專利名稱：一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯b的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取銀杏內(nèi)酯B的方法。
背景技術(shù)：
銀杏內(nèi)酯是目前強(qiáng)有力的特異性血小板活化因子(PAF)受體阻斷劑之一，銀杏內(nèi)酯B是銀杏內(nèi)酯中對PAF受體阻斷作用最強(qiáng)的，可劑量依賴性的消除PAF所引起的血小板聚集作用，從而防止血栓的形成。藥理研究表明銀杏內(nèi)酯B具有抗過敏、抗炎癥、抗休克作用，對缺血性損傷及器官移植排斥反應(yīng)也有保護(hù)作用。銀杏內(nèi)酯B在目前市售的銀杏葉提取物中含量較低且具有特定結(jié)構(gòu)，其提取分離得到高純度、高收率的銀杏內(nèi)酯B難度較大。本發(fā)明者們查閱國內(nèi)外文獻(xiàn)，目前與銀杏內(nèi)酯B單體分離/制備方法直接相關(guān)的授權(quán)發(fā)明或者專利主要有①ZL200310104958 (《模擬移動(dòng)床色譜分離提純銀杏內(nèi)酯B的方法》):該方法以銀杏葉為原料，經(jīng)過水煮得到銀杏浸膏，每克銀杏浸膏加入O. 8^1. 2L乙酸乙酯萃取，模擬移動(dòng)床純化、乙醇重結(jié)晶、甲醇重結(jié)晶得到純度大于90%的銀杏內(nèi)酯B單體。該發(fā)明乙酸乙酯用量很大，基于移動(dòng)床色譜分離銀杏內(nèi)酯B，成本較高。②ZL00117758. 3 (《由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A、B的方法》):該發(fā)明是向銀杏葉或其浸膏加入乙醇等浸取劑，得到的浸取液經(jīng)過濾、分層，取出有機(jī)相去雜，然后經(jīng)濃縮、干燥得富集GA、GB，采用制備型高效液相色譜再分離A與B。該發(fā)明的特征在于加入浸取液的同時(shí)加入氯化物鹽析劑及去雜過程加入加鹽或鈉鹽，液相色譜的分離柱流動(dòng)相為乙酸乙酯和石油醚混合液，固定相為硅膠。該發(fā)明的單體純化依賴于制備色譜，不能工業(yè)化大量生產(chǎn)。③ZL200410061284 (《銀杏葉中銀杏內(nèi)酯B和白果內(nèi)酯的提取方法》):該發(fā)明將銀杏葉用乙醇水溶液提取，上吸附柱去雜質(zhì)，然后用乙酸乙酯萃取出銀杏內(nèi)酯，濃縮干燥后用乙醇溶解上酸性氧化鋁柱，用乙醇洗脫，洗脫液分步結(jié)晶和重結(jié)晶，獲得較純的銀杏內(nèi)酯B和白果內(nèi)酯。該發(fā)明銀杏葉醇提取液采用液液萃取，用乙醇上柱，洗脫，洗脫液中雜質(zhì)較多，導(dǎo)致最終銀杏內(nèi)酯B和白果內(nèi)酯的純度不是很高，收率低，時(shí)間長。④CN101701019A (申請?zhí)?00910184916.6，《一種銀杏內(nèi)酯A、B的分離純化方
法》):該發(fā)明以純度>95%的銀杏總內(nèi)酯為起始原料，采用重結(jié)晶-超臨界CO2萃取組合工藝進(jìn)行純化，得到純度> 99. 5%的單體GA和GB。該發(fā)明對起始原料要求較高，采用超臨界CO2萃取對設(shè)備要求較高。⑤CN101412725A (申請?zhí)?00710050245. 5，《從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法》)該發(fā)明以銀杏葉為原料，乙醇提取，提取液減壓濃縮，濃縮液中加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮至浸膏；浸膏稀釋后上選擇性極性無孔吸附樹脂柱，用乙醇洗脫，，洗脫液濃縮后用乙醇結(jié)晶得到銀杏內(nèi)酯類化合物，將銀杏內(nèi)酯類化合物結(jié)晶上硅膠柱，用正己烷和乙酸乙酯混合液洗脫，洗脫液濃縮結(jié)晶得到銀杏內(nèi)酯B單體。該發(fā)明的正相柱的洗脫為混合溶劑，不容易回收。
