皮膚是一種特殊的人體器官。由于皮膚覆蓋整個身體的表面，因此很薄且非常廣闊，對成人來說，皮膚的總表面積約為1.60m²。因此皮膚的功能是在異物侵入身體時保護深層組織免受外界環(huán)境影響，包括免疫力，溫度調(diào)節(jié)，體液損失等。最后，持續(xù)經(jīng)受機械應(yīng)力意味著需要與極大靈活性相關(guān)的強壯的和富有凝聚力的結(jié)構(gòu)。由于皮膚持續(xù)承受環(huán)境攻擊，因此通過促進皮膚組成細胞的新陳代謝來保持皮膚的更新和修復是十分重要的。

在對皮膚細胞的新陳代謝和能量過程調(diào)控的研究范圍內(nèi)，本申請披露了匙羹藤提取物對皮膚細胞的代謝的有益效果；更具體地說，本申請公開了匙羹藤提取物能促進線粒體和增加細胞的能量水平，從而使其可防止或?qū)蛊つw老化的癥狀，并還可防止其受到外部攻擊所造成的損壞，如冷、風、紫外線輻射、輻射或暴露于毒素或污染物中。

所述研究進一步公開了匙羹藤提取物的效果，如下：

-培養(yǎng)的人角化細胞中的三磷酸腺苷(ATP)合成；

細胞能量基是從飲食中獲得的基本分子獲得(碳水化合物，蛋白質(zhì)，脂肪)。在線粒體上所述基本分子化合物的氧化引起能量的釋放，所述能量的形式為高能量化合物，三磷酸腺苷(ATP)。

當細胞需要能量時，ATP末端磷酸鍵水解生成二磷酸腺苷(ADP)釋放能量。根據(jù)細胞的需求，ATP不斷水解，然后再生。然而，隨著年齡的增長和皮膚細胞遭受各種氧化應(yīng)激，線粒體的完整性和功能性受損：ATP的新合成減少。

因此，確定能夠提高細胞內(nèi)ATP含量的試劑和通過刺激皮膚細胞促進ATP的新合成看來是十分重要的。

下述實施例部分的結(jié)果表明匙羹藤提取物引起ATP合成的顯著增加。

-在培養(yǎng)的人角化細胞經(jīng)受或不經(jīng)受氧化應(yīng)激時，呼吸鏈復合物IV，細胞色素C氧化酶的活性：

細胞色素C氧化酶在各種皮膚和頭發(fā)的細胞類型中發(fā)現(xiàn)；已知細胞色素C氧化酶參與線粒體呼吸鏈或氧化還原鏈的能量代謝，其控制細胞的能量水平，代謝和體內(nèi)平衡。所述細胞色素C氧化酶是由紅光活化的光受體：當光子被氧化還原鏈吸收時，通過光敏細胞的電化學勢的變化和由Ca²⁺和cAMP介導的細胞內(nèi)信號的轉(zhuǎn)導變化，光子傳送能量到呼吸系統(tǒng)誘導在細胞內(nèi)(DNA和RNA的合成，細胞增殖活性)和以ATP形式的能源生產(chǎn)過程中的一系列活動。

所述細胞色素C氧化酶能夠錯話光子轉(zhuǎn)換成分子氧這種酶可促進電子傳遞給轉(zhuǎn)化成水分子的分子氧而不形成對細胞有害的自由基中間體，根據(jù)如下簡圖：

通過細胞色素C氧化誘酶將氧氣誘導生產(chǎn)ATP和水分子的反應(yīng)簡圖

細胞色素C，底物之一，是呼吸鏈的必不可少的組分。細胞色素C在線粒體功能和細胞存活中起著重要的作用。細胞色素C的主要作用是確保借助于鐵原子價態(tài)變化的電子傳遞。細胞色素C是可溶性的，因此將電子從復合體III傳遞到復合體IV(細胞色素氧化酶)。然后細胞色素氧化酶將作為細胞色素氧化酶底物的電子轉(zhuǎn)移到氧氣。

目前大量數(shù)據(jù)使人們可斷言在老化組織的線粒體中，通過誘導脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，自由基對膜流動性的降低和某些如細胞色素氧化酶的轉(zhuǎn)運蛋白活性的降低負有主要的責任；因此，對于能夠增加細胞色素C氧化酶活性的化合物的鑒定被證明是有用的。

