提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，通過特殊升降溫、過濾、氧化、沉淀的方式提高精品肝素鈉的熱穩(wěn)定性。本發(fā)明提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，通過控制料液的濃度、酸堿度、升降溫的速度和過濾器的孔徑，再經(jīng)過氧化、沉淀等步驟，去除精品肝素鈉中隱藏雜質(zhì)，從而提高精品肝素鈉的熱穩(wěn)定性，確保肝素鈉注射液無可見異物。
【專利說明】提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉是由己糖醛酸(L-艾杜糖醛酸、D-葡萄糖醛酸)和D-硫酸氨基葡萄糖以I — 4糖苷鍵交替形成的粘多糖，具有六糖或八糖重復(fù)單位的線性鏈狀結(jié)構(gòu)，其分子量在3000—37000之間，平均分子量在15000。自1916年首次發(fā)現(xiàn)肝素鈉以來，其在醫(yī)藥方面作為抗凝試劑和抗栓試劑的應(yīng)用越來越受到人們的關(guān)注。此外肝素鈉還具有抗炎、抗過敏、抗病毒、抗癌、調(diào)血脂等多種生物學功能。
[0003]肝素鈉是世界上迄今為止已知的分子結(jié)構(gòu)最復(fù)雜的化合物，短期內(nèi)無法人工化學合成，目前只有來源于豬小腸粘膜的肝素鈉能夠用于臨床治療。肝素鈉原料藥的原料是肝素鈉粗品，其提取只能源自健康生豬的小腸粘膜，由于含有大量雜質(zhì)蛋白、雜質(zhì)核酸、微生物等雜質(zhì)，需經(jīng)過物理和化學提取分離過程，定向獲取天然結(jié)構(gòu)基團完整的肝素鈉，從而制成肝素鈉原料藥。肝素鈉原料藥是標準肝素鈉制劑的唯一有效成分和低分子肝素鈉原料的生產(chǎn)起點，目前肝素鈉制劑只有按照注射給藥方式用于臨床，這使得肝素鈉原料藥需要有很高的純度，方可保證制劑的用藥安全。
[0004]基于用藥安全，保證產(chǎn)品質(zhì)量，現(xiàn)中國藥典CP2010附錄IX H對肝素鈉鈉注射液(終端滅菌產(chǎn)品)可見異物做出明確規(guī)定。
[0005]企業(yè)應(yīng)根據(jù)藥典規(guī)定建立控制肝素鈉鈉注射液(終端滅菌產(chǎn)品)可見異物的措施，保證生產(chǎn)環(huán)境、設(shè)備、設(shè)施等均符合新版GMP的要求。但采用傳統(tǒng)工藝所生產(chǎn)的肝素鈉鈉原料藥生產(chǎn)成人體注射用肝素鈉鈉注射液(終端滅菌產(chǎn)品)在控制項目可見異物(有肉眼可見的小白點)總異常超標。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種確保肝素鈉注射液無可見異物的提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法。
[0007]本發(fā)明所述的提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，包括以下步驟:
[0008](I)溶解:將肝素鈉攪拌溶解，控制溶液濃度(w/v)為13% -15% ;
[0009](2)升降溫:將步驟⑴所得的肝素鈉溶液pH調(diào)節(jié)至8.5±0.5，控制溫度為82±2°C，保溫1±0.2h,然后在30±5min內(nèi)將肝素鈉溶液溫度升至93±2°C，保溫30±5min，最后在30±5min內(nèi)將肝素鈉溶液溫度降至35-40°C，停止攪拌，靜置1.5_3h ；
[0010](3)過濾:將步驟(2)所得的溶液利用微孔過濾器過濾，收集濾液；
[0011](4)沉淀:向步驟(3)所得的濾液中加入氯化鈉，攪拌至溶解，然后加入藥用乙醇進行沉淀，沉淀靜置2.5-3.5h ；
[0012](5) 二次溶解:將步驟(4)所得沉淀物溶解，控制溶液濃度(w/v)為13% -15% ;
[0013](6)氧化:將步驟(5)所得的肝素鈉溶液的pH調(diào)節(jié)至10.5±0.5，控制溫度為25-35°C，向肝素鈉溶液中加入0.005倍體積的過氧化氫，氧化7_10h ；
[0014](7) 二次過濾:將步驟(6)所得的溶液利用微孔過濾器過濾，收集濾液；
