專(zhuān)利名稱(chēng)：核苷磷酸化酶和核苷酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一些核苷類(lèi)似物，它們是PNP、PPRT、MTAP、MTAN和/或NH的抑制劑，這些化合物作為藥物以及含有這些化合物的藥物組合物的用法。本發(fā)明還涉及治療疾病的方法。
背景技術(shù)：
US 5,985,848，US 6,066,722和US 6,228,741涉及作為嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)和嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(PPRT)抑制劑的核苷類(lèi)似物。這種類(lèi)似物可用于治療寄生蟲(chóng)感染、T-細(xì)胞惡性腫瘤、自身免疫疾病和炎性疾病。這些類(lèi)似物還可在器官移植中用于免疫抑制。
PCT/NZ00/00048提供了一種制備某些PNP抑制劑的方法。該申請(qǐng)識(shí)別作為PNP抑制劑的化合物并表達(dá)了對(duì)制備這些物質(zhì)的更簡(jiǎn)便方法的需求。PCT/NZ01/00174也提供了作為PNP和PPRT抑制劑的其它核苷類(lèi)似物。
一些核苷類(lèi)似物也被鑒定為5′-甲硫基腺苷磷酸化酶(MTAP)和5′-甲硫基腺苷核苷酶(MTAN)的強(qiáng)有力的抑制劑。這是PCT/NZ03/00050的主題。
本申請(qǐng)的申請(qǐng)人也研發(fā)了一種制備連接有亞甲基的環(huán)胺脫氮嘌呤的方法，該方法包括使甲醛或甲醛等價(jià)物與環(huán)胺和雜芳族化合物反應(yīng)。該方法是新西蘭專(zhuān)利申請(qǐng)no.523970的主題。
PNP催化例如鳥(niǎo)嘌呤和次黃嘌呤等核糖核苷和脫氧核糖核苷的磷酸裂解，以得到相應(yīng)的糖-1-磷酸和鳥(niǎo)嘌呤、次黃嘌呤或其它嘌呤堿基。
缺失嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)的人會(huì)罹患特定的T-細(xì)胞免疫缺陷，這是由于dGTP的聚集會(huì)妨礙受激的T淋巴細(xì)胞的增殖。因此PNP抑制劑可抑制免疫，并可抵抗T-細(xì)胞惡性腫瘤和T-細(xì)胞增殖性疾病。
核苷水解酶(NH)催化核苷的水解。這些酶在哺乳動(dòng)物中未發(fā)現(xiàn)但一些原生動(dòng)物類(lèi)寄生蟲(chóng)的核苷補(bǔ)救需要這種酶。一些原生動(dòng)物寄生蟲(chóng)用核苷磷酸化酶來(lái)代替用于此目的的核苷水解酶，或除核苷水解酶外還利用核苷磷酸化酶。預(yù)計(jì)核苷水解酶和磷酸化酶的抑制劑可干擾寄生蟲(chóng)的代謝，因此可用于抗原生動(dòng)物類(lèi)寄生蟲(chóng)。
MTAP和MTAN作用于多胺生物合成途徑，哺乳動(dòng)物的嘌呤補(bǔ)救和細(xì)菌的細(xì)胞密度感受途徑。MTAP催化5′-甲硫基腺苷(MTA)可逆磷酸解成腺嘌呤和5-甲硫基-α-D-核糖-1-磷酸(MTR-1P)。MTAN催化MTA可逆水解成腺嘌呤和5-甲硫基-α-D-核糖和S-腺苷-L-高半胱氨酸(SAH)可逆水解成腺嘌呤和S-核糖-高半胱氨酸(SRH)。形成的腺嘌呤隨后參與循環(huán)并被轉(zhuǎn)化成核苷酸。實(shí)際上，人類(lèi)細(xì)胞中游離腺嘌呤的唯一來(lái)源就是這些酶作用的結(jié)果。MTR-1P隨后通過(guò)一系列酶作用被轉(zhuǎn)化成甲硫氨酸。
MTA是亞精胺形成過(guò)程中將氨丙基從脫羧基化的S-腺苷甲硫氨酸轉(zhuǎn)移到腐胺的反應(yīng)的副產(chǎn)物。該反應(yīng)是由亞精胺合成酶催化的。亞精胺合成酶對(duì)MTA聚集造成的產(chǎn)物抑制非常敏感。因此，對(duì)MTAP和MTAN的抑制將嚴(yán)重限制多胺的生物合成和細(xì)胞中腺嘌呤的補(bǔ)救途徑。同樣，MTA是細(xì)菌由S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和?；??；d體蛋白合成酰化的高絲氨酸內(nèi)酯的副產(chǎn)物，其中，隨后的內(nèi)酯化釋放出MTA和?；母呓z氨酸內(nèi)酯。?；母呓z氨酸內(nèi)酯是一種細(xì)菌的細(xì)胞密度敏感分子，它與細(xì)菌對(duì)人類(lèi)組織的毒性有關(guān)。最近的工作已經(jīng)鑒定了第二種通訊系統(tǒng)(自誘導(dǎo)物2，AI-2)，這對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌都是共同的，因此被認(rèn)為是“遍在信號(hào)”，它作用于種間細(xì)胞-細(xì)胞通訊。再者，MTAN產(chǎn)生S-核糖-高半胱氨酸(SRH)，這是AI-2的前體。在微生物中對(duì)MTAN或MTAP的抑制將組織MTA被移除并使該途徑受到產(chǎn)物抑制，由此可減少細(xì)胞密度敏感途徑的產(chǎn)生并降低微生物感染的毒力。在微生物中抑制MTAN還將阻止SRH的形成，從而減少第二細(xì)胞密度敏感途徑的產(chǎn)生。
據(jù)報(bào)道，許多惡性腫瘤都有遺傳缺失造成的MTAP缺損。已知這些細(xì)胞中MTAP酶功能的缺失是由于第9號(hào)染色體上緊密連鎖的MTAP和p16/MTS1腫瘤抑制基因的純合缺失。由于p16/MTS1的缺失可能會(huì)造成腫瘤，遺傳缺失的結(jié)果便是MTAP活性缺乏，但這不是造成癌癥的原因。但是，MTAP的缺失改變了這些細(xì)胞的嘌呤代謝，使得這些細(xì)胞主要依賴(lài)于從頭合成(de novo)途徑以提供嘌呤。這就使得這些細(xì)胞對(duì)氨甲喋呤、丙氨菌素和偶氮絲氨酸等阻斷從頭合成途徑的抑制劑異常敏感。因此，將氨甲喋呤、丙氨菌素或偶氮絲氨與MTAP抑制劑聯(lián)合治療將具有非常有效地抗腫瘤特性。
MTAP抑制劑也可非常有效地抵抗瘧疾等感染紅血細(xì)胞(RBC)的寄生蟲(chóng)感染，這是由于它們?nèi)狈︵堰噬锖铣傻膹念^合成途徑。原生動(dòng)物類(lèi)寄生蟲(chóng)的生長(zhǎng)和繁殖完全依賴(lài)于補(bǔ)救途徑產(chǎn)生的嘌呤。因此，MTAP抑制劑將殺死這些寄生蟲(chóng)而對(duì)宿主RBC沒(méi)有任何副作用，這是由于RBC是最終分化的細(xì)胞，且它們不合成嘌呤、不制造多胺或繁殖。
以上專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)中大多數(shù)地方所描述的化合物的亞氨基糖部分的氮原子位于C-1和C-4之間，從而形成1，4-雙脫氧-1，4-亞氨基-D-核糖醇化合物。氮原子在核糖醇環(huán)中的位置對(duì)于與酶結(jié)合是重要的。此外，糖部分和核苷堿基類(lèi)似物之間的鍵合位置對(duì)于酶抑制活性也是重要的。已知的化合物在糖環(huán)的C-1處連接。
在尋找新的和改進(jìn)的核苷磷酸化酶和核苷酶抑制劑的過(guò)程中，本申請(qǐng)人研究了一些化合物的合成和生物活性，其中，氮原子在糖環(huán)中的位置各不相同，且此外，兩個(gè)氮原子形成了糖環(huán)的一部分。還研究了連接糖部分和堿基類(lèi)似物的其它方式。
本申請(qǐng)人驚喜地發(fā)現(xiàn)，一些新的化合物對(duì)PNP、PPRT、MTAP和核苷水解酶MTAN中的一種或多種具有強(qiáng)有力的抑制活性。
因此，本發(fā)明的目的是提供一種化合物，它是PNP、PPRT、MTAP、MTAN和/或NH的抑制劑，或至少提供了一種有用的選擇。
發(fā)明綜述本發(fā)明的第一個(gè)方面提供了式(I)的化合物 其中V選自CH2和NH，W選自NR1和NR2；或V選自NR1和NR2，W選自CH2和NH；X選自CH2和CHOH，為R或S-構(gòu)型；Y選自氫、鹵素和羥基，但當(dāng)V選自NH、NR1或NR2時(shí)Y是氫；Z選自氫、鹵素、羥基、SQ、OQ或Q，其中Q是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；R1是式(II)的殘基
R2是式(III)的殘基 A選自N、CH或CR，其中，R選自鹵素、任選取代的烷基、芳烷基或芳基、OH、NH2、NHR3、NR3R4和SR5，其中，R3、R4和R5分別是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；B選自O(shè)H、NH2、NHR6、SH、氫或鹵素，其中，R6是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；D選自O(shè)H、NH2、NHR7、氫、鹵素或SCH3，其中，R7是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；E選自N和CH；G選自CH2和NH，或G不存在，條件是，其中W是NR1或NR2，G是NH時(shí)，則V是CH2，條件是，其中V是NR1或NR2，G是NH時(shí)，則W是CH2；或其互變異構(gòu)體，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其酯，或其前藥。
優(yōu)選Z選自氫、鹵素、羥基、SQ或OQ。更優(yōu)選Z是OH?；蛘?，優(yōu)選Z是SQ。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，Z是Q。
還優(yōu)選V是CH2。更優(yōu)選的是X是CH2。此外，優(yōu)選的是G是CH2。
優(yōu)選W是NR1?；蛘?，優(yōu)選的是W是NR2。同樣優(yōu)選的是，當(dāng)W選自NH、NR1或NR2時(shí)，則X是CH2。
優(yōu)選的本發(fā)明的化合物包括那些其中V、X和G都是CH2，Z是OH和W是NR1的化合物。
其它優(yōu)選的本發(fā)明的化合物包括那些其中V、X和G都是CH2，Z是SQ同時(shí)W是NR1的化合物。
優(yōu)選Y是氫。還優(yōu)選的是Y是羥基。
優(yōu)選B是羥基。還優(yōu)選的是B是NH2。
優(yōu)選A是CH。還優(yōu)選的是A是N。
優(yōu)選D是H。還優(yōu)選的是D是NH2。
同樣優(yōu)選的是E是N。
優(yōu)選的本發(fā)明的化合物包括(3R，4R)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(8-氮雜-9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(8-氮雜-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷；(3S，4R)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3，4-二羥基-4-甲硫基甲基吡咯烷；(3R，4S)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷；N-(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)-1，4-雙脫氧-1，4-亞氨基-D-核糖醇；N-(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基-1，4-雙脫氧-1，4-亞氨基-D-核糖醇；(3R，4R)-3-羥基-4-羥基甲基-1-(次黃嘌呤-9-基)吡咯烷；(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷；(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷；(3R，4S)-1-[(8-氮雜-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(9-脫氮鳥(niǎo)嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(4-氯苯硫基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(6-氯-9-脫氮嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(6-疊氮-9-脫氮嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；或(3R，4R)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-乙酰氧基-4-(乙酰氧基甲基)吡咯烷。
另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，它含有藥物有效量的上述式(I)的化合物。
再在另一方面，本發(fā)明提供了一種治療需要抑制嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、嘌呤核苷磷酸化酶、5’-甲硫基腺苷磷酸化酶、5’-甲硫基腺苷核苷酶和/或核苷水解酶的疾病或癥狀的方法，該方法包括給予需要治療的患者藥物有效量的上述式(I)的化合物。
所述疾病或癥狀包括癌癥、細(xì)菌感染、原生動(dòng)物感染或T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病。所述T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病是銀屑病、關(guān)節(jié)炎或移植排斥。
再在另一方面，本發(fā)明提供了上述式(I)的化合物在制造用于治療需要抑制嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、嘌呤核苷磷酸化酶、5’-甲硫基腺苷磷酸化酶、5’-甲硫基腺苷核苷酶和/或核苷水解酶的疾病或病癥的藥物中的應(yīng)用。
詳細(xì)描述應(yīng)該知道，式(I)的化合物的表示方法，其中，B和/或D是羥基，具有相應(yīng)的酰胺的烯醇型互變異構(gòu)形式，且這將主要以酰胺形式存在。使用烯醇型互變異構(gòu)表示方法僅是為了用更少的結(jié)構(gòu)式來(lái)表示本發(fā)明的化合物。
類(lèi)似的，應(yīng)該知道，式(I)的化合物的表示方法，其中，B和/或D是硫醇基，具有相應(yīng)的硫代酰胺的硫代烯醇型互變異構(gòu)形式，且這將主要以硫代酰胺形式存在。使用硫代烯醇型互變異構(gòu)表示方法僅是為了用更少的結(jié)構(gòu)式來(lái)表示本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的化合物可用適當(dāng)?shù)姆椒ㄖ苽?。一種合適的方法包括獨(dú)立合成糖部分和堿基部分，然后將堿基部分與糖環(huán)部分中的氮原子結(jié)合。
