使用普通牙膏每天刷牙2次治療牙齦炎，觀察牙齦炎治療后的情況；陽(yáng)性對(duì)照1-5分別采用0.4％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸,每天刷牙2次，觀察牙齦炎治療后的情況；每組5個(gè)病人，比較25組治療3天后癥狀和體征改善情況。牙齦癢、不適、脹痛、口臭癥狀療效評(píng)價(jià)、體征療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)同上。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量和計(jì)數(shù)資料組間比較采用t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)，以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。結(jié)果：表9第4天各組患者癥狀改善情況比較如表9中所示，第4天各實(shí)驗(yàn)組組患者癥狀改善情況比較，P>0.05,無(wú)差別。表10第4天各組患者體征改善情況比較如表10中所示，第4天各實(shí)驗(yàn)組組患者體征改善情況比較，P>0.05,無(wú)差別。結(jié)論：經(jīng)人體使用實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明使用0.4％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸和30％、40％、50％、60％、70％山梨糖醇制造的牙膏對(duì)牙齦炎癥均有治療效果。使用小于30％和大于70％山梨糖醇制造牙膏生產(chǎn)和使用開(kāi)始不現(xiàn)實(shí)(即太少不能實(shí)現(xiàn)膏狀，太多缺乏可流動(dòng)性)，不在本實(shí)驗(yàn)認(rèn)證范圍。實(shí)施例12本發(fā)明分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸牙膏的配方為：分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸0.4-4.0％、山梨糖醇30-70％、聚乙二醇4001-5％、糖精鈉0.02-0.2％、海藻酸鈉0.03-0.3％、月桂醇硫酸酯鈉0.2-2％、水合硅石DS1000.5-16.2％、水合硅石DS2000.2-4％、苯甲酸鈉0.03-0.3％、香精0.5-1.1％， 余量為水。優(yōu)選地，所述牙膏中包括重量百分比的以下物質(zhì)：低分子透明質(zhì)酸2％、山梨糖醇60％、聚乙二醇4005％、糖精鈉0.2％、海藻酸鈉0.3％、月桂醇硫酸酯鈉2％、水合硅石DS10016.2％、水合硅石DS2004％、苯甲酸鈉0.3％、香精1.1％，余量為水。實(shí)施例13目的：研究不同糖漿制劑輔料對(duì)生物活性透明質(zhì)酸的人體咽粘膜抗炎生物活性的影響。方法：從福瑞達(dá)采購(gòu)或制造使用微生物(酵母菌)生產(chǎn)的重組人和非人透明質(zhì)酸酶切割成5-10KD的低分子量的透明質(zhì)酸(即分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸)。本實(shí)驗(yàn)采用人體實(shí)驗(yàn)的方法檢測(cè)分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸的人體生物活性，即不同高濃度膠膏劑輔料對(duì)分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸治療喉咽部炎癥效果的影響。本實(shí)驗(yàn)先期的小動(dòng)物預(yù)實(shí)驗(yàn)已發(fā)現(xiàn)膠(膏)劑輔料黃原膠、改性瓜爾膠、卡拉膠、果膠、明膠、素肉粉、瓊脂、淀粉(還包括膠原蛋白、大豆蛋白水解物、酵母蛋白水解物)均降低或不增加分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸的人體生物活性。本實(shí)驗(yàn)所有病例均為咽喉炎患者，實(shí)驗(yàn)組1(山梨糖醇)采用山梨糖醇40％+分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸10％低糖糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組2(黃原膠)采用黃原膠40％+分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸10％低糖糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組3(淀粉)采用淀粉40％+分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸10％低糖糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組4(酵母蛋白水解物)采用酵母蛋白水解物40％+ 分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸10％低糖糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組5(內(nèi)毒素抑制)采用山梨糖醇40％+分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸10％+內(nèi)毒素10微克/毫升低糖糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組6(分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段污染)采用山梨糖醇40％+分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸10％+分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段低糖糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；陽(yáng)性對(duì)照采用10％分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；陰性對(duì)照采用各種糖混合物40％糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；比較六組治療3天后癥狀和體征改善情況?？人园Y狀療效評(píng)價(jià)：顯效：癥狀顯著改善或消失，患者滿意；有效：癥狀有改善或減輕，患者仍有不適，要求繼續(xù)治療；無(wú)效：癥狀無(wú)明顯減輕，患者不滿意。