[0015](8) 二次沉淀:將步驟(7)所得的濾液的pH調(diào)節(jié)至8.5±0.5，向濾液中加入氯化鈉，攪拌至溶解，然后加入藥用乙醇進行沉淀，沉淀靜置2.5-3.5h ;
[0016](9)凍干:將步驟⑶所得沉淀溶解，控制溶液濃度(w/v)為15% -20%，調(diào)節(jié)溶液PH為6.5-7.0，再利用微孔過濾器過濾，最后將濾液凍干。
[0017]所述步驟￠)中過氧化氫分三次加入，每次加入1/3的量，每次間隔30min。
[0018]所述過氧化氫為原濃度為30%的過氧化氫，加水稀釋，過氧化氫與水的體積比為1:3。
[0019]所述微孔過濾器的孔徑為0.22 μ mo
[0020]步驟⑷和⑶中，沉淀靜置3h。
[0021]步驟(6)中氧化時間為8h。
[0022]所述氯化鈉為質(zhì)量分數(shù)為I %的氯化鈉。
[0023]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于:本發(fā)明提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，通過控制料液的濃度、酸堿度、升降溫的速度和過濾器的孔徑，再經(jīng)過氧化、沉淀等步驟，去除肝素鈉中隱藏雜質(zhì)，從而提高肝素鈉的熱穩(wěn)定性，確保肝素鈉注射液無可見異物。

【具體實施方式】
[0024]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0025]實施例1
[0026]對300g肝素鈉原料(質(zhì)量符合CP2010的規(guī)定，但該批原料灌裝的肝素鈉鈉注射液2ml5000單位，可見異物有小白點，檢出不合格)進行熱穩(wěn)定性處理。
[0027]設(shè)備儀器:燒杯(5000mlI 個；250ml 2 個)、量筒(250ml I 個；100ml I 個)、玻璃棒2個、水浴鍋2個、溫度計、0.22 μ m囊式過濾器(PALL)、蠕動泵、凍干機。
[0028]初始物料:300g肝素鈉原料(質(zhì)量符合CP2010的規(guī)定，但該批原料灌裝的肝素鈉鈉注射液2ml 5000單位，可見異物有小白點，檢出不合格)。
[0029]初始物料性狀:凍干粉狀。
[0030]具體操作如下:
[0031](I)溶解:將300g肝素鈉原料置于5000ml的燒杯中，加入2.2L純化水，攪拌溶解，物料濃度約13.6% ;
[0032](2)升降溫:將步驟(I)所得的肝素鈉溶液pH調(diào)節(jié)至8.5，然后水浴升溫，緩緩攪拌，30min后，溶液溫度升至82°C，開始保溫lh，然后轉(zhuǎn)移到另一水浴鍋內(nèi)，25min內(nèi)升溫至93°C，開始保溫30min，最后在水浴降溫，30min內(nèi)將溶液溫度降至38 °C ;停止攪拌，靜止放置2h ；
[0033](3)過濾:將步驟⑵所得的溶液利用蠕動泵與0.22 μ m囊式過濾器進行過濾；
[0034](4)沉淀:向步驟(3)所得的濾液中加入22gl%的氯化鈉，攪拌至溶解，邊攪拌邊加入2.64L藥用乙醇，沉淀靜置3h ；
[0035](5) 二次溶解:將步驟(4)所得沉淀物加入2L純化水溶解，控制溶液濃度(w/v)為15% ；
[0036](6)氧化:將步驟(5)所得的肝素鈉溶液的pH調(diào)節(jié)至10.5，水浴控制溫度為28°C，將1ml過氧化氫分三次加入肝素鈉溶液中，每次間隔30min，氧化8h ；
[0037](7) 二次過濾:將步驟(6)所得的溶液利用蠕動泵與0.22 μ m囊式過濾器進行過濾，收集濾液；
[0038](8) 二次沉淀:將步驟(7)所得的濾液的pH調(diào)節(jié)至8.0，向濾液中加入20gl %的氯化鈉，攪拌至溶解，然后邊攪拌邊加入2.4L藥用乙醇，沉淀靜置3h ;
[0039](9)凍干:將步驟(8)所得沉淀用2.0L純化水溶解，控制溶液濃度(w/v)為15%，調(diào)節(jié)溶液PH為6.5，利用蠕動泵與0.22 μ m囊式過濾器進行過濾，最后將濾液凍干。
[0040]實施例2
[0041]對450g肝素鈉原料(質(zhì)量符合CP2010的規(guī)定，但該批原料灌裝的肝素鈉鈉注射液2ml5000單位，可見異物有小白點，檢出不合格)進行熱穩(wěn)定性處理。
