本發(fā)明屬生物醫(yī)學(xué)類技術(shù)領(lǐng)域，涉及Wip1抑制劑CCT007093在制備治療肝再生不足疾病藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
肝臟是人體中具有最強(qiáng)再生能力的組織器官，然而在許多急慢性肝病中，仍然會出現(xiàn)肝細(xì)胞再生抑制導(dǎo)致再生不足，嚴(yán)重影響健康甚至生命。如肥胖相關(guān)的非酒精性脂肪肝再生能力受到損害，更易受到酒精及病毒的作用而出現(xiàn)肝硬化，原位移植物為脂肪肝時，由于肝再生受到抑制，移植病人存活率降低；再生障礙性和爆發(fā)性肝衰竭病人由于缺乏有效的肝再生而導(dǎo)致死亡；肝細(xì)胞增殖能力下降導(dǎo)致酒精性肝炎病人死亡率上升；肝再生抑制是老齡化人群肝臟的典型表征，由此導(dǎo)致的>65歲人群肝病死亡率占人群死亡率比例是<45歲人群的4-5倍。此外，肝硬化肝癌更是對人類健康產(chǎn)生嚴(yán)重威脅的致死性疾病，在我國僅因慢性肝炎導(dǎo)致肝硬化致死的病人每年就有28萬，肝臟移植為晚期肝硬化和肝癌唯一的治療手段，對肝臟同種異體移植物需求的增長速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于實(shí)際的供體數(shù)，致使等待肝移植的人數(shù)增加，肝臟先天具備再生能力使得將小體積移植物應(yīng)用于肝臟移植。然而臨床經(jīng)驗(yàn)顯示，移植時嚴(yán)重失代償?shù)氖荏w往往在圍手術(shù)期死亡率明顯升高，這種病人的不良結(jié)果提示，其中一些過程是抑制再生造成的。因此，尋找有效的促進(jìn)肝再生藥物成為以上臨床急慢性肝臟病人的需要。肝臟再生調(diào)控是一個復(fù)雜的多分子參與過程，為了闡明這種復(fù)雜過程的調(diào)節(jié)機(jī)制，科研人員最常用的模型為小鼠三分之二肝切除術(shù)及小鼠肝臟毒性損傷。作為唯一能夠觀察哺乳動物體內(nèi)細(xì)胞進(jìn)程的模型，小鼠三分之二肝臟切除術(shù)被研究人員認(rèn)為是最為實(shí)用的再生模型，在肝再生研究中使用也最為廣泛。綜合肝再生機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)肝臟的再生主要由三大部分調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)成，即細(xì)胞因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，生長因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。TNFα、IL-6等細(xì)胞因子第一時間參與肝臟再生的啟動調(diào)控；肝素結(jié)合性表皮生長因子(heparin-bindingEGF-likegrowthfactor)，雙調(diào)蛋白(amphiregulin)等生長因子緊隨其后促進(jìn)肝臟再生的進(jìn)行，mTOR-PS6K信號通路主導(dǎo)了代謝通路調(diào)控。Wip1(Wild-typep53-inducedphosphatase)是一種核蛋白，為絲氨酸/蘇氨酸特異蛋白磷酸酶2C型家族中的一員，由PPM1D(proteinphosphatasemagnesium-dependent1delta)基因編碼。作為一個磷酸酶，Wip1基因于1997年被發(fā)現(xiàn)，它的發(fā)現(xiàn)及命名都依賴于大名鼎鼎的原癌基因P53，這和它的功能--抑制P53蛋白的磷酸化相關(guān)。隨后Wip1大量下游蛋白相繼發(fā)現(xiàn)，如P38,ARF,ATR,CHK1,ATM,CHK2,MDM2,UNG2,NFκB,γH2X。在許多人類癌癥，如乳腺癌、卵巢透明細(xì)胞腺癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、髓母細(xì)胞瘤、胃癌、胰腺癌中均檢測到Wip1DNA和RNA的過表達(dá)，而敲除PPM1D基因的小鼠能夠抵抗乳腺癌的發(fā)生，提示W(wǎng)ip1基因是一個致癌基因。Wip1在生理病理中的作用越來越受到科研人員的關(guān)注。