一種藍莓葉黃酮精華液及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種藍莓葉黃酮精華液及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明公開一種藍莓葉黃酮精華液的制備方法，包括如下步驟：(1)在水中加入乙二胺四乙酸二鈉溶解，加入卡波姆U20混勻，加熱至70-85℃，再加入甘油混勻，70-80℃保溫5min-15min，加入尿囊素溶解混勻，降溫至45℃-55℃，再加入藍莓葉黃酮，得到A相溶液。本發(fā)明證明藍莓葉黃酮具有抗炎功效，以其為活性成分的藍莓葉黃酮精華液可以應(yīng)用于化妝品領(lǐng)域。
【專利說明】一種藍莓葉黃酮精華液及其制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藍莓葉黃酮精華液及其制備方法與應(yīng)用，屬于化妝品領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 黃酮類物質(zhì)屬于植物的次生代謝產(chǎn)物，是一類具有多種生物活性植物多酚類物 質(zhì)。研究表明黃酮類物質(zhì)可以降低炎癥反應(yīng)中的內(nèi)皮細胞與免疫細胞之間的粘連作用，從 而減緩炎癥反應(yīng)。研究表明藍莓（Vaccinium uliginosum L.)葉子中黃酮類物質(zhì)的含量很 高，而且種類豐富，具有延緩衰老，抗炎、抗過敏、抗病毒，抗癌，強化細胞膜、使受損細胞再 生等多重功效。藍莓葉子還可以用來處理皮膚組織上發(fā)生的慢性炎癥和因損傷而發(fā)生的急 性炎癥，并可以預(yù)防和治療口腔內(nèi)產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)。
[0003] IL-10是一種T hi細胞免疫抑制因子，具有免疫抑制和抗炎癥作用，在調(diào)節(jié)Thl 細胞來源的細胞因子中起重要作用，因而早期被稱為細胞因子合成抑制因子。IL-10屬 于細胞因子中的干擾家族，研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性和外源性的IL-10均能在轉(zhuǎn)錄水平上強烈抑制 IL-l、IL-6、IL-8、腫瘤壞死因子-a (TNF-a)、GM-CSF、G-CSF的合成。近十年來，研究認為 IL-10主要是通過抑制IKK的激活或NK-k β的DNA結(jié)合能力，從而抑制NK-k β啟動相關(guān)前 炎癥因子基因的轉(zhuǎn)錄。因此在分子水平上以IL-10的表達量評價抗炎功效，是在炎癥發(fā)生 初期甚至于炎癥尚未發(fā)生的階段對其進行評價的有效方法。一些治療銀屑病的藥物如皮質(zhì) 類固醇、卡泊三醇、維生素 D3、蒽林等可以顯著增加 IL-10的表達，研究證實IL-10的抗銀 屑病作用是通過調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細胞分泌細胞因子所致。進一步支持IL-10在銀屑病發(fā)病中 起重要作用，臨床上已經(jīng)使用重組人IL-10來治療銀屑病。另外，學(xué)者普遍認為IL-10、 IL-8可作為銀屑病病情發(fā)展的早期監(jiān)測指標。
[0004] 目前對于抗炎類化妝品的研究，主要分為活體、組織上的功效驗證，分子水平的研 究僅限于動物細胞為模式的形式，以皮膚干細胞對黃酮抗炎功效少有報道，而通過人類表 皮干細胞進行藍莓黃酮抗炎功效鑒定還屬首次。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種藍莓葉黃酮精華液及其制備方法與應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明提供一種藍莓葉黃酮精華液的制備方法，包括如下步驟：
[0007] (1)在水中加入乙二胺四乙酸二鈉溶解，加入卡波姆U20混勻，加熱至70-85°C，再 加入甘油混勻，70-80°C保溫5min-15min，加入尿囊素溶解混勻，降溫至45°C -55°C，再加入 藍莓葉黃酮，得到A相溶液；
[0008] (2)將Microcare MTI、丁二醇、1，2-戊二醇混勻，得到C相溶液；
[0009] (3)在溫度為45°C -55°C的A相溶液中依次加入lg/100ml的透明質(zhì)酸鈉水溶液、 海藻糖，每加入一種物質(zhì)均要混勻，得到A相、B相的混合液；
[0010] ⑷在45°c -50°c的A相、B相混合溶液中加入C相溶液，混勻，得到A相、B相和 C相的混合液；
[0011] (5)加水，即得藍莓葉黃酮精華液；
[0012] 所述藍莓葉黃酮精華液中，所述步驟（1)中的水占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì) 量百分含量為60%、所述乙二胺四乙酸二鈉占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為 0. 02-0. 1 %、所述尿囊素占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為0. 1-0. 5 %、所述卡 波姆U20占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為0. 2-0. 8%、所述甘油占所述藍莓葉 黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為1. 0-6. 0%、所述藍莓葉黃酮占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì) 量百分含量為〇. 2-4. 0%、所述lg/100ml的透明質(zhì)酸鈉水溶液占所述藍莓葉黃酮精華液 的質(zhì)量百分含量為1.0-6. 0%、所述海藻糖占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為 0. 2-2. 0%、所述Microcare MTI占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為0. 05-0. 1%、 所述丁二醇占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為1. 0-3. 0 %、所述1，2-戊二醇占所 述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為0. 5-5. 0%、余量為步驟（5)所加的水；