例如，下面的流程1顯示了本發(fā)明化合物的1-N-亞氨基糖部分的制備，其中糖類(lèi)似物的氮原子位于與糖分子中的C-1異頭碳原子相同的位置。一種有用的用于合成1-N-亞氨基糖的起始化合物是N-叔-丁氧羰基-(3R，4S)-3-羥基-4-((1S)-1，2-二羥基乙基)吡咯烷。這種起始物質(zhì)可用Filichev等(Carbohydrate Res.，2001，333，115-122)的方法制備，唯一的變化是將叔-丁氧羰基部分而不是N-(9-芴基甲氧基羰基)用作氮原子保護(hù)基。氧化切斷二醇部分后進(jìn)行原位還原得到N-保護(hù)的3-羥基-4-羥基甲基吡咯烷(1)。除去N保護(hù)基得到(3R，4R)-3-羥基-4-羥基甲基吡咯烷(4)。外消旋的3-羥基-4-羥基甲基吡咯烷首先由Jaeger等(J.Org.Chem.，1965，30，740-744)制備，并被用于制備1′-氮雜碳環(huán)胸腺嘧啶類(lèi)似物(Lee，Y.H.，Kim，H.K.，Youn，I.K.，Chae，Y.B.，Bioorg.Med.Chem.Lett.1991,1,287-290.)和氮雜-C-嘧啶(Sorenson，M.D.，Khalifa，N.M.，Pedersen，E.B.，Synthesis，1999，1937-1943)。
還描述了兩種合成(3R，4R)-3-羥基-4-羥基甲基吡咯烷的其它方法。一種方法是Bols等的方法[Bols，M.，Hansen，S.U.，Acta Chem.Scand.，1998，52，1214-1222]，它包括對(duì)映異構(gòu)體的酶促純化。另一種方法是Ichikawa等的方法[Ichikawa，Y.，Makino，K.，Tetrahedron Lett.，1998，39，8245-8248]，該方法通過(guò)延胡索酸單乙基酯的多克(multi-gram)不對(duì)稱(chēng)合成(3R，4R)-3-羥基-4-羥基甲基吡咯烷。Ichikawa等評(píng)價(jià)了(3R，4R)-3-羥基-4-羥基甲基吡咯烷對(duì)人PNP的抑制活性并得到160μM的IC50。
在去除N-保護(hù)基之前可能需要將化合物(1)的羥基芐基化以得到鹽酸(3R，4R)-3-芐氧基-4芐氧基甲基吡咯烷(3)，這是準(zhǔn)備與合適的堿基類(lèi)似物結(jié)合的有用化合物。
可通過(guò)合適的醛的還原性胺化與糖部分連接。用相應(yīng)的溴前體制得的合適的醛的例子顯示在流程2中。
流程2醛式堿基類(lèi)似物與受保護(hù)的糖類(lèi)似物(3)的偶合顯示在流程3中。去除保護(hù)基可得到本發(fā)明的抑制劑化合物(3S，4S)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3，4-二羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(8)。
應(yīng)該知道的是，在其環(huán)的任何位置含有氮原子的糖類(lèi)似物可用這種方法與任何堿基類(lèi)似物偶合。還應(yīng)該知道，也可采用除通過(guò)醛的還原性胺化偶合以外的其它方法。
從下面的流程4可見(jiàn)，可對(duì)中間體(7)進(jìn)行操作以得到(10)。
流程4將堿基類(lèi)似物與糖類(lèi)似物(4)偶合的其它實(shí)施例顯示在流程5中。該方法可用來(lái)制備化合物(3R，4S)-1-[(8-氮雜-9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(12)和(3R，4S)-1-[(8-氮雜-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(13)。
在其環(huán)中含有兩個(gè)氮原子的糖類(lèi)似物中間體已被制備。(3R，4S)-4-羥基-3-羥基甲基吡唑烷(21)可按照流程6中列出的途徑來(lái)制備。酮(14)是用已知的化學(xué)方法(Lin，T-S.，Zhu，J-L.，Dutschman，G.E.，Cheng，Y-C.，Prusoff，W.H.，J.Med.Chem.1993，36，353-362)從D-木糖制備的。胺化后將亞胺還原并將所得仲胺乙酰化得到化合物(17)。經(jīng)過(guò)關(guān)鍵的酸水解步驟同時(shí)伴隨有再環(huán)化作用得到了亞氨基環(huán)(18)。經(jīng)過(guò)氫化然后切斷二醇部分并去除乙酸酯得到了所需的吡唑烷(21)。
吡唑烷(21)或其前體N-乙酸酯(20)可與各種堿基類(lèi)似物偶合得到本發(fā)明的式(I)的潛在的抑制劑。
另一種將堿基類(lèi)似物與糖類(lèi)似物偶合的方法顯示在流出7中。將醛N-叔-丁氧羰基-(3R，4S)-3-羥基-4-甲酰吡咯烷(22)用于Wittig反應(yīng)以得到5′C-C連接的中間體N-叔-丁氧羰基-(3R，4R)-3-羥基-4-(2-苯乙烯基)吡咯烷(23)。隨后進(jìn)行氫化并切除Boc得到鹽酸鹽(25)，它可用于Mannich反應(yīng)以得到(3R，4R)-1-[(6-氯-9-脫氮嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷(26)。于130℃在封管中用7N的甲醇氨處理，然后用3N的HCl水溶液將其轉(zhuǎn)化成鹽酸鹽以得到(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷鹽酸鹽(27)。
應(yīng)該知道，流程7中所例舉的方法可用于將各種C-4取代基不同的25的類(lèi)似物與各種9-脫氮嘌呤類(lèi)似物偶合。
流程7流程8顯示了再一種制備經(jīng)過(guò)選擇的本發(fā)明的化合物的方法。該方法采用D-阿拉伯糖醇而不是N-叔-丁氧羰基-(3R，4S)-3-羥基-4-[(1S)-1，2-二羥基乙基]吡咯烷作為起始化合物。
本發(fā)明的化合物是PNP、MTAP和/或MTAN的強(qiáng)有力的抑制劑。表1顯示了經(jīng)過(guò)選擇的本發(fā)明的化合物對(duì)人PNP的抑制常數(shù)。表2顯示了所選化合物對(duì)大腸桿菌(E coli)MTAN的抑制常數(shù)。表3顯示了所選化合物對(duì)人MTAP的抑制常數(shù)。表4顯示了所選化合物對(duì)結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)PNP的抑制常數(shù)。表5顯示了所選化合物對(duì)惡性瘧原生動(dòng)物(/Plasmodium falciparum)PNP的抑制常數(shù)。
表1抗人PNP的抑制常數(shù)
表2抗大腸桿菌MTAN的抑制常數(shù)
表3抗人MTAP的抑制常數(shù)
表4抗結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)PNP的抑制常數(shù)
表5抗惡性瘧原生動(dòng)物(Plasmodium falciparum)PNP的抑制常數(shù) 如表1、2、3、4和5所示，Ki是由酶-抑制劑復(fù)合物形成的初始抑制常數(shù)，Ki*是在慢發(fā)作(slow-onset)階段后觀察到的抑制(即緊密結(jié)合抑制)的平衡解離常數(shù)。Ki*是生物有效常數(shù)。
其它方面本發(fā)明的化合物可作為游離堿的形式和鹽的形式使用。術(shù)語(yǔ)″藥學(xué)上可接受的鹽″是指衍生自無(wú)機(jī)或有機(jī)酸的無(wú)毒鹽，例如下面的酸鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸、乳酸、延胡索酸、琥珀酸、酒石酸、葡糖酸、檸檬酸、甲烷磺酸和對(duì)甲苯磺酸。
所述活性化合物可通過(guò)各種途徑施用于患者，包括口服施用、注射或局部施用。根據(jù)患者的狀況和待治療疾病的性質(zhì)和程度，要施用的化合物的量是可變的。通常給成人的劑量小于1-1000毫克，優(yōu)選0.1-100毫克。
供口服施用時(shí)，所述化合物可被制成固體或液體制劑，例如片劑、膠囊劑、粉末劑、溶液劑、懸液劑和分散劑。這種制劑是此領(lǐng)域熟知的，其它口服劑型方案未在這里列出。當(dāng)為片劑形式時(shí)，所述化合物可與常規(guī)的片劑基料如乳糖、蔗糖和玉米淀粉，以及粘合劑、崩解劑和潤(rùn)滑劑一起制片。所述粘合劑可以是，例如，玉米淀粉或明膠，所述崩解劑可以是土豆淀粉或藻酸，所述潤(rùn)滑劑可以是硬脂酸鎂。也可加入其它組分如著色劑或調(diào)味劑。
液體形式包含水和乙醇等載體，可含或不含其它試劑如藥學(xué)上可接受的表面活性劑或懸浮劑。
所述化合物可與生理上可接受的稀釋劑如水或鹽水混合通過(guò)注射給藥。所述稀釋劑可含有一種或多種其它成分，如乙醇、丙二醇、油或藥學(xué)上可接受的表面活性劑。
所述化合物可作為局部用于皮膚或粘膜的乳膏的一種成分。所述乳膏優(yōu)選包含藥學(xué)上可接受的溶劑以幫助其通過(guò)皮膚或粘膜。合適的乳膏是精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的。
所述化合物還可通過(guò)持續(xù)釋放系統(tǒng)給予。例如，可將它們摻入緩釋片劑或膠囊。
附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示了化合物(8)抑制人PNP的動(dòng)力學(xué)曲線。
圖2顯示了對(duì)小鼠MTAP的體內(nèi)抑制。
實(shí)施例以下實(shí)施例進(jìn)一步闡述了本發(fā)明。但應(yīng)該明確，本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例。

實(shí)施例1N-叔-丁氧羰基-(3R，4R)-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(1)將乙醇(50mL)中的N-叔-丁氧羰基-(3R，4S)-3-羥基-4-[(S)-1，2-二羥基乙基]吡咯烷(3.4g，13.7mmol)溶液逐滴加入正在攪拌的高碘酸鈉(3.4g，16mmol)的水溶液(25mL)，同時(shí)保持反應(yīng)溫度在0℃。使反應(yīng)再進(jìn)行20分鐘然后分批加入硼氫化鈉(2.0g，過(guò)量)并再次確保反應(yīng)溫度保持在0℃。完全加入后濾出固體，用乙醇(50mL)洗滌并在真空下濃縮以得到一種漿狀物。通過(guò)層析顯示得到漿狀的1(2.74g，92％)。
實(shí)施例2N-叔-丁氧羰基-(3R，4R)-3-芐氧基-4-(芐氧基甲基)吡咯烷(2)0℃下，將氫化鈉(140mg，60％油分散，3.7mmol)分批加入正在攪拌的芐基溴(300μL，2.8mmol)和1(200mg，0.92mmol)的DMF溶液(10mL)。完全加入后使所得懸液回復(fù)室溫，用甲苯(100mL)稀釋?zhuān)盟?50mL)和鹽水(50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，并在真空下濃縮以得到漿狀物。通過(guò)層析顯示得到油狀的2(350mg，96％)，無(wú)需純化即可將其用于下一步驟。
實(shí)施例3(3R，4R)-3-芐氧基-4-(芐氧基甲基)吡咯烷鹽酸鹽(3)。
40℃下將鹽酸(2mL，1 M)加入2(500mg，1.3mmol)的甲醇溶液(2mL)并將所得混合物攪拌1小時(shí)。反應(yīng)完全后將反應(yīng)物在真空下濃縮以得到3的鹽酸鹽(330mg，90％)。1H NMRδ7.35-7.21(m，10H)，4.48(m，4H)，4.08(d，J＝2.9Hz，1H)，3.53(m，1H)，3.44(m，3H)，3.24(m，1H)，2.65(m，1H)。13C NMRδ138.0，137.6，128.9，128.8，128.3，128.2，79.3，73.7，71.9，68.7，49.6，46.4，44.8。
實(shí)施例4(3R，4R)-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(4)室溫下，將鹽酸(5mL，12M)加入正在攪拌的1(2.3g，10.6mmol)的甲醇溶液(5mL)。1小時(shí)后將反應(yīng)物在真空下濃縮以得到油狀的4(1.63g，100％)。13C NMRδ71.9，60.9，52.1，47.9，46.6。
流程2實(shí)施例57-N-芐氧基甲基-6-叔-丁氧基-9-脫氮嘌呤-9-甲醛(5)將5-芐氧基甲基-7-溴-4-叔-丁氧基吡咯并[3，2-d]嘧啶(400mg，1.02mmol)溶于乙醚(10mL)和苯甲醚(5mL)并冷卻至-78℃。然后逐滴加入正-丁基鋰(600μL，2.5M)，加入速度應(yīng)保持反應(yīng)溫度低于-70℃，并將所得溶液在-78℃放置30分鐘。然后加入二甲基甲酰胺(100μL)并再將反應(yīng)物攪拌30分鐘，然后用水淬滅并使其回復(fù)室溫。反應(yīng)物然后用乙酸乙酯(100mL)稀釋?zhuān)盟?30mL)和鹽水(30mL)洗滌，干燥(MgSO4)并在真空下濃縮以得到一種漿狀物。通過(guò)層析純化得到5(270mg，78％)。1H NMRδ10.29(s，1H)，8.62(s，1H)，7.98(s，1H)，7.34-7.22(m，5H)，5.79(s，2H)，4.53(s，2H)，1.71(s，9H)。13C NMRδ184.8，156.63，152.6，150.0，136.7，136.6，128.9，128.5，127.8，118.4，84.4，78.3，71.0，29.0。
實(shí)施例68-氮雜-9-脫氮-6-甲氧基-7-N-(四氫吡喃-2-基)-嘌呤-9-甲醛(6)于-78℃在惰性氣體下將n-BiLi(0.7mL，2.4M)逐滴加入正在攪拌的8-氮雜-9-溴-9-脫氮-6-甲氧基-7-N-(四氫吡喃-2-基)-嘌呤(530mg，1.7mmol)的THF溶液(20mL)。將反應(yīng)物再在-78℃下攪拌30分鐘，然后加入DMF(1.0mL)并使反應(yīng)物回復(fù)室溫。用水(50mL)淬滅反應(yīng)，用甲苯(2×100mL)萃取，將有機(jī)層合并并用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并在真空下濃縮以得到固體殘余物。通過(guò)層析顯示得到油狀的6。1HNMRδ10.43(s，1H)，8.71(s，1H)，6.55(dd，J＝10.0，2.7Hz，1H)，4.25(s，3H)，4.13(m，1H)，3.83(dt，J＝10.8，2.8Hz)，2.53-1.65(m，7H)。13C NMRδ177.0，161.5，154.5，143.9，130.2，128.9，87.0，67.4，53.5，28.7，23.7，21.2。