⑥CN101041661A (申請?zhí)?00710051805. 9《一種用免疫親和層析色譜柱提取銀杏內(nèi)酯B的方法》):該發(fā)明以銀杏葉為原料，乙醇提取，提取液減壓濃縮至粘稠物，將粘稠物上免疫親和層析色譜柱，用磷酸緩沖液沖洗三次，然后用甲醇沖洗，即得銀杏內(nèi)酯B。但該方法適用于實(shí)驗(yàn)室少量樣品制備，不能進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。⑦CN101392000A (申請?zhí)?00810046162. 3《銀杏內(nèi)酯A、B、C、J和白果內(nèi)酯單體的高效分離純化方法》)該發(fā)明以銀杏葉為原料，乙醇提取，提取液用石油醚萃取，水相加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相減壓濃縮后用甲醇溶解上制備高效液相，甲醇洗脫，分段收集洗脫液。減壓濃縮至干得到單體。該發(fā)明依賴制備高效液相，適用于實(shí)驗(yàn)室少量樣品制備，不能進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。
⑧CN101054384 (申請?zhí)?00710106040. 4《一種從銀杏葉或銀杏葉提取物中提取銀杏內(nèi)酯B的制備方法》)該發(fā)明采用高速逆流萃取、聚酰胺和大孔樹脂兩次柱層析分離、重結(jié)晶相結(jié)合的方法，得到純度>95%的銀杏內(nèi)酯B。該發(fā)明涉及兩次不同的層析分離、會(huì)增加脫除產(chǎn)品中樹脂殘留物的難度。⑨CN101302222 (申請?zhí)?00810024206. 2《一種銀杏內(nèi)酯B原料及其制備方法》)該發(fā)明取銀杏葉或銀杏葉提取物，在鹽酸溶液中浸煮，浸煮液過濾后采用有機(jī)溶劑萃取，得到的萃取液濃縮后添加10(Γ200目硅膠混合干燥，采用硅膠柱層析法收集富含銀杏內(nèi)酯B的洗脫液，經(jīng)結(jié)晶得到銀杏內(nèi)酯B原料。其中，銀杏內(nèi)酯B原料純度> 90%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有方法提取銀杏內(nèi)酯B工藝復(fù)雜、成本高、純度低、收率低和難于工業(yè)化生產(chǎn)的問題，而提供一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法。本發(fā)明的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法如下一、取銀杏葉，加入1(Γ15倍質(zhì)量的質(zhì)量百分含量為50°/Γ95%的乙醇溶液，加熱回流f3h，過濾，收集濾液，減壓濃縮去除乙醇，即得濃縮液A ;二、向步驟一得到的濃縮液A中加水溶解至濃縮液A含生藥量為O. Γ0. 3g/mL,再在室溫放置24 48h，取上層液，備用；三、將步驟二所得上層液減壓濃縮至含生藥量為O. 5^1. 5g/mL，然后以O(shè). 5^3BV/h速度過大孔樹脂柱，先用水以O(shè). 5^3BV/h的速度洗脫，再采用質(zhì)量百分含量為509Γ95%乙醇溶液以O(shè). 5^3BV/h的速度洗脫，收集2 8BV的洗脫液，洗脫液濃縮去除乙醇，即得濃縮液B ；四、將步驟三所得濃縮液B加稀釋劑混合均勻，在50°C 80°C溫度下干燥，裝柱，采用乙酸乙酯以O(shè). 