近年來人們在小鼠中研究發(fā)現(xiàn)敲除Wip1基因可通過ATM-mTOR信號通路影響細(xì)胞自嗜功能有效抑制動脈粥樣硬化的形成，在其癌癥功能領(lǐng)域研究亦發(fā)現(xiàn)其可調(diào)控DNA甲基化參與癌癥生成的調(diào)節(jié)。鑒于Wip1敲除小鼠可正常出生并發(fā)育，科研工作者將Wip1作為癌癥和動脈粥樣硬化的藥物靶點(diǎn)。但在肝臟組織中，Wip1的作用尚不知曉。Wip1抑制劑CCT007093為小分子化合物，CASnumber176957-55-4,分子量272.38518，化學(xué)命名為2,5-bis-(2-Thienylidene)cyclopentanone,，分子式為C15H12OS2,化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：2008年在對高表達(dá)Wip1腫瘤細(xì)胞的小分子化合物篩選中被發(fā)現(xiàn)，其可特異性殺死高表達(dá)Wip1蛋白的腫瘤細(xì)胞如乳腺癌細(xì)胞，卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞。但其在體內(nèi)是否具有Wip1磷酸酶抑制效果尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。在本項(xiàng)專利中，我們首次發(fā)現(xiàn)CCT007093在肝再生相關(guān)疾病中的應(yīng)用。具體的，本專利發(fā)現(xiàn)CCT007093在體內(nèi)可發(fā)揮抑制Wip1去磷酸化的作用,加速肝臟再生，降低大部分切肝術(shù)后死亡率，同時并未引起再生肝臟組織及再生肝臟中炎癥細(xì)胞的改變。本項(xiàng)專利亦揭示了其用于肝再生相關(guān)疾病的作用機(jī)制。CCT007093在肝臟再生過程中抑制Wip1蛋白的去磷酸化作用，Wip1以mTOR為靶蛋白抑制肝臟損傷后再生。本項(xiàng)專利亦首次揭示mTOR為Wip1的靶蛋白。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是針對上述問題，提出了Wip1抑制劑CCT007093在制備治療肝再生不足疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明以70﹪切肝術(shù)建立小鼠肝再生模型，小鼠肝臟可在11天恢復(fù)切肝前比重，符合肝再生表現(xiàn)，造模成功。我們發(fā)現(xiàn)抑制Wip1基因表達(dá)可促進(jìn)肝臟組織再生。抑制Wip1基因表達(dá)激活了mTOR-PS6K-PS6信號通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明Wip1蛋白可直接去磷酸化mTOR。本發(fā)明首次揭示mTOR為Wip1磷酸酶靶點(diǎn)。同時我們發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)給予Wip1抑制劑CCT007093可起相同的實(shí)驗(yàn)效果，并且CCT007093可提高大部分切肝術(shù)后小鼠的生存率。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示了CCT007093在促進(jìn)肝臟再生中的作用及機(jī)理。CCT007093的有效用量為3.2mg/kg，藥物配成溶劑，以腹腔注射方式給藥。該劑量可促進(jìn)小鼠70﹪肝切除術(shù)后肝再生并顯著提高80﹪肝切除術(shù)后小鼠存活率。本發(fā)明的有益效果是CCT007093能夠促進(jìn)肝臟組織再生，在肝臟組織大部分丟失時降低死亡率。CCT007093可促進(jìn)肝臟細(xì)胞增殖，增加再生肝臟比重。CCT007093通過直接激活mTOR信號通路促進(jìn)細(xì)胞增殖。本發(fā)明揭露了CCT007093可用于制備治療肝臟再生不足相關(guān)疾病的藥物，以及CCT007093用于促進(jìn)肝臟再生的作用機(jī)制。