實(shí)施例77-[(3R，4R)-(3-芐氧基-4-芐氧基甲基吡咯烷-1-基)甲基]-5-芐氧基甲基-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-酮(3S，4S)-1-[(9-脫氮-7-芐氧基甲基-次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-芐氧基-4-(芐氧基甲基)吡咯烷(7)將氰基硼氫化鈉(100mg，1.59mmol)加入正在攪拌的5(220mg，0.64mmol)和3.HCl(190mg，0.57mmol)的甲醇溶液(5mL)，并在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)物然后在真空下濃縮并重新溶于甲醇(2mL)和濃HCl(2mL)，攪拌1小時(shí)然后在真空下濃縮以得到固體殘余物。對(duì)所得殘余物進(jìn)行層析得到固體狀的7(202mg，63％)。1HNMRδ7.87(1H，s)，7.32(1H，s)，7.31-7.23(m，5H)，5.89(s，2H)，4.56(s，2H)，4.50(s，2H)，4.48(s，2H)，4.47(s，2H)，3.87(m，2H)，3.81(q，J＝13.4Hz，2H)，3.43(d，J＝7.1Hz，2H)，3.01(t，J＝8.1Hz，1H)，2.79(d，J＝4.7Hz，1H)，2.55(m，1H)，2.36(m，1H)。13C NMRδ156.2，145.8，141.8，138.9，138.8，137.6，131.4，128.8，128.7，128.7，128.3，128.2，128.1，128.0，128.8，117.9，115.7，81.3，77.1，73.5，72.1，71.4，70.8，60.0，56.4，48.6，45.9。
實(shí)施例8(3R，4R)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(8)將化合物7(120mg，0.21mmol)和Pearlman催化劑(120mg)懸浮于乙醇(3mL)和乙酸(1mL)并于室溫在氫氣下劇烈攪拌24小時(shí)。反應(yīng)物然后通過(guò)硅藻土(celite)過(guò)濾并在真空下濃縮以得到一種固體物質(zhì)。對(duì)該固體進(jìn)行層析和離子交換得到白色固體狀的8(38mg，68％)。熔點(diǎn)為248-250℃。1H NMRδ7.81(1H，s)，7.34(1H，s)，3.97(1H，brs)，3.65(2H，s)，3.53(1H，m)，3.44(1H，m)，2.93(1H，t，J＝9.0Hz)，2.77(1H，m)，2.60(1H，m)，2.33(1H，t，J＝7.1Hz)，2.12(1H，brs)。13C NMRδ155.8，144.1，142.8，130.0，117.3，111.1，72.9，62.7，60.2，54.8，48.9，473。HRMS(MH+)C12H16N4O3計(jì)算值265.1301。實(shí)測(cè)值265.1302。C12H16N4O3-1/2H2O分析計(jì)算值C，52.7；H，6.2；N，20.5。實(shí)測(cè)值C，53.0；H5.9；N，20.4。
流程4實(shí)施例9.1(3R，4R)-1-[(9-脫氮-7-芐氧基甲基-腺嘌呤-9-基)甲基]-3-芐氧基-4-(芐氧基甲基)吡咯烷(9)將化合物7(1.2g，2.12mmol)加入磷酰氯(20mL)并將所得懸液加熱至回流。1小時(shí)后將反應(yīng)物在真空下濃縮，用氯仿稀釋?zhuān)蔑柡蚇aHCO3和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，并在真空下濃縮。將所得殘余物溶于7N在甲醇中的NH3并將所得溶液在封管中加熱至120℃過(guò)夜。反應(yīng)物在真空下濃縮并通過(guò)層析純化以得到9(0.83g，69％)。1H NMRδ8.38(s，1H)，7.76(brs，1H)，7.32-7.25(m，15H)，6.01(brs，2H)，5.51(d，J＝2.3Hz，2H)，4.55(s，2H)，4.51(s，2H)，4.48(s，2H)，4.25(d，J＝2.9 Hz，2H)，4.05(m，1H)，3.50(d，J＝6.5Hz，2H)，3.42(m，1H)，3.31(m，1H)，3.20(m，1H)，3.01(m，1H)，2.71(m，1H)。13C NMRδ152.3，151.5，150.1，138.3，138.0，135.7，134.6，129.2，129.0，128.8，128.2，128.1，115.18，107.94，79.7，77.6，73.6，71.9，70.7，69.8，58.6，58.1，55.22，54.9，48.8，45.3。
實(shí)施例9.2(3R，4R)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(10)將化合物9(100mg，0.18mmol)和Pd/C(50mg，10％bw)懸浮于乙醇(4mL)，并于室溫在氫氣下劇烈攪拌24小時(shí)。然后通過(guò)硅藻土過(guò)濾反應(yīng)物并在真空下濃縮以得到一種漿狀物。在硅膠上進(jìn)行層析得到固體狀的10。1H NMR(D2O)δ7.83(s，1H)，7.13(s，1H)，3.88(q，J＝4.4Hz，1H)，3.56-3.32(4H，m)，2.78(t，J＝9.0Hz，1H)，2.62(dd，J＝10.7，6.4Hz，1H)，2.47(dd，J＝10.7，4.2Hz，1H)，2.16(dd，J＝9.8，7.0Hz，1H)，2.03(1H，m)。13C NMR(D2O)δ150.1，149.6，145.1，129.6，113.3，109.8，72.9，62.8，60.3，54.8，49.0，47.3.HRMS(MH+)C12H18N5O2計(jì)算值264.1461。實(shí)測(cè)值264.1457。
實(shí)施例10(3R，4R)-1-[(8-氮雜-9-脫氮-6-甲氧基-8-(四氫吡喃-2-基)-嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(11)
將氰基硼氫化鈉(100mg，1.59mmol)加入正在攪拌的6(340mg，1.3mmol)和4.HCl(190mg，0.57mmol)的甲醇溶液(5mL)并在室溫下攪拌過(guò)夜。對(duì)所得殘余物進(jìn)行層析得到固體狀的11(150mg，35％)。1H NMRδ8.39(s，1H)，5.90(d，J＝9.1Hz，1H)，4.17-3.94(m，4H)，4.12(s，3H)，3.67-3.52(m，2H)，2.94-2.79(m，2H)，2.66-2.52(m，2H)，2.35-2.09(m，2H)，1.70-1.56(m，2H)。13C NMRδ162.6，152.2，(140.1，140.0)，133.5，131.6，(87.0，86.9)，74.3，(68.3，68.2)，(64.3，64.2)，62.6，(56.2，56.1)，54.5，(50.6，50.7)，(47.7，47.6)，29.7，25.2，21.8。
實(shí)施例11(3R，4R)-1-[(8-氮雜-9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(12)將濃鹽酸(1mL，12M)加入11(50mg，0.14mmol)的甲醇溶液并攪拌過(guò)夜，然后在真空下濃縮以得到固體殘余物，將殘余物與甲醇一起研磨并過(guò)濾以得到固體狀的12(38mg，92％)。1H NMRδ8.13(s，1H)，4.35(d，J＝2.7Hz，1H)，3.86(m，1H)，3.66-3.43(m，2H)，3.55(d，J＝5.7Hz，2H)，3.10(m，1H)，2.44(brs，1H)。13C NMRδ154.7，145.4，137.1，134.7，128.6，71.4，60.6，60.6，55.0，48.0，47，9。
實(shí)施例12(3R，4R)-1-1(8-氮雜-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(13)將密閉試管中的在7N NH3中的11(100mg)的甲醇溶液(4mL)在120℃加熱過(guò)夜。反應(yīng)物然后在真空下濃縮，將粗的殘余物溶于甲醇(1mL)和濃HCl(1mL)并使其過(guò)夜。反應(yīng)物再次在真空下濃縮，所得殘余物通過(guò)層析純化以得到13(61mg，84％)。13C NMRδ152.4，151.5，139.1，134.8，122.7，71.7，61.1，60.3，55.0，48.4，48.2。
實(shí)施例135-O-叔-丁基二甲基甲硅烷基-1，2-O-異亞丙基-α-D-赤式-呋喃戊-3-酮糖(叔-丁氧羰基)腙(5-O-tert-butyldimethylsilyl-1，2-O-usioriotkudebe-α-D-erythro-pentofuranos-3-ulose(tert-butoxycarbonyl)hybrazone)(15)將14(11.5g，38mmol)、肼基甲酸叔丁酯(17g，128mmol)和對(duì)-甲苯磺酸吡啶(1.15g，4.6mmol)的甲苯(150mL)溶液在70℃攪拌過(guò)夜。反應(yīng)完全后用飽和的NaHCO3和水洗滌反應(yīng)物，干燥(MgSO4)并在真空下濃縮以得到一種漿狀物。通過(guò)層析純化得到油狀的15(12.5g，79％)。1H NMRδ8.43(brs，1H)，5.98(d，J＝4.8Hz，1H)，4.90(dd，J＝4.8，1.5Hz，1H)，4.76(q，J＝1.5Hz，1H)，3.77(m，2H)，1.48(s，9H)，1.45(s，3H)，1.41(s，3H)，0.82(s，9H)，-0.03(d，J＝5.8 Hz，6H)。13C NMRδ153.5，152.8，114.3，105.7，82.0，81.7，76.2，66.2，28.6，28.0，27.5，26.2，18.5.HRMS(MH+)C19H37N2O6Si計(jì)算值417.2421。實(shí)測(cè)值417.2398。
實(shí)施例143-(2-叔-丁氧羰基肼基)-5-O-叔-丁基二甲基甲硅烷基-3-脫氧-1，2-O-異亞丙基-α-D-呋喃核糖(16)于-78℃在惰性氣體下將硼烷.DMS復(fù)合物(15mL，約10M，150mmol)逐滴加入正在攪拌的15(12.5g，30mmol)的溶液。使反應(yīng)物回復(fù)室溫，用甲醇小心淬滅，然后所得溶液在真空下濃縮。所得粗制漿狀物與分次加入的甲醇(3×100mL)共整蒸餾以得到油狀的16(12.5g，100％)，該物質(zhì)無(wú)需進(jìn)一步純化即可用于下面的步驟。1HNMRδ6.29(brs，1H)，5.67(d，J＝3.7Hz，1H)，4.62(t，J＝4.3Hz，1H)，4.24(brs，1H)，3.75(m，2H)，3.72(m，1H)，1.46(s，3H)，1.38(s，9H)，1.27(s，3H)，0.82(s，9H)，-0.03(s，6H)。13C NMRδ156.9，112.8，104.6，80.7，80.4，80.2，65.0，63.1，28.7，27.1，26.9，26.3，18.7.HRMS(MH+)C19H38N2O6Si計(jì)算值418.2499。實(shí)測(cè)值418.2509。
實(shí)施例153-(1-乙酰-2-叔-丁氧羰基肼基-5-O-叔-丁基二甲基甲硅烷基-3-脫氧-1，2-O-異亞丙基-α-D-呋喃核糖(17)將乙酸酐(10mL，過(guò)量)加入正在攪拌的16(12.5g，30mmol)的吡啶溶液(30mL)并將所得反應(yīng)物在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)完全后反應(yīng)物用氯仿稀釋(500mL)并用10％HCl、水、飽和NaHCO3和鹽水洗滌，然后將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，濾液在真空下濃縮以得到粗制的黃色油狀物。通過(guò)層析純化顯示得到無(wú)色油狀的17(6.5g，47％)。1H NMRδ7.20(brs，1H)，5.75(d，J＝3.8Hz，1H)，5.02(dd，J＝9.8，5；0Hz，1H)，4.72(t，J＝4.2Hz，1H)，4.04(dd，J＝9.8，2.2Hz，1H)，3.87(d，J＝11.6Hz，1H)，3.70(dd，J＝11.6，3.8Hz，1H)，2.09(s，3H)，1.55(s，3H)，1.42(s，9H)，1.28(s，3H)，0.84(s，9H)，-0.03(s，6H)。13C NMRδ174.5，155.2，112.7，104.7，82.0，81.0，77.2，62.9，62.0，55.0，28.5，27.0，26.7，26.3，21.1，18.7.HRMS(MH+)C21H41N2O7Si計(jì)算值461.2683。實(shí)測(cè)值461.2704。
實(shí)施例16(3S，4S)-2-乙酰-3，4-二氫-3-[(1S)-1，2-二羥基乙基]-4-羥基吡唑(18)將攪拌中的17(2.0g，4.3mmol)的70％的乙酸溶液(20mL)在100℃加熱過(guò)夜。將所得溶液冷卻，用水(100mL)稀釋?zhuān)芤河寐确?2×100mL)萃取，然后將含水層在真空下濃縮以得到一種漿狀物。產(chǎn)物通過(guò)層析醇化物以得到油狀的18(380mg，47％)。13C NMRδ173.1，150.5，112.7，74.7，69.6，65.4，62.4，21.4.HRMS(MH+)C7H13N2O4計(jì)算值189.0875。實(shí)測(cè)值189.0876。
實(shí)施例17(3S，4S)-2-乙酰-3-[(1S)-1，2-二羥基乙基]-4-羥基吡唑烷(19)。
將Pearlmans催化劑(200mg)懸浮于(3S，4S)-2-乙酰-1，5-二氫-3-[(1S)-1，2-二羥基乙基]-4-羥基-吡唑(18)(200mg，1.11mmol)的甲醇溶液并在氫氣下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濾液在真空下濃縮以得到粗制的油狀物。所得粗制產(chǎn)物通過(guò)層析純化以得到無(wú)色油狀的19(85mg，43％)。1H NMRδ4.64(dd，J＝5.7，3.4Hz，1H)，3.90(m，2H)，3.61(m，2H)，3.36(dd，J＝11.7，6.5Hz，1H)，2.71(dd，J＝11.7，6.0Hz，1H)，2.18(s，3H)。13C NMRδ174.5，75.4，72.7，68.2，65.2，56.4，21.5.HRMS(MH+)C7H14N2O4計(jì)算值190.0953。實(shí)測(cè)值190.0951。
