本發(fā)明涉及已知化合物的新用途，具體地說，涉及一種具有熒光基團(tuán)的苯甲酰胺類化合物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
肝癌是我國的重大腫瘤疾病之一，發(fā)病率高，死亡率高，研制新的防治藥物極為重要。目前，已發(fā)現(xiàn)煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（Nampt）可調(diào)控哺乳動物細(xì)胞內(nèi)必需能量物質(zhì)NAD的水平。而肝癌細(xì)胞具有很高的NAD消耗和代謝速率，對于Nampt抑制劑較為敏感。因而NAD合成途徑的限速酶Nampt成為癌癥治療的新靶標(biāo)，其酶抑制劑FK866（HasmannM,etal.,CancerResearch2003;63:7436-7442.）和CHS-828（HjarnaaPJV,etal.,CancerResearch1999;59:5751-5757.）目前已進(jìn)入癌癥治療的臨床研究?；衔?-(3-氧代-4-丙基-3,4-二氫喹喔啉-2-基)-N-(吡啶-3-基甲基)苯甲酰胺是一種苯甲酰胺類化合物，其英文名為4-(3-oxo-4-propyl-3,4-dihydroquinoxalin-2-yl)-N-(pyridin-3-ylmethyl)benzamide，結(jié)構(gòu)式如式I所示，目前關(guān)于該化合物在預(yù)防和/或治療肝癌方面的應(yīng)用還未見報道。。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供如式I所示的具有熒光基團(tuán)的苯甲酰胺類化合物的新用途，。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：在本發(fā)明的第一方面，如式I所示的具有熒光基團(tuán)的苯甲酰胺類化合物用于制備預(yù)防和/或治療肝癌的藥物。在本發(fā)明的第二方面，如式I所示的具有熒光基團(tuán)的苯甲酰胺類化合物用于制備試劑，所述的試劑用于抑制人肝癌細(xì)胞株HepG2的增殖。在本發(fā)明的第三方面，如式I所示的具有熒光基團(tuán)的苯甲酰胺類化合物用于制備試劑，所述的試劑用于抑制煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的活性。在本發(fā)明的第四方面，如式I所示的具有熒光基團(tuán)的苯甲酰胺類化合物用于制備試劑，所述的試劑用于肝癌的影像學(xué)診斷。所述的“藥物”可為任何適用的常規(guī)劑型，其中所含如式I所示的化合物的用量為治療有效量以上，可根據(jù)具體情況選擇，一般為0.01~100mg/kg/天。所述的藥物可以僅以如式I所示的化合物作為唯一活性成分，也可還含有除如式I所示的化合物以外的其它活性成分。所述的其它活性成分為對如式I所示的化合物的抑制煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的活性沒有不良影響可聯(lián)合使用的其它活性成分，如其它通過抑制煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶來防治的藥物的活性成分。所述的“試劑”是指生物化學(xué)試劑或試藥，其概念包含診斷試劑、預(yù)防或治療疾病的藥物等。本發(fā)明優(yōu)點在于：本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一種具有熒光基團(tuán)的苯甲酰胺類化合物的全新用途，該化合物對于煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶表現(xiàn)出較好的抑制活性，可用于制備通過抑制煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶來預(yù)防和/或治療的疾病的藥物，可用于防治肝癌；同時該化合物還具有熒光基團(tuán)，因此也可用于診斷肝癌。附圖說明圖1為實施例1中，化合物I對煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的抑制曲線圖。圖2為實施例2中，化合物I對人肝癌細(xì)胞HepG2增殖能力抑制的量效曲線圖。圖3為實施例3中，化合物I在人肝癌細(xì)胞HepG2中的熒光成像圖。具體實施方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的具體實施方式作詳細(xì)說明。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。實施例1化合物I抑制煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的活性以下的酶是指煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，可購自康肽生物科技有限公司（003-82）或美國ChemDiv公司（M049-0244），也可自行制備。1、酶的制備：將轉(zhuǎn)化有重組質(zhì)粒（Nampt-pET28a+）的BL21（DE3）plysS細(xì)胞接種于2×YT培養(yǎng)基（37μg/ml氯霉素和75μg/ml卡那霉素）中，37℃振搖過夜，收集菌體后用20倍于原體積的新鮮培養(yǎng)基重懸，37℃培養(yǎng)至OD600約0.6，在0.5mMIPTG、28℃條件下誘導(dǎo)5小時。