本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種硫(硒)代磷酸環(huán)二核苷酸cGAMP（簡稱：硫（硒）代cGAMP）在防治腫瘤的聯(lián)合用藥物治療的用途。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的常見多發(fā)病，已成為人類死亡的一個(gè)重要原因。目前，腫瘤的主要治療手段包括藥物治療、外科手術(shù)治療和放射治療。盡管以分子靶向藥物為代表的新型抗腫瘤藥物不斷地涌現(xiàn)出來，在相當(dāng)一段時(shí)期內(nèi)，傳統(tǒng)的細(xì)胞毒抗腫瘤藥依然在腫瘤的藥物治療中占據(jù)主導(dǎo)地位。傳統(tǒng)的細(xì)胞毒抗腫瘤藥主要通過影響腫瘤細(xì)胞的核酸和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能，直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。盡管人們在腫瘤的藥物治療方面做出很多努力，研究新的化療藥物，改進(jìn)化療方案，但是治療效果仍不理想。傳統(tǒng)的細(xì)胞毒抗腫瘤藥對腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞缺乏理想的選擇作用，在殺傷惡性腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對人體的正常組織也有損害，從而導(dǎo)致嚴(yán)重的全身不良反應(yīng)，其中比較常見的不良反應(yīng)為骨髓抑制、消化道反應(yīng)和脫發(fā)。所以很多患者無法堅(jiān)持，甚至放棄化療，臨床上難以期望通過增加藥物劑量來獲得理想的效果。這些因素嚴(yán)重影響了化療療效。最近有研究表明，環(huán)二核苷酸合成酶（cGAS）在結(jié)合DNA后的活化條件下催化cGAMP的合成，進(jìn)一步通過STING介導(dǎo)IRF-3的活化，進(jìn)而促進(jìn)IFN-β的合成。外源性給予重組cGAS在DNA結(jié)合條件下促進(jìn)環(huán)二核苷酸cGAMP的生成，發(fā)揮抗病毒、增強(qiáng)免疫的作用。也有專利報(bào)道，體外合成的環(huán)二核苷酸cGAMP具有抗腫瘤的應(yīng)用。硫(硒)代磷酸環(huán)二核苷酸cGAMP具有比cGAMP更好的抗腫瘤活性。目前，尚沒有文獻(xiàn)報(bào)道將硫(硒)代磷酸環(huán)二核苷酸cGAMP和傳統(tǒng)的細(xì)胞毒抗腫瘤藥聯(lián)合使用治療腫瘤的相關(guān)報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了硫(硒)代磷酸環(huán)二核苷酸cGAMP[簡稱：硫（硒）代cGAMP]在制備抗腫瘤聯(lián)合用藥中的用途。本發(fā)明的另一個(gè)技術(shù)方案是提供了抗腫瘤聯(lián)合用藥物組合。其中，所述的藥物組合是與化療藥物組合，包括：硫（硒）代cGAMP+氟尿嘧啶，硫（硒）代cGAMP+環(huán)磷酰胺，硫（硒）代cGAMP+甲氨蝶呤，硫（硒）代cGAMP+順鉑，硫（硒）代cGAMP+卡鉑，硫（硒）代cGAMP+紫杉醇，硫（硒）代cGAMP+長春新堿，硫（硒）代cGAMP+絲裂霉素，硫（硒）代cGAMP+吉西他濱，硫（硒）代cGAMP+放線菌素。所述的抗腫瘤的聯(lián)合用藥物中的用途是指醫(yī)藥、食品或試劑等
技術(shù)領(lǐng)域：