實(shí)施例18(3R，4S)-2-乙酰-4-羥基-3-羥基甲基-吡唑烷(20)將19(80mg，0.42mmol)的乙醇溶液(5mL)逐滴加入正在攪拌的高碘酸鈉(150mg，0.7mmol)的水溶液(5mL)，加入速度可保持反應(yīng)物的溫度在5℃。反應(yīng)完全后在所得懸液中分批加入硼氫化鈉(135mg，xs)，加入速度可保持反應(yīng)物的溫度在0℃，完全加入后使反應(yīng)物回復(fù)室溫。在反應(yīng)物中加入快速色譜級(jí)二氧化硅并將所得懸液在真空下濃縮以得到白色固體。所得固體通過(guò)層析純化以得到無(wú)色油狀的20(51mg，76％)。1H NMRδ4.43(dd，J＝5.7，3.3Hz，1H)，3.91(q，J＝4.7Hz，1H)，3.75(d，J＝4.7Hz，1H)，3.31(m，1H)，3.28(dd，J＝11.8，5.7Hz，1H)，2.75(dd，J＝11.8，5.5Hz，1H)，2.17(s，3H)。13C NMRδ173.9，76.5，68.2，62.5，55.8，21.7.HRMS(MH+)C6H13N2O3計(jì)算值161.0926。實(shí)測(cè)值161.0920。
實(shí)施例19(3R，4S)-4-羥基-3-羥基甲基吡唑烷(21)將濃HCl(1.5mL)逐滴加入正在攪拌的20(15mg，0.09mmol)的甲醇溶液(1.5mL)并使所得反應(yīng)物在60℃保持3小時(shí)。將反應(yīng)物在真空下濃縮以得到21(18mg，100％)，為其二鹽酸鹽形式。1H NMRδ4.60(q，J＝2.4Hz，1H)，3.73-3.31(m，5H)。13C NMRδ72.6，68.3，60.2，54.1。
流程7實(shí)施例20N-叔-丁氧羰基-(3R，4S)-3-羥基-4-(2-苯乙烯基)吡咯烷(23)0℃在氬氣下在芐基三苯基磷鎓溴(1.75g，4.97mmol)的無(wú)水THF溶液(10mL)中加入1.6M在THF中的BuLi(2.33mL，3.73mmol)，無(wú)需冷卻將所得深紅色溶液攪拌10分鐘。再冷卻至0℃后，加入醛22(335mg，1.56mmol)(Gary B.Evans，RichardH.Furneaux，Andrzej Lewandowicz，Vern L.Schramm和Peter C.Tyler(2003)，Synthesisof Second-Generation Transition State Analogues of Human Purine NucleosidePhosphorylase，J.Med.Chem.，已出版)的THF溶液(5mL)并將所得混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。反應(yīng)物然后用水(1mL)淬滅，加入二氯甲烷(100mL)，有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉溶液(15mL)洗滌，然后用水(15mL)洗滌。用硫酸鎂干燥并在真空下濃縮，然后通過(guò)層析顯示得到漿狀的約1∶3的23的順/反混合物(290mg，64％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm反式7.28(m，5H)，6.49(d，J＝15.9Hz，1H)，6.03(dd，J＝15.9和8.1Hz，1H)，4.11(m，1H)，3.67(m，2H)，3.32(m，2H)，2.83(m，1H)，1.46(s，9H).順式7.27(m，5H)，6.58(d，J＝11.6Hz，1H)，5.43(dd，J＝11.6Hz和10.0Hz，1H)，4.11(m，1H)，3.65(m，2H)，3.21(m，2H)，2.88(m，1H)，1.44(s，9H)。
實(shí)施例21N-叔-丁氧羰基-(3R，4S)-3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷(24)在N-叔-丁氧羰基-(3R，4R)-3-羥基-4-(2-苯乙烯基)吡咯烷23(290mg，1.00mmol)的乙醇溶液(20mL)中加入10％Pd/C(250mg)，將懸液在氫氣下攪拌12小時(shí)。過(guò)濾后在真空下除去溶劑以得到254mg(87％)漿狀的標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm7.10(m，5H)，4.00(m，1H)，3.47(m，2H)，3.07(m，2H)，2.67(m，2H)，2.04(m，1H)，1.83(m，1H)，1.54(m，1H)，1.45(s，9H)。13C NMR(300MHz，Cd13)δppm(注意，由于旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的緩慢轉(zhuǎn)化，一些峰是雙峰)155.17，142.03，128.83，128.71，126.37，79.88，(74.94，71.26)，(53.17，52.90)，(49.90，49.34)，(46.11，45.52)，34.41，33.69，28.91。
實(shí)施例22(3R，4S)-3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷鹽酸鹽(25)在N-叔-丁氧羰基-(3R，4R)-3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷24(254mg，0.87mmol)的甲醇溶液(10mL)中加入濃HCl(約12N，4mL)，并將溶液在40℃攪拌30分鐘。在真空下除去溶劑并與甲苯共沸后得到了淺灰色固體狀的粗制的標(biāo)題化合物(202mg，0.89mmol，102％)。1H NMR(300MHz，MeOH-d4)δppm7.14(m，5H)，4.22(m，1H)，3.52(dd，J＝11.8和7.4Hz，1H)，3.39(dd，J＝12.3和4.9Hz，1H)，3.14(dd，J＝12.3和2.8Hz，1H)，3.02(dd，J＝11.8Hz，1H)，2.71(m，2H)，2.20(m，1H)，1.84(m，1H)，1.62(m，1H)。13C NMR(300MHz，MeOH-d4)δppm142.94，129.93，129.89，127.56，75.56，52.90，48.55，47.28，35.18，34.44。
實(shí)施例23(3R，4S)-1-[(9-脫氮-6-氯-嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷(26)在粗制的(3R，4R)-3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷鹽酸鹽25(194mg，0.85mmol)和6-氯-9-脫氮嘌呤(118mg，0.76mmol)的水懸液(2.2mL)中加入37％的甲醛水溶液(70μL，0.94mmol)和乙酸鈉(70mg，0.85mmol)。所得混合物在封管中邊攪拌邊在95℃加熱12小時(shí)。冷卻后，深棕色漿狀物用1，4-二噁烷(3mL)稀釋并將深棕色溶液預(yù)吸收到二氧化硅上。通過(guò)層析顯示得到淡黃色/褐色薄膜狀的標(biāo)題化合物(104mg，38％)。1HNMR(300MHz，MeOH-d4)δppm8.71(s，1H)，8.12(s，1H)，7.17(s，5H)，4.55(s，1H)，4.18(m，1H)，3.56(m，2H)，3.31(m，1.H)，3.04(dd，J＝11.6和7.7Hz，1H)，2.64(m，2H)，2.21(m，1H)，1.87(m，1H)，1.61(m，1H)。13C NMR(300MHz，MeOH-d4)δppm151.62，151.35，145.02，142.99，138.11，129.84，129.82，127.46，126.81，107.73，75.68，61.00，58.48，49.51，47.56，35.26，34.88。
實(shí)施例24(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷(27)將7N甲醇氨(4mL)中的7-[(3R，4R)-(3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷-1-基)甲基]-4-氯-吡咯并[3，2-d]嘧啶26(70mg，0.196mmol)的溶液在封管中于130℃邊攪拌邊加熱3小時(shí)。冷卻后在真空下除去溶劑。將殘余物置于甲醇中并將粗物質(zhì)預(yù)吸收到二氧化硅。柱層析后得到的物質(zhì)用3N HCl水溶液(4mL)在40℃處理1小時(shí)。凍干處理后得到31mg(39％)淡黃色固體狀的標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz，D2O)δppm8.40(s，1H)，7.83(s，1H)，7.26(m，5H)，4.33(m，4H)，4.07(m，1H)，3.80(m，2H)，2.75(m，2H)，2.37(m，1H)，1.90(m，1H)，1.66(m，1H).43CNMR(300MHz，D2O)δppm(注意，由于旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的緩慢轉(zhuǎn)化，一些峰是雙峰)149.54，144.47，142.40，133.05，129.05，128.85，126.51，113.64，103.48，(74.87，72.96)，(55.34，54.87)，(52.59，52.09)，(45.96，43.65)，33.30，32.94，32.33.ES-MSm/z for C19H23N5O(M+H)+338.1979；計(jì)算值338.4326。
流程9實(shí)施例25(3S，4S)-1-[(7-N-芐氧基甲基-6-O-叔-丁基-9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3，4-二羥基-4-羥基甲基-3，4-O-異亞丙基吡咯烷(29)將胺28(Bols，M.Tetrahedron Lett.1996，37，2097-2100)(0.50g，2.89mmol)和醛(5，流程3)(1.0g，2.95 mmol)的1，2-二氯乙烷溶液(50mL)和三乙酰氧基硼氫化鈉(1.1g，5.2mmol)一起攪拌1小時(shí)，然后用NaHCO3水溶液洗滌，干燥并濃縮至干。通過(guò)層析得到標(biāo)題化合物29(1.16g，2.34mmol，80％)。13C NMR(CDCl3)δ156.2，150.3(C)，150.0(CH)，137.5(C)，131.8，128.8，128.2，127.8(CH)，117.1，114.6，113.0，91.7，83.2(C)，82.4(CH)，77.3，70.2，65.7，62.1，60.5，48.4(CH2)，29.1，28.3(CH3)。
實(shí)施例26(3S，4S)-1-[(6-0-叔-丁基-9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3，4-二羥基-4-羥基甲基-3，4-O-異亞丙基吡咯烷(30)在10％Pd/C(0.25g)存在下將29(1.1g，2.21mmol)的乙醇溶液(30mL)在氫氣下攪拌。16小時(shí)后再加入催化劑，并在24小時(shí)后將固體和溶劑除去。殘余物通過(guò)層析得到漿狀的標(biāo)題化合物30(0.35g，0.93mmol，42％)。13C NMR(CD3OD)δ157.7(C)，150.2(CH)，149.8(C)，131.0(CH)，118.2，113.7，112.9，93.1，83.9(C)，83.5(CH)，66.4，62.7，61.0，48.9(CH2)，29.4，28.2(CH3)。
實(shí)施例27(3S，4S)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3，4-二羥基-4-羥基甲基吡咯烷(31)將甲醇(2.5mL)和濃HCl(2.5mL)中的30(0.15g，0.399mmol)的溶液放置1小時(shí)，然后濃縮至干。殘余物通過(guò)層析[(CH2Cl2/MeOH/aq NH310∶6∶1)得到白色固體狀的標(biāo)題化合物31(0.095g，0.34mmol，85％)。13C NMR(D2O/DCl)(85℃)8 153.8(C)，144.7(CH)，138.0(C)，132.8(CH)，118.5，103.8，78.8(C)，70.1(CH)，63.5，59.5，57.3，49.3(CH2)。
實(shí)施例28(3S，4R)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3，4-二羥基-4-甲硫基甲基吡咯烷(33)將乙基二異丙胺(0.2mL)加入30(0.14g)的二氯甲烷懸液(5mL)，然后加入甲烷磺酰氯(0.045mL)并將化合物攪拌1小時(shí)。所得溶液用常規(guī)方法處理并用硫代甲醇鈉(0.13g)處理DMF(3mL)中的粗產(chǎn)物，所得混合物在90℃加熱4小時(shí)，然后在甲苯和水之間分配。有機(jī)相用水洗滌，干燥并濃縮。將殘余物層析得到32(0.075g)。將甲醇(4mL)和濃HCl(4mL)中該物質(zhì)的溶液放置1小時(shí)，然后濃縮至干以得到白色固體狀的33.HCl(0.04g，62％)。13C NMR(D2O)δ153.4(C)，145.0(CH)，135.5(C)，133.1(CH)，118.6，102.9，79.2(C)，71.9(CH)，60.6，56.7，48.3，39.2(CH2)，17.1(CH3)。
流程10實(shí)施例29(3R，4S)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷(37)將2，4，6-三異丙基苯基磺酰氯(3.0g)加入1(1.0g)的吡啶溶液(20mL)并將所得溶液攪拌16小時(shí)，然后在60℃加熱1小時(shí)。加入氯仿并用水、2M HCl水溶液和NaHCO3水溶液洗滌溶液。進(jìn)行常規(guī)處理和層析以得到1.125g無(wú)色玻璃狀物質(zhì)34。用硫代甲醇鈉處理0.45g該物質(zhì)的DMF溶液(5mL)，并將混合物攪拌0.5小時(shí)。加入甲苯并對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行正常處理以得到0.115g粗物質(zhì)。該物質(zhì)的二氯甲烷溶液(5mL)用在二噁烷(3mL)中的4M的HCl處理。1小時(shí)后將溶液濃縮至干。將固體殘余物35溶于含有7-N-芐氧基甲基-9-脫氮-6-O-甲基次黃嘌呤-9-甲醛(0.18g)的甲醇(3mL)，并加入氰基硼氫化鈉(0.088g)。將混合物攪拌3天。加入氯仿并用正常方法處理混合物。然后層析得到36(0.178g)。將該物質(zhì)在濃HCl(10mL)中加熱回流1小時(shí)，然后將溶液濃縮至干。殘余物用甲醇/25％aqNH3(1∶1)處理1小時(shí)，然后濃縮至干。通過(guò)層析顯示得到一種固體物質(zhì)。將其溶于HCl水溶液并濃縮。將殘余物與乙醇一起研磨得到一種吸濕性的白色固體狀的37.HCl(0.048g)。13C NMR(D2O，85℃)δ154.6(C)，144.5(CH)，140.6(C)，132.6(CH)，118.6，104.6(C)，73.3(CH)，59.3，56.3，48.0(CH2)，45.7(CH)，34.7(CH2)，15.2(CH3)。