附圖說明圖1為Wip1基因敲除可增加再生肝臟比重；圖2為Wip1基因敲除可增加BRDU標(biāo)記再生肝細(xì)胞數(shù)目；圖3為Wip1基因敲除可增加再生肝臟細(xì)胞有絲分裂指數(shù)；圖4為Wip1基因敲除可增加再生肝臟中增殖細(xì)胞核蛋白抗原(ProliferatingCellNuclearAntigen，PCNA)表達(dá)水平；圖5為Wip1基因敲除可增加再生肝臟中細(xì)胞周期蛋白cyclinD蛋白表達(dá)水平；圖6為Wip1基因敲除激活再生肝臟中蛋白合成通路和脂肪酸調(diào)控通路；圖7為Wip1基因敲除激活再生肝臟中mTOR-P70S6K信號通路；圖8為mTOR抑制劑雷帕霉素(rapamycin；Rapa)可逆轉(zhuǎn)Wip1基因敲除小鼠中再生肝臟比重增加表型；圖9為mTOR抑制劑雷帕霉素可逆轉(zhuǎn)Wip1基因敲除小鼠再生肝臟中PCNA表達(dá)增高表型；圖10為饑餓后給胰島素刺激可激活HT293細(xì)胞內(nèi)mTOR蛋白活性(磷酸化mTOR表達(dá)升高)；圖11為在激活mTOR蛋白的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染W(wǎng)ip1cDNA可降低細(xì)胞內(nèi)mTOR信號通路活性(磷酸化mTOR及其下游磷酸化PS6蛋白的表達(dá))圖12為Wip1和mTOR蛋白可直接相互結(jié)合，Wip1和PS6K蛋白不存在相互結(jié)合；圖13為體外磷酸酶實(shí)驗(yàn)證實(shí)Wip1去磷酸化mTORSer2448,Ser2481兩個位點(diǎn)，且該去磷酸化作用可被Wip1抑制劑CCT007093抑制；圖14為CCT007093在小鼠體內(nèi)抑制Wip1去磷酸化作用劑量實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)圖；圖15為以磷酸化p53蛋白的表達(dá)為檢測指標(biāo)，檢測三種實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)摸索CCT007093在小鼠體內(nèi)腹腔注射抑制Wip1蛋白磷酸化實(shí)驗(yàn)；圖16為CCT007093在小鼠體內(nèi)可激活mTOR信號通路(Ser2448,Ser2481,Ser2159三個mTOR磷酸化位點(diǎn)及下游蛋白磷酸化P70S6K(T389),磷酸化S6(Ser235/236)蛋白的表達(dá))；圖17為CCT007093在293T細(xì)胞系激活mTOR信號通路劑量效應(yīng)關(guān)系；對照組(DMSO)，25μMCCT組，50μMCCT組,隨著CCT劑量的增加，mTOR信號通路(Ser2448,Ser2481,Ser2159三個mTOR磷酸化位點(diǎn)及下游蛋白磷酸化P70S6K(T389),磷酸化S6(Ser235/236)蛋白的表達(dá))越來越高；圖18為CCT007093可提高再生肝臟比重；圖19為CCT007093可增加再生肝臟中PCNA表達(dá)水平；圖20為CCT007093可提高大部分切肝術(shù)后小鼠的存活率；圖21為大部分切肝術(shù)后小鼠的存活率與肝比重存在相關(guān)性；圖22為腹腔注射CCT007093并未引發(fā)小鼠白細(xì)胞亞群(中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞)的絕對數(shù)目改變；圖23為腹腔注射CCT007093并未引發(fā)小鼠白細(xì)胞亞群(中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞)的比例改變；圖24為腹腔注射CCT007093并未引發(fā)小鼠大部分切肝術(shù)后肝組織結(jié)構(gòu)的病理改變；圖25為腹腔注射CCT007093并未引發(fā)小鼠大部分切肝術(shù)后肝組織細(xì)胞凋亡。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，而非限定本發(fā)明。本發(fā)明使用的Wip1敲除(Wip1-/-)小鼠為LawrenceA.Donehower教授贈送，p21和p53敲除小鼠來自KarlLenhardRudolph教授實(shí)驗(yàn)室。Wip1敲除小鼠分別與p21,p53敲除小鼠交配產(chǎn)生Wip1/p21，Wip1/p53雙基因敲除小鼠。