中，用于預(yù)防、保護(hù)、治療腫瘤及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，是包括藥物、試劑、食品或保健食品等類型中的一種或多種。本發(fā)明經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究表明，硫（硒）代cGAMP與傳統(tǒng)的細(xì)胞毒抗腫瘤藥氟尿嘧啶，環(huán)磷酰胺，甲氨蝶呤，順鉑，卡鉑，紫杉醇，長春新堿，絲裂霉素，吉西他濱，放線菌素合用后，可以增強(qiáng)抗腫瘤作用，降低毒性。本發(fā)明中，所述硫（硒）代cGAMP與化療藥物組合包括但不限于氟尿嘧啶，環(huán)磷酰胺，甲氨蝶呤，順鉑，卡鉑，紫杉醇，長春新堿，絲裂霉素，吉西他濱，放線菌素。本發(fā)明中，所述腫瘤包括但不限于結(jié)腸癌。本發(fā)明還涉及利用硫（硒）代cGAMP與抗腫瘤藥合用所制備的抗腫瘤藥。本發(fā)明中硫（硒）代cGAMP與抗腫瘤藥合用所制備的抗腫瘤藥可以按常規(guī)藥劑學(xué)制備成各種劑型，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等。本發(fā)明中硫（硒）代cGAMP與抗腫瘤藥合用所制備的抗腫瘤藥可以采取口服或注射（包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種）等中的一種或多種給藥途徑進(jìn)行腫瘤相關(guān)疾病的預(yù)防、保護(hù)或治療。本發(fā)明提供的硫（硒）代cGAMP與抗腫瘤藥合用所制備的抗腫瘤藥在腫瘤的藥物治療中具有良好的應(yīng)用前景。具體實(shí)施方式下面通過實(shí)施例，具體說明本發(fā)明的內(nèi)容。在本發(fā)明中，以下所述的實(shí)施例是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1：硫（硒）代磷酸環(huán)二核苷酸cGAMP的制備（1）腺苷5’-α硫代（硒代）磷酸和鳥苷5’-α硫代（硒代）磷酸按文獻(xiàn)方法制備。（HUANGZhen等，ScienceChina,Chemistry,2012,55(1),80-89.,BoyleN.A.,etal,Nucleosides,NucleotidesandNucleicAcids,2005,24,1651-1664.）所有化學(xué)試劑均購于Sigma公司。（2）硫（硒）代磷酸環(huán)二核苷酸cGAMP按文獻(xiàn)方法在結(jié)合DNA后的活化條件下，由環(huán)化二核苷酸合成酶（cGAS）催化腺苷5’-α硫代（硒代）磷酸和鳥苷5’-α硫代（硒代）磷酸合成，純度在98％以上。（PingweiLi，etal.,Immunity,2013,39(6),1019-1031.）實(shí)施例2：硫（硒）代磷酸環(huán)二核苷酸cGAMP與化療藥物聯(lián)合用于抗腫瘤的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)采用荷瘤鼠模型檢測硫（硒）代磷酸cGAMP與抗腫瘤藥聯(lián)合對動(dòng)物皮下移植瘤生長的抑制作用及對動(dòng)物的毒性作用。1、動(dòng)物健康雄性昆明白雜交Babl/c的F1代小鼠，體重20～25g，每組10只/籠群養(yǎng)，共分10組。購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，質(zhì)量合格證號（動(dòng)物合格證號：SCXK（滬）2007-0005）。飼養(yǎng)于清潔級動(dòng)物房。2、藥物藥物廠家氟尿嘧啶上海旭東海普藥業(yè)環(huán)磷酰胺江蘇盛迪醫(yī)藥有限公司甲氨蝶呤齊魯制藥有限公司順鉑齊魯制藥有限公司卡鉑齊魯制藥有限公司紫杉醇上海新亞藥業(yè)有限公司長春新堿廣州白云山明興制藥有限公司絲裂霉素上海新亞藥業(yè)有限公司吉西他濱南京正大天晴制藥有限公司放線菌素D上海新亞藥業(yè)有限公司將實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行分組：正常組：不接種腫瘤，給予與藥物實(shí)驗(yàn)組等量的生理鹽水陰性對照組：接種腫瘤，給予與藥物實(shí)驗(yàn)組等量的生理鹽水。硫（硒）代cGAMP組：接種腫瘤，給予硫（硒）代cGAMP5mg/kg藥物1組：接種腫瘤，給予氟尿嘧啶10mg/kg。藥物2組：接種腫瘤，給予氟尿嘧啶10mg/kg+硫代cGAMP5mg/kg。藥物2’組：接種腫瘤，給予氟尿嘧啶10mg/kg+硒代cGAMP5mg/kg藥物5組：接種腫瘤，給予環(huán)磷酰胺50mg/kg。