流程11實(shí)施例305-O-叔-丁基二甲基甲硅烷基-N-氰基甲基-1，4-雙脫氧-1，4-亞氨基-2，3-O-異亞丙基-D-核糖醇(39)將溴乙腈(1.46mL，20.9mmol)和乙基二異丙胺(5.46mL，56.9mmol)加入38(Horenstein，B.A.；Zabinski，R.F.；Schramm，V.L.Tetrahedron Lett.1993，34，7213-7216)(3.0g，10.45mmol)的乙腈溶液(20mL)。1小時(shí)后，將溶液濃縮至干并將殘余物層析以得到漿狀的標(biāo)題化合物39(3.4g，10.4mmol，99％)。1H NMRδ4.58(dt，J＝6.4，4.3Hz，1H)，4.20(dd，J＝6.8，4.2Hz，1H)，3.88(d，J＝17Hz，1H)，3.79(dd，J＝10.9，3.0Hz，1H)，3.58(m，1H)，3.56(d，J＝17Hz，1H)，3.19(dd，J＝9.8，6.1Hz，1H)，2.85(m，1H)，2.75(dd，J＝9.8，4.3Hz，1H)，1.44(s，3H)，1.23(s，3H)，0.82(s，9H)，0.09(s，3H)，0.08(s，3H)；13C NMRδ115.6，113.6(C)，82.2，78.3，68.6(CH)，64.7，59.3，41.0(CH2)，27.6，26.2，25.6(CH3)，18.5(C).HRMS(MH+)C16H31N2O3Si計(jì)算值327.2104。實(shí)測(cè)值327.2097。
實(shí)施例31N-(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)-1，4-雙脫氧-1，4-亞氨基-D-核糖醇鹽酸鹽(40.HCl)用與先前所述制備Immucillin-H(Evans，G.B.；Furneaux，R.H.；Gainsford，G.J.；Schramm，V.L.；Tyler，P.C.Tetrahedron 2000，56，3053-3062)相同的反應(yīng)順序?qū)-氰基甲基衍生物39(0.5g，1.53mmol)轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物，以得到無(wú)定形粉末狀的40.HCl(0.07g，0.23mmol，15％)。1H NMR(D2O)δ8.24(s，1H)，7.71(s，1H)，4.43(m，1H)，4.29-4.17(m，2H)，3.96(m，1H)，3.82-3.71(m，3H)；13C NMRδ154.2(C)，144.3(CH)，133.0(C)，124.0(CH)，117.8，115.9(C)，73.4，70.4，68.9(CH)，62.9，56.1(CH2).HRMS(MH+)C11H15N4O4計(jì)算值267.1093。實(shí)測(cè)值267.1101。
實(shí)施例32.17-N-芐氧基甲基-9-脫氮-9-甲酰-6-O-甲基次黃嘌呤(5a)將苯甲醚(10mL)和乙醚(25mL)中的7-N-芐氧基甲基-9-溴-9-脫氮-6-O-甲基次黃嘌呤(G.B.Evans等J.Org.Chem.2001，66，5723-5730)(1.0g，2.87mmol)的溶液冷卻至-70℃，并在所得懸液中加入正-丁基鋰(2.4mL，1.2M)。10分鐘后在澄清的溶液中加入無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺(1.1mL，14.2mmol)并將其在-70℃攪拌30分鐘，然后用水淬滅。進(jìn)行常規(guī)處理得到一種固體物質(zhì)，然后將其與乙醇一起研磨得到白色固體狀的標(biāo)題化合物(0.67g，2.26 mmol，78％)。熔點(diǎn)為100-101℃。1H NMRδ10.30(s，1H)，8.67(s，1H)，8.00(s，1H)，7.35-7.21(m，5H)，5.77(s，2H)，4.55(s，2H)，4.14(s，3H)；13C NMRδ184.7(CH)，157.0(C)，153.0(CH)，150.0(C)，136.9(CH)，136.5(C)，129.0，128.7，128.1(CH)，118.6，116.7(C)，78.3，71.4(CH2)，54.3(CH3).HRMS(MH+)C19H21N3O3計(jì)算值340.1661實(shí)測(cè)值340.1652。
實(shí)施例32.2N-(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基-1，4-雙脫氧-1，4-亞氨基-D-核糖醇鹽酸鹽(41.HCl)將醛(5a)(114mg，0.38mmol)加入在甲醇(1.5mL)、THF(0.5mL)和乙酸(100μL)中的38(Horenstein，B.A.；Zabinski，R.F.；Schramm，V.L.Tetrahedron Lett.1993，34，7213-7216)(100mg，0.35mmol)的溶液并將化合物攪拌10分鐘。加入氰基硼氫化鈉(88mg，1.4mmol)并將溶液攪拌4小時(shí)，然后在氯仿和NaHCO3水溶液之間分配。將有機(jī)層干燥并濃縮至干。對(duì)殘余物進(jìn)行層析得到推測(cè)的漿狀的N-(7-N-芐氧基甲基-9-脫氮-6-0-甲基次黃嘌呤-9-基)甲基-5-O-叔-丁基二甲基甲硅烷基-1，4-雙脫氧-1，4-亞氨基-2，3-O-異亞丙基-D-核糖醇(175mg，0.31mmol，88％)。將該物質(zhì)的乙醇溶液(5mL)與10％Pd/C(100mg)一起在氫氣下攪拌16小時(shí)。將固體物質(zhì)和溶劑除去并對(duì)殘余物進(jìn)行層析得到一種漿狀物(129mg)，將其溶于甲醇(5mL)和濃HCl(5mL)，將溶液加熱回流2小時(shí)。將溶液濃縮至干，將殘余物溶于水并凍干處理以得到粉末狀的標(biāo)題化合物41.HCl(80mg，0.25mmol，80％)。1H NMR(D2O)δ8.57(m，1H)，7.78(s，1H)，4.66(s，1H)，4.56(s，1H)，4.29(m，1H)，4.13(m，1H)，3.76(m，2H)，3.61(m，2H)，3.34(dd，J＝13.0，3.4Hz，1H)；13C NMRδ153.6(C)，144.8(CH)，136.7(C)，133.2(CH)，118.5，103.3(C)，71.3，70.3，68.9(CH)，57.4，57.1，50.1(CH2).HRMS(MH+)C12H17N4O4計(jì)算值281.1250。實(shí)測(cè)值281.1260。
實(shí)施例33(3R，4R)-3-羥基-4-羥基甲基-1-(次黃嘌呤-9-基)吡咯烷(47)將叔-丁基亞硝酸酯(3.5mL，30mmol，4eq.)加入游離堿3(2.25g，7.5mmol)的無(wú)水THF溶液(30mL)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3天。將溶液濃縮至干。層析得到無(wú)色漿狀的N-亞硝基化合物42(2.05g，83％)。將42(1.0g，3.1mmol)的無(wú)水THF溶液(20mL)在氬氣下冷卻至0℃并緩慢加入氫化鋁鋰(1g，26.3mmol)。將化合物在室溫下攪拌6小時(shí)，然后用15％的NaOH溶液(25mL)和水(10mL)小心淬滅。混合物用氯仿提取兩次，用NaHCO3水溶液洗滌，干燥并濃縮至干。層析(氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇，5∶2∶1)得到漿狀的肼43(0.41g，43％)。將亞胺甲酸酯(Formimidate)44(Watson，A.A.J.Org.Chem.1974，39，2911-2916)(0.224g，1.44mmol，1.2eq.)加入43(0.375g，1.2mmol)的乙醇溶液(1.5mL)并將反應(yīng)混合物加熱回流10分鐘，然后使其冷卻。將溶液濃縮至干。層析(氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇，5∶2∶1)得到淡棕色膠狀的45(0.155g，31％)。用5M HCl水溶液(36.5μL，0.183mmol)處理45(77mg，0.183mmol)的無(wú)水MeOH溶液(1mL)。除去溶劑得到棕色膠狀的鹽酸鹽。加入DMF(1.5mL)，然后加入原甲酸三乙酯(0.304mL，1.83mmol，10eq.)并將反應(yīng)混合物在120℃加熱30分鐘。冷卻后在真空下除去溶劑。殘余物通過(guò)硅膠柱層析(氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇，5∶2∶0.5)純化以得到膠狀的次黃嘌呤46(49mg，62％)。在乙醇(3mL)和25％的氨水(1mL)中的46(41mg，0.095mmol)的溶液中加入Pd(OH)2/C(20mg，20％Pd)。反應(yīng)混合物在室溫室壓下在氫氣下攪拌3小時(shí)。然后濾去催化劑并用乙醇(1.5mL)洗滌。將溶液濃縮至干并對(duì)殘余物進(jìn)行層析(二氯甲烷∶甲醇∶氨水，7∶2∶0.5)得到白色固體狀的標(biāo)題化合物47(21mg，88％)。1H NMR(CD3OD)δ8.17(s，1H)，8.07(s，1H)，4.26(m，1H)，3.85-3.64(m，4H)，3.48-3.43(m，2H)，2.49-2.41(m，1H)；13C NMRδ159.3(C)，149.7(C)，146.7(CH)，142.3(CH)，124.7(C)，72.7(CH)，63.7，63.6，58.4(CH2)，50.2(CH).M/Z C10H13N5O3(MH+)計(jì)算值252.109，實(shí)測(cè)值252.108。
流程13實(shí)施例34(3R，4S)-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷鹽酸鹽(48)。
0℃下，將甲烷磺酰氯(180μL，23mmol)逐滴加入三乙胺(400μL，29mmol)和(3R，4R)-1-叔-丁氧羰基-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(1)(2g，9.2mmol)的CH2Cl2溶液，并使所得溶液回復(fù)室溫。反應(yīng)物用CH2Cl2稀釋?zhuān)盟望}水洗滌，干燥(MgSO4)并在真空下濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠快速層析純化以得到油狀的(3R，4R)-1-叔-丁氧羰基-3-羥基-4-(甲磺酰氧基甲基)吡咯烷(900mg)。無(wú)需進(jìn)一步純化將產(chǎn)物溶于DMF(10mL)并在室溫下與硫代甲醇鈉(400mg，5.7mmol)一起攪拌過(guò)夜。反應(yīng)物用甲苯稀釋?zhuān)盟礈欤}水，干燥(MgSO4)并在真空下濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠快速層析純化以得到漿狀的(3R，4S)-1-叔-丁氧羰基-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷(600mg，2.4mmol)，未進(jìn)一步對(duì)其表征。將(3R，4S)-1-叔-丁氧羰基-3-羥基-4-(甲硫基)吡咯烷溶于MeOH(5.0mL)和濃HCl(1.0mL)并在真空下濃縮以得到漿狀的(3R，4S)-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷鹽酸鹽(48)(442mg，三個(gè)步驟的總產(chǎn)率為26％)。13C NMR(D2O)δ73.5，51.5，48.6，45.2，34.3，14.9。
實(shí)施例35(3R，4S)-1-[(6-叔-丁氧基-7-芐氧基甲基-9-脫氮嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷(49)將氰基硼氫化鈉(200mg，3.2mmol)加入正在攪拌的5(800mg，2.32mmol)和48(550mg，3.00mmol)的甲醇溶液(10mL)，并將化合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將粗反應(yīng)物吸收到二氧化硅上，干填裝到硅膠快速層析柱上并洗脫以得到固體狀的49(1.10g，78％)。1H NMR(CDCl3)δ8.48(s，1H)，7.54(s，1H)，7.33-7.23(m，5H)，5.75(s，2H)，4.50(s，2H)，4.12(m，1H)，4.02(s，2H)，3.30(dd，J＝9.9，7.5Hz，1H)，2.95(m，2H)，2.64(dd，J＝12.7，7.1Hz，1H)，2.52-2.38(m，3H)，2.07(s，3H)，1.70(s，9H)。13C NMR(CDCl3)δ156.4，150.3，150.3，137.5，133.3，128.8，128.2，127.8，117.1，111.7，83.5，77.5，76.1，70.4，61.4，58.2，48.8，47.4，37.3，29.0，16.0。
實(shí)施例36(3R，4S)-3-乙酰氧基-1-[(7-芐氧基甲基-9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-4-(甲硫基甲基)吡咯烷(50)室溫下，將乙酸酐(1mL，xs)逐滴加入在CH2Cl2(20mL)中的化合物49(1.1g，2.3mmol)、DMAP(30mg，cat.)和Et3N(2mL，xs)的溶液。15分鐘后用CH2Cl2稀釋反應(yīng)物，用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并在真空下濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠快速層析純化以得到漿狀的產(chǎn)物(1.35g)。室溫下在CH2Cl2(20mL)中的漿狀物溶液中逐滴加入TFA(5mL)并在真空下濃縮。將所得殘余物溶于CH2Cl2并用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并在真空下濃縮以得到泡沫狀的(3R，4S)-3-乙酰氧基-1-[(7-芐氧基甲基-9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-4-(甲硫基甲基)吡咯烷(50)(800mg，76％)。1H NMR(CDCl3)δ7.80(s，1H)，7.65(s，1H)，7.25-7.20(m，5H)，5.82(s，2H)，5.11(brs，1H)，4.56(s，2H)，4.47(s，2H)，3.80-3.59(m，3H)，3.32(brs，1H)，2.80-2.69(m，2H)，2.57(dd，J＝13.0，8.3Hz，1H)，2.07(s，3H)，2.05(s，3H)。13CNMR(CDCl3)δ170.7，155.4，145.8，143.3，137.2，134.2，128.8，128.3，128.1，118.1，106.9，77.4，75.7，71.2，57.0，55.8，48.1，43.5，35.0，21.0，16.1。HRMS(MH+)C23H29N4O4S計(jì)算值457.1910。實(shí)測(cè)值457.2412。