體征療效評(píng)價(jià)：顯效：咽部紅色明顯變淺；有效：咽部紅色開(kāi)始變淺；無(wú)效：咽部紅色沒(méi)有開(kāi)始變淺。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量和計(jì)數(shù)資料組間比較采用t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)，以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。結(jié)果：如表11所示，第4天癥狀改善情況：實(shí)驗(yàn)組1顯效10例，總有效率100％；實(shí)驗(yàn)組2有效6例，無(wú)效4例，總有效率60％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；實(shí)驗(yàn)組3有效7例，無(wú)效3例，總有效率70％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；實(shí)驗(yàn)組4有效6例，無(wú)效4例，總有效率60％，顯效率 與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01。表11第4天各組患者癥狀改善情況比較如表12所示，第4天臨床體征改善情況：實(shí)驗(yàn)組1顯效10例，總有效率100％；實(shí)驗(yàn)組2有效6例，無(wú)效4例，總有效率60％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；實(shí)驗(yàn)組3有效7例，無(wú)效3例，總有效率70％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01；實(shí)驗(yàn)組4有效6例，無(wú)效4例，總有效率60％，顯效率與實(shí)驗(yàn)組1比較P<0.01。表12第4天各組患者體征改善情況比較結(jié)論：實(shí)驗(yàn)組1(山梨糖醇)明顯比實(shí)驗(yàn)組2(黃原膠)、實(shí)驗(yàn)組3(淀粉)、實(shí)驗(yàn)組4(酵母蛋白水解物)有效，用人體實(shí)驗(yàn)表明(1)山梨糖醇對(duì)分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸治療咽炎和咳嗽的療效有明顯協(xié)同作用；(2)黃原膠、淀粉、酵母蛋白水解物對(duì)分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸治療咽炎和咳嗽的療效沒(méi)有促進(jìn)作用；(3)內(nèi)毒素和分子量小于5KD的超低分子量透明質(zhì)酸片段污染對(duì)分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸治療咽炎和咳嗽的療效有抑制作用。實(shí)施例14分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸低糖糖漿配方(重量百分比)：分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸10％、山梨糖醇40％、白砂糖1％、紅糖2％、麥芽糖醇6.7％、薄荷香精0.01％、蜂蜜1％、苯甲酸鈉0.3％，余量為水。即實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)組1配方。實(shí)施例15目的：研究不同濃度山梨糖醇低糖糖漿輔料對(duì)分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸的人體體咽粘膜抗炎生物活性的影響。方法：制造6％、8％、10％、12％分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸和30％、40％、50％山梨糖醇低糖糖漿，適當(dāng)調(diào)整其它輔料的％含量。本實(shí)驗(yàn)所有病例均為咽喉炎患者，實(shí)驗(yàn)組1-4分別采用山梨糖醇30％+分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸6％、8％、10％、12％低糖糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組5-8分別采用 山梨糖醇40％+分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸6％、8％、10％、12％低糖糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；實(shí)驗(yàn)組9-12分別采用山梨糖醇50％+分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸6％、8％、10％、12％低糖糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；陽(yáng)性對(duì)照1-4分別采用6％、8％、10％、12％分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；陰性對(duì)照采用不含分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸的各種糖混合物糖漿每天含服6次，每次3-5ml，觀察治療后咽喉炎體癥和咽喉炎癥引起的咳嗽癥狀的情況；每組4個(gè)病人，比較12組治療3天后癥狀和體征改善情況?？人园Y狀療效評(píng)價(jià)：顯效：癥狀顯著改善或消失，患者滿意；有效：癥狀有改善或減輕，患者仍有不適，要求繼續(xù)治療；無(wú)效：癥狀無(wú)明顯減輕，患者不滿意。體征療效評(píng)價(jià)：顯效：咽部紅色明顯變淺；有效：咽部紅色開(kāi)始變淺；無(wú)效：咽部紅色沒(méi)有開(kāi)始變淺。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量和計(jì)數(shù)資料組間比較采用t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)，以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。結(jié)果：表13第4天各組患者癥狀改善情況比較以上各實(shí)驗(yàn)組組比較，P>0.05，無(wú)差別。表14第4天各組患者體征改善情況比較以上各實(shí)驗(yàn)組組比較，P>0.05，無(wú)差別。結(jié)論：經(jīng)人體使用實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明使用6％、8％、10％、12％分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸和30％、40％、50％山梨糖醇制造的低糖糖漿對(duì)咽喉炎癥均有治療效果。