藥物6組：給接種腫瘤，給予環(huán)磷酰胺50mg/kg+硫代cGAMP5mg/kg。藥物6’組：給接種腫瘤，給予環(huán)磷酰胺50mg/kg+硒代cGAMP5mg/kg藥物7組：接種腫瘤，給予甲氨蝶呤50mg/kg。藥物8組：接種腫瘤，給予甲氨蝶呤50mg/kg+硫代cGAMP5mg/kg。藥物8’組：接種腫瘤，給予甲氨蝶呤50mg/kg+硒代cGAMP5mg/kg。藥物9組：接種腫瘤，給予順鉑1mg/kg。藥物10組：接種腫瘤，給予順鉑1mg/kg+硫代cGAMP5mg/kg。藥物10’組：接種腫瘤，給予順鉑1mg/kg+硒代cGAMP5mg/kg。藥物11組：接種腫瘤，給予卡鉑20mg/kg。藥物12組：接種腫瘤，給予卡鉑20mg/kg+硫代cGAMP5mg/kg。藥物12’組：接種腫瘤，給予卡鉑20mg/kg+硒代cGAMP5mg/kg。藥物13組：接種腫瘤，給予紫杉醇5mg/kg。藥物14組：接種腫瘤，給予紫杉醇5mg/kg+硫代cGAMP5mg/kg。藥物14’組：接種腫瘤，給予紫杉醇5mg/kg+硒代cGAMP5mg/kg。藥物15組：接種腫瘤，給予長春新堿0.1mg/kg。藥物16組：接種腫瘤，給予長春新堿0.1mg/kg+硫代cGAMP5mg/kg。藥物16’組：接種腫瘤，給予長春新堿0.1mg/kg+硒代cGAMP5mg/kg。藥物17組：接種腫瘤，給予絲裂霉素1mg/kg。藥物18組：接種腫瘤，給予絲裂霉素1mg/kg+硫代cGAMP5mg/kg。藥物18’組：接種腫瘤，給予絲裂霉素1mg/kg+硒代cGAMP5mg/kg。藥物19組：接種腫瘤，給予吉西他濱50mg/kg。藥物20組：接種腫瘤，給予吉西他濱50mg/kg+硫代cGAMP5mg/kg。藥物20’組：接種腫瘤，給予吉西他濱50mg/kg+硒代cGAMP5mg/kg。藥物21組：接種腫瘤，給予放線菌素D1mg/kg。藥物22組：接種腫瘤，給予放線菌素D1mg/kg+硫代cGAMP5mg/kg。藥物22’組：接種腫瘤，給予放線菌素D1mg/kg+硒代cGAMP5mg/kg。3、實(shí)驗(yàn)方法小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株Colon26（購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫），細(xì)胞培養(yǎng)，傳代，在細(xì)胞對數(shù)期收集細(xì)胞，做成濃度為1.0×107的細(xì)胞懸液，小鼠右前肢腋下注射0.2ml細(xì)胞懸液，10d左右腫瘤長至直徑約5mm，致瘤成功，動(dòng)物隨機(jī)均分組，每天給藥1次，腹腔注射，連續(xù)給藥14天。14天后，處死小鼠并稱瘤體重量，抑瘤率=（陰性對照組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重）／陰性對照組平均瘤重×100％。尾靜脈抽取小鼠血液，檢測各組小鼠血液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板的數(shù)量。4、統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)采用所有的數(shù)據(jù)均用±s表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用t檢驗(yàn)。5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果（1）藥物的抑瘤率結(jié)果顯示，氟尿嘧啶，磷酰胺，甲氨蝶呤，順鉑，卡鉑，紫杉醇，長春新堿，絲裂霉素，吉西他濱，放線菌素與硫（硒）代磷酸環(huán)二核苷酸cGAMP聯(lián)合用藥后與單用氟尿嘧啶，環(huán)磷酰胺，甲氨蝶呤，順鉑，卡鉑，紫杉醇，長春新堿，絲裂霉素，吉西他濱，放線菌素相比，療效明顯增強(qiáng)，見表2-1和表2-2。