實(shí)施例37(3R，4S)-1-[(7-芐氧基甲基-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷(51)將胺50(800mg，1.75mmol)溶于POCl3并加熱回流1小時(shí)。所得溶液在真空下濃縮并與甲苯(×2)共餾以得到固體殘余物。上述反應(yīng)得到的產(chǎn)物無(wú)需進(jìn)一步純化，將其溶于MeOH(15mL)中的7N NH3并在封管中于110℃加熱過(guò)夜。反應(yīng)物在真空下濃縮并通過(guò)硅膠快速層析純化所得殘余物以得到漿狀的(3R，4S)-1-[(7-芐氧基甲基-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷(51)(500mg，69％)。1H NMR(d4-MeOH)δ8.24(s，1H)，7.85(s，1H)，7.29-7.26(m，5H)，5.74(s，2H)，4.63(s，2H)，4.43(s，2H)，4.26-4.22(m，1H)，3.70(dd，J＝11.4，6.9Hz，1H)，3.49(dd，J＝12.1，5.6Hz，1H)，3.29(dd，J＝12.3，3.3Hz，1H)，3.16(dd，J＝11.4，6.1Hz，1H)，2.76-2.67(m，1H)，2.50-2.44(m，2H)，2.07(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ153.4，153.0，149.9，138.1，137.0，130.0，129.7，129.3，116.5，106.5，79.5，75.0，72.3，60.9，57.8，50.1，47.6，36.6，16.0。
實(shí)施例38(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷(52)將胺(51)(150mg，0.37mmol)溶于濃HCl(5mL)并將所得溶液加熱回流90分鐘。反應(yīng)物冷卻至室溫，用水(50mL)稀釋并用CHCl3(×2)洗滌，含水層在真空下濃縮，然后與水(×2)共蒸餾。所得殘余物溶于NH4OH，在真空下濃縮，并將殘余物通過(guò)硅膠快速層析以得到固體狀的(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷(52)(69mg，65％)。熔點(diǎn)為108-110℃。1H NMR(D2O)δ7.96(s，1H)，7.31(s，1H)，4.00-3.95(m，1H)，3.74(s，2H)，3.05(dd，J＝10.5，7.9Hz，1H)，2.88(dd，J＝11.1，6.2Hz，1H)，2.71(dd，J＝11.1，4.0Hz，1H)，2.49(dd，J＝13.0，6.7Hz，1H)，2.40-2.24(m，2H)，2.16-2.13(m，1H)，1.93(s，3H)。13C NMR(D2O)δ150.5，150.1，145.4，130.4，113.6，108.33，75.0，59.8，56.6，47.4，45.9，35.9，14.8.HRMS(MH+)C13H20N5OS計(jì)算值294.1389。實(shí)測(cè)值294.1394。C13H19N5OS.4/3H2O的分析計(jì)算值C，49.19；H，6.88；N，22.06；S，10.10。實(shí)測(cè)值C，49.86；H6.58；N，21.63；S，9.74。
流程14實(shí)施例39(3R，4S)-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷鹽酸鹽(53)。
將(3R，4R)-1-叔-丁氧羰基-3-羥基-4-(甲磺酰氧基甲基)吡咯烷(見(jiàn)實(shí)施例34，1.10g，3.7mmol)溶于DMF(2mL)并逐滴加入DMF(10mL)中的芐硫醇(870L，7.4mmol)和NaH(270mg，60％油分散，6.8mmol)的溶液，同時(shí)在室溫下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)物用甲苯稀釋?zhuān)盟望}水洗滌，干燥(MgSO4)并在真空下濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠快速層析純化以得到漿狀的(3R，4S)-1-叔-丁氧羰基-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷。無(wú)需進(jìn)一步純化，將產(chǎn)物溶于MeOH(5.0mL)和濃HCl(1.0mL)并在真空下濃縮以得到漿狀的(3R，4S)-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷鹽酸鹽(53)(730mg，兩個(gè)步驟的總產(chǎn)率為76％)。1H NMR(D2O)δ7.40-7.27(m，5H)，4.26-4.22(m，1H)，3.74(s，2H)，3.56(dd，J＝12.4，7.2Hz，1H)，3.37(dd，J＝12.8，5.2Hz，1H)，3.21(dd，J＝12.8，3.0Hz，1H)，3.07(dd，J＝12.4，5.5Hz，1H)，2.61-2.52(m，1H)，2.47-2.34(m，2H)。13C NMR(D2O)δ138.7，129.5，129.3，127.9，73.5，51.5，48.5，45.4，35.9，31.8.(MH+)C12H18NOS計(jì)算值224.1109。實(shí)測(cè)值224.1102。
實(shí)施例40(3R，4S)-1-[(6-叔-丁氧基-7-芐氧基甲基-9-脫氮嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷(54)將氰基硼氫化鈉(200mg，3.2mmol)加入正在攪拌的5(800mg，2.32mmol)和53(570mg，2.2mmol)的甲醇溶液(10mL)，并將化合物在室溫下攪拌。將粗制反應(yīng)物吸收到二氧化硅上，干填裝到硅膠快速層析柱上并洗脫以得到固體狀的54(1.10g，78％)。1H NMR(CDCl3)δ8.45(s，1H)，7.62(s，1H)，7.27-7.22(m，10H)，5.75(s，2H)，4.51(s，2H)，4.15(s，2H)，3.67(s，2H)，3.38(dd，J＝10.7，7.0Hz，1H)，3.12-3.02(m，2H)，2.69-2.63(m，1H)，2.54-2.49(m，1H)，2.44-2.39(m，2H)，1.70(s，9H)。13C NMR(CDCl3)δ156.6，150.6，150.0，138.3，137W5，134.4，129.3，129.0，128.8，128.2，127.8，117.1，109.0，83.9，77.9，75.2，70.7，60.5，57.7，49.1，47.0，36.8，33.7，29.0.(MH+)C31H49N4O3S計(jì)算值547.2743。實(shí)測(cè)值547.2723。
實(shí)施例41(3R，4S)-3-乙酰氧基-1-[(7-芐氧基甲基-9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-4-(芐硫基甲基)吡咯烷(55)室溫下，將乙酸酐(1mL，過(guò)量)逐滴加入CH2Cl2(20mL)中的54(1.16g，2.12mmol)、DMAP(30mg，cat.)和Et3N(2mL，過(guò)量)的溶液。15分鐘后用CH2Cl2稀釋反應(yīng)物，用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，并在真空下濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠快速層析純化以得到漿狀的產(chǎn)物(1.35g)。室溫下在CH2Cl2(20mL)中的漿狀物溶液中逐滴加入TFA(5mL)并在真空下濃縮。將所得殘余物溶于CH2Cl2并用飽和NaHCO3和水洗滌，干燥(MgSO4)并在真空下濃縮以得到泡沫狀的(3R，4S)-3-乙酰氧基-1-[(7-芐氧基甲基-9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-4-(芐硫基甲基)吡咯烷(55)(900mg，兩個(gè)步驟的總產(chǎn)率為80％)。1H NMR(CDCl3)δ7.90(s，1H)，7.33(s，1H)，7.28-7.17(m，10H)，5.91(s，2H)，4.85(brs，1H)，4.58(s，2H)，3.86-3.74(m，2H)，3.68(s，2H)，3.16-3.11(m，1H)，2.84-2.80(m，2H)，2.71(dd，J＝11.4，4.6Hz，1H)，2.50-2.36(m，2H)，2.27-2.21(m，1H)，2.00(s，3H)。13CNMR(CDCl3)δ171.3，156.2，145.8，141.9，138.6，137.5，131.4，129.2，128.8，128.3，128.2，127.4，117.9，115.2，78.9，77.0，70.9，59.8，58.7，48.3，45.1，36.9，34.4，21.5.HRMS(MH+)C29H33N4O4S計(jì)算值533.2223。實(shí)測(cè)值533.2236。
實(shí)施例42(3R，4S)-1-[(7-芐氧基甲基-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷(56)將胺55(900mg，1.7mmol)溶于POCl3(15mL)并加熱回流1小時(shí)。所得溶液在真空下濃縮并與甲苯(×2)共餾以得到固體殘余物。無(wú)需進(jìn)一步純化將此殘余物溶于MeOH(15mL)中的7N NH3并在封管中于130℃加熱過(guò)夜。反應(yīng)物在真空下濃縮并通過(guò)硅膠快速層析純化所得殘余物以得到漿狀的(3R，4S)-1-[(7-芐氧基甲基-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷(56)(720mg，兩個(gè)步驟的總產(chǎn)率為87％)。1H NMR(CDCl3)δ8.32(s，1H)，7.67(s，1H)，7.35-7.25(m，10H)，5.52(s，2H)，4.56(s，2H)，4.23(s，2H)，3.68(s，2H)，3.54-3.48(m，1H)，3.22(d，J＝3.4Hz，2H)，2.83(brs，1H)，2.63-2.45(m，4H)。13C NMR(CDCl3)δ152.2，151.6，149.5，138.2，135.7，134.5，129.2，129.1，128.9，128.8，128.2，127.5，115.2，107.4，77.6，74.9，70.7，60.2，57.3，48.5，46.9，46.3，36.7，33.5，23.1。
實(shí)施例43(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷(57)將胺56(330mg，0.7mmol)溶于MeOH(4mL)和濃HCl(4mL)的溶液并加熱回流90分鐘。反應(yīng)物冷卻至室溫，用水(50mL)稀釋?zhuān)肅HCl3(×2)洗滌，含水層在真空下濃縮，然后與水(×2)共沸。將所得殘余物重溶于NH4OH，在真空下濃縮并通過(guò)硅膠快速層析純化殘余物以得到固體狀的(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷(57)(30mg，12％)。1H NMR(d4-MeOH)δ8.17(s，1H)，7.46(s，1H)，7.26-7.16(m，5H)，3.93-3.90(m，1H)，3.83-3.74(m，2H)，3.68(s，2H)，3.03-2.97(m，1H)，2.80(dd，J＝10.2，6.4Hz，1H)，2.66-2.58(m，2H)，2.38(dd，J＝12.5，8.9Hz，1H)，2.30(dd，J＝9.5，7.2Hz，1H)，2.20-2.14(m，1H)。13C NMR(d4-MeOH)δ152.5，151.4，147.4，140.4，130.4，130.4，129.8，128.3，115.5，112.9，77.3，62.7，59.2，49.3，48.6，37.5，35.6.HRMS(MH+)計(jì)算值C19H24N5OS370.1702。實(shí)測(cè)值370.1694。
流程15實(shí)施例44(3R，4S)-1-[(8-氮雜-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷鹽酸鹽(58)將氰基硼氫化鈉(20mg，0.32mmol)加入正在攪拌的甲醇(5mL)中的6(180mg，0.52mmol)和(3R，4S)-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷鹽酸鹽(53)(95mg，0.37mmol)的溶液并在室溫下攪拌過(guò)夜。將粗制反應(yīng)物吸收到二氧化硅上，干填裝到硅膠快速層析柱上并洗脫以得到泡沫狀的(3R，4S)-1-{[8-氮雜-9-脫氮-8-(四氫吡喃-2-基)-6-甲氧基次黃嘌呤-9-基]甲基}-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷(80mg，46％)。將其溶于MeOH(15mL)中的7N NH3并在封管中于110℃加熱過(guò)夜。反應(yīng)物在真空下濃縮并通過(guò)硅膠快速層析純化所得殘余物以得到(3R，4S)-1-{[8-氮雜-9-脫氮-8-(四氫吡喃-2-基)-腺嘌呤-9-基]甲基}-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷。產(chǎn)物未進(jìn)行表征，但將其溶于甲醇(2.0mL)和濃HCl(2mL)，在真空下濃縮，將所得殘余物與異丙醇一起研磨以得到白色固體狀的(3R，4S)-1-[(8-氮雜-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷鹽酸鹽(58)(52mg，82％)。13C NMR(d4-MeOH)δ153.7，152.0，139.9，138.8，135.1，130.4，130.0，128.5，124.6，74.6，61.4，58.4，50.4，47.7，37.4，33.4.(MH+)C18H23N6OS計(jì)算值371.1654。實(shí)測(cè)值371.1670。