5^3BV/h的速度洗脫，收集1 5BV的洗脫液，濃縮去除乙酸乙酯，得濃縮液C；五、向步驟四得到的濃縮液C中加入5 20倍體積的無水乙醇溶解，再加水至不再析晶，然后室溫靜置養(yǎng)晶12 48h，過濾，收集固相物，得銀杏內(nèi)酯B粗品；六、將步驟五所得銀杏內(nèi)酯B粗品，加入8^20倍體積的質(zhì)量百分含量為709Γ95%的乙醇溶液加熱回流使溶解,過濾,收集濾液,室溫放置析晶12 48h ；七、重復(fù)步驟六f 2次，得重結(jié)晶樣品；再用5(Γ90倍體積的乙酸乙酯回流溶解得到的重結(jié)晶樣品，過濾，收集溶液，室溫放置析晶12 48h，再過濾，收集結(jié)晶產(chǎn)物，向結(jié)晶產(chǎn)物中加入8 20倍體積的量百分含量為70°/Γ95%的乙醇溶液，加熱回流使溶解，過濾，去除沉淀收集濾液，室溫放置析晶12 48h，過濾，收集固相物得濕晶，在60°C 80°C溫度下干燥后，即得成品銀杏內(nèi)酯B。結(jié)合現(xiàn)有銀杏內(nèi)酯B提取方法的分析，本發(fā)明包含以下有益效果I、本發(fā)明使用的大孔樹脂為強(qiáng)極性樹脂，包括ADS-2、NKA-9、SA-I、SA_2中的一種或幾種混合。對于脂溶性成分(包括留體類、二萜、三萜香豆素等)的處理，現(xiàn)有方法均選擇非極性或弱極性樹脂，如D101、AB-8、HPD100, ADS-17等。而本發(fā)明的目標(biāo)成分銀杏內(nèi)酯B屬于二萜類的脂溶性成分，本發(fā)明采用了非常規(guī)技術(shù)手段——強(qiáng)極性樹脂進(jìn)行分離，本發(fā)明的方法提取的銀杏內(nèi)酯B收率高為98. 59Γ99. 5%，而經(jīng)過現(xiàn)有方法采用的非極性或弱極性樹脂的提取的銀杏內(nèi)酯B轉(zhuǎn)移率僅為15°/Γ75%，且洗脫液中的雜質(zhì)含量也較高，不利于后續(xù)的分離純化工藝。采用本發(fā)明中的幾種強(qiáng)極性樹脂工藝簡便，且使后續(xù)的分離純化工藝簡單易行，起到意料不到的效果；2、本發(fā)明在過大孔樹脂洗脫液濃縮后干燥時(shí)加入稀釋劑使浸膏在干燥過程中更好烘干，且分散性好，利于后續(xù)的純化工藝；·3、本發(fā)明提供的方法中，所用溶劑僅為乙醇、乙酸乙酯，毒性較小，且均可回收重復(fù)使用，因此溶劑損耗量小，成本較低；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的方法工藝簡單，生產(chǎn)成本較低，所得產(chǎn)品純度高，收率較高，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合最佳的實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于以下實(shí)施例。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法如下一、取銀杏葉，加入1(Γ15倍質(zhì)量的質(zhì)量百分含量為50°/Γ95%的乙醇溶液，加熱回流f3h，過濾，收集濾液，減壓濃縮去除乙醇，即得濃縮液A ;二、向步驟一得到的濃縮液A中加水溶解至濃縮液A含生藥量為O. Γ0. 3g/mL,再在室溫放置24 48h，取上層液，備用；三、將步驟二所得上層液減壓濃縮至含生藥量為O. 5 I. 5g/mL，然后以O(shè). 5^3BV/h速度過大孔樹脂柱，先用水以O(shè). 5^3BV/h的速度洗脫，再采用質(zhì)量百分含量為509Γ95%乙醇溶液以O(shè). 5^3BV/h的速度洗脫，收集2 8BV的洗脫液，洗脫液濃縮去除乙醇，即得濃縮液B ；