已被證實匙羹藤提取物對人角化細胞的細胞色素C氧化酶活性具有促進作用；此外，匙羹藤提取物的效果已在先由過氧化氫(H2O2)處理的人角化細胞上試驗，所述過氧化氫(H2O2)會引起細胞色素C氧化酶活性的顯著降低；隨后證實匙羹藤提取物顯著恢復色素C氧化酶的活性。

總之，匙羹藤提取物對于培養(yǎng)的人角化細胞的新陳代謝和能量過程的調(diào)控具有顯著效果。

-通過測定核糖-5-磷酸的培養(yǎng)的人成纖維細胞的戊糖途徑：

本申請試驗也證實，通過引起核糖-5-磷酸合成的顯著增加，匙羹藤提取物對培養(yǎng)的人角化細胞和成纖維細胞的新陳代謝和能量過程的調(diào)控具有一定的效果。

與此同時，參與ATP生產(chǎn)的糖酵解，磷酸戊糖途徑是一種生產(chǎn)NAPDH、電子供體和核糖-5-磷酸(DNA，RNA的合成)的代謝途徑，所述電子供體尤其促進細胞呼吸(Krebs循環(huán)、呼吸鏈)。

因此，根據(jù)前述的性質(zhì)，匙羹藤提取物似乎是一種增加皮膚細胞能量代謝的有用藥劑。

匙羹藤是一種生長于印度和斯里蘭卡的中部和南部熱帶森林的原生植物；匙羹藤通常用于各種治療用途的藥物制劑，尤其是用于治療糖尿病。

廣為人知的是可將匙羹藤提取物用于組合物中以應(yīng)用于皮膚，特別是因為所述組合物的著色性或其對頭發(fā)生長的抑制特性(WO 2005/067953)

但是，以本申請人的理解，迄今為止從未提出并證明具有上述性質(zhì)的匙羹藤提取物可作為代謝途徑的活化劑以給皮膚細胞提供能量。

本發(fā)明涉及一種匙羹藤提取物或一種包括所述匙羹藤提取物的化妝品組合物的化妝品應(yīng)用，所述化妝品應(yīng)用用于活化皮膚細胞的能量生產(chǎn)代謝途徑；增加ATP的合成；促進色素C氧化酶的活性；誘導核糖-5-磷酸的合成；從而對皮膚調(diào)節(jié)代謝和能量過程進行調(diào)控。

優(yōu)選的，匙羹藤提取物從植物的地上部分獲得，更優(yōu)選的，從葉子獲得，并且可用本領(lǐng)域技術(shù)人員的公知的提取方法制備。

根據(jù)一具體的實施例中，所述提取物可利用下述處理從匙羹藤地上部分的碎片中提取：

-干燥后研磨；

-水醇相中的固/液萃取，例如在水和C1～C4(如乙醇)的混合物中；

-粗過濾

-活性炭脫色

-以1μm為截止閾值的板過濾

-濃縮。

為了使提取物易于應(yīng)用，所述提取物可溶解于化妝品用基質(zhì)中，如甘油。

由此獲得一種清晰的琥珀色液體提取物。

優(yōu)選的，匙羹藤提取物為水醇提取物和/或通過甘油穩(wěn)定。

對于上述的化妝品應(yīng)用，匙羹藤提取物制備成一種化妝品組合物，所述化妝品組合物包括0.01～10％干重的匙羹藤提取物，優(yōu)選0.01～5％干重，所述干重百分比是基于所述組合物的總重量。

所述組合物可以任一劑型應(yīng)用于化妝品和護膚品領(lǐng)域，所述劑型尤其可為任選的膠凝水溶液，任選的雙相洗劑分散體，油包水型乳液(O/W)或相反的水包油型乳液(W/O)，或三重乳液(W/O/W或O/W/O)或離子和/或非離子型的囊泡分散體。所述組合物使用常規(guī)方法制備。

所述組合物基本上為流體，其具有如下外觀：白色或有色的面霜，軟膏，乳液，洗液，精華液，糊劑或泡沫。其可隨意地以氣霧劑的形式應(yīng)用于皮膚。其也可以固體的形式呈現(xiàn)，尤其是棒狀形式。其可用作護膚產(chǎn)品和/或化妝產(chǎn)品。