流程16實(shí)施例457-芐氧基甲基-6-O-芐基-9-脫氮-9-甲酰-N2，N2-二(4-甲氧基芐基)-鳥(niǎo)嘌呤(59)-80℃在惰性氣體下將正-丁基鋰(0.5mL，1.5M)逐滴加入乙醚(6mL)和苯甲醚(3mL)中的正在攪拌的7-芐氧基甲基-6-O-芐基-9-溴-9-脫氮-N2，N2-二(4-甲氧基芐基)-鳥(niǎo)嘌呤(Evans，G.B.；Furneaux，R.H.；Hausler，H.；Larsen，J.S.；TVler，P.C.制備手冊(cè))溶液。將反應(yīng)物在-80℃再攪拌30分鐘，然后加入DMF(1.0mL)并使反應(yīng)物回復(fù)室溫。用水(50mL)淬滅反應(yīng)物并用氯仿(2×100mL)萃取。將有機(jī)層合并，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并在真空下濃縮以得到固體殘余物。將該固體物質(zhì)與乙醇一起研磨以得到白色固體狀的59(280mg，72％)。熔點(diǎn)172-174℃。1H NMRδ10.25(s，1H)，7.79(s，1H)，7.30-7.21(m，13H)，6.85-6.82(m，5H)，5.62(s，2H)，5.44(s，2H)，4.84(s，4H)，4.45(s，2H)，3.79(s，6H)。13C NMRδ185.5，159.4，159.1，156.5，153.9，136.9，136.7，134.9，131.5，129.5，128.9，128.5，128.3，128.0，117.3，114.2，111.0，78.4，71.0，67.9，55.7，49.5.HRMS(MH+)C38H37N4O5計(jì)算值629.2764。實(shí)測(cè)值629.2749。
實(shí)施例46(3R，4R)-1-{[6-O-芐基-7-芐氧基甲基-9-脫氮-N2，N2-二(4-甲氧基芐基)鳥(niǎo)嘌呤-9-基]甲基}-3-羥基-4-羥基甲基吡咯烷(60)將氰基硼氫化鈉(200mg，3.0mmol)加入正在攪拌的59(530mg，0.84mmol)和4.HCl(163mg，1.06mmol)的甲醇溶液(10mL)并將化合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物吸收到二氧化硅上并在真空下濃縮。將所得殘余物層析得到白色固體狀的60(430mg，70％)。熔點(diǎn)98-100℃。1H NMRδ7.49(s，1H)，7.35-7.12(s，14H)，6.81(d，J＝8.5Hz，4H)，5.59(s，2H)，5.47(s，2H)，4.85-4.73(m，4H)，4.44(s，2H)，4.23-4.12(m，3H)，3.75(s，6H)，3.50-3.35(m，3H)，3.20(dd，J＝12.0，5.0Hz，1H)，3.08(d，J＝12.0Hz，1H)，2.95(dd，J＝11.4，5.4Hz，1H)，2.24(brs，1H)。13C NMRδ159.0，158.4，156.7，153.1，137.6，137.0，135.0，131.5，129.4，128.9，128.7，128.4，128.3，128.1，128.0，125.7，114.3，110.6，105.1，78.1，73.1，70.8，68.0，62.2，60.7，55.7，54.8，49.2，48.9.HRMS(MH+)C43H48N5O6計(jì)算值730.3605。實(shí)測(cè)值730.3629。
實(shí)施例47(3R，4R)-1-[(9-脫氮鳥(niǎo)嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(61)將濃HCl(2mL)逐滴加入60(370mg，0.5mmol)的甲醇溶液(4mL)并將所得溶液加熱回流4小時(shí)。使反應(yīng)物冷卻至室溫，然后在真空下濃縮。將所得殘余物在水和氯仿之間分配，分離并在真空下濃縮水層。對(duì)所得殘余物進(jìn)行硅膠和離子交換層析得到白色固體狀的61(39mg，28％)。熔點(diǎn)223-225℃。1H NMRδ7.18(s，1H)，4.03-3.98(m，1H)，3.58(s，2H)，3.55(dd，J＝11.1，6.3Hz，1H)，3.45(dd，J＝11.1，7.4Hz，1H)，2.97(dd，J＝10.0，8.5Hz，1H)，2.79(dd，J＝10.9，6.3Hz，1H)，2.64(dd，J＝10.9，4.0Hz，1H)，2.35(dd，J＝10.3，7.0Hz，1H)，2.20-2.09(m，1H)。13C NMRδ158.6，152.8，143.5，129.6，112.7，107.9，72.8，62.6，60.2，54.8，48.9，47.8.HRMS(MH+)C12H18N5O3計(jì)算值280.1410。實(shí)測(cè)值280.1413.分析(C12H17N5O3.1/2 H2O)C，H，N。
實(shí)施例48Mannich反應(yīng)—一般過(guò)程 流程17實(shí)施例48.1—一般過(guò)程(3R，4R)-1-[(9-脫氮鳥(niǎo)嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-羥基甲基吡咯烷(61)將(3R，4R)-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷鹽酸鹽(4)(154mg，1.0mmol)和乙酸鈉(82mg，1.0mmol)溶于水(2mL)，并將溶液加入甲醛(82μL，1.0mmol)和脫氮鳥(niǎo)嘌呤(120mg，0.8mmol)的水溶液中。將反應(yīng)物在95℃攪拌12小時(shí)。加入硅膠(1.0g)并將混合物蒸發(fā)至干。通過(guò)硅膠層析純化，采用CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH(5∶4∶1)作為洗脫液，得到乙酸鹽。將其轉(zhuǎn)變?yōu)辂}酸鹽并分析1H和13C NMR譜，發(fā)現(xiàn)該化合物在所有方面都與先前的報(bào)告相同(Evans，G.B.；Furneaux，R.H.；Lewandowicz，A.；Schramm，V.L.；Tyler，.P.C.J.Med.Chem.，印刷中)5表用Mannich反應(yīng)一般方法制備的其它化合物


實(shí)施例48.2(3R，4R)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-羥基甲基吡咯烷(8)采用Mannich反應(yīng)一般過(guò)程(上述)以得到乙酸鹽形式的化合物8。將其轉(zhuǎn)化成鹽酸鹽并分析1H和13C NMR譜，發(fā)現(xiàn)該化合物在所有方面都與先前的報(bào)告相同(Evans，G.B.；Furneaux，R.H.；Lewandowicz，A.；Schramm，V.L.；Tyler，P.C.J.Med.Chem.，印刷中)。
實(shí)施例48.3(3R，4R)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(10)采用Mannich反應(yīng)一般過(guò)程(上述)以得到乙酸鹽形式的化合物10。1H NMR(d4-MeOH)δ8.20(s，1H)，7.65(s，1H)，4.27(s，1H)，4.22(五峰，J＝3.0Hz，1H)，3.59(m，2H)，3.46(dd，J＝111，8.3Hz，1H)，3.26(dd，J＝11.4，5.7Hz，1H)，3.11(dd，J＝11.4，3.0Hz，1H)，2.95(dd，J＝11.2，6.8Hz，1H)，2.37(brs，1H)，1.82(s，3H)。13CNMR(d4-MeOH)152.9，151.9，147.1，132.0，115.8，108.2，73.6，63.1，61.9，56.0，50.8，49.5，23.7.HRMS(MH+)C12H18N5O2計(jì)算值264.1461。實(shí)測(cè)值264.1457。
實(shí)施例48.4(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷(57)采用Mannich反應(yīng)一般過(guò)程(上述)以得到乙酸鹽形式的化合物57。通過(guò)離子交換層析將乙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離堿基。1H NMR(d4-MeOH).17(s，1H)，7.46(s，1H)，7.26-7.16(m，5H)，3.93-3.90(m，1H)，3.83-3.74(m，2H)，3.68(s，2H)，3.03-2.97(m，1H)，2.80(dd，J＝10.2，6.4Hz，1H)，2.66-2.58(m，2H)，2.38(dd，J＝12.5，8.9Hz，1H)，2.30(dd，J＝9.5，7.2Hz，1H)，2.20-2.14(m，1H).H).″C NMR(d4-MeOH)152.5，151.4，147.4，140.4，130.4，130.4，129.8，115.5，112.9，77.3，62.7，59.2，49.3，48.6，37.5，35.6。HRMS(MH+)C19H24N5OS計(jì)算值370.1702。實(shí)測(cè)值370.1694。
實(shí)施例48.5(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(4-氯苯硫基甲基)吡咯烷(62)采用Mannich反應(yīng)一般過(guò)程(上述)以得到乙酸鹽形式的化合物62。1H NMR(d4-MeOH)8.25(s，1H)，7.84(s，1H)，7.35-7.23(m，5H)，4.54(s，2H)，4.30(m，1H)，3.74(dd，J＝11.9，7.9Hz，1H)，3.59(dd，J＝12.2，5.6Hz，1H)，3.40-3.15(m，4H)，2.89(dd，J＝13.5，9.1Hz，1H)，2.47(brs，1H)，1.98(s，3H)。13C NMR(d4-MeOH)153.0，151.8，146.1，135.7，134.0，133.2，132.2，130.7，115.7，105.5，74.6，60.4，57.3，49.2，47.7，36.1，23.0.HRMS(MH+)C18H21CIN5OS計(jì)算值390.1155。實(shí)測(cè)值390.1264。
實(shí)施例48.6(3R，4R)-1-[(6-氯-9-脫氮嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(63)采用Mannich反應(yīng)一般過(guò)程(上述)以得到乙酸鹽形式的化合物63。1H NMR(D2O)δ.34(s，1H)，7.98(s，1H)，4.48(s，2H)，4.31(m，1H)，3.68(dd，J＝12.1，8.3Hz，1H)，3.53(d，J＝5.9Hz，2H)，3.45(dd，J＝12.6，5.5Hz，1H)，3.32(dd，J＝12.6，2.5Hz，1H)，3.13(dd，J＝12.0，7.4Hz，1H)，2.40(brs，1H)，1.82(s，3H)。13CNMR(d4-MeOH)149.7，148.6，143.4，137.6，124.8，104.5，71.3，60.7，59.8，54.4，48.0，47.8，23.5.HRMS(MH+)C12H16CIN4O2計(jì)算值283.0962。實(shí)測(cè)值283.0973。
實(shí)施例48.7(3R，4R)-1-1(6-疊氮-9-脫氮嘌呤-9-基)甲基-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷(64)采用Mannich反應(yīng)一般過(guò)程(上述)以得到乙酸鹽形式的化合物64。1HNMR(D2O)9.52(s，1H)，7.89(s，1H)，4.62(s，2H)，4.38(m，1H)，3.78(dd，J＝12.0，8.5Hz，1H)，3.60(d，J＝5.9Hz，2H)，3.55(t，J＝5.5Hz，1H)，3.42(brd，J＝11.4Hz，1H)，3.23(dd，J＝11.9，7.3Hz，1H)，2.48(brs，1H)，1.86(s，3H)。13C NMR(D2O)141.7，138.6，133.6，132.2，111.7，107.2，71.4，60.8，59.9，54.6，48.0，48.0，23.7。
實(shí)施例48.8(3R，4R)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-乙酰氧基-4-(乙酰氧基甲基)吡咯烷(65)采用Mannich反應(yīng)一般過(guò)程(上述)以得到乙酸鹽形式的化合物65。1H NMR(D2O)δ.25(s，1H)，7.69(s，1H)，5.05(五峰，J＝2.8Hz，1H)，4.23-4.06(m，4H)，3.40(dd，J＝10.5，8.1Hz，1H)，3.27-3.12(m，2H)，2.77(dd，J＝10.5，7.8Hz，1H)，2.63(m，1H)，2.03(s，3H)，2.00(s，3H)，1.98(s，3H)。13C NMR(D2O)172.9，172.6，153.0，151.1，145.4，132.1，115.6，108.8，76.6，65.1，59.6，55.8，48.6，45.7，23.4，21.3，21.1。HRMS(MH+)C16H22N5O4計(jì)算值348.1 672。實(shí)測(cè)值348.1669。
實(shí)施例49PNP的抑制該反應(yīng)涉及將肌苷(1mM)和無(wú)機(jī)磷酸鹽(50mM，pH7.4)轉(zhuǎn)化成次黃嘌呤和α-D-核糖1-磷酸。用這種方法分析需要抑制劑的濃度至少為10x酶濃度。酶濃度為1.6pM。反應(yīng)的進(jìn)程通過(guò)由黃嘌呤氧化酶(128μg；每毫升反應(yīng)混合物59毫單位)催化的次黃嘌呤氧化形成的尿酸進(jìn)行偶合測(cè)定來(lái)鑒定。用濃度為0-1nM的抑制劑來(lái)確定初始解離常數(shù)。Ki在0-4分鐘的時(shí)間段測(cè)定，平衡解離常數(shù)Ki*在35-45分鐘的時(shí)間段測(cè)定。根據(jù)以下等式確定抑制常數(shù)(Ki或Ki*)對(duì)Ki，v＝(kcat)(A)/(Km.(1+I/Ki)+A)；對(duì)Ki*，v＝(kcat)(A)/(Km.(1+I/Ki*)+A)。
