一種pafr拮抗劑及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種血小板活化因子受體(PAFR)拮抗劑及其應(yīng)用，該P(yáng)AFR拮抗劑包括丹參酚酸A和甘松新酮，可有效抑制血小板聚集，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明其在抑制血小板聚集方面有顯著的療效，同時(shí)無(wú)任何毒性、副作用少，可用于制備預(yù)防或治療PAF與PAFR結(jié)合所致疾病的藥物。
【專利說(shuō)明】一種PAFR拮抗劑及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥單體組合物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種血小板活化因子受體（PAFR) 拮抗劑及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 血小板活化因子（platelet activating factor，PAF)是體內(nèi)一種重要的多功能 磷脂遞質(zhì)，PAF主要由中性粒細(xì)胞、血小板、肥大細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，有廣泛 的生物活性。PAF通過(guò)與PAF受體（PAFR)結(jié)合可引起很多生理、病理反應(yīng)，如血栓形成、低 血壓、支氣管痙攣、內(nèi)臟器官損傷、神經(jīng)損傷、急性胰腺炎、哮喘等。PAFR拮抗劑能阻斷這些 效應(yīng)的發(fā)生，從而能拮抗血小板活化，進(jìn)而對(duì)PAF誘導(dǎo)的心血管疾病具有很好的治療和預(yù) 防作用，包括：抑制血栓形成，抑制哮喘病人接觸抗原后的早期支氣管收縮，抑制特異質(zhì)個(gè) 體接觸抗原后的遲發(fā)性皮膚過(guò)敏，以及對(duì)腦缺血及腦炎性損傷有保護(hù)作用，有很大的應(yīng)用 價(jià)值。綜上所述，尋找與發(fā)展新型、高效、安全、低毒、方便的血小板活化因子受體拮抗劑具 有重要臨床意義。
[0003] 近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)血小板活化因子專一性受體拮抗劑的研宄十分活躍，進(jìn)展也較 快目前已知的PAFR受體抑制劑主要分為三類：（I)PAF結(jié)構(gòu)底物類似物，以PAF為模型設(shè)計(jì) 的一系列甘油衍生物，主要有ev3988、eV5898、CV6290等.（2)天然藥物，包括銀杏樹中提取 的的銀杏內(nèi)酯類，海風(fēng)藤中提取的海風(fēng)滕酮，川芎中提取的川芎嗪（3)化學(xué)合成物WEB2086 等。
[0004] 丹參酷酸A為從中藥丹參（拉丁學(xué)名：Salvia miltiorrhiza Bunge)提取、精制 而成的化合物，分子式為C26H22010,相對(duì)分子質(zhì)量為494. 45,近年來(lái)臨床研宄發(fā)現(xiàn)其具有 血小板聚集活性；甘松新酮為敗醬科植物甘松（拉丁學(xué)名：N. chinensis Batal)的干燥根 及根莖提取、精制而成的化合物，分子式為C15H2203,相對(duì)分子質(zhì)量為250. 33,近年來(lái)臨床 研宄發(fā)現(xiàn)其具有促神經(jīng)生長(zhǎng)、改善認(rèn)知能力、保護(hù)心肌細(xì)胞、降血壓、抑菌與抗瘧、抗腫瘤等 多種藥理活性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的在于通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)分子對(duì)接方法和動(dòng)物試驗(yàn)相結(jié)合的方 式篩選活性組合物，從而提供一種血小板活化因子受體拮抗劑及其應(yīng)用。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過(guò)大量試驗(yàn)研宄和不懈探索，最終獲得了如下 技術(shù)方案：
[0007] -種血小板活化因子受體（PAFR)拮抗劑，包括丹參酚酸A和甘松新酮。優(yōu)選地， 所述的PAFR拮抗劑由丹參酚酸A和甘松新酮組成。
[0008] 為了進(jìn)一步得到更好的血小板活化因子受體拮抗效果，所述的PAFR拮抗劑中丹 參酚酸A和甘松新酮的質(zhì)量用量比優(yōu)選為1 :1-5。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的PAFR拮抗劑中丹 參酚酸A和甘松新酮的質(zhì)量用量比為1 :1-3。在本發(fā)明的一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施例中，所述的 PAFR拮抗劑中丹參酚酸A和甘松新酮的質(zhì)量用量比為I :1. 5。
[0009] 本發(fā)明人對(duì)眾多中藥單體化合物應(yīng)用MacroModel小分子配體前處理優(yōu)化模塊對(duì) 活性組分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行前處理優(yōu)化，能量閾值設(shè)定為0. 5kJ ?ηπΓ1 · moΓ1;通過(guò)Swiss-Prot搜 尋PAFR蛋白的一級(jí)氨基酸序列，該蛋白共有342各氨基酸殘基，以人源κ阿片受受體（PDB ID 4DJH的A鏈）為模板，在Swiss-Prot和NCBI蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索目標(biāo)序列基礎(chǔ)上， 選用Prime模塊應(yīng)用同源模建方式，在NCBI BLAST序列比對(duì)基礎(chǔ)上建立了 PAFR蛋白三維 結(jié)構(gòu)加入到系統(tǒng)中，進(jìn)行加氫原子、刪除水分子、處理重原子前處理，采用glide對(duì)接模塊 下receptor grid generation面板確定PAFR蛋白結(jié)構(gòu)的活性位點(diǎn)區(qū)域；將化合物分子導(dǎo) 入系統(tǒng)中，PAFR蛋白和小分子物質(zhì)間距離設(shè)定為1. 0/0. 