表2-1實(shí)驗(yàn)各藥物的抑瘤率ap<0.01，與藥物1組比較；bp<0.01，與藥物3組比較；cp<0.01，與藥物5組比較；dp<0.01，與藥物7組比較；ep<0.01，與藥物9組比較表2-2實(shí)驗(yàn)各藥物的抑瘤率fp<0.01，與藥物11組比較；gp<0.01，與藥物13組比較；hp<0.01，與藥物15組比較；ip<0.01，與藥物17組比較；jp<0.01，與藥物19組比較；kp<0.01，與藥物21組比較（2）藥物對小鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響結(jié)果顯示，氟尿嘧啶，環(huán)磷酰胺，甲氨蝶呤，順鉑，卡鉑，紫杉醇，長春新堿，絲裂霉素，吉西他濱，放線菌素與硫（硒）代環(huán)二核苷酸cGAMP聯(lián)合用藥后與單用氟尿嘧啶，，環(huán)磷酰胺，甲氨蝶呤，順鉑，卡鉑，紫杉醇，長春新堿，絲裂霉素，吉西他濱，放線菌素相比，白細(xì)胞數(shù)量和血小板數(shù)量明顯增加，見表2，表3和表4。表3實(shí)驗(yàn)各組小鼠白細(xì)胞水平（±s）組別藥物N白細(xì)胞數(shù)量（109/L）陰性對照組生理鹽水1065.27±2.41cGAMP組cGAMP1050.04±1.69藥物1組氟尿嘧啶103.17±0.09藥物2組硫（硒）代cGAMP+氟尿嘧啶108.60（9.5）±0.86（0.75）a藥物5組環(huán)磷酰胺102.64±0.10藥物6組硫（硒）代cGAMP+環(huán)磷酰胺109.76（10.82）±0.32（0.28）c藥物7組甲氨蝶呤102.32±0.08藥物8組硫（硒）代cGAMP+甲氨蝶呤109.55（12.82）±0.19（0.12）d藥物9組順鉑103.68±0.24藥物10組硫（硒）代cGAMP+順鉑1011.31（12.51）±0.33（0.23）e藥物11組卡鉑105.02±0.18藥物12組硫（硒）代cGAMP+卡鉑1014.56（21.12）±0.74（0.82）f藥物13組紫杉醇105.66±0.37藥物14組硫（硒）代cGAMP+紫杉醇1015.32（18.23）±0.90（1.10）g藥物15組長春新堿104.17±0.26藥物16組硫（硒）代cGAMP+長春新堿1012.34（13.20）±0.32（0.23）h藥物17組絲裂霉素103.12±0.11藥物18組硫（硒）代cGAMP+絲裂霉素1011.98（13.85）±0.40（0.21）i藥物19組吉西他濱103.94±0.17藥物20組硫（硒）代cGAMP+吉西他濱1014.11（17.23）±0.35（0.23）j藥物21組放線菌素103.58±0.23藥物22組硫（硒）代cGAMP+放線菌素1012.56（18.32）±0.39（0.12）kap<0.01，與藥物1組比較；bp<0.01，與藥物3組比較；cp<0.01，與藥物5組比較；dp<0.01，與藥物7組比較；ep<0.01，與藥物9組比較；fp<0.01，與藥物11組比較；gp<0.01，與藥物13組比較；hp<0.01，與藥物15組比較；ip<0.01，與藥物17組比較；jp<0.01，與藥物19組比較；kp<0.01，與藥物21組比較表4實(shí)驗(yàn)各組小鼠血小板水平（±s）ap<0.01，與藥物1組比較；bp<0.01，與藥物3組比較；cp<0.01，與藥物5組比較；dp<0.01，與藥物7組比較；ep<0.01，與藥物9組比較；fp<0.01，與藥物11組比較；gp<0.01，與藥物13組比較；hp<0.01，與藥物15組比較；ip<0.01，與藥物17組比較；jp<0.01，與藥物19組比較；kp<0.01，與藥物21組比較上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，氟尿嘧啶，環(huán)磷酰胺，甲氨蝶呤，順鉑，卡鉑，紫杉醇，長春新堿，絲裂霉素，吉西他濱，放線菌素與硫（硒）代cGAMP聯(lián)合用藥后與單用氟尿嘧啶，環(huán)磷酰胺，甲氨蝶呤，順鉑，卡鉑，紫杉醇，長春新堿，絲裂霉素，吉西他濱，放線菌素相比，抗腫瘤療效明顯增強(qiáng)，骨髓抑制不良反應(yīng)明顯減弱。因此，硫（硒）代磷酸環(huán)二核苷酸cGAMP可用于防治腫瘤的聯(lián)合用藥，具有增效減毒的作用。當(dāng)前第1頁1 2 3