清潔級C57BL/6小鼠購自JacksonLab,飼養(yǎng)于杭州師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心清潔級動物房，實(shí)驗(yàn)時小鼠為6-8周齡。在整個體內(nèi)實(shí)驗(yàn)過程中，所有操作均遵守國家及杭州師范大學(xué)倫理委員會制定的《實(shí)驗(yàn)動物使用條例》。雷帕霉素購自美國LCLaboratories；二甲基亞砜(Dimethylsulfoxide,DMSO),5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxyUridine,BRDU),CCT007093,BRDU抗體，β-肌動蛋白(β-actin)抗體等從美國Sigma-Aldrich公司購買；HT293細(xì)胞細(xì)胞株由杭州師范大學(xué)衰老研究所干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室常規(guī)保存；質(zhì)粒pCMV6-AC-GFP-PPM1D購自美國Origene公司。本發(fā)明中所使用的所有抗體，除特別說明，均購自美國CellSignalingTechnology公司。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果均是由獨(dú)立的三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)得到，采用不配對的t檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)，均用士SEM表示。P值<0.05為顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)(*<0.05，**<0.01)。實(shí)施例一：Wip1基因敲除可促進(jìn)小鼠肝臟再生對Wip1基因敲除和同窩對照野生型小鼠實(shí)施70﹪肝切除手術(shù)，檢測并分析比較手術(shù)后不同時間點(diǎn)肝比重、增殖細(xì)胞數(shù)量、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)及細(xì)胞周期蛋白CyclinD的表達(dá)，分析Wip1對肝再生的作用。結(jié)果表明，Wip1-/-小鼠肝切除術(shù)后肝比重,肝臟增殖細(xì)胞,細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白較Wip1+/+組顯著增加。Wip1-/-組小鼠術(shù)后肝重占原肝重比值顯著高于Wip1+/+組(每個時間點(diǎn)n≥12)(圖1)。免疫組化顯示術(shù)后Wip1-/-和Wip1+/+組BrdU陽性細(xì)胞，Wip-/-組小鼠術(shù)后BrdU陽性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)比值在36h顯著高于Wip1+/+組(圖2)。HE染色顯示術(shù)后有絲分裂細(xì)胞,Wip1-/-組小鼠術(shù)后有絲分裂細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)比值在36h,48h顯著高于Wip1+/+組(圖3)。Westernblot圖顯示肝切除術(shù)后各時間點(diǎn)PCNA，CyclinD蛋白表達(dá)，Wip1-/-組小鼠PCNA蛋白表達(dá)量在24h,48h顯著高于Wip1+/+組(圖4)。Wip-/-組小鼠CyclinD蛋白表達(dá)量在36h,48h，72h顯著高于Wip1+/+組(圖5)。以上結(jié)果表明Wip1缺失可通過增加進(jìn)入增殖周期細(xì)胞數(shù)量加速肝組織再生。實(shí)施例二：mTOR信號通路是Wip1促進(jìn)肝再生的靶點(diǎn)1.部分切肝術(shù)后肝再生過程中，mTOR信號通路在Wip1-/-組小鼠中高表達(dá)。為進(jìn)一步探討Wip1基因缺失促進(jìn)肝臟再生的分子機(jī)制，我們對Wip-/-組和Wip1+/+組小鼠70﹪肝臟切除術(shù)后24和36小時的再生肝組織進(jìn)行基因芯片分析，對差異蛋白高表達(dá)進(jìn)行信號通路分析，結(jié)果表明Wip-/-組小鼠蛋白和脂肪酸代謝信號通路顯著高于Wip1+/+組(圖6)。