[0013] 所述藍莓葉黃酮精華液的pH為5. 5-6. 5 ;
[0014] 所述卡波姆U20的INCI名稱為丙烯酸（酯）類/C10-30烷醇丙烯酸酯交聯(lián)聚合 物；
[0015] 所述 Microcare MTI 的 INCI 名稱為 METHYLISOTHIAZOLINONE IODOPROPYNYLBUTYLCARBAMATE。
[0016] 上述方法中，所述步驟（5)之后，還有將所述藍莓葉黃酮精華液的pH調(diào)節(jié)至 5. 5-6. 5的步驟；
[0017] 所述pH調(diào)節(jié)所使用的試劑具體為氫氧化鈉水溶液或檸檬酸水溶液；
[0018] 所述氫氧化鈉水溶液具體為5g/100ml的氫氧化鈉水溶液；
[0019] 所述檸檬酸水溶液具體為l〇g/l〇〇ml的檸檬酸水溶液。
[0020] 上述任一所述的方法中，所述步驟（1)中所述保溫的時間為IOmin ;
[0021] 所述步驟⑶中A相溶液的溫度為50°C。
[0022] 上述任一所述的方法中，所述藍莓葉黃酮的制備方法如下：將藍莓葉粉末與體積 百分含量為50% -90%的乙醇水溶液按照料液比lg:20ml-lg:70ml混勻，利用閃式提取法 在30V-110V的電壓下閃式提取30s-270s，得到提取液，再將提取液離心得到上清液，將上 清液冷凍干燥即得。
[0023] 上述方法中，所述乙醇水溶液為體積百分含量為80%的乙醇水溶液；
[0024] 所述料液比為lg: 40ml ;
[0025] 所述閃式提取法的電壓為60V ;
[0026] 所述閃式提取的時間為90s。
[0027] 由上述任一所述的方法制備得到的藍莓葉黃酮精華液也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0028] 藍莓葉黃酮在制備具有抗炎和/或護膚作用的產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保 護范圍。
[0029] 上述應(yīng)用中，所述藍莓葉黃酮的制備方法如下：將藍莓葉粉末與體積百分含量為 50% -90%的乙醇水溶液按照料液比lg: 20ml-lg:70ml混勻，利用閃式提取法在30V-110V 的電壓下閃式提取30s-270s，得到提取液，再將提取液離心得到上清液，將上清液冷凍干燥 即得。
[0030] 上述應(yīng)用中，所述乙醇水溶液為體積百分含量為80%的乙醇水溶液；
[0031] 所述料液比為lg:40ml ;
[0032] 所述閃式提取法的電壓為60V ;
[0033] 所述閃式提取的時間為90s。
[0034] 上述藍莓葉黃酮精華液在制備具有抗炎和/或護膚作用的產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬于 本發(fā)明的保護范圍。
[0035] 本發(fā)明證明藍莓葉黃酮具有抗炎功效，以其為活性成分的藍莓葉黃酮精華液可以 應(yīng)用于化妝品領(lǐng)域。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0036] 圖1為熒光定量PCR程序。
[0037] 圖2為藍莓葉提取物處理不同時間對IL-10表達量影響。

【具體實施方式】
[0038] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0039] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0040] U20 (卡波姆，INCI名稱：丙烯酸（酯）類/C10-30烷醇丙烯酸酯交聯(lián)聚合物）購 自路博潤特種化工（上海）有限公司。
[0041] HA(透明質(zhì)酸鈉）購自華熙福瑞達生物醫(yī)藥有限公司，化妝品級。1%HA為濃度 為lg/100ml的透明質(zhì)酸鈉水溶液，制備方法為：稱取Ig透明質(zhì)酸鈉粉末，溶解于IOOml去 離子水中，攪拌混合均勻至澄清透明液體。
[0042] Microcare MTI (INCI 名稱：METHYLISOTHIAZOLINONE IODOPROPYNYLBUTYLCARBAMATE)購自上海乾一化學(xué)品有限公司。
[0043] Hydrolite 5(1，2_戊二醇）購自德之馨（上海）有限公司，產(chǎn)品目錄號為616751。
[0044] KGM基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制：90ml DMEM(購自Gibco,產(chǎn)品目錄號為11965)基礎(chǔ)培 養(yǎng)基，加入IOml FBS(購自Hyclone，產(chǎn)品目錄號為SH30084. 03)，再向其中加入20mM的 HEPES (購自Gibco,產(chǎn)品目錄號為15630106)、0· 18nM的Adenine (購自Sigma，產(chǎn)品目錄號 為 A9795)、2mM 的 L-Glutamine (購自 Gibco,產(chǎn)品目錄號為 25030-081)、2nM 的 3, 3'，5-Tri iodothyronine(購自 Sigma，產(chǎn)品目錄號為 T2725)、lnM 的 Cholera toxin(購自 Sigma，產(chǎn) 品目錄號為c9903)，最后按照100UI/mL加入Penicillin Streptomycin (購自Gibco,產(chǎn)品 目錄號為15140163)混合溶解均勻。