四、將步驟三所得濃縮液B加稀釋劑混合均勻，在50°C 80°C溫度下干燥，裝柱，采用乙酸乙酯以O(shè). 5^3BV/h的速度洗脫，收集1 5BV的洗脫液，濃縮去除乙酸乙酯，得濃縮液C；五、向步驟四得到的濃縮液C中加入5 20倍體積的無水乙醇溶解，再加水至不再析晶，然后室溫靜置養(yǎng)晶12 48h，過濾，收集固相物，得銀杏內(nèi)酯B粗品；六、將步驟五所得銀杏內(nèi)酯B粗品，加入8^20倍體積的質(zhì)量百分含量為709Γ95%的乙醇溶液加熱回流使溶解,過濾,收集濾液,室溫放置析晶12 48h ；七、重復(fù)步驟六f 2次，得重結(jié)晶樣品；再用5(Γ90倍體積的乙酸乙酯回流溶解得到的重結(jié)晶樣品，過濾，收集溶液，室溫放置析晶12 48h，再過濾，收集結(jié)晶產(chǎn)物，向結(jié)晶產(chǎn)物中加入8 20倍體積的量百分含量為70°/Γ95%的乙醇溶液，加熱回流使溶解，過濾，去除沉淀收集濾液，室溫放置析晶12 48h，過濾，收集固相物得濕晶，在60°C 80°C溫度下干燥后，即得成品銀杏內(nèi)酯B。本實(shí)施方式步驟一中所述的減壓濃縮去除的乙醇以及步驟四中所述的濃縮去除乙酸乙酯，均可以回收后重復(fù)使用。本實(shí)施方式使用的大孔樹脂為強(qiáng)極性樹脂，包括ADS-2、NKA-9、SA-I、SA_2中的一種或幾種混合。對于脂溶性成分(包括留體類、二萜、三萜香豆素等)的處理，現(xiàn)有方法均選擇非極性或弱極性樹脂，如D101、AB-8、HPD100、ADS-17等。而本實(shí)施方式的目標(biāo)成分銀杏內(nèi)酯B屬于二萜類的脂溶性成分，本實(shí)施方式采用了非常規(guī)技術(shù)手段——強(qiáng)極性樹脂進(jìn)行分離，本實(shí)施方式的方法提取的銀杏內(nèi)酯B收率高為98. 59Γ99. 5%，而經(jīng)過現(xiàn)有方法采用的非極性或弱極性樹脂的提取的銀杏內(nèi)酯B轉(zhuǎn)移率僅為159Γ75%，且洗脫液中的雜質(zhì)含量也較高，不利于后續(xù)的分離純化工藝。采用本實(shí)施方式中的幾種強(qiáng)極性樹脂工藝簡便，且使后續(xù)的分離純化工藝簡單易行，起到意料不到的效果； 本實(shí)施方式在過大孔樹脂洗脫液濃縮后干燥時(shí)加入稀釋劑使浸膏在干燥過程中更好烘干，且分散性好，利于后續(xù)的純化工藝；本實(shí)施方式提供的方法中，所用溶劑僅為乙醇、乙酸乙酯，毒性較小，且均可回收重復(fù)使用，因此溶劑損耗量小，成本較低；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)施方式提供的方法工藝簡單,生產(chǎn)成本較低,所得產(chǎn)品純度高,收率較高,易于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中所述的銀杏葉為銀杏葉粗粉。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟三中所述的大孔樹脂為NKA-9、ADS-2、SA-U SA-2中的一種或幾種按任意比組成的混合物。其它與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟三中所述的采用質(zhì)量百分含量為709Γ80%乙醇。其它與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至四之一不同的是步驟三中所述的以f2BV/h的速度洗脫。其它與具體實(shí)施方式
一至四之一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟三中所述的收集3 4BV的洗脫液。其它與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至六之一不同的是步驟四中所述的以f2BV/h的速度洗脫。其它與具體實(shí)施方式
一至六之一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至七之一不同的是步驟四中所述的收集2 4BV的洗脫液。其它與具體實(shí)施方式
一至七之一相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至八之一不同的是步驟四中所述的稀釋劑加入量為每IOOkg的銀杏葉提取濃縮液加入5 10kg的稀釋劑。其它與具體實(shí)施方式