根據(jù)文獻(xiàn)(1.Espeillac,C.,etal.,S6kinase1isrequiredforrapamycin-sensitiveliverproliferationaftermousehepatectomy.JClinInvest,2011.121(7):p.2821-32.2.Goggin,M.M.,etal.,Rapamycin-sensitiveinductionofeukaryoticinitiationfactor4Finregeneratingmouseliver.Hepatology,2004.40(3):p.537-44.)報(bào)道，部分切肝術(shù)后mTOR信號通路為調(diào)控代謝的主要通路。我們對部分肝臟切除術(shù)后Wip1-/-和Wip1+/+組小鼠再生肝組織進(jìn)行中的mTOR信號通路蛋白進(jìn)行westernblot分析發(fā)現(xiàn)，磷酸化mTOR及其下游蛋白磷酸化p70S6K蛋白表達(dá)在Wip1-/-組顯著高于Wip1+/+組，表明在肝再生過程中mTOR信號通路在Wip-/-組顯著活躍于Wip1+/+組(圖7)。2.mTOR抑制劑雷帕霉素(rapamycin)可逆轉(zhuǎn)Wip1-/-組小鼠在部分肝臟切除術(shù)后肝再生加速表型在部分切肝術(shù)前2小時開始對Wip1-/-組小鼠腹腔注射雷帕霉素2.5mg/kg/d，部分肝切除術(shù)后36小時犧牲小鼠，取出再生肝組織，稱重，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雷帕霉素注射后Wip1-/-組和Wip1+/+組小鼠再生肝重比體重較注射前均顯著下降，且兩組小鼠下降至同一水平(圖8)。對再生肝組織進(jìn)行Westernblot檢測，發(fā)現(xiàn)雷帕霉素注射后PCNA蛋白在Wip1-/-組和Wip1+/+組表達(dá)均顯著下調(diào)，且下調(diào)后的PCNA蛋白表達(dá)在Wip1-/-組和Wip1+/+組無顯著差異(圖9)。以上結(jié)果提示W(wǎng)ip1-/-組小鼠部分肝切除術(shù)后再生加速依賴于mTOR信號通路。3.Wip1蛋白可與mTOR蛋白特異性結(jié)合并直接去磷酸化mTOR蛋白。對HT293細(xì)胞進(jìn)行無血清培養(yǎng)16小時，隨后加入10﹪血清和100nM胰島素37℃培養(yǎng)10分鐘，可檢測到磷酸化mTOR蛋白(ser2448,ser2481)高表達(dá)(圖10)。在該細(xì)胞中過表達(dá)Wip1cDNA可顯著降低磷酸化mTOR及其下游蛋白磷酸化S6(Ser235/236)表達(dá)水平(圖11)。Wip1蛋白分別和mTOR蛋白、p70S6K蛋白進(jìn)行免疫共沉淀，發(fā)現(xiàn)Wip1蛋白可直接結(jié)合mTOR蛋白并不與p70S6K蛋白進(jìn)行直接結(jié)合(圖12)。為進(jìn)一步確認(rèn)Wip1蛋白是否可以直接去磷酸化mTOR蛋白，我們進(jìn)行了體外磷酸酶實(shí)驗(yàn)，具體如下，裂解過表達(dá)mTOR蛋白的細(xì)胞，使用mTOR蛋白抗體和免疫磁珠純化磷酸化mTOR蛋白，加入過表達(dá)Wip1cDNA細(xì)胞的裂解液，進(jìn)行Westernblot分析，發(fā)現(xiàn)磷酸化mTOR蛋白表達(dá)顯著下降。加入Wip1抑制劑CCT007093后該抑制作用可被逆轉(zhuǎn)(圖13)。以上結(jié)果提示W(wǎng)ip1蛋白可直接去磷酸化mTOR蛋白。實(shí)施例三：Wip1抑制劑CCT007093可促進(jìn)肝再生，并顯著改善大部分切肝術(shù)后小鼠的生存率1.CCT007093可在體內(nèi)發(fā)揮Wip1抑制劑效果CCT007093在DMSO中稀釋為2.5mg/ml，分不同劑量和次數(shù)對進(jìn)行70﹪切肝術(shù)的野生型C57小鼠進(jìn)行腹腔注射(圖14)，收集術(shù)后36小時再生肝臟組織，Westernblot分析Wip1經(jīng)典下游蛋白磷酸化p53的表達(dá)檢測CCT007093抑制效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CCT007093在使用3.2mg/kg的注射劑量，四次注射的情況下可達(dá)到對Wip1的最佳抑制效果(圖15)。