使用小于30％和大于50％山梨糖醇制造低糖糖漿生產(chǎn)和使用開(kāi)始不現(xiàn)實(shí)(即太少不能實(shí)現(xiàn)膏狀，太多缺乏可流動(dòng)性)，不在本實(shí)驗(yàn)認(rèn)證范圍。實(shí)施例16分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸低糖糖漿配方：分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸6-12％、山梨糖醇30-50％、白砂糖0.1-1％、紅糖0.5-2％、麥芽糖醇0.5-6.7％、薄荷香精0.001-0.01％、蜂蜜0.1-1％、苯甲酸鈉0.1-0.3％，余量為水。實(shí)施例17目的：測(cè)定分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸抑制皮膚油脂分泌生物活性。方法：從福瑞達(dá)采購(gòu)或制造使用微生物(酵母菌)生產(chǎn)的重組人和非人透明質(zhì)酸酶切割成5-10KD的低分子量的透明質(zhì)酸(即分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸)。使用0.2％和2.0％濃度的分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸噴或涂擦于多例油性皮膚正常人七例，8小時(shí)后使用皮膚水油檢測(cè)儀(電導(dǎo)方法)檢查皮膚油性情況。0.2％的商品普通大分子透明質(zhì)酸原液噴或涂擦于對(duì)稱部位作為無(wú)活性陰性對(duì)照。結(jié)果：0.2％和2.0％濃度的分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸噴或涂擦于油性皮膚，8小時(shí)后明顯抑制皮膚油性度，0.2％的商品大分子透明質(zhì)酸原液噴或涂擦于對(duì)稱部位沒(méi)有明顯抑制皮膚油性。結(jié)論：0.2％和2.0％濃度濃度的分子量5-10KD低分子透明質(zhì)酸有抑制皮膚油性的生物活性。實(shí)施例18目的：比較分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸卡波姆凝膠和合成皮質(zhì)激素曲安奈德卡波姆凝膠的皮膚創(chuàng)口抗炎效果。方法：制造使用微生物(酵母菌)生產(chǎn)的重組人和非人透明質(zhì)酸酶切割成5-10KD和10-100KD的低分子量的透明質(zhì)酸1:1混合物(即分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸)。制造3％分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸的3.0％卡波姆凝膠15克/支(制劑1)；制造3％分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸并含0.2mg曲安奈德的3.0％卡波姆凝膠15克/支(制劑2)；制造含1mg曲安奈德的3.0％卡波姆凝膠15克/支(制劑3)；制造1.5％分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸并含0.2mg曲安奈德的3.0％卡波姆凝膠15克/支(制劑4)；制造含0.2mg曲安奈德的3.0％卡波姆凝膠15克/支(制劑5)；氫化可的 松軟膏(制劑6)。比較以上五種制劑對(duì)皮膚創(chuàng)口的抗炎效果，每日涂抹3次，每次涂抹2ml，觀察各制劑組皮膚激光治療形成的創(chuàng)口第1天的紅腫痛情況。疼痛療效評(píng)價(jià)：顯效：疼痛癥狀顯著改善或消失，患者滿意；有效:疼痛癥狀有改善或減輕,患者仍有不適，要求繼續(xù)治療；無(wú)效：疼痛癥狀無(wú)明顯減輕，患者不滿意。紅腫體征療效評(píng)價(jià)：顯效:創(chuàng)口無(wú)明顯腫脹，創(chuàng)口周邊有寬度小于1.5毫米的輕度紅腫圍繞；有效:創(chuàng)口輕微腫脹，創(chuàng)口周邊有寬度大于1.5毫米和小于3.0毫米的輕度紅腫圍繞；無(wú)效:創(chuàng)口明顯腫脹，創(chuàng)口周邊有寬度大于3.0毫米的紅腫圍繞。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量和計(jì)數(shù)資料組間比較采用t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)，以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。結(jié)果：表15各組患者治療后第1天疼痛癥狀和紅腫體征改善情況比較組別例數(shù)顯效有效無(wú)效總有效率％制劑110640100制劑2101000100制劑3101000100制劑410820100制劑510460100制劑610640100結(jié)論：結(jié)果表明制劑1和制劑5皮膚創(chuàng)口的抗炎效果類似，制劑2、3和4皮膚創(chuàng)口的抗炎效果類似，分子量5-100KD低分子透明質(zhì)酸可以取代部分合成皮質(zhì)激素曲安奈德的皮膚創(chuàng)口抗炎效果，3％分子量5-100KD低分 子透明質(zhì)酸凝膠的皮膚抗炎效果與氫化可的松軟膏效果類似。綜上所述，本發(fā)明公開(kāi)了5-250KD低分子透明質(zhì)酸的新應(yīng)用及新制劑。所述低分子生物活性透明質(zhì)酸是由透明質(zhì)酸酶切割大分子透明質(zhì)酸獲得的透明質(zhì)酸片段，所述透明質(zhì)酸片段的分子量為5KD-250KD；所述透明質(zhì)酸酶為以下酶中的一種或幾種：酵母菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、植物生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、細(xì)菌生產(chǎn)的重組透明質(zhì)酸酶、動(dòng)物提取的透明質(zhì)酸酶。所述5-250KD的低分子量的透明質(zhì)酸，安全可靠，具有促進(jìn)細(xì)胞、皮膚、粘膜、組織分泌防衛(wèi)素2、抑制皮膚粘膜炎癥和皮膚控油的生物活性，用于制備殺滅微生物、抑制皮膚粘膜炎癥疾病和/或抑制皮膚過(guò)多油脂分泌的制劑或物品，制劑可以是噴劑、滴劑、護(hù)理劑、洗劑、貼劑、漱口口服劑、飲品添加劑、肺吸入劑、干粉口服劑、注射點(diǎn)滴液等，可廣泛用于預(yù)防和治療皮膚粘膜組織炎癥性疾病等。最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3