本發(fā)明所述組合物也可含有化妝品領(lǐng)域的常規(guī)佐劑，例如親水性或親脂性的膠凝劑、親水性或親脂性的助劑、防腐劑、抗氧化劑、溶劑、芳香劑、填充劑、過濾器、顏料，氣味吸收劑和染料。上述不同佐劑的量為相關(guān)領(lǐng)域中的常用量，例如組合物的總重量的0.01～20％。所述佐劑，根據(jù)其性質(zhì)，可被引入到油相、水相、脂囊泡和/或成納米粒子?？傊?，上述比例的佐劑可被選擇以不阻礙本發(fā)明所尋求的匙羹藤提取物的特性。

根據(jù)本發(fā)明所述組合物的預期用途，匙羹藤提取物可與其他抗老化劑關(guān)聯(lián)，尤其是抗皺劑、去色素劑、緊膚劑、去污劑、緊致劑、抗自由基劑和/或免疫保護劑和/或促進細胞新陳代謝的制劑(尤其是蛋白質(zhì)合成)和/或細胞增生。

本申請證實匙羹藤提取物和與本發(fā)明相同的化妝品組合物可用于活化皮膚細胞的代謝路徑，尤其是供應(yīng)細胞能量。所述皮膚細胞表示角化細胞，纖維母細胞和黑色素細胞，優(yōu)選的，所述皮膚細胞由角化細胞和纖維母細胞組成。

因此，匙羹藤提取物的應(yīng)用為一種用于調(diào)理皮膚細胞和/或促進皮膚細胞的新陳代謝的制劑；因此，本發(fā)明所述提取物和/或化妝品組合物可作為一種制劑用于調(diào)理皮膚細胞和/或促進皮膚細胞的新陳代謝。

本發(fā)明所述匙羹藤提取物和/或化妝品組合物還可用于使肌膚細胞達到最佳狀態(tài)，確保體內(nèi)平衡，更新和修復細胞。

同樣地，優(yōu)選的，本發(fā)明所述匙羹藤提取物和/或化妝品組合物用于皮膚的提神、調(diào)理、新生和排毒，尤其是緊張和疲勞的皮膚；增強皮膚膚色的光澤和/或外觀；也可預防和/或修復面部的疲態(tài)，如昏暗和/或暗淡的膚色；還可保護皮膚細胞和皮膚免受侵襲性環(huán)境因素的影響，例如與氣候相關(guān)的因素，如冷，風，或污染物。

本發(fā)明所述匙羹藤提取物和/或化妝品組合物也用于增強皮膚膚色的顏色和/或光澤，例如防止暗淡和/或無光澤的皮膚外觀。

本發(fā)明所述匙羹藤提取物和/或化妝品組合物還可用于調(diào)理眼部周圍，提神疲勞的眼睛，減少眼睛下面的眼袋和陰影，通?？苫謴颓逅途Τ渑娴哪樕?。

本發(fā)明所述匙羹藤提取物和/或化妝品組合物可用于提神和抗疲勞治療。

上述申請優(yōu)選面部皮膚，即臉上、脖子、肩部和/或眼部周圍，但也適用于但也適用于人體特定皮膚的美容治療。

本發(fā)明也涉及一種美容治療方法，用于活化皮膚細胞的代謝路徑供應(yīng)細胞能量；皮膚的提神，調(diào)理，新生或解毒；調(diào)理眼部周圍，提神疲勞的眼睛，減少眼睛下面的眼袋和陰影，通?？苫謴颓逅途Τ渑娴哪樕槐景l(fā)明包括匙羹藤提取物和包含所述匙羹藤提取物的化妝品組合物的皮膚應(yīng)用。

皮膚上的應(yīng)用可以劑型的形式實現(xiàn)。例如，本發(fā)明所述組合物可僅包括皮膚上的應(yīng)用或伴隨皮膚按摩的應(yīng)用。

本發(fā)明優(yōu)選足夠量的組合物實現(xiàn)，以處理所需處理的的整個皮膚表面。例如，包括一個常規(guī)應(yīng)用，如在皮膚上的乳膏，也包括充當治療面膜的應(yīng)用。

下文所述的實施例一方面涉及匙羹藤提取物的生物效應(yīng)的評價，另一方面也涉及本發(fā)明所述組合為的生物效應(yīng)的評價。

實施例參考以下附圖，圖1、圖2A、圖2B和圖3的直方圖。所述實驗組包括未經(jīng)處理的對照實驗，經(jīng)過處理的0.125％匙羹藤葉提取物，經(jīng)過處理的0.25％匙羹藤葉提取物。