2.CCT007093可激活mTOR信號通路對野生型小鼠四次注射3.2mg/kg的CCT007093，并進(jìn)行70﹪切肝術(shù)，收集術(shù)后36小時再生肝組織，Westernblot檢測mTOR信號通路蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)CCT007093可顯著升高磷酸化mTOR(ser2448,ser2481,ser2159)及其下游蛋白磷酸化p70S6K(T389),磷酸化S6(Ser235/236)的表達(dá)(圖16)。在HT293細(xì)胞中通過血清饑餓實(shí)驗(yàn)激活mTOR信號通路，隨后分別加入25μM和50μMCCT007093，結(jié)果發(fā)現(xiàn)磷酸化mTOR(ser2448,ser2481,ser2159)及其下游蛋白磷酸化p70S6K(T389),磷酸化S6(Ser235/236)的表達(dá)水平隨著CCT007093劑量的升高而升高。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示CCT007093的加入與mTOR信號通路的表達(dá)存在劑量效應(yīng)關(guān)系(圖17)。3.CCT007093可加速70﹪切肝術(shù)后小鼠肝組織再生對野生型小鼠四次注射3.2mg/kg的CCT007093，并進(jìn)行70﹪切肝術(shù)，術(shù)后36小時犧牲小鼠，取出再生肝組織，稱重，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CCT007093注射后小鼠再生肝重比體重較注射前均顯著升高(圖18)。對再生肝組織進(jìn)行Westernblot檢測，發(fā)現(xiàn)CCT007093注射后PCNA蛋白表達(dá)顯著升高(圖19)。以上結(jié)果提示CCT007093注射可加速小鼠部分肝切除術(shù)后再生。4.CCT007093可降低大部分切肝術(shù)后小鼠的死亡率對野生型小鼠進(jìn)行80﹪切肝術(shù)，并在術(shù)前12小時注射3.2mg/kg的CCT00709312小時每次，記錄CCT007093組及對照組小鼠死亡時間，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，CCT007093可顯著延長80﹪切肝術(shù)后小鼠存活時間(圖20)，并且小鼠存活時間延長與小鼠肝重之間存在相關(guān)性(圖21)。以上結(jié)果提示CCT007093可通過加速大部分切肝術(shù)后小鼠肝組織再生改善小鼠術(shù)后生存率。實(shí)施例四：Wip1抑制劑CCT007093腹腔注射并未在體內(nèi)引起免疫細(xì)胞改變，破壞肝組織結(jié)構(gòu)或引起細(xì)胞凋亡等不良反應(yīng)CCT007093組及對照組小鼠取血，抗凝，全自動血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析小鼠體內(nèi)白細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞中中性粒細(xì)胞，單核細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞的絕對數(shù)目(圖22)和比例(圖23)均無改變。對大部分切肝術(shù)24，48小時后小鼠的肝組織進(jìn)行固定，包埋，石蠟切片，HE染色發(fā)現(xiàn)，CCT007093組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常(圖24)。對大部分切肝術(shù)24小時后小鼠的肝組織進(jìn)行固定，包埋，石蠟切片，TUNEL染色分析細(xì)胞凋亡情況發(fā)現(xiàn)CCT007093組小鼠肝組織細(xì)胞并未出現(xiàn)細(xì)胞凋亡及壞死(圖25)。上述實(shí)施例并非是對于本發(fā)明的限制，本發(fā)明并非僅限于上述實(shí)施例，只要符合本發(fā)明要求，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。