分離dnj及制備dnj納米混懸劑的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了分離DNJ和制備DNJ納米混懸劑的方法，分離DNJ的方法以桑樹為原料，經(jīng)過粉碎提取，微波焦化，加水溶解后得到分離物I，該分離物依次通過細沙-活性炭和硅膠兩次色譜分離形成分離物II，所述分離物II經(jīng)離子交換與乙醇沉淀得到分離物III，該分離物III經(jīng)氧化鋁色譜柱分離得到分離物IV，將分離物IV結(jié)晶與重結(jié)晶后得到目標(biāo)產(chǎn)物。制備DNJ納米混懸劑的方法首先對DNJ組分進行酯化修飾，增強其脂溶性，然后通過表面活性劑結(jié)合和高壓均質(zhì)處理將DNJ分散成高度分散粒子群。本發(fā)明分離DNJ技術(shù)具有原料易得，工藝簡單，效果明顯，適于大規(guī)模生產(chǎn)的特點，本發(fā)明制備DNJ納米混懸劑可以改善藥物的溶解性，提高生物利用率。
【專利說明】分離DNJ及制備DNJ納米混懸劑的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及藥物分離純化技術(shù)，特別涉及從桑源規(guī)模化 分離純化DNJ以及制備DNJ組分納米混懸劑的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病已成為危害人類的健康的主要殺手之一，可引發(fā)眼、腎、心臟、血管、神經(jīng)的 慢性損害及功能障礙。據(jù)估計，到2050年，世界上患糖尿病的人數(shù)將達到3億，其中90%為 2型糖尿病。目前針對2型糖尿病的口服降糖藥主要有磺酰脲類、雙胍類、α-葡萄糖苷酶 抑制劑和噻唑烷二酮類4類。其中α-葡萄糖苷酶抑制劑降血糖效果顯著，受到的關(guān)注最 為廣泛。目前已經(jīng)上市的阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇屬于此類藥物，但這幾種藥物都 通過化學(xué)合成方法得到，容易引發(fā)不同程度的脹氣、腹部不適、惡心、嘔吐、腸鳴及腹瀉等副 反應(yīng)。因此，探索開發(fā)高效低毒植物源α-葡萄糖苷酶抑制劑類降血糖藥物是中藥研究領(lǐng) 域的重要發(fā)展目標(biāo)。
[0003] DNJ (中文名1-脫氧野尻霉素）是一種哌啶生物堿，廣泛存在與桑樹的枝干、樹葉 及根莖中，其結(jié)構(gòu)與葡萄糖相似（結(jié)構(gòu)式如下圖所示），可以與哺乳動物的小腸內(nèi)的α-葡 萄糖苷酶結(jié)合，且親和力明顯大于麥芽糖、蔗糖等二糖，從而阻斷了二糖與α -葡萄糖苷酶 結(jié)合，競爭性的抑制了二糖分解為葡萄糖，最終達到控制血糖含量的目的。
[0004]

【權(quán)利要求】
1. 一種分離DNJ的方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 、干燥粉碎桑材料并用稀鹽酸、乙醇溶液或沸水提取得到提取液； 2) 、首先將步驟1)的提取液濃縮后微波焦化，得到粉狀提取物，然后將其溶解并離心 分離上層清液，最后濃縮上清液，得到分離物I ; 3) 、初次色譜分離，包括： A、 利用色譜柱i分離分離物I，本步驟固定相為細沙與活性炭混合物，流動相為乙醇溶 液； B、 濃縮A所得洗脫液并用色譜柱ii進一步分離，本步驟固定相為硅膠，流動相為乙酸 乙酯、乙醇的混合液； C、 濃縮B所得洗脫液，得到分離物II ; 4) 、離子交換層析：首先使分離物II通過陽離子交換樹脂，并用氫氧化鈣溶液進行洗 脫，然后濃縮離子交換所得洗脫液，接著向濃縮后的洗脫液中加入乙醇進行沉淀，最后過濾 濃縮得到分離物III ; 5) 、首先利用色譜柱iii分離分離物III，本步驟固定相為氧化鋁，流動相為乙酸乙酯、 乙醇混合液，然后濃縮洗脫液得到分離物IV ; 6) 、首先將分離物IV加入乙醇溶液結(jié)晶，然后將結(jié)晶產(chǎn)物加入乙酸乙酯、乙醇混合溶 液中重結(jié)晶，最后分離結(jié)晶產(chǎn)物即得到分離目標(biāo)組分。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述分離DNJ的方法，其特征在于：步驟1)使用稀鹽酸提取時鹽 酸濃度為〇. 03?0. 07mol/L，使用乙醇溶液提取時乙醇濃度為60?80%，液料比為20? 