一至八之一相同。
具體實(shí)施方式
十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至九之一不同的是步驟四中所述的稀釋劑為硅藻土、微晶纖維素、碳酸氫鈣、淀粉中的一種或幾種按任意比混合。其它與具體實(shí)施方式
一至九之一相同。通過以下試驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果
試驗(yàn)I本試驗(yàn)的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法是按照以下步驟進(jìn)行的取IOkg的銀杏葉粗粉，加入15倍體積的質(zhì)量百分含量為50%的乙醇，加熱至回流2h，過濾，收集濾液，再向?yàn)V液中加9倍體積的質(zhì)量百分含量為50%的乙醇提取lh，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無乙醇味，加水至濃縮液含生藥量為O. lg/mL,以O(shè). 5BV/h速度上ADS-2樹脂，用水以lBV/h的速度洗至流出液無雜質(zhì)后，再用質(zhì)量百分含量為50%的乙醇洗脫，洗脫速度為lBV/h，收集5倍柱體積的洗脫液，洗脫液減壓濃縮至稠浸膏，然后與O. 5kg淀粉混勻，在80°C的溫度下干燥，得提取物；將干燥后的提取物裝柱，用乙酸乙酯洗脫，洗脫速度為O. 5BV/h,共收集洗脫液1BV,乙酸乙酯洗脫液濃縮至無乙酸乙酯味，加入400mL無水乙醇溶解，再加入IOOmL水，室溫靜置析晶12h，再采用布氏漏斗抽濾，收集固相物得銀杏內(nèi)酯B粗品；將銀杏內(nèi)酯B粗品， 用10倍體積的質(zhì)量百分含量為70%乙醇回流溶解銀杏內(nèi)酯B粗品，過濾，收集濾液，室溫放置12h，析出結(jié)晶，重復(fù)將內(nèi)酯B粗品溶解、過濾和析晶的操作廣2次，得結(jié)晶粗品；然后用70倍體積的乙酸乙酯回流溶解上述得到的結(jié)晶粗品，回收乙酸乙酯至有結(jié)晶析出，室溫冷卻析晶12h，將得到的結(jié)晶物再用15倍體積的質(zhì)量百分含量為70%乙醇回流溶解，過濾，收集濾液，室溫放置12h，析出結(jié)晶，濾過，干收集固相物，在60°C干燥，即得有關(guān)物質(zhì)為I. 6%，得到3. Og的銀杏內(nèi)酯B。本試驗(yàn)得到的銀杏內(nèi)酯B的純度為98. 5%。試驗(yàn)2本試驗(yàn)的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法是按照以下步驟進(jìn)行的取IOkg的銀杏葉粗粉，加入9倍體積的質(zhì)量百分含量為50%的乙醇，加熱回流提取2h，過濾，收集濾液，再向?yàn)V液中加7倍體積的質(zhì)量百分含量為80%的乙醇提取lh，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無乙醇味，加水至濃縮液含生藥量為O. 2g/mL，然后以2BV/h速度上NKA-9樹脂，用水以lBV/h的速度洗至流出液無雜質(zhì)后，再用質(zhì)量百分含量為95%的乙醇洗脫，洗脫速度為O. 5BV/h，收集IBV的洗脫液，洗脫液減壓濃縮至稠浸膏，然后與O. 5kg微晶纖維素混勻，在70°C的溫度下干燥，得提取物；將干燥后的提取物裝柱，用乙酸乙酯洗脫，洗脫速度為O. 