[0042]設(shè)備儀器:燒杯(5000mlI 個；250ml 2 個)、量筒(250ml I 個；100ml I 個)、玻璃棒2個、水浴鍋2個、溫度計、0.22 μ m囊式過濾器(PALL)、蠕動泵、凍干機。
[0043]初始物料:450g肝素鈉原料(質(zhì)量符合CP2010的規(guī)定，但該批原料灌裝的肝素鈉鈉注射液2ml 5000單位，可見異物有小白點，檢出不合格)。
[0044]初始物料性狀:凍干粉狀。
[0045]具體操作如下:
[0046](I)溶解:將450g肝素鈉原料置于5000ml的燒杯中，加入3.3L純化水，攪拌溶解，物料濃度約14.0% ;
[0047](2)升降溫:將步驟⑴所得的肝素鈉溶液pH調(diào)節(jié)至8.0，然后水浴升溫，緩緩攪拌，30min后，溶液溫度升至80°C，開始保溫lh，然后轉(zhuǎn)移到另一水浴鍋內(nèi)，25min內(nèi)升溫至91°C，開始保溫35min，最后在水浴降溫，25min內(nèi)將溶液溫度降至35 °C ;停止攪拌，靜止放置 2.5h ;
[0048](3)過濾:將步驟⑵所得的溶液利用蠕動泵與0.22 μ m囊式過濾器進行過濾；
[0049](4)沉淀:向步驟⑶所得的濾液中加入33gl%的氯化鈉，攪拌至溶解，邊攪拌邊加入3.98L藥用乙醇，沉淀靜置3.5h ；
[0050](5) 二次溶解:將步驟(4)所得沉淀物加入2.8L純化水溶解，控制溶液濃度(w/v)為 14.5% ；
[0051](6)氧化:將步驟(5)所得的肝素鈉溶液的pH調(diào)節(jié)至11，水浴控制溫度為35°C，將15ml過氧化氫分三次加入肝素鈉溶液中，每次間隔30min，氧化1h ；
[0052](7) 二次過濾:將步驟(6)所得的溶液利用蠕動泵與0.22 μ m囊式過濾器進行過濾，收集濾液；
[0053](8) 二次沉淀:將步驟(7)所得的濾液的pH調(diào)節(jié)至8.5，向濾液中加入30gl %的氯化鈉，攪拌至溶解，然后邊攪拌邊加入3.6L藥用乙醇，沉淀靜置3h ;
[0054](9)凍干:將步驟⑶所得沉淀用3.0L純化水溶解，控制溶液濃度(w/v)為16%，調(diào)節(jié)溶液PH為7.0，利用蠕動泵與0.22 μ m囊式過濾器進行過濾，最后將濾液凍干。
[0055]實施例3
[0056]對30Kg肝素鈉原料(質(zhì)量符合CP2010的規(guī)定，但該批原料灌裝的肝素鈉鈉注射液2mll2500單位，可見異物有小白點，檢出不合格)進行熱穩(wěn)定性處理。
[0057]設(shè)備儀器:搪玻璃反應(yīng)釜(2000L 2個、夾層可利用蒸汽與冷凍水升降溫；淄博太極)、量筒(250ml I個；100ml I個)、流量計(泉州日新)、溫度計、0.22 μ m微孔過濾器(密理博)、壓縮空氣、凍干機(上海東富龍)。
[0058]初始物料:30Kg肝素鈉原料(質(zhì)量符合CP2010的規(guī)定，但該批原料灌裝的肝素鈉鈉注射液2ml 12500單位，可見異物有小白點，檢出不合格)。
[0059]初始物料性狀:凍干粉狀
[0060]具體操作如下:
[0061](I)溶解:將30Kg肝素鈉原料置于2000L的燒搪玻璃反應(yīng)釜中攪拌溶解，物料濃度為14.3% ；
[0062](2)升降溫:將步驟⑴所得的肝素鈉溶液pH調(diào)節(jié)至8.5，然后夾層通蒸汽，緩緩攪拌，30min后，溶液溫度升至82 °C，開始保溫Ih，然后開大蒸汽，25min內(nèi)升溫至92 °C，開始保溫30min，最后夾層內(nèi)通冷凍水降溫，30min內(nèi)將溶液溫度降至37°C ;停止攪拌，靜止放置2.0h ；
[0063](3)過濾:將步驟(2)所得的溶液利用壓縮空氣與0.22 μ m微孔過濾器進行過濾，過濾至另一 2000L搪玻璃反應(yīng)釜中；
[0064](4)沉淀:向步驟⑶所得的濾液中加入2.1gl%的氯化鈉，攪拌至溶解，邊攪拌邊加入252L藥用乙醇，沉淀靜置3.0h ；
[0065](5) 二次溶解:將步驟(4)所得沉淀物加入200L純化水溶解，控制溶液濃度(w/v)為 15% ；