[0045] 人皮膚表皮干細胞培養(yǎng)基（現(xiàn)用現(xiàn)配）的制備：
[0046] 在100ml KGM基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入以下終濃度的各個試劑：
[0047]

【權(quán)利要求】
1. 一種藍莓葉黃酮精華液的制備方法，包括如下步驟： (1) 在水中加入乙二胺四乙酸二鈉溶解，加入卡波姆U20混勻，加熱至70-85°C，再加入 甘油混勻，70-80°C保溫5min-15min，加入尿囊素溶解混勻，降溫至45°C -55°C，再加入藍莓 葉黃酮，得到A相溶液； (2) 將Microcare MTI、丁二醇、1，2-戊二醇混勻，得到C相溶液； (3) 在溫度為45°C _55°C的A相溶液中依次加入lg/100ml的透明質(zhì)酸鈉水溶液、海藻 糖，每加入一種物質(zhì)均要混勻，得到A相、B相的混合液； (4) 在45°C -50°C的A相、B相的混合溶液中加入C相溶液，混勻，得到A相、B相和C 相的混合液； (5) 加水，即得藍莓葉黃酮精華液； 所述藍莓葉黃酮精華液中，所述步驟（1)中的水占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量 百分含量為60%、所述乙二胺四乙酸二鈉占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為 0. 02-0. 1%、所述尿囊素占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為0. 1-0. 5%、所述卡 波姆U20占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為0. 2-0. 8%、所述甘油占所述藍莓葉 黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為1. 0-6. 0%、所述藍莓葉黃酮占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì) 量百分含量為〇. 2-4. 0%、所述lg/100ml的透明質(zhì)酸鈉水溶液占所述藍莓葉黃酮精華液 的質(zhì)量百分含量為1.0-6. 0%、所述海藻糖占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為 0. 2-2. 0%、所述Microcare MTI占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為0. 05-0. 1%、 所述丁二醇占所述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為1. 0-3. 0 %、所述1，2-戊二醇占所 述藍莓葉黃酮精華液的質(zhì)量百分含量為0. 5-5. 0%、余量為步驟（5)所加的水； 所述藍莓葉黃酮精華液的pH為5. 5-6. 5 ; 所述卡波姆U20的INCI名稱為丙烯酸（酯）類/C10-30烷醇丙烯酸酯交聯(lián)聚合物； 所述 Microcare MTI 的 INCI 名稱為 METHYLISOTHIAZOLINONE I0D0PR0PYNYL BUTYLCARBAMATE。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟（5)之后，還有將所述藍莓葉黃 酮精華液的pH調(diào)節(jié)至5. 5-6. 5的步驟； 所述pH調(diào)節(jié)所使用的試劑具體為氫氧化鈉水溶液或檸檬酸水溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步驟（1)中所述保溫的時間為 10min ； 所述步驟（3)中A相溶液的溫度為50°C。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述藍莓葉黃酮的制備方法如下： 將藍莓葉粉末與體積百分含量為50%-90%的乙醇水溶液按照料液比1§:2〇1111-4:7〇1111混 勻，利用閃式提取法在30V-110V的電壓下閃式提取30s-270s，得到提取液，再將提取液離 心得到上清液，將上清液冷凍干燥即得。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述乙醇水溶液為體積百分含量為80% 的乙醇水溶液； 所述料液比為lg:40ml ; 所述閃式提取法的電壓為60V ; 所述閃式提取的時間為90s。
6. 由權(quán)利要求1-5任一所述的方法制備得到的藍莓葉黃酮精華液。
7. 藍莓葉黃酮在制備具有抗炎和/或護膚作用的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：所述藍莓葉黃酮的制備方法如下：將藍莓 葉粉末與體積百分含量為50% -90 %的乙醇水溶液按照料液比lg:20ml-lg:70ml混勻，利 用閃式提取法在30V-110V的電壓下閃式提取30s-270s，得到提取液，再將提取液離心得到 上清液，將上清液冷凍干燥即得。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于：所述乙醇水溶液為體積百分含量為80% 的乙醇水溶液； 所述料液比為lg:40ml ; 所述閃式提取法的電壓為60V ; 所述閃式提取的時間為90s。
10. 權(quán)利要求6所述的藍莓葉黃酮精華液在制備具有抗炎和/或護膚作用的產(chǎn)品中的 應(yīng)用。
【文檔編號】A61K8/97GK104367512SQ201410645188
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年11月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月12日
【發(fā)明者】蘇寧, 劉娟, 趙丹, 楊麗, 朱建宇, 徐歌, 王昌濤 申請人:中國檢驗檢疫科學(xué)研究院, 北京工商大學(xué)