5BV/h,共收集洗脫液1BV,乙酸乙酯洗脫液濃縮至無乙酸乙酯味，加入350mL無水乙醇溶解，再加入350mL水，室溫靜置析晶12h，再采用布氏漏斗抽濾，收集固相物得銀杏內(nèi)酯B粗品；將銀杏內(nèi)酯B粗品，用18倍體積的質(zhì)量百分含量為85%乙醇回流溶解銀杏內(nèi)酯B粗品，過濾，收集濾液，室溫放置12h，析出結(jié)晶，重復(fù)將內(nèi)酯B粗品溶解、過濾和析晶的操作廣2次，得結(jié)晶粗品；然后用90倍體積的乙酸乙酯回流溶解上述得到的結(jié)晶粗品，回收乙酸乙酯至有結(jié)晶析出，室溫冷卻析晶12h，將得到的結(jié)晶物再用8倍體積的質(zhì)量百分含量為85%乙醇回流溶解，過濾，收集濾液，室溫放置12h，析出結(jié)晶，濾過，干收集固相物，在65°C干燥，即得有關(guān)物質(zhì)為I. 5%，得到3. 2g的銀杏內(nèi)酯B。本試驗(yàn)得到的銀杏內(nèi)酯B的純度為98. 8%。試驗(yàn)3本試驗(yàn)的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法是按照以下步驟進(jìn)行的取IOkg的銀杏葉粗粉，加入12倍體積的質(zhì)量百分含量為50%的乙醇，加熱回流提取2h，過濾，收集濾液，再向?yàn)V液中加5倍體積的質(zhì)量百分含量為95%的乙醇提取lh，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無乙醇味，加水至濃縮液含生藥量為O. 15g/mL，然后以2BV/h速度上SA-2樹脂，用水以lBV/h的速度洗至流出液無雜質(zhì)后，再用質(zhì)量百分含量為80%的乙醇洗脫，洗脫速度為3BV/h，收集3倍柱體積的洗脫液，洗脫液減壓濃縮至稠浸膏，然后與O. 5kg硅藻土混勻，在70°C的溫度下干燥，得提取物；將干燥后的提取物裝柱，用乙酸乙酯洗脫，洗脫速度為O. 5BV/h,共收集洗脫液2BV,乙酸乙酯洗脫液濃縮至無乙酸乙酯味，加入400mL無水乙醇溶解，再加入IOOmL/K，室溫靜置析晶12h，再采用布氏漏斗抽濾，收集固相物得銀杏內(nèi)酯B粗品；將銀杏內(nèi)酯B粗品，用16倍體積的質(zhì)量百分含量為95%乙醇回流溶解銀杏內(nèi)酯B粗品，過濾，收集濾液，室溫放置12h，析出結(jié)晶，重復(fù)將內(nèi)酯B粗品溶解、過濾和析晶的操作f 2次，得結(jié)晶粗品；然后用90倍體積的乙酸乙酯回流溶解上述得到的結(jié)晶粗品，回收乙酸乙酯至有結(jié)晶析出，室溫冷 卻析晶24h，將得到的結(jié)晶物再用10倍體積的質(zhì)量百分含量為95%乙醇回流溶解，過濾，收集濾液，室溫放置24h，析出結(jié)晶，濾過，干收集固相物，在70°C干燥，即得有關(guān)物質(zhì)為I. 0%，得到2. 9g的銀杏內(nèi)酯B。本試驗(yàn)得到的銀杏內(nèi)酯B的純度為99. 5%。
權(quán)利要求
1.一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法如下 一、取銀杏葉，加入1(Γ15倍質(zhì)量的質(zhì)量百分含量為50°/Γ95%的乙醇溶液，加熱回流r3h,過濾，收集濾液，減壓濃縮去除乙醇，即得濃縮液A ； 二、向步驟一得到的濃縮液A中加水溶解至濃縮液A含生藥量為O.Γ0. 3g/mL，再在室溫放置24 48h，取上層液，備用； 三、將步驟二所得上層液減壓濃縮至含生藥量為O.5^1. 5g/mL，然后以O(shè). 5^3BV/h速度過大孔樹脂柱，先用水以O(shè). 5^3BV/h的速度洗脫，再采用質(zhì)量百分含量為509Γ95%乙醇溶液以O(shè). 5^3BV/h的速度洗脫，收集2 8BV的洗脫液，洗脫液濃縮去除乙醇，即得濃縮液B ； 四、將步驟三所得濃縮液B加稀釋劑混合均勻，在50°C 80°C溫度下干燥，裝柱，采用乙酸乙酯以O(shè). 