[0066](6)氧化:將步驟(5)所得的肝素鈉溶液的pH調(diào)節(jié)至10.5，夾層控制溫度為28°C，將IL過氧化氫分三次加入肝素鈉溶液中，每次間隔30min，氧化8h ；
[0067](7) 二次過濾:將步驟(6)所得的溶液利用壓縮空氣與0.22 μ m微孔過濾器進行過濾，過濾至另一 2000L搪玻璃反應(yīng)釜中，收集濾液；
[0068](8) 二次沉淀:將步驟(7)所得的濾液的pH調(diào)節(jié)至8.0，向濾液中加入2Kgl %的氯化鈉，攪拌至溶解，然后邊攪拌邊加入240L藥用乙醇，沉淀靜置3h ;
[0069](9)凍干:將步驟(8)所得沉淀用200L純化水溶解，控制溶液濃度(w/v)為15%，調(diào)節(jié)溶液PH為7.0，利用蠕動泵與0.22 μ m微孔過濾器進行過濾，最后將濾液凍干。
[0070]經(jīng)檢測，實施例1、2、3所制備的肝素鈉凍干粉經(jīng)檢測，符合CP2010質(zhì)量標準，利用其進行生產(chǎn)的肝素鈉注射液(2ml 12500單位)，經(jīng)檢測無可見異物。
【權(quán)利要求】
1.一種提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)溶解:將肝素鈉攪拌溶解，控制溶液濃度(w/ν)為13%-15% ; (2)升降溫:將步驟(1)所得的肝素鈉溶液pH調(diào)節(jié)至8.5±0.5，控制溫度為82±2°C，保溫1 ± 0.2h，然后在30 土 5min內(nèi)將肝素鈉溶液溫度升至93 ± 2 °C，保溫30 土 5min，最后在30±5min內(nèi)將肝素鈉溶液溫度降至35-40°C，停止攪拌，靜置1.5_3h ； (3)過濾:將步驟(2)所得的溶液利用微孔過濾器過濾，收集濾液； (4)沉淀:向步驟(3)所得的濾液中加入氯化鈉，攪拌至溶解，然后加入藥用乙醇進行沉淀，沉淀靜置2.5-3.5h ； (5)二次溶解:將步驟(4)所得沉淀物溶解，控制溶液濃度(w/v)為13% -15% ; (6)氧化:將步驟(5)所得的肝素鈉溶液的pH調(diào)節(jié)至10.5±0.5，控制溫度為25-35?，向肝素鈉溶液中加入0.005倍體積的過氧化氫，氧化7-10h ； (7)二次過濾:將步驟(6)所得的溶液利用微孔過濾器過濾，收集濾液； (8)二次沉淀:將步驟(7)所得的濾液的pH調(diào)節(jié)至8.5±0.5，向濾液中加入氯化鈉，攪拌至溶解，然后加入藥用乙醇進行沉淀，沉淀靜置2.5-3.5h ; (9)凍干:將步驟(8)所得沉淀溶解，控制溶液濃度(w/v)為15%-20%，調(diào)節(jié)溶液pH為6.5-7.0，再利用微孔過濾器過濾，最后將濾液凍干。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，其特征在于，所述步驟(6)中過氧化氫分三次加入，每次加入1/3的量，每次間隔30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，其特征在于，所述過氧化氫為原濃度為30%的過氧化氫，加水稀釋，過氧化氫與水的體積比為1:3。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，其特征在于，所述微孔過濾器的孔徑為0.22 μ m0
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，其特征在于，步驟(4)和(8)中，沉淀靜置3h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，其特征在于，步驟(6)中氧化時間為8ho
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高肝素鈉熱穩(wěn)定性的方法，其特征在于，所述氯化鈉為質(zhì)量分數(shù)為1%的氯化鈉。
【文檔編號】A61P29/00GK104490793SQ201410698472
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月26日
【發(fā)明者】周霞, 郭恩中, 雷曉剛, 喬德強, 林勇, 郭維 申請人:山東辰中生物制藥有限公司