8 ;精度方面選擇標(biāo)準(zhǔn)精度，將化合 物小分子分別引入到PAFR蛋白結(jié)構(gòu)的活性位點(diǎn)區(qū)域，與PAFR蛋白進(jìn)行虛擬篩選工作，每個(gè) 化合物對(duì)接工作，記錄虛擬篩選評(píng)價(jià)打分指標(biāo)對(duì)接得分Glide-Score、范德華力、親脂性能、 結(jié)合能Glide energy、氫鍵指標(biāo)等數(shù)據(jù)，并結(jié)合體外動(dòng)物試驗(yàn)，最終發(fā)現(xiàn)丹參酷酸A和甘松 新酮組成的組合物對(duì)小鼠血小板活化因子受體的拮抗作用最強(qiáng)，并且具有協(xié)同作用，這預(yù) 示著丹參酚酸A聯(lián)用甘松新酮可以治療PAF與PAFR結(jié)合所致疾病。因此，本發(fā)明還提供一 種制藥用途，即：丹參酚酸A聯(lián)用甘松新酮在制備預(yù)防或治療PAF與PAFR結(jié)合所致疾病的 藥物中的應(yīng)用。PAF與PAFR結(jié)合所致疾病包括：血栓形成、低血壓、支氣管痙攣、內(nèi)臟器官 損傷、神經(jīng)損傷、急性胰腺炎、哮喘。
[0010] 本發(fā)明通過(guò)采用經(jīng)典的整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法結(jié)合PAFR活性測(cè)試和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)不 同比例的組合物進(jìn)行抑制率測(cè)定，將丹參酚酸A與甘松新酮配伍組合給藥發(fā)現(xiàn)二者具有顯 著地協(xié)同抑制血小板聚集作用，特別是兩種活性成分的質(zhì)量配比為1:1. 5時(shí)具有更好的抑 制血小板聚集的協(xié)同作用?？朔说⒎铀酇與甘松新酮兩個(gè)單一化合物給藥劑量過(guò)大， 抗血小板聚集活性偏低的缺點(diǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0011] 以下是本發(fā)明的動(dòng)物試驗(yàn)例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案和技術(shù)效果做進(jìn)一步說(shuō)明和闡 述。但是，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不受限于以下實(shí)施例，凡是基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技 術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0012] 實(shí)施例1
[0013] 小鼠32只，體質(zhì)量18-22g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，隨機(jī)分為4組， 每組8只，分別給予表1中相對(duì)應(yīng)的藥物及相應(yīng)的劑量，藥物事先用生理鹽水按照相應(yīng)的劑 量溶解，尾靜脈注射給藥，每日給藥1次，連續(xù)給藥7天，末次給藥結(jié)束后2小時(shí)內(nèi)摘取小鼠 眼球取血，肝素鈉抗凝，5000轉(zhuǎn)每分鐘離心取上清液得到含藥血漿，備用。
[0014] 選用南京明澤生物科技有限提供的小鼠血小板活化因子（PAF)酶聯(lián)免疫分析 (ELISA)試劑盒，參照說(shuō)明書應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠血小板活化因子（PAF)水 平，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（0D值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠血小板活 化因子（PAF)濃度分別對(duì)上述的含藥血漿進(jìn)行檢測(cè)。將每個(gè)測(cè)得值與空白對(duì)照組的差值除 以空白對(duì)照組的測(cè)得值，即得PAFR抑制率，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表1。
[0015] 通過(guò)表1的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，丹參酚酸與甘松新酮的聯(lián)用組與兩個(gè)化合物的單 藥組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P < 0. 05)，這表明丹參酚酸A聯(lián)用甘松新酮可協(xié)同抑制PAFR。
[0016] 表I PAFR試劑盒檢測(cè)結(jié)果

【權(quán)利要求】
1. 一種PAFR拮抗劑，其特征在于，所述的PAFR拮抗劑包括丹參酚酸A和甘松新酮。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的PAFR拮抗劑，其特征在于，所述的PAFR拮抗劑由丹參酚酸A 和甘松新酮組成。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的PAFR拮抗劑，其特征在于，丹參酚酸A和甘松新酮的質(zhì) 量用量比為1 :1_5。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的PAFR拮抗劑，其特征在于，丹參酚酸A和甘松新酮的質(zhì)量用 量比為1 :1_3。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的PAFR拮抗劑，其特征在于，丹參酚酸A和甘松新酮的質(zhì)量用 量比為1 :1. 5。
6. 丹參酚酸A聯(lián)用甘松新酮在制備預(yù)防或治療PAF與PAFR結(jié)合所致疾病的藥物中的 應(yīng)用。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的PAF與PAFR結(jié)合所致疾病包括： 血栓形成、低血壓、支氣管痙攣、內(nèi)臟器官損傷、神經(jīng)損傷、急性胰腺炎、哮喘。
【文檔編號(hào)】A61P7/02GK104490866SQ201410742153
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年12月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月8日
【發(fā)明者】居文政, 馬世堂, 戴國(guó)梁 申請(qǐng)人:江蘇省中醫(yī)院