45mL/g，提取次數(shù)為3?5次，提取時利用350?490W超聲波輔助處理20?40min ;使用 沸水提取時沸水溫度為95?100°C，液料比為20?45mL/g，提取時間20?40min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述分離DNJ的方法，其特征在于：步驟2)微波焦化時微波功率為 640?800W，處理時間為2?6min。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述分離DNJ的方法，其特征在于：步驟3)-A中細沙與活性炭體積 比為2:1，乙醇溶液濃度為50?90 %，洗脫流速為0. 9?1. 6BV/h，收集1?30柱體積洗 脫液；步驟3) -B中乙酸乙酯與乙醇體積比為1:3?2: 1，洗脫流速為0. 5?1. 3BV/h，收集 1?30柱體積洗脫液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述分離DNJ的方法，其特征在于：步驟4)氫氧化鈣溶液pH為10? 12,洗脫流速為0. 9?1. 6BV/h，收集1?30柱體積洗脫液，乙醇占濃縮液體積濃度為70? 85%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述分離DNJ的方法，其特征在于：步驟5)乙酸乙酯與乙醇體積比 為1:3?2:1，洗脫流速為0. 3?0. 8BV/h，收集1?50柱體積洗脫液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述分離DNJ的方法，其特征在于：步驟6)結(jié)晶溫度為1?6°C，乙 醇溶液濃度大于90%，時間為6?48h，重結(jié)晶溫度為-18?-23°C，乙酸乙酯與乙醇體積比 為2:1?7:1，時間為6?48h，按照結(jié)晶-重結(jié)晶-結(jié)晶-重結(jié)晶的順序重復(fù)2?5遍。
8. 制備DNJ納米混懸劑的方法，其特征在于，包括以下步驟： 1)、制備酯化目標(biāo)組分，包括： a、按物質(zhì)的量計取氯化1-丁基-3-甲基咪唑0. 25?1. 0份、DNJ0. 03-0. 07份、乙、丙、 丁、戊、己或庚酸酐0. 3-0. 5份和八水硫酸鋁0. 003?0. 012份并加入反應(yīng)釜混合反應(yīng)；b、 乙酸乙酯洗滌步驟a的反應(yīng)產(chǎn)物，分層后取上層液，用飽和碳酸鈉調(diào)至中性，得酯化目標(biāo)組 分； 2) 配制溶液A :所述溶液A按質(zhì)量計含甘露醇或聚乙二醇400 :0. 2?3%，乳糖：0. 5? 2%，葡萄糖：0. 5?2%，羧甲基纖維素鈉：0. 3?5%，其余為水； 3) 向溶液A中加入表面活性劑配制溶液B，所述溶液B中表面活性劑質(zhì)量百分含量為 0. 5?5%，所述表面活性劑是聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯、泊洛沙姆188、吐溫80、卵 磷脂、十二烷基硫酸鈉或三乙酸甘油酯中的任意一種； 4) 按體積比3:2?2:3混合步驟1)所得酯化目標(biāo)組分和溶液B并進行超聲波處理，超 聲處理時功率為140?280W，時間15?45min ; 5) 去除步驟4)溶液中的有機組分，然后移至高壓均質(zhì)機或超微納米粉碎機處理，得到 納米混懸劑。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述制備DNJ納米混懸劑的方法，其特征在于：步驟1)混合反應(yīng)時 溫度為80?160°C，反應(yīng)時間為6?14h，混合液轉(zhuǎn)速為300?500r/min，所得酯化目標(biāo)組 分的轉(zhuǎn)化率為63. 2?87. 3%，所制得酯化目標(biāo)組分的質(zhì)量濃度為0. 7?1. 25%。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述制備DNJ納米混懸劑的方法，其特征在于：步驟5)高壓均質(zhì)處 理時分別在500bar、lOOObar、1500bar壓力下各循環(huán)5?10次，或超微納米粉碎機2900rpm 碾磨45?60min，得平均粒徑為180?380nm的混懸液。
【文檔編號】A61K9/10GK104402801SQ201410614225
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】徐立, 劉超, 喻艷 申請人:西南大學(xué)