離心收集菌體，并重懸于lysisbuffer（20mMTris-HCl，300mMNaCl，pH=7.5）中，200W超聲裂解細(xì)胞，超聲1秒間歇9秒，共進(jìn)行30分鐘。將裂解液于12500rpm、4℃離心50分鐘后吸取上清液。該上清液與Ni-NTA柱（購自QIAGEN公司）在冰上振搖孵育2小時，再依次用bindingbuffer（5mMimidazole，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.5）、washbuffer1（20mMimidazole，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.5）、washbuffer2（40mMimidazole，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.5）、washbuffer3（60mMimidazole，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.5）依次洗去雜蛋白，最后用Elutionbuffer（200mMimidazole，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.5）洗脫收集目的蛋白，并進(jìn)行SDS-PAGE檢測。將收集的目的蛋白與無菌甘油以1:1比例混合，用Bradford方法測定蛋白濃度后保存于-20℃?zhèn)溆谩?、酶反應(yīng)體系為25μl，其中各種組分的濃度為：50mMTris-HCl（pH=7.5）、0.02%BSA、12mMMgCl2、2mMATP、0.4mMPRPP、2mMDTT、2μg/mlNampt、0.2μMNAM、2%DMSO和倍比稀釋的化合物I。先將0.5μl不同濃度的化合物I加于96孔板，再加入20μl酶反應(yīng)混合溶液（除底物之外的酶反應(yīng)組分），室溫孵育5分鐘后，加入4.5μl底物NAM溶液以啟動反應(yīng)，37℃反應(yīng)15分鐘后于95℃加熱1分鐘終止酶反應(yīng)。3、待酶反應(yīng)液在冰上冷卻后，依次加入10μl20%苯乙酮和10μl2MKOH，渦旋混合儀上混勻后于冰水中作用2分鐘，加入45μl88%甲酸，37℃加熱10分鐘，冰上冷卻。4、使用酶標(biāo)儀測定激發(fā)波長382nm、發(fā)射波長445nm處的熒光值。5、根據(jù)公式：E=R/(1+(C/IC50)S)+B（其中E為酶活性，C為化合物濃度，R、IC50、S、B為待擬合的參數(shù)），在origin7.0軟件中將酶相對活性對化合物I濃度的曲線進(jìn)行擬合（見圖1），求出化合物I的IC50，結(jié)果見表1：表1實施例2化合物I抑制人肝癌細(xì)胞的體外增殖我們考察了化合物I對人肝癌細(xì)胞體外增殖能力的抑制作用。用梯度濃度的化合物I作用于對數(shù)生長期的細(xì)胞株2天，利用細(xì)胞活力法進(jìn)行檢測：1、將對數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞消化后，吹打成單細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板，1×104細(xì)胞/孔，每孔培養(yǎng)基100μl，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。2、待細(xì)胞貼壁后，加入梯度濃度的受試化合物I在培養(yǎng)箱中再培養(yǎng)2天。3、細(xì)胞活力測定：取細(xì)胞活力試劑（CCK-8試劑）10μl依次加到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，混合均勻后于37℃反應(yīng)30分鐘，酶標(biāo)儀檢測各孔OD值（檢測波長：450nm），記錄結(jié)果，按下列公式計算抑制率：抑制率(%)=(OD對照－OD給藥)/OD對照×100%。結(jié)果顯示（見圖2），化合物I對人肝癌細(xì)胞株HepG2的增殖表現(xiàn)出不同程度的抑制作用，化合物I對細(xì)胞活力抑制的IC50值為3050±950nM。實施例3化合物I在人肝癌細(xì)胞中的熒光成像我們通過激光共聚焦顯微鏡觀測了化合物I在人肝癌細(xì)胞HepG2中的熒光成像。具體方法為：1、將對數(shù)生長期的細(xì)胞消化后，吹打成單細(xì)胞懸液，接種于培養(yǎng)皿中，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。2、待細(xì)胞貼壁后，加入終濃度為3μM的化合物I，溶劑對照則加入同等體積的溶劑DMSO，即二甲基亞砜。3、30分鐘后，在激光共聚焦顯微鏡下觀測化合物熒光。4、觀測完畢后，迅速去除含有化合物的培養(yǎng)液，并用磷酸鹽緩沖液清洗3次后再次在激光共聚焦顯微鏡下觀測細(xì)胞中的熒光。5、觀測完畢后，立刻換為無化合物培養(yǎng)液繼續(xù)孵育4小時。6、4小時后，取出培養(yǎng)皿再次觀測細(xì)胞中的熒光?；衔颕在人肝癌細(xì)胞HepG2中的熒光成像圖見圖3，在體外培養(yǎng)條件下，發(fā)現(xiàn)其可富集于肝癌細(xì)胞中，因此可用于肝癌的影像診斷。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。