圖1表示ATP含量的直方圖；

圖2A表示含有H₂O₂的細胞色素C氧化酶的活性的的直方圖；

圖2B表示不含H₂O₂的細胞色素C氧化酶的活性的直方圖；

圖3表示核糖-5-磷酸含量的直方圖。

下述的一組實施例中，實驗產(chǎn)品為通過上述水醇萃取方法獲得并用甘油穩(wěn)定的匙羹藤葉提取物(1.5％干重提取物在70％/30％甘油/水混合物中)

實施例1-所述提取物在培養(yǎng)的人角化細胞內(nèi)的ATP合成中效果研究

原料和方法

實驗組：

實驗組1：未經(jīng)處理的對照組

實驗組2：在培養(yǎng)基中，匙羹藤提取物的濃度稀釋至0.125％

實驗組3：在培養(yǎng)基中，匙羹藤提取物的濃度稀釋至0.25％

細胞培養(yǎng)

角化細胞的培養(yǎng)使用包皮環(huán)割手術(shù)收集的人體包皮皮膚，并補充胰島素、上表皮生長因素和垂體制劑使其在KGM2培養(yǎng)基(角質(zhì)細胞生長培養(yǎng)基，KGN2，培養(yǎng)基)中擴增。所述試驗在第3代角質(zhì)細胞上進行。細胞在多孔培養(yǎng)皿以1×10⁵細胞的比率接種。在37℃(5％CO₂)培育24小時后，在細胞的對數(shù)生長期采用0.125％和0.25％濃度的匙羹藤提取物處理。經(jīng)過24小時的處理后，對細胞取樣，并進行所述ATP的測定。

ATP測定：

ATP的測定使用PROMOKINE測定試劑盒(Promocell，法國)。使用分光光度計在570nm波長下進行比色測定。

結(jié)果

表I

所得結(jié)果證明0.125％和0.25％濃度的匙羹藤提取物引起ATP合成的顯著增加，分別增加了19％和22％。

實施例2-所述提取物對細胞色素C氧化酶的活性的效果研究，所述細胞色素C氧化酶為呼吸鏈復合物IV，其位于經(jīng)受氧化應(yīng)激或不經(jīng)受氧化應(yīng)激的培養(yǎng)的人角質(zhì)細胞上。

原料和方法

實驗組：

實驗組1：未經(jīng)處理的對照組

實驗組2：在培養(yǎng)基中，匙羹藤提取物的濃度稀釋至0.125％

實驗組3：在培養(yǎng)基中，匙羹藤提取物的濃度稀釋至0.25％

實驗組4：經(jīng)過H₂O₂處理的對照組

實驗組5：在培養(yǎng)基+H₂O₂中，匙羹藤提取物的濃度稀釋至0.125％

實驗組6：在培養(yǎng)基+H₂O₂中，匙羹藤提取物的濃度稀釋至0.25％

細胞培養(yǎng)

角化細胞的培養(yǎng)使用包皮環(huán)割手術(shù)收集的人體包皮皮膚，并補充胰島素、上表皮生長因素和垂體制劑使其在KGM2培養(yǎng)基(角質(zhì)細胞生長培養(yǎng)基，KGN2，培養(yǎng)基)中擴增。所述試驗在第3代角質(zhì)細胞上進行。細胞在多孔培養(yǎng)皿以1×10⁶細胞的比率接種。在37℃(5％CO₂)培育24小時后，在細胞的對數(shù)生長期采用0.125％和0.25％濃度的匙羹藤提取物單獨處理或在含有H₂O₂的情況下處理。

細胞色素C氧化酶的活性評價

經(jīng)過24小時的處理后，對細胞取樣，沖洗并懸浮于磷酸緩沖鹽溶液中。細胞色素C氧化酶的活性評價使用分析試劑盒(細胞色素C氧化酶測定試劑盒-Sigma公司)。

結(jié)果

表II

所得結(jié)果顯示，與未經(jīng)處理對照組相比，0.125％和0.25％濃度的匙羹藤提取物促進了人角化細胞的細胞色素C氧化酶的活性，分別增加了17％和23％。

用過氧化氫(H₂O₂)單獨處理的細胞引起細胞色素C氧化酶的活性的顯著降低(-34％)。當存在H₂O₂時，0.125％和0.25％濃度的匙羹藤提取物促進了恢復了細胞色素C氧化酶的活性(+13％和+16％)