5^3BV/h的速度洗脫，收集1 5BV的洗脫液，濃縮去除乙酸乙酯，得濃縮液C ； 五、向步驟四得到的濃縮液C中加入5 20倍體積的無水乙醇溶解，再加水至不再析晶，然后室溫靜置養(yǎng)晶12 48h，過濾，收集固相物，得銀杏內(nèi)酯B粗品； 六、將步驟五所得銀杏內(nèi)酯B粗品，加入8^20倍體積的質(zhì)量百分含量為709Γ95%的乙醇溶液加熱回流使溶解，過濾，收集濾液，室溫放置析晶12 48h ； 七、重復(fù)步驟六廣2次，得重結(jié)晶樣品；再用5(Γ90倍體積的乙酸乙酯回流溶解得到的重結(jié)晶樣品，過濾，收集溶液，室溫放置析晶12 48h，再過濾，收集結(jié)晶產(chǎn)物，向結(jié)晶產(chǎn)物中加入8 20倍體積的量百分含量為70°/Γ95%的乙醇溶液，加熱回流使溶解，過濾，去除沉淀收集濾液，室溫放置析晶12 48h，過濾，收集固相物得濕晶，在60°C 80°C溫度下干燥后，即得成品銀杏內(nèi)酷B。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于步驟一中所述的銀杏葉為銀杏葉粗粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于步驟三中所述的大孔樹脂為NKA-9、ADS-2、SA-U SA-2中的一種或幾種按任意比組成的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于步驟三中所述的采用質(zhì)量百分含量為70°/Γ80%乙醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于步驟三中所述的以l 2BV/h的速度洗脫。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于步驟三中所述的收集3 4BV的洗脫液。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于步驟四中所述的以f 2BV/h的速度洗脫。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于步驟四中所述的收集2 4BV的洗脫液。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于步驟四中所述的稀釋劑加入量為每IOOkg的銀杏葉提取濃縮液加入5 10kg的稀釋劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求I或9所述的一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于步驟四中所述的稀釋劑為硅藻土、微晶纖維素、碳酸氫鈣、淀粉中的一種或幾種按任意比混合。
全文摘要
一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，本發(fā)明公開了一種從銀杏葉提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其工藝步驟如下銀杏葉用乙醇提取，提取液減壓濃縮得浸膏。浸膏加水稀釋后過大孔樹脂柱吸附，乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮得稠膏，稠膏與稀釋劑拌勻后烘干，將干膏裝柱，用乙酸乙酯洗脫，乙酸乙酯洗脫液濃縮至無乙酸乙酯味，加入乙醇溶解，用乙醇結(jié)晶得到粗結(jié)晶，粗結(jié)晶用乙醇、乙酸乙酯重結(jié)晶即可得到純度≥98%的銀杏內(nèi)酯B。本發(fā)明提供的方法工藝簡單，生產(chǎn)成本較低，所得產(chǎn)品純度高，收率較高，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D493/22GK102887909SQ20121044101
公開日2013年1月23日 申請日期2012年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月7日
發(fā)明者寧樹一, 魏凱, 馬仁強(qiáng), 周清 申請人:黑龍江天宏藥業(yè)股份有限公司