山奈酚在抑制受體對器官移植排斥反應(yīng)藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了山奈酚在抑制受體對器官移植排斥反應(yīng)藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明首次公開了山奈酚在受體體內(nèi)抑制器官移植排斥反應(yīng)的藥理作用，而且其與低劑量環(huán)孢素短期聯(lián)合使用時(shí)效果最佳，可以誘導(dǎo)胰島移植物在受體內(nèi)的長期存活，這樣可以避免因長期使用全量環(huán)孢素而導(dǎo)致的各種副作用，也減輕了患者長期抗排斥治療的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，并更有利于器官移植患者的長期高質(zhì)量生活。本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)了山奈酚的免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制，山奈酚可顯著上調(diào)小鼠受體體內(nèi)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞數(shù)量，并下調(diào)受體體內(nèi)胰島移植物IL-6的基因表達(dá)，從而起到抗炎抗排斥反應(yīng)的作用。
【專利說明】山奈酚在抑制受體對器官移植排斥反應(yīng)藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及山奈酚在抑制受體對器官移植排斥反應(yīng)藥物中的應(yīng) 用。

【背景技術(shù)】
[0002] 器官移植被廣泛地應(yīng)用于臨床治療，以挽救患各種終端性器官疾病的病人，例如 終末期心、腎、肝、肺等疾病。我國目前已成為世界第二大器官移植大國，每年僅有9000多 例器官移植手術(shù)，但每年需要移植的器官衰竭病人已達(dá)30多萬，因此，器官移植在我國的 需求和發(fā)展?jié)摿薮?。然而，移植后往往出現(xiàn)嚴(yán)重排斥反應(yīng)，病人需要持續(xù)使用免疫抑制性 藥物以抑制受體對移植物的排斥反應(yīng)。環(huán)孢素是最常用的免疫抑制劑之一，但是長期使用 免疫抑制性藥物如全量環(huán)孢素易引起許多副作用，例如誘發(fā)病毒感染或?qū)е履[瘤發(fā)生等。 這是當(dāng)前移植免疫學(xué)領(lǐng)域面臨的重大問題之一。為解決這個(gè)問題，目前國內(nèi)外研究學(xué)者的 主要研究方向是短期使用免疫調(diào)節(jié)性淋巴細(xì)胞治療（CD4 + CD25+ Treg)或其他作用溫和的 免疫抑制劑等方法以誘導(dǎo)移植物的長期存活或耐受。
[0003] 山奈酚是存在蔬菜水果中的一種很重要的活性單體，有研究表明它在體外細(xì)胞培 養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中可抑制淋巴細(xì)胞的增殖，也有研究證實(shí)山奈酚能抑制骨髓或血細(xì)胞移植物對宿主 (受體）的排斥反應(yīng)，但是尚未知道山奈酚是否能抑制受體對供體移植物的排斥反應(yīng)。
[0004] 目前針對器官移植排斥反應(yīng)主要是長期使用免疫抑制劑抗排斥。長期服用免疫 抑制劑不僅所需費(fèi)用昂貴，也易產(chǎn)生許多副作用，如感染、腫瘤、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等副作 用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決上述存在的問題，本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)在胰島移植物的排斥反應(yīng)中短期 使用山奈酚聯(lián)合少量環(huán)孢素可以誘導(dǎo)長期的胰島移植物存活以及免疫耐受，且山奈酚本身 也具有一定的抗排斥作用，從而減少全量環(huán)孢素單獨(dú)使用的治療副作用以及長期抗排斥治 療的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此更有利于器官移植患者的長期高質(zhì)量生活。
[0006] 本發(fā)明的目的在于提供山奈酚在抑制受體對器官移植排斥反應(yīng)藥物中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是： 本發(fā)明通過研究山奈酚或/和環(huán)孢素對小鼠胰島移植模型的治療，通過檢測相應(yīng)的胰 島存活時(shí)間，調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的數(shù)量，及IL-6基因表達(dá)的水平，發(fā)現(xiàn)山奈酚可抑制受體 對移植器官的排斥反應(yīng)，并在環(huán)孢素的協(xié)同作用下誘導(dǎo)了胰島移植物的長期存活或免疫耐 受；證明了山奈酚在抑制受體對移植器官排斥反應(yīng)藥物制備中的應(yīng)用。
[0008] -種抑制受體對移植器官排斥反應(yīng)的藥物組合物，該藥物組合物中含有山奈酚和 環(huán)孢素。
[0009] 進(jìn)一步的，上述藥物組合物中山奈酚和環(huán)孢素的質(zhì)量比為1: (2?4)。
[0010] 進(jìn)一步的，上述藥物組合物中山奈酚和環(huán)孢素的質(zhì)量比為1 :3 本發(fā)明的有益效果是： 1) 本發(fā)明首次利用山奈酚抑制移植受體對供體移植物的排斥反應(yīng)，從而延長移植物的 存活時(shí)間； 2) 本發(fā)明首次將山奈酚和低劑量環(huán)孢素聯(lián)合使用，誘導(dǎo)移植物長期存活或免疫耐受， 該聯(lián)合方法為最佳的治療方案。
[0011] 3)本發(fā)明第一次從動物實(shí)驗(yàn)證明山奈酚能抑制小鼠受體對胰島移植物的排斥，并 在環(huán)孢素的協(xié)同作用下誘導(dǎo)了胰島移植物的長期存活或免疫耐受；而且，山奈酚與環(huán)孢素 短期聯(lián)合使用，不僅產(chǎn)生協(xié)同作用，也減少了環(huán)孢素的使用劑量和期限，從而明顯減少長期 單獨(dú)使用全劑量環(huán)孢素的許多副作用，也減輕了患者長期抗排斥治療的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，并更有 利于器官移植患者的長期高質(zhì)量生活。
[0012] 4)以往研究只證明山奈酚能抑制移植物(供體的骨髓或血細(xì)胞）對宿主(受體）的 排斥反應(yīng)，該發(fā)現(xiàn)只局限于骨髓或血細(xì)胞移植。然而，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)山奈酚能抑制受體對供體 器官移植物的排斥，該發(fā)明適用范圍廣泛，包括各種器官移植例如心肺腎肝腸以及胰島等。 另外，本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)了山奈酚的免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制，山奈酚可顯著上調(diào)小鼠受體體內(nèi)調(diào)節(jié) 性T淋巴細(xì)胞數(shù)量，并下調(diào)受體體內(nèi)胰島移植物IL-6的基因表達(dá)，從而起到抗炎抗排斥反 應(yīng)的作用。以往的有關(guān)機(jī)制研究只表明山奈酚在體外細(xì)胞培養(yǎng)中能抑制淋巴細(xì)胞的增殖， 缺乏體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的支撐，而本發(fā)明具體發(fā)現(xiàn)山奈酚可顯著上調(diào)小鼠受體體內(nèi)調(diào)節(jié)性 T淋巴細(xì)胞數(shù)，此體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)更具有臨床意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013] 圖1為山奈酚本身或與環(huán)孢素聯(lián)合使用促進(jìn)胰島移植物在小鼠受體體內(nèi)存活的 情況； 圖2為流式細(xì)胞儀定量分析山奈酚誘導(dǎo)上調(diào)受體小鼠腎臟和淋巴結(jié)中調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì) 胞（CD4+ FoxP3+ Tregs)數(shù)量的情況； 圖3為山奈酚本身或與環(huán)孢素聯(lián)合使用下調(diào)IL-6 (白介素-6)基因表達(dá)的情況。