化合物(8)抑制人PNP的動(dòng)力學(xué)曲線顯示在圖1中；抑制劑的濃度在右手邊標(biāo)出。
實(shí)施例50MTAP和MTAN的抑制用連續(xù)分光光度測(cè)定和非連續(xù)測(cè)定來(lái)表征本發(fā)明抑制劑以及MTAP和/或MTAN的體內(nèi)抑制。在連續(xù)分光光度測(cè)定中，MTA轉(zhuǎn)化成腺嘌呤是通過(guò)274nm處吸光度的減少測(cè)定的。在274nm，光譜特性的差別最大，MTA轉(zhuǎn)化成腺嘌呤的毫摩爾消光系數(shù)(cm-1)是1.6。在非連續(xù)測(cè)定中，將10-20μL含有在50mM磷酸解緩沖液(pH7.5)中的50μM[2，8-3H]MTA(285cpm/pmol)、10mM KCl和酶的混合物在室溫下孵育。加入1μL濃HCl或60％的高氯酸終止反應(yīng)。加入腺嘌呤作為載體(1-2μL，6mM)，將5μL樣品點(diǎn)樣到薄層纖維素片上并在比例為9∶1的1M乙酸銨(pH7.55)和異丙醇中展開(kāi)。展開(kāi)后，腺嘌呤點(diǎn)通過(guò)紫外線吸收定位，將其切下并計(jì)數(shù)氚含量。為分析血液樣品中MTAP的活性，將6μL含有1∶1血液0.6％Triton X-100的混合物加到上述測(cè)定混合物中并通過(guò)薄層層析分析在適當(dāng)時(shí)間取得的樣品。用類(lèi)似的方法測(cè)定來(lái)自小鼠肝臟的MTAP的活性。在合適的時(shí)候?qū)⒑屑s100μg蛋白質(zhì)的肝臟提取物(3μL)加到測(cè)定混合物中，然后通過(guò)薄層層析分析。
慢發(fā)作抑制和抑制常數(shù)慢發(fā)作抑制的動(dòng)力學(xué)和Ki和Ki*值的測(cè)定是通過(guò)以下方法進(jìn)行的將已知濃度的酶(1-5nM)加到具有高底物濃度和各種抑制劑濃度的反應(yīng)混合物中。對(duì)MTA核苷酶通常采用150μM的底物濃度，對(duì)MTA磷酸化酶通常采用200μM的底物濃度。這些濃度相當(dāng)于274nm的OD在0.7-1.1之間。以274nm吸光度的降低監(jiān)測(cè)產(chǎn)物的形成。測(cè)定Ki*時(shí)采用高底物濃度。該實(shí)驗(yàn)中包含兩個(gè)對(duì)照，一個(gè)對(duì)照無(wú)抑制劑，另一個(gè)對(duì)照沒(méi)有酶。這些酶對(duì)抑制劑的Ki值是將抑制劑存在時(shí)初速度與無(wú)抑制劑時(shí)的初速度的比值與抑制劑濃度擬合計(jì)算出來(lái)的，可將已知的Km和底物濃度帶入下式計(jì)算Vo′Vo=Km+[S]Km+[S]+Km[l]Kl]]>其中，Vo’是抑制劑存在時(shí)的速度Vo是不存在抑制劑時(shí)的速度[I]是抑制劑濃度同時(shí)，[S]是底物濃度而Ki*是通過(guò)與下式擬合計(jì)算出的
Vs′Vs=Km+[S]Km+[S]+Km[l]Kl*]]>其中，Vs′是抑制劑存在時(shí)達(dá)到平衡時(shí)的穩(wěn)態(tài)速度，Vs是無(wú)抑制劑時(shí)對(duì)照的穩(wěn)態(tài)速度。這些等式描述了競(jìng)爭(zhēng)性抑制，其中，底物和類(lèi)似于過(guò)渡態(tài)的抑制劑以相互排斥的方式與酶結(jié)合。
實(shí)施例51小鼠MTAP的體內(nèi)抑制給小鼠喂食200毫克化合物57，并按時(shí)間的函數(shù)取出血液樣品。將細(xì)胞溶解并在含有MTA的測(cè)定混合物中測(cè)定MTAP的殘余活性。該測(cè)定方法測(cè)量腺嘌呤從[2，8-3H]MTA的釋放。結(jié)果顯示在圖2中。
盡管已通過(guò)實(shí)施例描述了本發(fā)明，但應(yīng)該知道，在不背離本發(fā)明范圍的情況下可對(duì)其做出變化或修飾。此外，當(dāng)存在特定特征的等價(jià)形式時(shí)，如果在說(shuō)明書(shū)中特別指出，這些等價(jià)形式也包含在內(nèi)。
工業(yè)應(yīng)用本發(fā)明涉及PNP、PPRT、MTAP、MTAN和/或NH的抑制劑化合物。因此，預(yù)計(jì)所述化合物可用于治療需要抑制PNP、PPRT、MTAP、MTAN和/或NH的疾病。所述疾病包括癌癥、細(xì)菌感染、原生動(dòng)物感染或T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物 其中V選自CH2和NH，W選自NR1和NR2；或V選自NR1和NR2，W選自CH2和NH；X選自CH2和CHOH，為R或S-構(gòu)型；Y選自氫、鹵素和羥基，但當(dāng)V選自NH、NR1或NR2時(shí)Y是氫；Z選自氫、鹵素、羥基、SQ、OQ或Q，其中Q是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；R1是式(II)的殘基 R2是式(III)的殘基 A選自N、CH或CR，其中，R選自鹵素、任選取代的烷基、芳烷基或芳基、OH、NH2、NHR3、NR3R4和SR5，其中，R3、R4和R5分別是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；B選自O(shè)H、NH2、NHR6、SH、氫或鹵素，其中，R6是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；D選自O(shè)H、NH2、NHR7、氫、鹵素或SCH3，其中，R7是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；E選自N和CH；G選自CH2和NH，或G不存在，條件是，其中W是NR1或NR2，G是NH時(shí)，則V是CH2，條件是，其中V是NR1或NR2，G是NH時(shí)，則W是CH2；或其互變異構(gòu)體，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其酯，或其前藥。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中，Z選自氫、鹵素、羥基、SQ或OQ。
3.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的化合物，其中，V是CH2。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，X是CH2。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，G是CH2。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，Z是OH。
7.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，Z是SQ。
8.如權(quán)利要求1、3、4或5中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，Z是Q。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，W是NR1。
10.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，W是NR。
11.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，W選自NH、NR1或NR2，X是CH2。
12.如權(quán)利要求1、2、3、4、5、6或9中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，V、X和G都是CH2，Z是OH，W是NR1。
13.如權(quán)利要求1、2、3、4、5、7或9中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，V、X和G都是CH2，Z是SQ，W是NR1。
14.如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，Y是氫。
15.如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，Y是羥基。
16.如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，B是羥基。
17.如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，B是NH2。
18.如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，A是CH。
19.如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，A是N。
20.如權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，D是H。
21.如權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，D是NH2。
22.如權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的化合物，其中，E是N。
23.如權(quán)利要求1所述的化合物，所述化合物是(3R，4R)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(8-氮雜-9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(8-氮雜-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(2-苯基乙基)吡咯烷；(3S，4R)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3，4-二羥基-4-甲硫基甲基吡咯烷；(3R，4S)-1-[(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷；N-(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)-1，4-雙脫氧-1，4-亞氨基-D-核糖醇；N-(9-脫氮次黃嘌呤-9-基)甲基-1，4-雙脫氧-1，4-亞氨基-D-核糖醇；(3R，4R)-3-羥基-4-羥基甲基-1-(次黃嘌呤-9-基)吡咯烷；(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(甲硫基甲基)吡咯烷；(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷；(3R，4S)-1-[(8-氮雜-9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(芐硫基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(9-脫氮鳥(niǎo)嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4S)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(4-氯苯硫基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(6-氯-9-脫氮嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；(3R，4R)-1-[(6-疊氮-9-脫氮嘌呤-9-基)甲基]-3-羥基-4-(羥基甲基)吡咯烷；或(3R，4R)-1-[(9-脫氮腺嘌呤-9-基)甲基]-3-乙酰氧基-4-(乙酰氧基甲基)吡咯烷；或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其酯，或其前藥。
24一種含有藥物有效量的如權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)所述化合物的藥物組合物。
25.一種治療需要抑制嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、嘌呤核苷磷酸化酶、5’-甲硫基腺苷磷酸化酶、5’-甲硫基腺苷核苷酶和/或核苷水解酶的疾病或癥狀的方法，其特征在于，所述方法包括給予需要治療的患者藥物有效量的如權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)所述化合物。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述疾病或癥狀是癌癥、細(xì)菌感染、原生動(dòng)物感染或T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，所述T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病是銀屑病、關(guān)節(jié)炎或移植排斥。
28.如權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)所述的化合物在制造用于治療需要抑制嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、嘌呤核苷磷酸化酶、5’-甲硫基腺苷磷酸化酶、5’-甲硫基腺苷核苷酶和/或核苷水解酶的疾病或病癥的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，它們是嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)、嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(PPRT)、5’－甲硫基腺苷磷酸化酶(MTAP)、5’－甲硫基腺苷核苷酶(MTAN)和/或核苷水解酶(NH)的抑制劑。本發(fā)明還涉及這些化合物在治療包括癌癥、細(xì)菌感染、原生動(dòng)物感染、T－細(xì)胞介導(dǎo)的疾病在內(nèi)的疾病和感染中的應(yīng)用，并涉及含有這些化合物的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61P37/02GK1692120SQ03824354
公開(kāi)日2005年11月2日 申請(qǐng)日期2003年8月21日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月21日
發(fā)明者G·B·埃文斯, R·H·弗爾諾, D·H·倫茲, V·L·施拉姆, P·C·泰勒, O·V·朱布科瓦 申請(qǐng)人:阿爾伯愛(ài)因斯坦醫(yī)科葉希瓦大學(xué), 工業(yè)研究有限公司