總之，匙羹藤提取物對培養(yǎng)的人角化細胞的新陳代謝和能量過程的調(diào)控具有顯著效果。

實施例3-所述提取物對人角化細胞的戊糖路徑的效果研究，通過測定核糖-5-磷酸。

原料和方法：

實驗組：

實驗組1：未經(jīng)處理的對照組

實驗組2：在培養(yǎng)基中，匙羹藤提取物的濃度稀釋至0.125％

實驗組3：在培養(yǎng)基中，匙羹藤提取物的濃度稀釋至0.25％

細胞培養(yǎng)

角化細胞的培養(yǎng)使用包皮環(huán)割手術(shù)收集的人體包皮皮膚，并補充牛血清、左旋谷酰胺和抗生素使其在RPMI 1640培養(yǎng)基中擴增。所述試驗在第3代角質(zhì)細胞上進行。細胞在多孔培養(yǎng)皿以1×10⁵細胞的比率接種。在37℃(5％CO₂)培育24小時后，在細胞的對數(shù)生長期采用0.125％和0.25％濃度的匙羹藤提取物處理。

核糖-5-磷酸的測定

經(jīng)過24小時的處理后，對細胞取樣，并對細胞沉淀物在冰浴下超聲處理30s，在壓力11000g、溫度10℃下離心5min。上層清液轉(zhuǎn)移到干凈試管中。通過在試樣中加入含有3μmol/l IS，隨后在-20℃存儲至少30min來脫蛋白，終止殘余的酶活性。隨后加入15μl磷酸緩沖液(pH 11.5；1mol/l)中和溶液，試樣在壓力21000g、溫度4℃下離心5min。上層清液轉(zhuǎn)移到玻璃瓶中并在注射前于-20℃的溫度下儲存。制備一系列的標準溶液，包含核糖-5-磷酸的濃度分別為0.625、1.25、2.5、3.75和6.25μmol/l。所述標準溶液處理方法同上。核糖-5-磷酸的濃度通過LC-MS/MS測定。

結(jié)果

表III

所得結(jié)果證明0.125％和0.25％濃度的匙羹藤提取物引起了核糖-5-磷酸合成的顯著增加，分別增加了26％和33％。

總之，匙羹藤提取物對培養(yǎng)的人角化細胞的新陳代謝和能量過程的調(diào)控具有顯著效果。

實施例4-組分組成

精華液(％)

高分子膠(0.60)

纖維素羧甲醚(0.20)

戊二醇(2.00)

氨丁三醇(0.52)

甘油&水&聚乙二醇-8&辛乙二醇&聚丙烯酸鈉(5.00)

水&甘油&甘油丙烯酸/丙烯酸&共聚物(10.00)

匙羹藤(3.00)

防腐劑(QS)

絡(luò)合劑(QS)

芳香劑(QS)

去離子水(QSP 100)

保濕霜(％)

十六硬脂酸酯&十二醇硫酸鈉&鯨蠟硬脂醇硫酸酯鈉(1.70)

氫化聚異丁烯(7.00)

異壬酸異壬酯(5.00)

甘油硬脂酸酯(5.60)

C12-15烷基苯酸酯(3.50)

聚乙二醇-甲基葡萄糖&倍半硬脂酸酯(0.50)

甘油(3.00)

高分子膠(0.25)

二氧化硅(0.15)

云母(0.10)

滑石粉(0.50)

甘油&水&聚乙二醇-8&辛乙二醇&聚丙烯酸鈉(5.00)

二甲基硅氧烷&聚二甲基硅氧(0.15)

維生素E(0.20)

匙羹藤(1.00)

防腐劑(QS)

絡(luò)合劑(QS)

芳香劑(QS)

去離子水(QSP 100)

保濕凝膠(％)

木薯粉(1.00)

銨&丙烯酰二甲基?；撬?VP&共聚物(1.00)

乙二醇(5.00)

乙基己基甘油(0.20)

水&甘油&甘油丙烯酸/丙烯酸&共聚物(5.00)

辛酸/癸酸甘油三酯(1.50)

環(huán)甲硅油(5.00)

苯基三甲基聚硅氧烷(1.00)

環(huán)戊硅氧烷&聚乙二醇/聚丙二醇-18/18二甲基硅烷(1.00)

維生素E(0.20)

匙羹藤(1.00)

乙二氨四醋酸四鈉(0.05)

防腐劑(QS)

芳香劑(QS)

去離子水(QSP 100)。