【具體實(shí)施方式】
[0014] 本發(fā)明采用小鼠胰島移植模型以觀察山奈酚和環(huán)孢素是否抑制小鼠受體對胰島 移植物的排斥反應(yīng)。
[0015] 1.實(shí)驗(yàn)動物模型 采用BALB/c小鼠為胰島移植供體，C57BL/6小鼠為胰島移植受體。
[0016] 胰島移植方法：從供體小鼠取出胰腺，體外采用膠原酶消化后，在顯微鏡下挑選出 胰島置于冰上，然后將400個(gè)供體胰島注射在受體的腎臟包膜下。
[0017] 2.藥物治療劑量 山奈酚（Kaempferol):每只受體小鼠隔天腹腔注射一次，每次0· Img (約2mg/kg/day); 環(huán)孢素 （CsA):低劑量為6mg/kg/day皮下注射，全劑量為12mg/kg/day皮下注射。
[0018] 3.分組及藥物處理 將經(jīng)胰島移植后的C57BL/6小鼠分成以下六組：第1組為對照組（PBS注射一次)、第2 組為單獨(dú)全劑量環(huán)孢素組（12mg/kg/d皮下注射一次）、第3組為低劑量環(huán)孢素組（6mg/kg/ d皮下注射一次)、第4組為山奈酚組(每次0. lmg，2天腹腔注射一次)、第5組為山奈酚+低 劑量環(huán)孢素組(處理方法為第3和第4組的結(jié)合)、第6組為山奈酚+全劑量環(huán)孢素組(處理 方法為第2和第4組的結(jié)合)。藥物治療期限為連續(xù)三周。
[0019] 經(jīng)移植和上述藥物處理后的C57BL/6小鼠，飼養(yǎng)至相應(yīng)的時(shí)間后，進(jìn)行以下實(shí)施 例1?3中各指標(biāo)的檢測。
[0020] 實(shí)施例1山奈酚顯著延長胰島移植物的存活時(shí)間 將上述經(jīng)過不同處理的6組小鼠進(jìn)行胰島移植物存活時(shí)間的檢測，檢測結(jié)果如圖1和 表1所示。
[0021] 表1山奈酚本身或與環(huán)孢素聯(lián)合使用促進(jìn)胰島移植物在小鼠受體體內(nèi)存活的平 均時(shí)間

【權(quán)利要求】
1. 山奈酚在抑制受體對移植器官排斥反應(yīng)藥物制備中的應(yīng)用。
2. -種抑制受體對移植器官排斥反應(yīng)的藥物組合物，其特征在于：該藥物組合物中含 有山奈酚和環(huán)孢素。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種抑制受體對移植器官排斥反應(yīng)的藥物組合物，其特征在 于：該藥物組合物中山奈酚和環(huán)孢素的質(zhì)量比為1: (2?4)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種抑制受體對移植器官排斥反應(yīng)的藥物組合物，其特征在 于：該藥物組合物中山奈酚和環(huán)孢素的質(zhì)量比為1 :3。
【文檔編號】A61K38/13GK104434908SQ201410620935
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月5日
【發(fā)明者】戴振華, 劉旭生, 曾玉群, 盧富華, 鄒川, 盧釗宇, 蘇國彬, 吳禹池, 張臘, 吳一帆 申請人:廣東省中醫(yī)院